INFORME FINAL LABORATORIO BIOQUIMICA

ADRIANA ESPERANZA TRUJILLO MARTINEZ C.C. 37551212

JESSICA VIVIANA SNCHEZ PREZ C.C 1064837645

JOS LUIS GALVN MENDOZA C.C. 1065875058

YARLEY RAMIREZ FLOREZ C.C. 63552738

TUTORA VIRTUAL: GOLDA MEYER TORRES VARGAS

ASESORA DE PRCTICA
DIANA CAROLINA PARRA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BSICAS TEGNOLOGIA E INGENIERIA
CEAD BUCARMANGA
 INTRODUCCIN

Bioqumica parte fundamental de la carrera de ingeniera y ciencia que estudia

de los seres vivos el cual permite comprender los mecanismos de formacin y
transformacin de nutrientes como protenas, carbohidratos, lpidos y cidos
nucleicos parte fundamental de los alimentos. Con el desarrollo del laboratorio
complementamos los conceptos fundamentales adquiridos.
El desarrollo practico preparamos reactivos, observamos los mtodos cualitativos
para la identificacin de aminocidos, realizamos ensayos enzimticos
cualitativos, aislamiento y determinacin de cidos nucleicos, propiedades
fisicoqumicas de los carbohidratos, para el desarrollo de estas prcticas
utilizamos materias primas de uso comn como harinas, leguminosas, frutas,
verduras, tejidos de origen animal, y material reactivo de uso de laboratorio, esto
con el fin de comprender los temas relacionados con el curso de bioqumica.
 OBJETIVOS

Usar adecuadamente los reactivos, identificando su funcin en cada una de

las prcticas en las cuales los vamos a utilizar

Identificar los aminocidos como unidades estructurales de las protenas,

estableciendo la relacin entre su estructura y su funcin, perdida de esta al
virar su pH y solubilidad.

Identificar las enzimas como catalizadores en los procesos bioqumicos,

analizando la actividad enzimtica de la sacarosa y alfa-amilasa, al variar
su temperatura de trabajo

Identificar el ADN de la cebolla

Identificar los monosacridos y polisacridos, establecer la relacin entre la

estructura y la funcin al virar sus propiedades fisicoqumicas
 PRCTICA N 1: METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE
AMINOACIDOS Y PROTEINAS

MATERIALES Y EQUIPOS

Hgado
Huevo
Marcado de vidrio
Cinta para rotular
Tubos de ensayos
Pipetas
Esptulas
Gradilla
Papel filtro
Agua destilada
Sacarosa
NaOH 30% y 40%
Ninhidrina
Sulfato cprico
NHO3 concentrado
Acido actico glacial
HSO4 concentrado
Cristales de sacarosa

EXTRACTOS PROBLEMA

EXTRACTO DE HUEVO EXTRACTO DE HIGADO

Resultados de la Prueba de Biuret:
Color violeta: Positivo (detecta los grupos aminos en las protenas)
Color azul: Negativo

ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA DE BIURET (huevo)

Procedimiento: En un tubo de ensayo tomamos 2 ml de la muestra de HUEVO y

luego le adicionamos 2 ml de NaOH a la muestra que estaba en el tubo de
ensayo, y se le adiciona el cido cprico y se agita por 10 minutos.
Resultado: La muestra tomo color violeta, se observa enturbiamiento y mostro
dos fases. Reaccin positiva.

ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA DE BIURET (hgado)

Procedimiento: En un tubo de ensayo tomamos 2 ml de la muestra de HIGADO

y luego le adicionamos 2 ml de NaOH a la muestra que estaba en el tubo de
ensayo, y se le adiciona el cido cprico y se agita por 10 minutos

Resultado: La muestra tomo calor caf oscuro. Reaccin negativa

 ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA DE ACIDO GLAXILICO (huevo)

Procedimiento:Extracto problema 2 ml, cido actico glacial 2 ml, HSO4

concentrado, dejar caer lentamente por las paredes del tubo inclinado, hasta que
se formen dos capas. Observe el cambio de color en la interface. Si se forma un
anillo violeta en la interface de los dos lquidos, la reaccin se considera positiva

Resultado: En esta prueba despus de agregar el cido sulfrico se observ que

hubo separacin de fases, cambio de color y hubo separacin de fases, cambio
de color y el anillo que se formo fue de color lila bastante claro. Prueba positiva

ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA DE ACIDO GLAXILICO (hgado)

Procedimiento: Extracto problema, cido actico glacial 2 ml HSO4

concentrado, dejar caer lentamente por las paredes del tubo inclinado, hasta que
se formen dos capas. Observe el cambio de color en la interface. Si se forma un
anillo violeta en la interface de los dos lquidos, la reaccin se considera positiva.

