EXTRACCION DE ADN METODO FENOL CLOROFORMOL

INTRODUCCION
El ácido desoxirribonucleico, comúnmente conocido como ADN, es una molécula fundamental
que contiene toda la información genética necesaria para el desarrollo y funcionamiento de los
seres vivos. La introducción del ADN en el campo de la genética revolucionó nuestra
comprensión de la herencia y sentó las bases para numerosos avances
científicos y tecnológicos
La extracción de ADN es un proceso fundamental en biología molecular que permite el
aislamiento y purificación del material genético presente en células y organismos. Entre los
métodos utilizados para realizar esta tarea, el método del fenol-cloroformo se destaca como
una técnica ampliamente utilizada y confiable.
El método del fenol-cloroformo se basa en las diferentes capacidades de estos disolventes para
extraer y separar diferentes componentes celulares. El fenol es un compuesto orgánico que
actúa como desnaturalizante, rompiendo las membranas celulares y liberando el ADN
presente en el núcleo o mitocondria. Por otro lado, el cloroformo es un solvente que se usa
para separar el fenol y la proteína debido a su mayor afinidad por el fenol.
El objetivo de la practica realizada fue la extracción del ADN con el método Fenol
Cloroformo, seguido de los protocolos para la obtención de muestra biología, preparación de
extracción y seguimiento del protocolo respectivo.
La extracción de ADN desempeña un papel fundamental en la investigación científica, el
diagnóstico médico, la medicina forense, la agricultura y la conservación de especies. Es una
herramienta esencial para comprender la genética, identificar enfermedades genéticas,
resolver crímenes, mejorar la agricultura y proteger la biodiversidad

MATERIAL Y METODOS
 CENTRIFUGA marca (Thermo electron corporation), modelo (Micromax RF)

 Muestras biológicas (Cola de pescado)

 Equipo de seguridad personal (Bata de laboratorio, guantes)

 Tubos de ensayos

 Solución de Lisis (Tris HCL 1mol)

 Fenol

 Cloroformo

 Gel de agarosa

 Peine

 Buffer TAE

 Buffer TE

 Matraz

 Microondas

 Alcohol de 92% y 70%

 Cámara Electroforesis

 Pipeta

 Parafilm

 Micropiteta

 Reactivo Lodin

 Reactivo Red Gel

 Fotodocumentador marca (UVITEC)

 Espectrofotómetro (EPOCH 2 BIO-TEK)

 Mini Incubador
 RNAsa Mix A1/T1 (2mg/ml)

METODOS
Recolección de muestra
Las muestras fueron obtenidas en diferentes puntos, mercado buenos aires, mercado El
progreso, mercado Bellamar y Plaza vea. Se compraron pescados como bonito y caballa.
Se les hizo un corte transversal a la altura de las colas de los pescados como muestra
biológica para la extracción de ADN.

Preparación de muestra
Las colas que fueron cortadas se colocaron en un recipiente transparente junto con alcohol
de 96% que cubra completamente la muestra.
Extracción del ADN
En el día 1, se agregó a cada tubo Eppendorf 300 micro litros de solución 1 y 10 micro
litros de proteinasa K.
Se agregó las muestras a cada tubo previamente se secó el exceso de ETANOL de la
muestra biológica y se dejó incubar durante toda la noche a 37 °C, se dejó con movimiento
en el mini incubador habiendo sellado cada tubo con parafilm.
En el día 2, se puso en una solución de lisis 37°C, para romper el tejido y facilitar la
extracción del ADN y se colocó en la centrifuga y termino en un estado líquido.
Se llevaron las muestras a la cámara de gases para incluir 400 microlitros de FENOL, luego
se agregó 400 microlitros de CLOROFORMO para separar el ADN, se colocó 20min en
movimiento, luego se colocó en la centrifuga equilibrando los tubos a 12 000 RPM por
5min a 12°C.
Se preparó el gel agarosa (reactivo polvo al 1%), se utilizó 0.80g, se usó un molde con los
peines para dejar huecos en el gel.
Se preparó el buffer TAE 5x 80ml mas la agarosa en un matraz, mostrándose usa solución
blanquecina que luego fue llevada al microondas por 2min, evitando que hierva hasta que el
resultado fue una solución transparente y se enfrió mediante un taper con agua simple
moviendo el matraz con la solución en la superficie, posteriormente se vertió al molde con
los peines.
Luego de centrifugar las muestras, la fase acuosa se colocó en otros tubos, se retiró 200
microlitros, se cortó la punta del tip para evitar sacar tocar el material de la interfase.

Purificación
Se purificó el ADN con alcoholes, se procedió a empezar con el alcohol de 92% ya que
ayudó a precipitar en el fondo de tubo, posteriormente se colocó a la centrífuga a 12 000
RPM por 5 minutos luego se retiró el alcohol cuidadosamente con la micropipeta y se
procedió con el alcohol de 70% (el protocolo dice 10ml), se retiró todo el alcohol con
cuidado evitando que se despegue el pellet y se suspendió en 50 microlitros buffer TE

Cámara de electroforesis
Se colocó el gel de agarosa con el buffer con los reactivos lodin (1 micolitros) y red gel
(3microlitros) en 3 microlitros de ADN y se dejó las muestras durante 30 minutos en la
cámara de electroforesis
 RESULTADO Y DISCUSIONES

(Cuantificación) espectrofotómetro, los resultados estaban en unas fotos acerca del rango de 1.8 y 2
para ver si estaban contaminadas

Resultado del foto documentador

Imagen de la chica que mostro al final

CONCLUSIONES

RECOMENDACIONES

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS