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Laboratorio de Bioquímica

Fermentación alcohólica a partir de Sacharomyces Cerevisiae inmovilizado en


alginato de calcio
Camila Buenaventuraa y María Valentina Castiblancob
a
Universidad de la Sabana, Facultad de Ingeniería, Bogotá, Colombia
b
Universidad de la Sabana, Facultad de Ingeniería, Bogotá, Colombia

INFORMACIÓN DEL ARTÍC ULO RESUMEN


Palabras clave: Las levaduras son microorganismos que cumplen un papel importante en los procesos
Etanol fermentativos a nivel industrial para la producción de bebidas alcohólicas y algunos
Azúcares no reductores alimentos como el pan. En la práctica se lleva a cabo la fermentación de glucosa
Cámara de Neubauer usando la levadura a partir de la fermentación de glucosa usando Sacharomyces
Células cerevisiae inmovilizada en alginato de calcio para la producción de etanol,
Inmovilización obteniendose un rendimiento del 0,34%, debido a una ruptura incompleta de los
azúcares no reductores.

Concentración de sustrato: La concentración excesiva de


hidratos de carbono en forma de monosacáridos y disacáridos
1. Introducción puede frenar la actividad bacteriana. De la misma forma la baja
Las levaduras son hongos que forman sobre los medios de concentración puede frenar el proceso. Las concentraciones
cultivo colonias pastosas, constituidas en su mayor parte por límite dependen del tipo de azúcar, así como de la levadura
células aisladas que suelen ser esféricas, ovoideas, elipsoides o responsable de la fermentación. Las concentraciones de
alargadas. La fermentación alcohólica es un proceso azúcares afectan a los procesos de osmosis dentro de la
anaeróbico en el cual intervienen microorganismos, estos membrana celular. [5]
transforman los azucares presentes en algunos alimentos en
alcohol, dióxido de carbono, y energía. El proceso de
fermentación es utilizado para la fabricación de bebidas Concentración de etanol: Una de las principales
alcohólicas tales como cerveza, vino, sidra, cava, sake, entre limitaciones del proceso, es la resistencia de las levaduras a las
otras. [1] La conversión se representa mediante la ecuación: concentraciones de etanol (alcohol) que se llegan a producir
durante la fermentación, algunos microorganismos como
𝐶6𝐻12𝑂6→2𝐶2𝐻5𝑂𝐻+2𝐶𝑂2+𝐸𝑛𝑒𝑟𝑔𝑖𝑎 el saccharomyces cerevisiae pueden llegar a soportar hasta el
Los primeros microorganismos utilizados como fuente de 20% de concentración en volumen, mayor concentración del
proteínas fueron las levaduras, principalmente la etanol puede llegar a inhibir o matar la levadura. [5]
Saccharomyces cerevisiae, la cual es una levadura heterótrofa
que obtiene la energía a partir de la glucosa y tiene una elevada
capacidad fermentativa. Puede aislarse con facilidad en plantas Temperatura: El proceso de fermentación es exotérmico, y
y tierra, así como del tracto gastrointestinal y genital humano. las levaduras tienen un régimen de funcionamiento en unos
[2] Esta levadura sigue un metabolismo fermentativo cuando rangos de temperatura óptimos, se debe entender además que
está en condiciones anaerobias, pero cuando hay oxígeno hace las levaduras son seres mesófilos. Si se expone cualquier
una respiración aerobia y no produce alcohol. [3] levadura a una temperatura cercana o superior a 55 °C por un
tiempo de 5 minutos se produce su muerte. En la mayoría se da
En el proceso de fermentación alcohólica industrial se la fermentación alcohólica a una temperatura de 30 °C. [5]
presentan ciertas variables que incrementan o reducen los
rendimientos de la reacción, como lo son:
pH: El pH es un factor limitante en el proceso de la
fermentación ya que las levaduras se encuentran afectadas
Tipo de microorganismo: Los microorganismos de mayor claramente por el medio en que se encuentran, bien sea alcalino
interés para la producción de etanol en la industria son, o ácido. Por regla general el funcionamiento de las levaduras
Saccharomyces spp, Zymomonas mobilis (Zm) y está en un rango que va aproximadamente desde 3.5 a 5.5 pH.
Kkluyveromyces spp, los cuales han despertado interés por su Los procesos industriales procuran mantener los niveles
consumo rápido de glucosa en procesos de fermentación y óptimos de acidez durante la fermentación usualmente
bajas de pH en el medio en que se encuentran. [4] mediante el empleo de disoluciones tampón. Los ácidos de
algunas frutas (ácido tartárico, málico) limitan a veces este
proceso. [5] 2.2.2. Agitador Vórtex

