UNIVERSIDAD DE PANAMÁ

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES, EXACTAS Y

TECNOLOGÍA
ESCUELA DE QUÍMICA

Nombre
Milagros Ronel
3-741-101
Ismael Mora
3-740-1165

Asignatura
Bioquímica II (laboratorio)

Profesor
Alexander Arosemena

Tema
La orina

2018
 INTRODUCCIÓN

La orina es líquido excretado por los riñones, cuya composición es bastante

estable, si bien la proporción de los distintos componentes varía según la dieta.
En condiciones normales es transparente, de un color anaranjado y
ligeramente ácida. Su principal componente (además del agua) es la urea
(unos 82 g/día). La composición patológica de la orina puede orientar en el
diagnóstico de diversas enfermedades.
 Constituyentes normales de la orina:
 Urea: es el principal producto nitrogenado del catabolismo de las
proteínas.
 Creatinina: derivado de la creatina (reservorio energético en el músculo
que repone el ATP).
 Ácido úrico: derivado del catabolismo de las bases nitrogenadas
púricas. Principal producto nitrogenado de aves y ciertos reptiles.
 Cl- y Na+: junto con la urea, son las sustancias más abundantes en la
orina.
 Sulfatos: derivados de las proteínas del alimento o de la actividad
celular.
 Fosfatos: derivados principalmente de los alimentos y, en menor
proporción, del metabolismo celular.
 Agua: es el compuesto más abundante, y actúa como solvente de las
sustancias descritas.
 Otros: alantoína (derivado el ácido úrico), pigmentos, electrolitos (K+,
Ca+2, etc.)
Cuando se encuentran componentes en la orina diferentes a los ya citados, se
puede intuir que el individuo presenta algún cambio importante en el
metabolismo, la mayor parte producto de una enfermedad.
 PROCEDIMIENTO, RESULTADOS Y ANÁLISIS

A. Descomposición de la urea por las ureasas.

Procedimiento: se agregan 4 gotas de una solución de rojo de fenol al
0.04% a 3 ml de una solución de urea 0.1 M. En caso de no obtener un
color rosado, se agrega la solución de NaOH 0.1 M, gota a gota, hasta
que esta coloración aparezca. Se agrega ácido acético 0.1 M, gota a
gota, hasta que el color rosado apenas desaparezca, lo cual tiene lugar a
un pH de aproximadamente 7. Se agregan 0.5 g de la nuez de las
semillas del zapallo y se agita. Se deja reposar por algún tiempo. Se
observa y se anota cualquier cambio de color. Se explican los
resultados. Se repite con orina.
Resultados: El tubo de la urea presento un mayor cambio que la orina

Urea Orina
Análisis:
Uno de los principales desechos del metabolismo de las proteínas es la
urea, por ende, en una muestra de orina siempre se debe encontrar este
compuesto. En este caso es claro que el tubo con urea tendrá el mayor
cambio por la reacción debido a que las muestras de orina pueden tener
mas agua de lo normal según la alimentación de la persona.

B. Reacción del ácido fosfotúngstico con el ácido úrico

Procedimiento: Se diluyen 3ml de orina con 2ml de agua en un tubo de
ensayo. Se agregan 2ml de la solución saturada de Na2CO3 y se agita.
 Se agregan 2ml de la solución de ácido fosfotúngstico y se observa el
color azul que se desarrolla.
Resultados: No ocurrió cambio de color.

Análisis:
Los niveles de acido úrico en una persona sana son muy bajos, por ende
el resultado de esta experiencia puede parecer negativo pero, se puede
deber a la baja concentración del acido en la muestra.
C. Amoniaco urinario.
Procedimiento: se tratan de 5 ml de orina con NaOH 0.1 N hasta
reacción alcalina a la fenolftaleína, que se emplea como indicador. Se
calienta suavemente y se nota el olor característico del amoníaco.
Resultados: se logro percibir el olor del amoniaco.

Análisis:
Una pequeña cantidad de urea puede pasar a amonio en la orina, al
tratarla con hidróxido de sodio este pasa a amoniaco que con calor pasa
a su fase gaseosa, el resultado de esta prueba. Además el hidróxido de
sodio puede reaccionar con la urea y descomponerla hacia la formación
de amoniaco.

D. Reacción del ácido pícrico para la creatinina.

 Procedimientos: se ponen 5 ml de orina en un tubo de ensayo y 5 ml de
agua en otro tubo de ensayo. Se agregan 1 ml de la solución saturada de
ácido pícrico y 1 ml de NaOH 2M a cada uno de los dos tubos. Se
observan y se anota el color en cada caso.
Resultados:

Agua Orina
Análisis:
El tubo con agua funciona como blanco, este al no contener el analito
no cambia de color, por ende, si el tubo con orina cambia de color se
concluye que este contiene creatina y efectivamente esto es lo que
sucedió. La creatina es uno de los componentes principales (después de
la urea) de la orina.