Resultado: su color es oscuro, no se observa sedimentacin. En esta muestra se

observaron presencia de Aminocidos.
 ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA DE SOLVENTE ORGANICO
ACETONA (huevo)

Procedimiento: extracto problema 2ml, Acetona 2 ml, Observe la formacin de

precipitado (enturbiamiento)
Resultado: Se observa precipitado y enturbiamiento, hay formacin de dos fases
blanco lechoso en la parte superior y trasparente en la parte inferior, sin
partculas. Prueba positiva para enturbiamiento y precipitacin

ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA DE SOLVENTE ORGANICO

ACETONA (hgado)

procedimiento: Extracto problema 2ml, Acetona 2 ml, observe la formacin de

precipitado (enturbiamiento)

Resultado: Se observan dos fases de diferentes colores y muchas

macropartculas en le muestra. Positiva para precipitado y negativa para
enturbiamiento.
 ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA DE PRECIPITACION ACIDICA
(huevo)

Procedimiento: extracto problema 2ml, cido tricloroacetico al 10% 2 ml, agite y

observe la formacin precipitado (enturbiamiento)

Resultado: Finalmente al calentar cada una de las muestras se observa

desnaturalizacin de la protena, hay rompimiento de enlaces y separacin de
aminocidos, enturbiamiento en la parte inferior de la muestra. Prueba positiva

ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA DE PRECIPITACION ACIDICA

(hgado)

Procedimiento: extracto problema 2ml, cido tricloroacetico al 10% 2 ml, Agite y

observe la formacin precipitado (enturbiamiento)
Resultado: En esta muestra no se observa formacin de precipitacin, tampoco
enturbiamiento, su aspecto de color igual, no hay cambio fsico. Prueba negativa
 REACCION XANTOPROTEICA
ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA XANTOPROTEICA (huevo)

HNO3 bao maria

3 minutos bao
maria NaOH

Procedimiento: En el extracto problema se le adiciono 1 ml de HNO3

concentrado, se Mezcla bien, y luego se calentar a la bao mara y se observar.
Adicionar solucin de NaOH al 40% lentamente sin agitar y observar.

Resultado: Finalmente se observ que cambio la coloracin y se form de color

amarillo naranja ,hubo enturbiamiento y se observaron dos fases
ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA XANTOPROTEICA (hgado)

Bao maria
NaOH
3 minutos bao
HNO3 maria

Procedimiento: En el extracto problema se le adiciono 1 ml de HNO3

concentrado, se Mezcla bien, y luego se calentar a la bao mara y se observar.
Adicionar solucin de NaOH al 40% lentamente sin agitar y observar.

Resultado: En esta muestra se observ, separacin de fases, una transparente y

la otra caf.
 PRUEBA DE LIEBERMAN
ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA LIEBERMAN (huevo)

Sacarosa ebullicion 3 7 minutos

calentar minutos

Procedimiento: Al extracto problema se le adiciono, una pisca de sacarosa y 5

ml de cido clorhdrico

Resultado: toma color caf y hace ebullicin a los 3 minutos

 ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA LIEBERMAN (hgado)

ebullicion 3
minutos
Sacarosa 7 minutos

Procedimiento: Al extracto problema se le adiciono, una pisca de sacarosa y 5

ml de cido clorhdrico

Resultado: empieza ebullicin y se diluye, toma un color caf oscuro.

ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA NINHIDRINA (huevo)

Peso molecular nihidrina: 178.15

Ph 7 Bao maria

Procedimiento: extracto problema 2ml cido tricloroacetico al 10%

Agite y observe la formacin precipitado (enturbiamiento)
Resultado: despus de 2 minutos el color se mantiene
 ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA NINHIDRINA (hgado)

Peso molecular nihidrina: 178.15

Ph ajustado bao mara

Procedimiento: extracto problema 2ml cido tricloroacetico al 10%

Agite y observe la formacin precipitado (enturbiamiento)
Resultado: Despues de dos minutos el color se mantiene. negativa

ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA DE DESNATURALIZACIN DE

PROTEINA (Huevo)

Procedimiento: extracto problema 2ml se Caliente en agua hirviendo durante

10 minutos asegurndose que la temperatura interna llegue a los 95 100C.
Observe la formacin de Precipitado (enturbiamiento).