Tiene como principal función mezclar pequeños viales de


Contacto con el aire: Una intervención de oxígeno (por líquidos. Cuando se presiona un tubo de ensayo u otro
mínima que sea) detiene completamente el proceso de recipiente apropiado dentro de la copa de goma, el movimiento
fermentación (es el denominado Efecto Pasteur). [5] se transmite al interior del líquido y se crea un vórtice. [9]
2.2.3. Baño de maría
Uno de los inconvenientes más comunes en la fermentación Conformado con un recipiente lleno de agua caliente. El
alcohólica es la pérdida de biomasa al final del proceso, por baño de maría se utiliza para incubar muestras en agua a una
razones técnicas y económicas la mayoría de los procesos temperatura constante durante un largo período de tiempo. [10]
químicos catalizados por enzimas o llevados a cabo por células
requieren su reutilización o el continuo uso de biocatalizadores
durante largos periodos de tiempo. Una forma efectiva de 2.2.4. Cámara de Neubauer
inmovilizar células es a través de atrapamiento, el cual está
basado en la oclusión de las enzimas dentro de una red La cámara de Neubauer es un instrumento utilizado en
polimérica, como el alginato de calcio, que permite al sustrato medicina y biología para realizar el recuento de células en un
y a los productos pasar a través de ella y retiene las enzimas.[6] medio líquido, que puede ser un cultivo celular, sangre, orina,
Este método, de hacer uso de las células inmovilizadas, se ha liquido sinovial, etc. Esta cámara está adaptada al microscopio
considerado un método importante ya que permite el alto nivel de de campo claro o al de contraste de fases.[11]
elaboración de metabolismos por parte de las células, así mismo,
permite el uso de las células por largos periodos de tiempo,
aumentando la duración de estas. [4] 2.2.5. Refractómero
Es un aparato destinado a medir el índice de refracción de
un medio material. Se basan en la medida del llamado ángulo
La dilución de una suspensión de células, en este caso, el uso crítico o ángulo límite o en la medida del desplazamiento de
Saccharomyces cerevisiae es un procedimiento que permitirá una imagen.[12]
disminuir la carga de células en un intervalo que se pueda contar
en la cámara de Neubauer de manera cómoda y lograr reportar de
manera factible el número de células que se encuentran en dicha 2.3. Metodología
suspensión celular. [7]
𝐶é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠/𝑚𝐿 = 2500 × # 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 𝑒𝑛 𝑙𝑎𝑠 4 á𝑟𝑒𝑎𝑠 × 𝐹𝐷 En un principio se prepara una solución de 50mL de alginato
de sodio al 3% p/V, este se debe agregar lentamente al agua
para evitar formación de grumos y agitando hasta que se
A partir de una técnica de conteo celular será posible el solubilice completamente. Luego, se realiza una esterilización
recuento de las células encontradas en el campo, así como la por medio de un calentamiento a baño de maría (92°C) por 20
determinación del promedio de células contenidas en la minutos. Dejar en reposo la solución a temperatura ambiente
suspensión de alginato, su concentración y el rendimiento en la hasta que alcanzar una temperatura por debajo de los 40°C.
producción de etanol a partir de glucosa usando la levadura
Saccharomyces cerevisiae inmovilizada. El procedimiento que se describirá se realizará al lado de un
mechero para evitar la contaminación de la mezcla.

