Reporte Laboratorio extracción de ADN

Introducción
El presente documento tiene como objetivo exponer una de las técnicas de extracción de
ADN llevada a cabo en el laboratorio, a partir de pimentón y fresa, utilizando una solución
buffer de extracción, papaína y etanol. Sin embargo, es importante iniciar con la explicación
básica del concepto de ADN, en qué consiste su extracción, qué técnicas se encuentran para
llevarla a cabo, cuál es su importancia y en qué casos se aplican estas técnicas.
Concepto de ADN
El ADN (ácido desoxirribonucleico) es la molécula que contiene la información genética de
todo ser vivo, su composición se da por la unión de dos cadenas de polinucleótidos mediante
enlaces fosfodiéster 3’ - 5’, formando una doble hélice, que interactúan a su vez por puentes
de hidrógeno teniendo en cuenta de sus bases nitrogenadas: Adenina, citosina, timina y
guanina, conocidas comúnmente como A, C, T, G, respectivamente; cabe resaltar que el
orden en el que se combinan determina la codificación de la información genética. Esta
molécula está organizada en cromosomas
¿En qué consiste la extracción de ADN?
La extracción de ADN es una técnica muy utilizada en bioquímica y biología molecular para
obtener el ADN puro y proceder a diferentes estudios como la clonación, amplificación y
secuenciación de ADN, por lo que para su correcta extracción es necesario utilizar técnicas
de cuidado ya que es necesario obtener el ADN en buen estado para observar su estructura sin
estar afectada por el proceso de extracción. Para escoger uno de los diferentes métodos de
extracción de ADN es necesario analizar qué tipo de tejidos tenemos (animal o vegetal), que
cantidad de ADN necesitamos obtener de la extracción y el costo y tiempo necesario para
cada técnica
Técnicas para la extracción de ADN
➔ Lisis por ruptura mecánica y extracción con disolventes orgánicos
Este método puede ser usado para extraer ADN de material crudo, liofilizado o congelado,
que puede romperse con un mortero, por congelación-descongelación o usando ultrasonidos.
El lisado de células se puede extraer con cloroformo, alcohol isoamílico o fenol, siendo las
proteínas y otros componentes de la célula solubles en el disolvente orgánico, por lo que de
esta forma se logra la separación de los ácidos nucleicos. Este método se puede usar para
moléculas de ADN de alto peso molecular, obteniendo buenos rendimientos de moléculas
relativamente puras, siempre teniendo en cuenta que hay que controlar el pH de la fase
acuosa y la concentración de sales, que son los factores que aseguran una buena separación.
Las desventajas de este método son el uso de disolventes orgánicos dañinos para la salud
humana y que pueden quedar como trazas en la muestra de ADN y luego actuar como
interferentes en técnicas como el PCR

➔ Método de salting-out
A partir de un lisado celular se pueden separar las moléculas de proteínas y otros
contaminantes del ADN mediante la adición de altas concentraciones de sal que hacen que
disminuya la solubilidad de las moléculas orgánicas en la fase acuosa. En este método se
utiliza frecuentemente la proteínasa K, el TRIS-HCl (funciona como tampón) para regular el
pH y otros reactivos químicos que aseguren la total inactivación de las enzimas que pueden
actuar sobre las moléculas de ADN. Para la extracción se utilizan sales inorgánicas como el
perclorato de sodio y el cloruro de sodio en concentraciones muy altas que hacen precipitar a
las moléculas orgánicas. El precipitado formado se separa por centrifugación y luego se
puede extraer el ADN de la disolución acuosa mediante la adición de alcohol, por
precipitación. Este método es sencillo, pero no siempre es eficaz, por lo que el ADN obtenido
en muchas ocasiones debe ser purificado antes de ser usado en posteriores aplicaciones.
(Wako Chemicals USA, 2014)