Resultado: Se observa destruccin de la protena, enturbiamiento, precipitacin y

cambio de color en el momento del calentamiento hay desnaturalizacin de las
protenas. positiva
 ANALISIS DE LABORATORIO EN PRUEBA DE DESNATURALIZACIN DE
PROTEINA (Hgado)

Procedimiento: extracto problema 2ml se Caliente en agua hirviendo durante

10 minutos asegurndose que la temperatura interna llegue a los 95 100C.
Observe la formacin de Precipitado (enturbiamiento).

Resultado: Se observa destruccin de la protena, enturbiamiento, precipitacin y

cambio de color en el momento del calentamiento hay desnaturalizacin de las
protenas. Positiva
PRACTICA 3: ANALISIS ENZIMATICO CUALITATIVOS

MATERIALES Y EQUIPOS

Vaso de precipitado
Mortero
Esptula
Vidrio reloj
Agua destilada
Sacarosa
Fructosa
Reactivo selliwanoff
Agitador de vidrio
Pipeta
Probeta
Tubos de ensayos
Gradillas
Pinzas para tubos de ensayos
Experimento 1
Extracto de enzima
sacarosa

17 gr de levadura en mortero, triturar hasta polvo

100 ml de agua destilada en vaso precipitado

Adicionar la levadura

Agitar por 10 minutos

Filtrar con papel filtro

Agregar el filtrado a un vaso de precipitado

Agregar 50 ml de acetona mezclar

Dejar en reposo 10 minutos

Descontar el lquido sin perder el precipitado

Colocar en hielo

Marcar recipiente como

solucin enzima
 1. PRUEBA ENZIMA CRUDA

1.1 CON SACAROSA

Procedimiento: En 3 ml de agua
destilada se adicionan 2 ml de solucin
de sacarosa y se calienta llevndola a
una temperatura de 30 a 38 c,
transcurrido 5 min hay separacin de
enzimas, la sacarosa queda en el
precipitado de la solucin.

1.2 PRUEBA DE SELLIWANOFF

Procedimiento:
se adicionan
3 ml de fructosa al 5%
1 ml de reactivo selliwanoff
se lleva a bao mara por 4 min se
observa separacin

1.3 PRUEBA FELING
No se obtuvieron evidencias porque
esta practica fue realizada por otro
grupo y desecharon de inmediato los
resultados
Procedimiento:
Se adicionan
3 ml de la enzima preparada
1 ml de reactivo selliwanoff
Se lleva a bao mara por 4 min se
observa una solucin homognea y se
mantiene el color inicial
Procedimiento:
Antes de calentar tenia un color azul
oscuro, despus de calentar en bao
mara presento 2 fases color claro y
espeso respectivamente por accin de
la temperatura sobre la actividad
enzimtica
 2. ENZIMA HERBIDA

2.1 PRUEBA FEHLING

Procedimiento:
Inicialmente era de color azul la mezcla,
se lleva a hervir por 3 min y cambio a
verde y en instante se torno a color
naranja

2.2 PRUEBA DE SELLIWANOFF

No hay evidencias fotogrficas Procedimiento:

debido a que el grupo que realizo la Se dividi en 2 fases en el fondo
practica las desecho inmediatamente sustrato color berge y el resto
transparente turbio.
Resultado positivo
 Experimento 2:

Extracto de enzima
amilasa
10 ml de saliva

10 ml de agua destilada

Mezclar

Filtrar

Rotular solucin de enzima

amilasa

Llevar a incubadora de 37 38 c

DETERMINACION DEL PH PTIMO DE LA AMILASA SALIVAL

Se prepararon 5 tubos y se adiciona a cada minutos a cada uno 4ml de enzima,

luego se llevaron a incubar a 38 C `por 20 minutos. Trascurrido los 20 minutos en
cada tubo de ensayo se colocaron 0.2 ml de acido tricloracetico al 10% y se
adiciono de forma inmediata a cada tubo 3 gotas de lugol.