2. Materiales y métodos Se pesan 1,5g de levadura y suspenderlos en 25mL de agua


destilada estéril y mezclar con la solución de alginato preparada
2.1. Reactivos
hasta que la solución resultante sea homogénea. Después se
agrega la suspensión en una jeringa estéril y se añade gota a
Alginato de sodio, agua destilada (H2O), fosfato
gota en la solución de cloruro de calcio 0,1M en agitación.
monopotásico (KH2PO4), sulfato de magnesio (MgSO4),
hidróxido de sodio (NaOH), etanol (C2H6O), ácido
dinitrosalicílico (DNS) (C7H4N2O7), glucosa(C6H12O6) y Agregar 10 gotas de alginato de sodio en 10 mL de solución
levadura (Saccharomyces cerevisiae). salina isotónica estéril, transferir la mezcla a un balón aforado
de 25ml y llevar hasta el aforo con solución salina. Llevar la
2.2. Instrumentación solución a la cámara de Neubauer para realizar conteo celular
y reportar el número de células.
2.2.1. Espectrofotómetro UV-Visible
Una vez formadas las esferas esperar 60 minutos hasta que
Tiene como objetivo el análisis cuantitativo de alguna endurezcan, luego retirarlas de la solución de cloruro de calcio,
molécula. Se basa en la interacción de la radiación haciéndolas pasar por un colador al lado del mechero; llevarlas
electromagnética con la materia. A través de esta interacción a un Erlenmeyer con desprendimiento, que contenga 100mL de
las moléculas pueden pasar de un estado inicial a uno medio de cultivo estéril (Glucosa: 100g/L, KH2PO4: g/L,
energético (excitado), absorbiendo una cantidad de energía MgSO4*7H2O: 1g/L, ajustar el pH a 4,5. El medio se esteriliza
radiante igual a la diferencia energética existente entre los dos a 15psi por 15 minutos) con agitación, el cual se conectó a una
niveles. [8] manguera que burbujeaba solución de hidróxido de calcio
(0,1%p/v). Colocar el Erlenmeyer en un agitador orbital a 2.3.2. Determinación de etanol por medio del índice de
200rpm y 30°C. refracción

Tomar una muestra de 1mL para medir azucares reductores 2.3.2.1. Curva de calibración de etanol mediante
y concentración de etanol en diferentes tiempos (6pm (to), 7am …………determinación de índice de refracción
(t1) 9am (t2), 11am (t3) y 3pm (t4)) . Dejar fermentar 17 horas y
al terminar este tiempo tomar la solución de hidróxido de calcio Se preparan las soluciones descritas en la tabla 2, luego se
y filtrar el precipitado. Colocar en horno a 60°C para luego midió el índice de refracción a cada tubo.
determinar la cantidad de carbonato de calcio y posteriormente
por estequiometria el dióxido de carbono. Tabla 2. Volúmenes curva de calibración de etanol
Tubo Etanol (µL) Agua destilada(µL) %v/v
2.3.1. Determinación de azúcares reductores por medio de 1 - 1000 0
..ácido dinitrosalicílico (DNS) 2 20 980 2
3 40 960 4
El método de DNS para la determinación de azúcares 4 60 940 6
reductores se basa en la reacción que presenta este tipo de 5 80 920 8
azúcar con el ácido 3,5-dinitrosalicilico para formar 3-amino- 6 100 900 10
5-nitrosalicilico, solución caracterizada por tener una 7 120 880 12
coloración marrón. 8 140 860 14
9 160 840 16
2.3.1.1. Curva calibración azúcares reductores por medio 10 180 820 18
……..de espectrofotometría a 540nm. 11 200 800 20

