UNIVERSIDAD ESTATAL PENÍNSULA DE

SANTA ELENA

FACULTAD DE CIENCIAS DEL MAR

CARRERA DE BIOLOGÍA

GENÉTICA

EXTRACCIÓN DEL ADN MÉTODO NaCl MODIFICADO

INTEGRANTES

ÁNGEL LAINEZ DE LA CRUZ

ARIANNA REYES MERA

SCARLETH SOLANO SORIANO

NAHOMY TERÁN SALAZAR

DOCENTE

BLGA. YANETH GALARZA Ph.D

2023
INTRODUCCIÓN

La biología molecular ha avanzado mucho en los cuarenta años siguientes al

descubrimiento de la estructura del ADN ya que es la que contiene la información
genética. El primer paso para realizar estudios es disponer de muestras de ADN con
calidad y cantidad que permita su análisis molecular. (De Jesus et al. 2005)

El ácido desoxirribonucleico (ADN) es el material genético que contienen todos los seres
vivos (plantas y animales). Existe diferentes técnicas para realizarla extracción de ADN,
sin embrago, estos demandan de mucho más tiempo, más recursos económicos, además
que la calidad y cantidad de ADN no son las apropiadas. Por otra parte, si existe una mala
utilización de las muestras va a haber una máxima probabilidad de que se contamine el
ADN.

El continuo crecimiento tecnológico acompañado de la necesidad de solucionar

problemáticas prioritarias ha fomentado la implementación de técnicas moleculares como
la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y la secuenciación. En el campo agrícola
estas técnicas tienen aplicaciones que incluyen caracterizaciones moleculares,
identificación de genes o mutaciones, entre otros, y en todos los casos la etapa inicial y
fundamental es la extracción del ácido desoxirribonucleico (ADN) de plantas.

La extracción de ADN usando el protocolo NaCl modificado, es una alternativa simple,

fácil, rápida y no contaminante que permite obtener ADN de buena calidad y cantidad
(Lopera et al. 2008).

El proceso para la extracción de ADN posee un gran impacto sobre la sensibilidad y

reproductibilidad de la prueba diagnóstica molécula, esto se realiza con el objetivo de
hacer estudios genéticos, de forense y biología molecular, Cabe recalcar que para la
extracción del ADN se requiere una serie de etapas básicas. Independientemente del tipo
de célula de estudio, para aislar el ácido nucleico es necesario como primer paso, romper
la membrana plasmática mediante métodos físicos, químicos enzimáticos para liberar o
acceder al núcleo de la célula, y posteriormente romper la membrana nuclear para dejar
libre el ADN. A partir de esto, la purificación de los ácidos nucleicos se realiza mediante
la extracción de las proteínas y los lípidos con solventes orgánicos, y finalmente se debe
proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo, por lo que para aislar hay que hacer
que se precipite en alcohol.
Los organismos llamados eucariotas presentan genomas que se encuentran organizados
en cromosomas. El ADN de estos organismos se encuentra en un área dividida dentro de
la célula llamada núcleo donde se encuentran diversas moléculas de ADN el cual están
empaquetada en forma compacta y precisa.

En el presente informe se mostrarán los respectivos procedimientos que se realizó para

extraer el ADN de las células vegetales y de las células animales, usando el protocolo de
extracción con NaCl modificado, el cual ha sido el método más usado para obtener ADN
genómico de peces o plantas, desde las muestras de sus tejidos, debido rapidez y eficacia
que se obtiene en los resultados.

OBJETIVO

Extraer el ADN de células animales, aplicando el protocolo basado en el método de

NaCl modificado el cual permitirá obtener un ADN de alta calidad

MATERIALES

• 1 galón de agua destilada

• 1galón de alcohol absoluto
• 1 litro de etanol 100%
• 1 muestra de pescado
• 2 rollos de papel toalla
• 1 hielera y hielo picado
• 1 litro de alcohol industrial
• 2 tubos eppendorf
• Centrifugadora
• Micropipetas
• Mechero de alcohol

PROCEDIMIENTO

1. Preparación de la muestra
2. Disociación de los tejidos; romper las células
• Mecánica
 • Enzimática
• Química
3. Purificación
4. Precipitación
5. Lavado en etanol al 70-75%
6. Resuspención

RESULTADOS

PASO 1 - PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

1. Se realiza la toma de la muestra y lavado con agua destilada, eliminar el agua,
haciendo un corte de la corteza rosada del rábano y llevar a un mortero dónde se
procederá a triturar.

