PRACTICA N°3

OBTENCIÓN DE BIOMASA Y FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA

1. OBJETIVOS
 Evaluar la melaza como sustrato para la producción de alcohol.
 Calcular parámetros cinéticos de rendimiento de biomasa a partir de sustrato, velocidad
especifica de crecimiento
2. RESUMEN

La determinación de biomasa es una de las variables importantes ya que su determinación nos

lleva a la comprensión de la eficiencia del mismo. Para determinar la biomasa es necesario
calcular el número de células en una determinada muestra. Los métodos que cuantifican la
cantidad de células son útiles principalmente para enumerar organismos como bacterias o
levaduras, mientras los que miden la masa o actividad celular pueden utilizarse para todos los
microorganismos, incluidos los hongos filamentosos, en los que es difícil cuantificar las células
individuales. Para la producción de microorganismos se utilizan bio reactores que suministren
sustrato necesario para la reproducción constante del ser y podamos obtener abundante
biomasa o células. Así mismo la levadura Saccharomyces cerevisiae, obtenida por estos métodos
es utilizada para inocular fermentaciones industriales para la obtención del alcohol. Por lo que
en esta situación se realizó el proceso de obtención de biomasa para la posterior obtención de
alcohol por fermentación anaeróbica de dilución de melaza y agua.

Palabras clave: biomasa, fermentación

3. INTRODUCCION

La determinación de la biomasa es una de las variables más importantes de un bioproceso. ya

que su determinación nos lleva a la comprensión de la eficiencia del mismo. Se trata de una
variable clave para establecer las tasas de producción, de consumo de nutrientes y el cálculo de
los balances de masa de cualquier proceso biológico. Los métodos clásicos de determinación de
biomasa son métodos directos que se basan en el número de células o en el peso celular. Los
métodos de enumeración celular son métodos de observación, basados en propiedades físicas o
en la actividad biológica. Actualmente hay un gran interés en métodos alternativos de
determinación de la biomasa. Estos métodos son indirectos y estiman algún componente celular
o alguna actividad metabólica específica. No requieren el examen visual de los organismos ni su
incubación.
El medio ambiente en el que crece el microorganismo va a determinar su adecuado desarrollo.
El pH, la temperatura y la presencia de oxigeno son los parámetros ambientales más
importantes cuando se pretende utilizar un microorganismo industrialmente.
En la industria tenemos el estado líquido que son acuosos y oleosos también los del estado
sólido que es polvo o granular. Las etapas para la preparación son:
 Reactivación de la cepa
 Crecimiento en medio solido
 Crecimiento en medio de cultivo liquido

Su desarrollo en cultivo preservado se reactiva en medio liquido o en medio sólido, según el

método de preservación se requerirá tiempo para la recuperación del cultivo. Sucesivamente se
irá incrementando el volumen del recipiente de cultivo, para conseguir la velocidad de
crecimiento adecuado.

Es muy vital ir incrementando el volumen para que a escala industrial se alcancen los resultados
óptimos, en caso de que el número de celular no es el adecuado pues la producción no será
óptima. Cantidad requerida para el proceso de fermentación es el 10 % del volumen total del
trabajo.

Cuando el producto deseado es la biomasa, la concentración de microorganismos representa la

eficiencia del proceso. Si el interés va dirigido hacia los metabolitos, el mismo parámetro es una
medida indirecta de su producción

4. MARCO TEÓRICO
Fermentación

La fermentación en estado sólido (FES), la fermentación líquida (FL) y la Fermentación solida

sumergida (FSS) son un proceso que permite el aprovechamiento de fuentes no convencionales
de carbohidratos para la alimentación animal mediante el uso de microorganismos. Levadura es
un nombre genérico que agrupa a una variedad de organismos unicelulares, incluyendo especies
patógenas para plantas y animales, y especies no solamente inocuas sino de gran utilidad
(González y Valenzuela 2003), Saccharomyces cerevisiae es una levadura que constituye el grupo
de microorganismos más íntimamente asociado al progreso y bienestar de la humanidad; su
nombre deriva del vocablo Saccharo (azúcar), myces (hongo) y cerevisiae (cerveza) (Hernández
1999). El proceso de producción de proteína unicelular es una vía biotecnológica adecuada para
el aprovechamiento de desechos industriales ricos en carbohidratos. El principal factor limitante
en la generación de proteína unicelular es el alto costo de las fuentes de carbono, por lo que el
uso de subproductos es ideal (Duran, 1989).
 Dilución: la altísima concentración de azúcares y sales presentes en las melazas impiden que los
microorganismos puedan fermentarlas, debido a la gran presión osmótica que generan sobre sus paredes
celulares; asimismo, las melazas son altamente viscosas, y su manipulación es difícil en estas condiciones.
Por estas razones, es necesario diluir las melazas; para ello, se les agrega agua, hasta obtener diluciones
de 25º Brix o menores; a valores mayores se tiene el riesgo de inicios lentos de fermentación y
contaminación bacteriana.

5. MATERIALES Y METODOS
 Refractómetro
 Balanza analítica
 Pipetas de 1 ml
 Tubos de ensayo

6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Producción de Biomasa

 Analizar la mezcla diluida de melaza y agua

 Llevar la mezcla a 13° a 14°Brix
 Esterilizar equipos y sustrato
 Regular pH a 4.6 o 4.8
 Añadir Sulfato de Amonio (2.5g/lt)
 Añadir Fosfato de Amonio (0.5g/lt)
 Inocular levadura activada

Tiempo Ph Temperatura °Brix Número de Celulas

0min 4.74 35°C 13.8 2.15x10^6
30min 4.61 27°C 13.3 1.25x10^6

Fermentación alcohólica

 Diluir 1:1 melaza y agua

 Llevar a 85°C por 30 minutos
 Diluir a 17° Brix
 Filtrar
 Regular pH con H2SO4 a 4.7
 Activar levadura
 Inocular levadura
 Tiempo pH Temperatura °Brix
0 días 4.70 24°C 17
2 días 4.65 26°C 14
5 días 4.40 20°C 9.5
7 días 4.40 20°C 9.5

Determinación de grados alcohólicos por densidad

%𝑨𝒍𝒄. = ∆𝑳𝒆𝒄𝒕𝒖𝒓𝒂𝑫𝒆𝒏𝒔𝒊𝒅𝒂𝒅 ∗ 𝟏𝟑𝟏

7. CONCLUSION Y REFERENCIAS

Las células de levadura se reproducen de forma exponencial siempre que la disponibilidad de

oxígeno y sustrato (azúcares y minerales) esté disponible. Cuando llega al punto de saturación
de células por capacidad, este proceso debe detenerse para poder retirar la biomasa. La
fermentación alcohólica no se diferencia mucho en el proceso inicial de preparación de medios,
pero al inocular la levadura no se le suministra ningún nutriente extra para que se convierta en
un ambiente anaerobio y podamos producir alcohol. Se obtuvo de alcohol en el proceso que se
hizo sobre 20lt.