E. Reacción del nitroprusiato para la creatinina.

Procedimientos: Se agregan 5 gotas de nitroprusiato de sodio 0.1 M a 5
ml de orina. Se agrega NaOH 1 M, gota a gota, hasta que aparezca un
color rojo. Se hierve y se anota el cambio de color. Se acidifica
cuidadosamente con ácido acético glacial y se calienta por 1 min. Se
anotan los resultados.
Resultados:
 Análisis:
Al igual que en la prueba anterior se necesita detectar creatina, esta vez se
utiliza nitroprusiato que cambia de color azul en cuando es calentado y es
positivo.

F. Reacción para los fosfatos.

Procedimiento: Se agrega NH4OH diluido (1:10) a 10 ml de orina
hasta reacción alcalina al tornasol. Se calienta ligeramente la mezcla y
se filtra. Se designa el precipitado obtenido con la letra A. se agregan 3
ml de la mixtura magnesiana al filtrado y se calienta ligeramente. Se
observa el precipitado que se obtiene en este caso y se llama precipitado
B.
Resultados:

A B
Análisis:
 El amoniaco se utiliza primero para mantener un pH básico lo que hace
que precipiten algunos componentes, lo segundo es que en este medio
se favorece a la formación de iones fosfatos que al reaccionar en medio
amoniacal con magnesio precipitan como fosfatos de magnesio de color
blanco.

G. Prueba para el indican o reacción de Obermayer

Procedimiento: se tratan 5 ml de orina con 1 mL de acetato de plomo
al 20 % y se filtra. Se trata el filtrado con 5 mL del reactivo de
Obermayer y se agita por 2 minutos. Se añaden 3 ml de cloroformo y se
agita el contenido del tubo vigorosamente, para permitir que el
cloroformo extraiga el azul índigo que se ha producido en la oxidación
del indican que se hallaba presente.

Resultados:

Análisis:
Esta prueba es para la detección de indican, un compuesto producido por las
bacterias de la flora intestinal. La prueba es positiva cuando la fase orgánica
presenta un color azul. Cuando el color azul es muy pronunciado es debido a
la sobre producción del indican, algo que indica problemas en la flora
intestinal.
H. reacción para la glucosa.
Procedimiento: se adiciona 8 gotas de la orina patológica a 5 ml del
reactivo de Benedict contenidos en un tubo de ensayo. Se agita y se
pone el tubo en un baño maría hirviendo por 5 min. Se saca el tubo y se
 deja enfriar muy lentamente. Se registra el color del precipitado, en caso
de que lo haya, así como el color del líquido que sobrenada. Se repite el
procedimiento con la orina normal.
Resultados: Positivo para la orina patológica.

Patológica Normal
Análisis:
En la una muestra de orina sana no hay cantidades apreciables de
glucosa debido que los productos tanto de anabolismo como de
catabolismo de esta no son excretados, por ende, una orina con glucosa
en ella demuestra un problema metabólico, es por esto que solo la
muestra patológica da positiva (precipitado naranja de óxido de cobre
I).

I. Reacción de Rothera modificada para los cuerpos cetónicos.

Procedimiento: se pone 1 g del reactivo de nitroprusiano de sodio e un
tubo de ensayo y se agregan 5 ml dela orina patológica, filtrada o
destilada. Se mezcla hasta que se disuelva el reactivo de nitroprusiano.
Se agrega suficiente solución de NH4OH al 28 %, hasta que se formen
dos capas. la aparición de un color rojo purpura, similar al del KMnO4
en la zona de contacto entre las dos capas, indica la presencia de
acetona o de ácido diacético.
Resultados: Positivo para la orina patológica.

Normal Patológica
 Análisis:
Los cuerpos cetónicos son parte del metabolismo de los lípidos,
producto de un exceso en la producción de acetil-CoA, este exceso se
transforma a cuerpos cetónicos que pueden ser utilizados como energía
o pasar a otros ciclos metabólicos, por lo general no se excreta por la
orina. Al igual que en el caso anterior la presencia de estos compuestos
en la orina son producto de alteraciones metabólicas y por esta razón
esta prueba solo da positiva en la orina patológica.