1. Acido clorhdrico PH 1
2. Acido tartrico PH 3
3. Buffer PH 7
4. NaOH al 0.1 N PH 11
5. NaOH al 0.5 N PH 11

(No se obtienen evidencias fotogrficas)

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE ACTIVIDAD ENZIMATICA

 Procedimiento:
Se adicionaron
1 ml de agua destilada
0.2 ml de KCL
1 ml de solucin de almidn
Se analizaron 3 muestras la primera se
llevo a temperatura baja (agua hielo)
por 2 min la segunda a temperatura
ambiente y la tercera a 90c por 10 min.
respectivamente como se evidencia en
la imagen
A cada tubo se le adiciona 2 ml de la
enzima y se incubo por 20 min despus
0.2 ml de acido tricloracetico al 10%
seguido 4 gotas de lugol.

DEGRADACION ENZIMATICA POLISACARIDOS

Procedimiento:
Se adicionaron 3 ml de solucin de
almidn, 2 gotas de saliva en los 3
tubos de ensayos marcados A, B y C
Y se de adiciono lo siguiente
A 1 ml de acido clorhdrico al 5%
B 1 ml de NaOH al 5%
C 1 ml de agua
Se llevaron a bao mara a una T de
37 c por 10 min y se le adicionaron 5
gotas de lugol
al final todos los tubos tenan el mismo
color a diferencia del B ( color morado
claro) presenta menos precipitacin del
polisacrido y A es el color oscuro
A y C morado mas oscuro
Procedimiento:
Se utilizaron otros 3 tubos de ensayo
previamente marcados D, E y F se le
adiciono 3 ml de almidn y 2 gotas de
saliva, durante 10 min colocamos el D
en hielo, el E en bao mara a 37c y el
F en agua hirviendo y despus se le
adicionaron 5 gotas de lugol
Se concluyo que el D y E conservaron
el mismo color por bajas T y no se
desnaturalizaron a diferencia del F que
cambio de color por la
desnaturalizacin de la protena por alta
temperatura
PRACTICA 7: AISLAMIENTO Y DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS

procedimiento

Cortar cebolla en cuadros

Alistar vaso precipitado

Echar 2 cucharadas de detergente

1 cucharada de sal

Agua destilada

Licuar 30 segundos

Filtrar

Solucin filtrada

3 cucharadas de zumo de papaya

Mezclar vodka

Dejar caer lentamente por pared del vaso

Reposar 3 minutos

Echar lugol para darle color y

visualizar mejor
PRACTICA 8: PROPIEDADES FISICOQUIMICAS DE LOS CARBOHIFRATOS

MATERIALES Y EQUIPOS
Trozo de pan
Papa
Tubos de ensayo
Vasos precipitados
Pipetas
Solucin almidn
Mecheros
Lugol
Reactivo de tollens
Reactivo de fehlin A y B
SOLUBILIDAD

TUBO ENSAYO 1

0.5 gramos de pan

2 ml de agua destilada

Agitar 1 minuto

Dejar 30 segundos en reposo

Observar
TUBO ENSAYO 2

0.5 gramos de pan

2 ml de alcohol etlico

Agitar 1 minuto

Dejar 30 segundos en reposo

Observar
 TUBO ENSAYO 3

0.5 gramos de papa

2 ml de agua destilada

Agitar 1 minuto

Dejar 30 segundos en reposo

Observar

TUBO ENSAYO 4

0.5 gramos de papa

2 ml de alcohol etlico

Agitar 1 minuto

Dejar 30 segundos en reposo

Observar
 Evidencias fotografas

Solubilidad de los tubos Solubilidad de los

de ensayo 3 y 4 tubo de ensayo 1 y 2

DISCUSIN DE RESULTADO

El ensayo de Liebermann-Burchard se usa para determinar colesterol

colorimtricamente (tambin se hace por medio de enzimas).
La reaccin se hace en un medio anhidro acido fuerte (anhdrido actico-cido
sulfrico).

La fase inicial del proceso estriba en la prolongacin del grupo hidroxilo del
colesterol seguido de una deshidratacin para formar un ion carbono 3,5-
colestadieno. La oxidacin secuencial de este carbonacin por el cido sulfrico
produce un compuesto cromo form de estructura no bien definida, que absorbe
energa en la zona de la luz

Se basa en la reaccin coloreada (verde) que dan aquellas sustancias que tienen
como ncleo el ciclo pentano perhidrofenantreno

XANTOPROTEICO

Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo,

cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La prueba da
resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos
bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la
prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.

