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Tomar una muestra de 1mL para medir azucares reductores 2.3.2.1. Curva de calibración de etanol mediante
y concentración de etanol en diferentes tiempos (6pm (to), 7am …………determinación de índice de refracción
(t1) 9am (t2), 11am (t3) y 3pm (t4)) . Dejar fermentar 17 horas y
al terminar este tiempo tomar la solución de hidróxido de calcio Se preparan las soluciones descritas en la tabla 2, luego se
y filtrar el precipitado. Colocar en horno a 60°C para luego midió el índice de refracción a cada tubo.
determinar la cantidad de carbonato de calcio y posteriormente
por estequiometria el dióxido de carbono. Tabla 2. Volúmenes curva de calibración de etanol
Tubo Etanol (µL) Agua destilada(µL) %v/v
2.3.1. Determinación de azúcares reductores por medio de 1 - 1000 0
..ácido dinitrosalicílico (DNS) 2 20 980 2
3 40 960 4
El método de DNS para la determinación de azúcares 4 60 940 6
reductores se basa en la reacción que presenta este tipo de 5 80 920 8
azúcar con el ácido 3,5-dinitrosalicilico para formar 3-amino- 6 100 900 10
5-nitrosalicilico, solución caracterizada por tener una 7 120 880 12
coloración marrón. 8 140 860 14
9 160 840 16
2.3.1.1. Curva calibración azúcares reductores por medio 10 180 820 18
……..de espectrofotometría a 540nm. 11 200 800 20
En 6 tubos de ensayo se preparan las soluciones descritas en 2.3.2.2. Determinación concentración etanol
la tabla 1, estas tendrán un volumen final de 500µL.
A cada muestra tomada a distintos tiempos se le mide el
Tabla 1. Volúmenes curva estándar índice de refracción.
Solución Agua destilada Concentración
Tubo
glucosa (µL) (µL) (mg/mL) 3. Resultados
B - 500 -
3.1. Cuantificación de células en cámara de Neubauer.
1 25 475 0,2
2 50 450 0,4
3 75 425 0,6 Mediante la cámara de Neubauer se logró realizar un
4 100 400 0,8 reconteo de células como se muestra en la figura 1.
5 125 475 1,0
6 150 350 1,2 Figura 1. Reconteo cámara de Neubauer
De las muestras tomadas a diferentes tiempos (T0, Utilizando la ecuación de cuantificación de células por unidad
T1,T2,T3,T4), tomar 50µL de cada la solución y colocarlos en de volumen, conociendo el número de células en las cinco
tubos de ensayo, luego a todas las muestras añadir 500µl de áreas, las cuales sumadas son 30 células y por último se sabe
DNS, después se llevan los tubos a ebullición durante 5 que en el procedimiento realizado se utilizó un factor de
minutos y al finalizar este tiempo se pasan a agua-hielo. dilución de 250, de esta manera dio como resultado
Finalmente se agregan 5mL de agua destilada, se agita en el 18,75×106 células/mL.
vórtex y deja en reposo durante 15 minutos, luego se lee
absorbancia a 540nm.
3.2. Determinación de azúcares reductores por medio de ácido
dinitrosalicílico (DNS)
0.4
2 1,3353 2
0.3 3 1,3363 4
4 1,3372 6
0.2 5 1,3387 8
0.1
6 1,3394 10
7 1,3422 12
0 8 1,3436 14
0.04 0.54 1.04 9 1,3443 16
Concentración (mg/mL)
10 1,3454 18
11 1,3465 20
Al realizar la curva de calibración para los azúcares
reductores se obtuvo un R2= 0,98328, lo cual indica linealidad
A partir de la tabla 4 se graficó la figura 3
para la curva patrón. En este caso como ninguno de los valores
de absorbancia contenidos en la tabla 3 se encontraba fuera del
rango, no fue necesario descartar datos, así se encontró la
ecuación de la recta reflejada en la figura 2. Figura 3. Curva calibración etanol.
Referencias 1. Cálculos
[1] Carlile MJ et al. 2001. The Fungi. 2ª ed. 1.1. Cámara de Neubauer
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biotechnological interest. Int. Microbiol. 6: 201- 𝐶é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠/𝑚𝐿 = 2500 × 30 × 250
05. (2003) = 18,75 × 106 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠/𝑚𝐿
[3] Sanz Esteban, M.; Serrano Barrero, S.; Torralba
Redondo. (2003) B. Biología. Oxford University
1.2. Cálculos producción teórica de etanol
Press. Madrid.
[4] Matiz, Torres, & Poutou. (2002). Producción de
Etanol producido (Teórico)=
etanol con células inmovilizadas de Zymomonas
mobilis spp. Bogotá: Javeriana
100g glucosa 1 mol glucosa 2 mol etanol
× ×
L 180,16 g glucosa 1 mol glucosa
24,48×10-5 molC2 H5 OH
%Rendimiento= ×100%
0,0666 molC2 H5 OH
=0,37%