J. Reacción de Gerhart para el ácido diacetico

Procedimiento: se agrega una solución de FeCl3 al 5 %, gota a gota a 5
ml de la orina patológica, hasta que termine de precipitar el FePO4. Se
filtra y se descarta el precipitado. El desarrollo de un color en el filtrado
indica la presencia del ácido diabético. Para confirmar estos resultados,
se hierve una porción de la orina patológica por 5 minutos con el
propósito de descomponer el ácido diabético. Se enfría y se repite la
prueba anterior con 5 ml de la orina patológica hervida, en cuyo caso se
deberá obtener una prueba negativa. Se repite el procedimiento con la
orina normal.

Resultados: Solo ocurrió reacción con la orina patológica.

Normal Patológica Hervida

Análisis:
Dado que el acido diabético solo esta en orinas de origen patológica esta
prueba solo dará positiva para la misma. La orina sana y la orina
hervida se utilizan como blanco y como muestra de que a temperaturas
altas el acido se descompone y por ende no da reacción.
K. Prueba de coagulación para las proteínas
Procedimiento: si la orina no está clara, se filtra 10 ml de la misma. Se
ponen 5 ml de esta orina en un tubo de ensayo y se calienta a ebullición.
Se mantiene la orina en ebullición por 1 o 2 minutos. En caso de que se
forme un precipitado, se agregan de 3 a 5 gotas de ácido acético, ello
indica la presencia de proteínas. Se hace la prueba tanto con la orina
patológica como con la orina normal.
Resultados:
Patológica Normal

Análisis:
En este caso no se obtuvieron resultados apropiados, pero en dado caso
la prueba hubiese resultado, la muestra patológica tendría precipitado,
dado que en la orina sana no hay proteínas (ciclo de la urea).

L. Reacción de Gmelin para establecer la presencia de Bilis.

Procedimiento: se ponen 5 ml de la solución de NaNO2 en HNO3
concentrado en un tubo de ensayo, y con una pipeta, se estratifican 2 ml
de la orina patológica sobre la superficie de la solución acida. Se
observará la formación de anillos coloreados en la zona de contacto
entre ambas capas, pero solamente la aparición de un anillo verde
comprobaría la presencia de pigmentos biliares. Se repite la prueba con
la orina normal.
Resultados: No se obtuvieron resultados en esta prueba.

M.Reacción de Kalk-Wildhirt para los pigmentos biliares.

Procedimiento: se tratan 5 ml de la orina patológica con 2 gotas de
azul de metileno al 0.25 %. En presencia de bilirrubina se desarrolla un
 color verde. Si aparece un color verde azulado, el resultado es dudoso.
Puede haber interferencias debidas a la presencia de un alto contenido
de un ocromo o debidas a la presencia de sangre en la orina. Se repite la
prueba con orina normal.
Resultados:
Rata Patológica Normal

Análisis: en la mayor parte no había presencia de pigmentos, pero se

puede observar un ligero cambio de izquierda a derecha en el color.