En 6 tubos de ensayo se preparan las soluciones descritas en 2.3.2.2. Determinación concentración etanol
la tabla 1, estas tendrán un volumen final de 500µL.
A cada muestra tomada a distintos tiempos se le mide el
Tabla 1. Volúmenes curva estándar índice de refracción.
Solución Agua destilada Concentración
Tubo
glucosa (µL) (µL) (mg/mL) 3. Resultados
B - 500 -
3.1. Cuantificación de células en cámara de Neubauer.
1 25 475 0,2
2 50 450 0,4
3 75 425 0,6 Mediante la cámara de Neubauer se logró realizar un
4 100 400 0,8 reconteo de células como se muestra en la figura 1.
5 125 475 1,0
6 150 350 1,2 Figura 1. Reconteo cámara de Neubauer

Posteriormente agregar 500µL de DNS, llevar las


soluciones a ebullición durante 5 minutos e inmediatamente se
pasan a agua-hielo. 6 8
6
Se adicionan 5mL de agua destilada, se agita y deja en
reposo durante 15 minutos, luego se lee absorbancia a 540nm.
5 5
2.3.1.2. Determinación concentración azúcares reductores

De las muestras tomadas a diferentes tiempos (T0, Utilizando la ecuación de cuantificación de células por unidad
T1,T2,T3,T4), tomar 50µL de cada la solución y colocarlos en de volumen, conociendo el número de células en las cinco
tubos de ensayo, luego a todas las muestras añadir 500µl de áreas, las cuales sumadas son 30 células y por último se sabe
DNS, después se llevan los tubos a ebullición durante 5 que en el procedimiento realizado se utilizó un factor de
minutos y al finalizar este tiempo se pasan a agua-hielo. dilución de 250, de esta manera dio como resultado
Finalmente se agregan 5mL de agua destilada, se agita en el 18,75×106 células/mL.
vórtex y deja en reposo durante 15 minutos, luego se lee
absorbancia a 540nm.
3.2. Determinación de azúcares reductores por medio de ácido
dinitrosalicílico (DNS)

3.2.1. Curva de calibración (azúcares reductores)

A partir del procedimiento 2.3.1.1. se lograron recolectar los


datos descritos en la tabla 3.
Tabla 3. Concentraciones y absorbancias (540nm), curva Tabla 4. Concentraciones azúcares reductores
patrón azúcares reductores Concentración azúcares
Tubo Absorbancia
Concentración reductores (mg/mL)
Tubo Absorbancia To 2,588 5,181
(mg/mL)
T1 0,742 1,495
1 0,080 0,2 T2 0,515 1,043
2 0,196 0,4 T3 0,211 0,436
T4 0,121 0,256
3 0,299 0,6
4 0,391 0,8 3.3. Determinación de etanol por medio del índice de
refracción
5 0,534 1,0
6 0,560 1,2
3.3.1. Curva de calibración (etanol)

Utilizando los datos de la tabla 3 se elaboró la siguiente


curva de calibración. De acuerdo con el procedimiento 2.3.2.1 se reunieron los
valores reflejados en la tabla 5.
Figura 2. Curva calibración azúcares reductores.
Curva de calibración azúcares reductores Tabla 5. Concentraciones e índice de refracción, curva
0.6 patrón etanol
0.5 y = 0.5009x - 0.0073
Tubo Índice de refracción %v/v
R² = 0.98328
1 1,3335 0
Absorbancia

0.4
2 1,3353 2
0.3 3 1,3363 4
4 1,3372 6
0.2 5 1,3387 8
0.1
6 1,3394 10
7 1,3422 12
0 8 1,3436 14
0.04 0.54 1.04 9 1,3443 16
Concentración (mg/mL)
10 1,3454 18
11 1,3465 20
Al realizar la curva de calibración para los azúcares
reductores se obtuvo un R2= 0,98328, lo cual indica linealidad
A partir de la tabla 4 se graficó la figura 3
para la curva patrón. En este caso como ninguno de los valores
de absorbancia contenidos en la tabla 3 se encontraba fuera del
rango, no fue necesario descartar datos, así se encontró la
ecuación de la recta reflejada en la figura 2. Figura 3. Curva calibración etanol.