Los anillos aromticos presentes en algunos aminocidos reaccionan con cido

ntrico concentrado formando nitro derivados de color amarillo o anaranjado por lo
cual esta reaccin permite reconocer la presencia de Tirosina, Fenilalanina y
Triptfano.

REACCION DE LA NINHIDRINA

La Ninhidrina es un poderoso agente reactivo comn para visualizar las bandas

de separacin de aminocidos por cromatografa o electroforesis, tambin es
utilizada con fines cuantitativos para la determinacin de aminocidos 2 Reacciona
con todos los aminocidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una
coloracin que vara de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado
prpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloracin producida por la
Ninhidrina es independiente de la coloracin original del aminocido. Esta prueba
es positiva tanto para protenas como para aminocidos. En aquellos casos donde
no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de Ninhidrina, indica que no hay
protenas, pero si hay aminocidos libres.

PRUEBA DE DENATURALIZACION POR CALOR

Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de
orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena poli
peptdica reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional
fija.

Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el disolvente

disminuir su estabilidad en disolucin y provocar la precipitacin. As, la
desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas
elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitarn la
agregacin intermolecular y provocar la precipitacin. La precipitacin suele ser
consecuencia del fenmeno llamado desnaturalizacin y se dice entonces que la
protena se encuentra desnaturalizada.
 CONCLUSIONES

Con el desarrollo de esta prctica pudimos interiorizar varios conceptos que tenan
en la parte terica, con la realizacin de estos ensayos pude ver a fondo procesos
como la desnaturalizacin de las protenas, identificacin y reacciones de los
aminocidos de acuerdo al medio en el cual se est preparando y la coloracin
caracterstica segn el resultado de las pruebas, pude observar como la
temperatura afecta directamente en cuanto a la desnaturalizacin de las protenas
y cuales cambios surgen a partir de estas, adems la obtencin de almidones y
ADN de materiales orgnicos dndonos un enfoque real de los procedimientos de
laboratorio utilizados en la actualidad en la planta de alimentos.
 APLICACIONES

Estos laboratorios son importantes porque nos dan conocimiento claro de la

composicin y cualidades de determinados alimentos que nos sern tiles para
nuestra vida diaria como futuros ingenieros de alimentos ADRIANA TRUJILLO

La bioqumica nos permite a los ingenieros de alimentos por medio de sus

herramientas modificar las caractersticas de los alimentos para generar uno
nuevo, un claro ejemplo es el yogur, las carnes fras o el queso. Tambin nos
permite mejorar el valor nutritivo de los mismos y su calidad, en algunos productos
se adiciona microorganismos que ayudan en el proceso del metabolismo para
hacerlo por decir de alguna manera un proceso ms eficiente JESSICA
SANCHEZ

La aplicacin de estos laboratorios a la ingeniera de alimentos son fundamentales

ya que nos dan nociones de todos estos procedimientos que son de gran
importancia en la industria de los alimentos porque de ah dependen muchas
explicaciones a reacciones bioqumicas que se puedan presentar en la cadena
alimentaria o tambin es la base para resolver problemas e innovar en cuanto a la
lnea de alimentos en general. JOSE LUIS GALVAN*

Al realizar este laboratorio y aunque no se realizaron todas las practicas como

indica la gua completa, con los que realizamos, abarcamos la mayora de temas
del curso, el cual son fundamentales para un ingeniero de alimentos con la
identificacin de aminocidos, protenas, enzimas, carbohidratos identificando su
reaccin con la preparacin y dilucin de reactivos indicados para los cambios de
los alimentos influenciados por los cambios de temperatura, variando su pH. A
travs de coloraciones identificamos el ADN de la cebolla, demostrando que con
implementos sencillos y amuestro alcance identificamos los componentes de los
nutrientes. YARLEY RAMIREZ
 BIBLIOGRAFIA

Jerez, Garca Alberto (2011) Modulo Bioqumica. UNAD, Duitama,

Acreditador
Billo, S.(2002) Resumen sobre precipitacin de protenas por
desnaturalizacin

Clark JM (1966): Bioqumica Experimental, 1 ed. Editorial Acriba

(Zaragoza, Espaa), pg. 42-45.

http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/cel
ular/centrizonal.htm visitado el 27 marzo 2013 a las 22:32

http://www2.uah.es/quimica_organica/docencia/practicas/exp_sint_org_I.pdf
visitado el 27 de marzo 2013 a las 21:48