2. En un tubo eppendorf se agrega una muestra considerable.

PASO 2 – DISOCIACIÓN DE TEJIDOS, ROMPIMIENTO DE CÉLULAS

3. Se añade el primer reactivo, 800 microlitros de tampón de extracción (0.05MTris
– 0.1M EDTA) y se tritura la muestra, a continuación, se añaden 70 microlitros
del segundo reactivo Sodium Dodecyl Sulfate al 10% triturando nuevamente, para
así homogenizar la muestra con los reactivos.
 4. Homogenizada la muestra con los reactivos se incuba en vaso de precipitado en
una estufa a 55°C durante 15 minutos, durante este tiempo los reactivos se activan
y permiten el rompimiento de las células, donde posteriormente obtendremos 3
capas en la muestra, capa blanquecina rica en proteínas, capa de sobrenadante y
una capa de residuos celulares.

PASO 3 – PURIFICACIÓN
5. Centrifugar 10.000 rpm durante 5 minutos
6. Transferir 700μL de sobrenadante (ADN extraído) a un nuevo tubo eppendorf de
1.5mL.

PASO 3 – PRECIPITACIÓN

7. Agregar 800μL de alcohol absoluto (etanol frío al 100%) dejar en reposo 30 min
a -20°C.

8. Centrifugar la muestra durante 5 minutos a una velocidad de 10000 rpm.

PASO 5 – LAVADO
9. Se procede a descartar el sobrenadante y se lava la muestra de ADN con alcohol
etanol al 70%. Y luego se coloca en la centrifugadora, y todas las muestras de los
tubos eppendorf deben encontrarse con la misma cantidad para que no haya
ningún problema al centrifugar.

10. Se debe centrifugar durante 5 minutos a una velocidad 12000 rpm.

PASO 5 – RESUSPENSIÓN

11. Se debe secar el pellet de ADN, utilizando un mechero de alcohol, pero teniendo
la precaución de no acercar mucho la muestra para que no se vaya a degenerar
dentro del tubo eppendorf, y al ADN obtenido se le agrega 50 microlitros de agua
ultrapura y se procede a refrigerar a una temperatura de 20°C
CONCLUSIÓN

Para finalizar con el presente informe se concluye que el método de extracción de ADN
del tejido de pez por medio de la utilización de NaCl modificado es efectivo y eficiente.
Debido a que nos da un resultado con alta pureza del ADN extraído, lo que lo hace
conveniente para su uso en diversas aplicaciones en biología molecular, como PCR y
secuenciación de ADN.

Como se conoció, el NaCl modificado es capaz de romper las membranas celulares y las
proteínas que rodean el ADN, permitiendo de esta manera la liberación y posterior
precipitación mediante la adición de etanol. De esta forma, se logra obtener un producto
final de ADN de alta calidad y pureza.

De la misma manera ocurrió con el tejido del vegetal donde, donde el método demostró
ser efectivo y reproducible. Se aplico los mismos pasos para la ruptura de la pared celular
vegetal y la liberación del contenido celular, incluyendo el ADN. Cabe recalcar que la
eficiencia de la extracción del ADN puede verse afectada por factores, como la cantidad
del tejido utilizado. Por lo tanto, es recomendable optimizar y ajustar las condiciones
experimentales para obtener los mejores resultados en cada caso específico.

Este protocolo de extracción puede substituir protocolos que utilizan elementos químicos,
contaminantes y peligrosos, dado a que tiene la ventaja de ser económico y de utilizar
productos químicos fácilmente disponibles. Seis pasos fueron esenciales en el proceso de
extracción con sal común: 1. Preparación de la muestra, 2. Liberación de componentes
celulares, 3. Eliminación de proteínas y lípidos, 4. Precipitación del ADN, 5. Remoción
o lavado del RNA y 6. resuspensión y almacenaje del pellet.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

De Jesus R, Moreno N, Martinez, J.A, 2005. Ensayo de dos métodos de extracción de

ADN de ratón para ser usado en el control genético de ratones Consanguíneos
mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), revista Científica, vol.
XV-N° 002 , Universidad del Zulia Maracaibo, Venezuela, 134-140 pag.

Osorio, J. H., & Quenán , Y. (2012). SCielo. Obtenido de MODIFICACIÓN DE UNA

TÉCNICA PARA EXTRACCIÓN DE ADN DE GLÓBULOS BLANCOS:
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1657-
95502012000200003

Tuya, F., Curbelo, L., & Montero, D. (2016). Extracción de ADN. Obtenido de
PRACTICAS DE BIOLOGÍA GENERAL: http://fernandotuya.org/wp-
content/uploads/2010/10/Prácticas-genéticas.-Extración-ADN.-Abril-2016.-
Alumnos.pdf

Lopera N, Jayme A, Povh R, Ribeiro P, Patricia C, Gomes, Carolina B. Jacometo y Lopes

T, 2008. Comparación de protocolos de extracción de ADN con muestras de aleta
y larva de peces: extracción modificada con cloruro de sodio. Ciencia e
Investigación Agraria, Brazil, vo1.35-N°1, pág. 77-86.
ANEXOS