𝑦 = 0,5009𝑥 − 0,0073 Curva calibración etanol


Haciendo uso de esta ecuación fue posible determinar las 1.348
concentraciones, de esta manera se despejo “x” de la ecuación 1.346
Índice de refracción

de la recta, en la cual se reemplaza “y” con el valor de la y = 0,0007x + 1,3336


1.344 R² = 0,9916
absorbancia en cada muestra.
1.342
1.34
3.2.2. Determinación azúcares reductores por medio de 1.338
espectrofotometría a 540nm. 1.336
1.334
Haciendo uso de la ecuación de la recta obtenida de la figura 1.332
2, se logró determinar las concentraciones de azúcares en cada 0 5 10 15 20
muestra a diferentes tiempos contenidos en la tabla 4. Concentración (%v/v)

Al realizar la curva de calibración para el etanol se obtuvo


una linealidad de R2= 0,9916, sin necesidad de descartar
ningún dato puesto que el margen de error entre ellos no
superaba el 5% ,así se encontró la ecuación de la recta reflejada
en la figura 3.
𝑦 = 0,0007𝑥 + 1,3336 3.4.1. Rendimiento real
Utilizando la ecuación de la recta se logró hallar las
concentraciones de etanol presente en cada muestra,
Es calculado usando la cantidad de carbonato de calcio
despejando “x” de la ecuación, en la cual se reemplaza “y” con
el valor de la absorbancia en cada una. (CaCO3) producido y la reacción de descomposición de este a
partir de calor.
CaCO3 ≜CaO + CO2
3.3.2. Determinación concentración etanol
La cantidad de carbonato de calcio se hallo haciendo una
diferencia entre el peso que poseía antes del secado, el cual
Haciendo uso de la ecuación obtenida de la figura 3, se logró corresponde a 42,014g y el que tenía al sacarlo del horno
determinar las concentraciones de etanol en cada muestra a siendo este de 42,0385g, fue así como se halló la cantidad de
diferentes tiempos, además para realizar un mejor análisis se CaCO3 obtenido de 0,0245g.
convirtieron las concentraciones de %v/v a mg/mL mediante
una conversión en la que el porcentaje de volumen se divide en A partir de este valor se conoce la cantidad de CO2
100mL y lo multiplico con la densidad del etanol, siendo esta producido puesto que se tiene una relación estequiométrica 1:1,
0,798g/Ml y finalmente se pasa de g a mg, de esta forma se así se sabe que se este dato es de 24,48 × 10−5 mol CO2
obtuvieron los datos contenidos en la tabla 6.
Por último, para calcular el rendimiento real (etanol
Tabla 6. Concentraciones etanol producido) se hace uso de la reacción etanol a partir de la
Índice de Concentración glucosa y utilizando una relación estequiométrica 1:1 se
Tubo
refracción (%v/v) conoce que la cantidad de etanol obtenido fue de
24,48 × 10−5 mol C2 H5 OH.
To 1,3454 16,857
T1 1,3383 6,714 3.4.3 % Rendimiento producción de etanol.
T2 1,3378 6 Haciendo uso del rendimiento real y teórico se sabe que el
T3 1,3373 5,285 porcentaje (%) de rendimiento en la producción de estanol es
de 0,37%.
T4 1,3375 5,571
Discusión
4.1. Cuantificación de células en cámara de Neubauer
3.4. Rendimiento en la producción de etanol a partir de Se encontró que por cada mL de solución de alginato de
glucosa calcio inmovilizo 18,75×106 células, el conteo de estas no
debería cambiar a través del tiempo y la biomasa podría ser
reutilizada.
Teniendo en cuenta que:
4.2. Determinación azúcares reductores por medio de
Rendimiento real espectrofotometría a 540nm.
%Rendimiento= ×100%
Rendimiento teórico
Al ser un proceso de fermentación en donde se consume la
Al usar la ecuación anteriormente mencionada es necesario
calcular el rendimiento teórico y el real. glucosa para generar etanol, se espera que la concentración de
azucares reductores (glucosa) disminuya linealmente a medida
que pasa el tiempo, como se puede evidenciar en la tabla 4
3.4.1. Rendimiento teórico. efectivamente estas concentraciones se reducen, pero no
linealmente, esto posiblemente es causado por qué no se contó
con el tiempo adecuado para este tipo de fermentación (63
Para calcular el rendimiento teórico se tiene en cuenta que horas), de lo anterior se infiere que no se logró realizar la
se utilizo un cultivo estéril que contenía 100g/L de glucosa y ruptura de los azúcares no reductores (sacarosa) en azúcares
mediante la reacción de la producción de etanol se realiza reductores (fructosa y glucosa), es decir, la degradación de los
estequiometria. polisacáridos a sus respectivos monosacáridos no se dio
completamente. (Vázquez y Dacosta, 2007). La ruptura