CUESTIONARIO
Descomposición de la urea por ureasas
¿Por qué se debe ajustar tan cuidadosamente el pH?
R:/ porque la enzima tiene un pH óptimo de 7.
¿Qué efecto tiene la presencia de los metales pesados sobre la reacción?
R:/ causarían la inhibición de la actividad de la enzima.
Explique ¿en qué forma esta reacción sirve de base para una cuantificación de
la urea?
R:/ por titulación se podría determinar la cantidad de hidróxido de amonio
presente.
Reacción del ácido pícrico para la creatinina
Compare esta reacción con aquella en que la glucosa se trata con una solución
de picrato alcalino.
R:/ En la solución básica con glucosa el acido es reducido por acción de la
glucosa
¿Son los mismos compuestos coloreados los que se forman en ambas
reacciones? Explique su respuesta.
R:/ con la glucosa se reduce la molécula, mientras que con la creatina se crea
un complejo. Son productos diferentes.
Reacción del nitroprusiato para la creatinina
¿Qué sustancia, presente en la orina, puede interferir con la reacción?
R:/ si hay residuos de aminoácidos como cisteína en la orina, esta puede
reaccionar con el nitroprusiato (test de Brand).
¿Cuál es el efecto del álcali sobre la creatinina?
R:/ ayuda a que pase de una molécula lineal a un ciclo
¿Qué productos se forman cuando se hierve la creatinina con NaOH?
R:/ se produce creatina.
¿Cómo se puede convertir la creatina en creatinina?
R:/ la creatinina se forma por la degradación de la creatina
Prueba para los Fosfatos
¿Cuál es la composición de los precipitados A y B?
R:/proteínas y sales de amonio. Mientras que el B fosfatos de magnesio y
amonio.
¿Qué sucede cuando se deja reposar por algún tiempo la orina?
R:/se sedimentan los productos en suspensión y algunos que se degradan por
la luz.
Reacción de Obermayer
¿Qué es el indican y bajo qué forma se encuentra en la orina?
R:/ es un β-glucósido, precursor del índigo, un colorante. Se excreta en forma
de indoxilsulfato de potasio(indican); sal potásica del acido indoxilsulfonico.
¿Cuál es el significado bioquímico del indican urinario?
R:/ El indicán urinario o indoxilsulfato de potasio procede del indol, cuerpo
formado en el intestino a expensas de los albuminoides y que sólo aparece en
la orina en los casos de insuficiencia hepática o de fermentaciones intestinales
intensas.
Reacción para la glucosa
¿En la presencia de cantidades detectables de glucosa en la orina un síntoma
definitivo de diabetes? Explique su respuesta.
R:/Si, la diabetes mellitus provoca un aumento de la concentración de glucosa
en la orina ya que al encontrarse una gran cantidad de esta en la sangre al
momento de ser filtrada por los riñones es probable que no se pueda realizar
de manera eficiente.
¿Qué se entiende por “umbral renal” y a que se denomina compuesto de
umbral?
R:/ El umbral renal de la glucosa, también llamado dintel renal, es la
concentración de glucosa en la sangre a la cual los riñones comienzan a liberar
glucosa hacia la orina.
¿Qué cantidad de glucosa puede contener una muestra de 24 Hr de un
paciente con glucosurina patológica?
R:/ 140 mg/dL
Reacción de Gerhart
Defina el término “cuerpos cetónicos” y explique su origen metabólico
R:/ Los cuerpos cetónicos son unos productos de desecho de las grasas que se
producen cuando el organismo recurre a la combustión de las grasas en lugar
de la glucosa para generar energía. Estos se sintetizan en la mitocondria del
hígado a partir de acetil coA; su degradación se da en la mitocondria de tejidos
extrahepáticos.
¿Cuál es el nivel de los cuerpos cetónicos en la orina normal?
R:/ Los niveles óptimos de cuerpos cetónicos en orina son de entre 0,5 y 3
mg/dL lo que indica que el individuo está bien adaptado a la utilización de los
cuerpos cetónicos como fuente de energía.
Prueba de coagulación de proteínas
¿Qué proteínas se precipitan en la prueba de la coagulación?
R:/ Albumina.
¿Qué sucede si se adiciona un exceso de ácido acético en esta prueba, aun
cuando las proteínas se encuentren presentes?
R:/ se disuelven.
En ocasiones se obtiene un precipitado al calentar la orina el cual se disuelve
mediante la adición de varias gotas de ácido acético 2N. de que es este
precipitado?
R:/ proteínas
¿La presencia de albumina es siempre indicio de una condición patológica?
R:/ en condiciones normales no debería aparecer, sin embargo aparece si se
tienen problemas urinarios, infecciones del hígado, fiebre, después de ejercicio
intensio o durante la menstruación en mujeres.
Reacción de Gmelin
¿Cuál es el significado de la presencia de cantidades anormales de pigmentos
biliares en la orina?
R:/ El incremento en los niveles de pigmentos biliares en la orina puede
deberse a:
 Enfermedad de las vías biliares
 Cirrosis
 Cálculos en las vías biliares
 Hepatitis
 Hepatopatía
 Tumores del hígado o de la vesícula biliar
 Ictericia

Conclusiones
De esta experiencia se puede concluir lo siguiente:
 La orina es una mezcla que contiene desechos del cuerpo. Se pueden
detectar enfermedades o inicios de estas por un cambio en su
composición.
  La mayor parte de estas reacciones son de tipo cualitativa y se ha
demostrado que se deben hacer otros análisis para determinar la
concentración de los componentes.
 Las principales rutas afectadas y que se pueden ver reflejadas en la
orina son: carbohidratos, nucleótidos y aminoácidos.
 Una muestra de orina sana no debería contener carbohidratos, indican o
proteínas.
 Algunos productos de desechos en la orina no deben provenir
directamente de una ruta metabólica, por ejemplo el indican es producto
de la flora intestinal.
Bibliografía
https://www.ecured.cu/Pigmento_biliar_en_orina

https://es.wikipedia.org/wiki/Indic%C3%A1n

http://www.iqb.es/monografia/fichas/ficha051.htm

https://es.wikipedia.org/wiki/Fisiolog%C3%ADa_renal#Umbral_plasm%C3%A1tico_renal

https://es.slideshare.net/AlejandraBrenes/metabolismo-de-cuerpos-cetnicos

https://www.miayuno.es/que-son-los-cuerpos-cetonicos/

https://www.portalesmedicos.com/diccionario_medico/index.php/Indicanuria

https://es.wikipedia.org/wiki/Creatinina

http://bioquimicarps.blogspot.com/2015/02/ureasa.html