➔ Método de electroforesis en gel

La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar fragmentos de ADN según su
tamaño, las muestras de ADN se cargan en pozos (ranuras) en un extremo de un gel y se
aplica una corriente eléctrica para arrastrarlas a través del gel, debido a la carga negativa que
presentan los fragmentos de ADN estos se mueven hacia el electrodo positivo. Puesto que
todos los fragmentos de ADN tienen la misma cantidad de carga por masa, los fragmentos
pequeños atraviesan el gel más rápido que los grandes. En los casos en que el gel se tiñe con
un pigmento que se une al ADN, los fragmentos de ADN pueden verse como bandas, las
cuales representan un grupo de fragmentos de ADN del mismo tamaño.
(Khan Academy, 2018)
 Imagen 1. diagrama explicativo del proceso que se realiza para la extracción de ADN por
electroforesis en gel - tomado de Electroforesis en gel - Khan Academy

Importancia y aplicaciones de la extracción del ADN

Como se mencionó previamente, la extracción de ADN es empleada en diversas disciplinas,
como es el caso de la biomedicina, puesto que partiendo de material biológico como
cepillado bucal, saliva , sangre o cualquier tejido y mediante técnicas físico-químicas, se lleva
a cabo la extracción, separando y purificando el ADN con el fin de analizar y diagnosticar a
pacientes con enfermedades neurodegenerativas, cáncer, infecciones, etc. (Alberto Checa
Rojas, 2016).

Otra de sus aplicaciones se da en las ciencias forenses (medicina forense y la identificación

de víctimas en desastres), ya que mediante el perfil de ADN ( una técnica que analiza los
atributos únicos del ADN de una persona) se pueden llevar a cabo las pruebas de
maternidad/paternidad, identificación humana (autores criminales) empleando huellas
dactilares, muestra que las pruebas basadas en el ADN no sólo proporcionan evidencia
excluyente, sino que pueden proporcionar evidencia de la identidad de una persona sin sesgo.
(Alberto Checa Rojas, 2017)
También presenta gran implicación en identificación de cáncer ya que mejora el diagnóstico,
ayuda a su clasificación y permite pronosticar los resultados de un tratamiento específico, que
son las bases para una medicina personalizada.
Referencias

- Científica SENNA. (s.f.). Buffer de Lisis. Obtenido de

https://www.cientificasenna.com/producto/buffers-para-lisis/
- COLEGIO PERUANO NORTEAMERICANO ABRAHAM LINCOLN. (2018).
Extracción de ADN. Perú
- Cruz Vázquez, J. K., Anaya López, J. L., Montero Tavera, V., & F, R. (Septiembre de
2017). Extracción de DNA de plántulas de papaya preservadas con sílica gel: una
alternativa para descartar el uso de nitrógeno líquido. Obtenido de
https://www.utm.mx/edi_anteriores/temas63/NotaCientifica-
2_T63ExtracciondeDNAdeplantasdepapaya.pdf
- Martínez M., L. (Abril de 2015). EXTRACCIÓN DE DNA . Obtenido de :
http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart%C3%ADnez
%20Mart%C3%ADn2015_4_19P21_19.pdf
- ICIQ VIRTUAL LAB. (s.f.). El ADN de las fresas. Obtenido de Experimentos
Caseros: http://labvirtual.iciq.es/es/expcas/ladn-de-les-maduixes/?pdf=742
- Alberto Checa Rojas. (2016). Extracción de ADN. 2021, Noviembre 10, Conogasi.org
Sitio web: https://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn/
- ADN: Conceptos básicos y aplicaciones. 2021, Noviembre 10, Conogasi.org
Sitioweb: https://conogasi.org/articulos/adn-conceptos-basicos-y-aplicaciones/
- electroforesis en gel. (2018). Khan Academy. https://es.khanacademy.org/science/ap-
biology/gene-expression-and-regulation/biotechnology/a/gel-electrophoresis
- Wako Chemicals USA. (2014, 30 enero). métodos de extracción de ADN. FUJIFILM
Value from innovation. https://www.wakolatinamerica.com/blog-reactivos/noticias-
wako/post/10-metodos-de-extraccion-de-adn/