C6 H12 O6 →2C2 H5 OH+2CO2 + Energía incompleta de los azúcares no reductores puede estar dada por
la presencia de oxígeno en la reacción, pues se sabe que la
presencia del mismo inhibe el rompimiento. Adicionalmente se
De esta manera se conoce que se producen teóricamente debe tener en cuenta que no había ninguna otra fuente de
0,0666 moles de etanol.
hidratos de carbono, que permitiera la regeneración de los
azúcares reductores
[5] Bruers, C. (2004). Diversos factores que afectan
4.3. Determinación concentración etanol la fermentación. Extraído el 29 de septiembre,
del sitio web brotherwood.cl:
Los índices de refracción reportados para las http://www.brotherwood.cl/beerheads/diversos-
concentraciones iniciales reportados en la tabla 6 corresponden factores-que-afectan-la-fermentacion-chile-
a los azúcares reductores presentes en la muestra, por lo cual, bruers/
no se puede hablar de una concentración de etanol en el tiempo
inicial, es decir, el tiempo cero, puesto que en este la [6] O'Driscoll, K.F. 1976. Techniques of enzyme
fermentación aún no había iniciado, puesto que el tiempo entrapment in gels. En: Methods in
reportado es de 63 horas. (Vázquez y Dacosta, 2007) Enzymology, volume XLIV, (Mosbach K., ed),
Academic Press, New York, NY, pp. 169-183.
4.4. Rendimiento producción de etanol [7] Marcos, U. N. (2013). Optimización de un
Experimentalmente se encontró que el rendimiento método para la producción de biomasa de
experimental para la obtención de etanol a partir de la Saccharomyces cerevisiae empleada en la etapa
fermentación de la levadura Sacharomyces cerevisiae se de fermentación del mosto de cerveza, desde un
obtuvo 0,37%, por otro lado en la literatura se reporta que por nivel de laboratorio a un nivel Piloto.
cada gramo de glucosa transformada se obtiene [8] Gonzales, J. (2015). Espectrofotometría UV.
estequiométricamente 0,511g de etanol y 0,489g de dióxido de Extraído el 29 de septiembre de 2018, del sitio
carbono, adicionalmente el rendimiento experimental varía web slidershare.net:
entre el 90 y el 95 % del teórico, y en la industria varía del 87 https://es.slideshare.net/juliogonzalez33046736/
al 93 % del teórico (Vázquez y Dacosta, 2007). Esta gran espectrofotometra-uv
margen de error en el rendimiento obtenido y el reportado de la [9] TP-Laboratorio Químico. (2015). Agitador
reacción pudo ser afectado como ya antes se ha dicho, por el vórtex (Agitador de tubos vórtex). Extraído el 29
aireamiento del proceso, y errores sistemáticos cometidos de septiembre de 2018, del sitio web
durante este. tplaboratorioquimico.com:
https://www.tplaboratorioquimico.com/laborator
io-quimico/materiales-e-instrumentos-de-un-
4. Conclusión laboratorio-quimico/agitador-vortex-agitador-
tubos-vortex.html
[10] TP-Laboratorio Químico. (2015). Baño de maría
En base a lo que reporta la literatura, la producción de para laboratorio. Extraído el 29 de septiembre de
alcohol (etanol) es mayor, cuando en el proceso de 2018, del sitio web tplaboratorioquimico.com:
fermentación se usan células inmovilizadas; esto se debió, a [11] Chambillo, J. (2017). Uso de la cámara de
que la inmovilización de la levadura con perlas de alginato de Neubauer. Extraído el 20 de septiembre de 2018,
calcio permitió cambios en la composición de las células por la del sitio web Scribd.com:
interacción con el soporte del alginato, ya que este funciona https://es.scribd.com/document/349997069/Uso-
como un catalizador activo que acelera la velocidad de la de-La-Camara-Neubauer
fermentación. Además, la concentración de azúcares [12] Anónimo (26 de enero de 2010). Refractometria
reductores disminuye en el tiempo, puesto que se da la ruptura y polarimetría. [mensaje en blog]. Recuperado
de estos. de:http://clasesusanita.blogspot.com/2010/01/ref
ractometria-y-polarimetria.html
[13] Vázquez, H., Dacosta, O. (2007).Fermentación
Por último, al determinar el rendimiento experimental para alcohólica: Una opción para la producción de
la obtención de etanol a partir de la fermentación de la levadura energía renovable a partir de desechos agrícolas.
Sacharomyces cerevisiae se obtuvo 0.34%, de acuerdo a la
Investigación y tecnología, 8(4), 252-253
literatura el rendimiento experimental varía entre el 90 y el 95
% del teórico, y en la industria varía del 87 al 93 % del
reportado. (Vázquez y Dacosta, 2007) Anexos

Referencias 1. Cálculos

[1] Carlile MJ et al. 2001. The Fungi. 2ª ed. 1.1. Cámara de Neubauer
Academic Press, San Diego, p 70.
[2] Querol, A. Molecular evolution in yeast of
biotechnological interest. Int. Microbiol. 6: 201- 𝐶é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠/𝑚𝐿 = 2500 × 30 × 250
05. (2003) = 18,75 × 106 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠/𝑚𝐿
[3] Sanz Esteban, M.; Serrano Barrero, S.; Torralba
Redondo. (2003) B. Biología. Oxford University
1.2. Cálculos producción teórica de etanol
Press. Madrid.
[4] Matiz, Torres, & Poutou. (2002). Producción de
Etanol producido (Teórico)=
etanol con células inmovilizadas de Zymomonas
mobilis spp. Bogotá: Javeriana
100g glucosa 1 mol glucosa 2 mol etanol
× ×
L 180,16 g glucosa 1 mol glucosa

1,11 mol etanol 1L sln


= × ×60mL sln
L solución 1000mL sln
=0,0666 mol etanol

1.3. Producción de carbonato de calcio


CaCO3 producido=42,0385g-42,014g
=0,0245g CaCO3

1.4. Cantidad de dióxido de carbono


1 mol CaCO3
𝐶O2 producido = 0,0245g CaCO3 ×
100,087g CaCO3
1mol CO2
× = 24,48 × 10−5 mol CO2
1 mol CaCO3

1.5. Etanol real producido


C2 H5 OHproducido
2 mol C2 H5 OH
= 24,48 × 10−5 mol CO2 ×
2 molCO2
= 24,48 × 10−5 molC2 H5 OH

1.6. %Rendimiento producción etanol

24,48×10-5 molC2 H5 OH
%Rendimiento= ×100%
0,0666 molC2 H5 OH
=0,37%