LABORATORIO DE BIOQUÍMICA UNIVERSIDAD SANTIAGO DE CALI

LABORATORIO DE MACROMOLÉCULAS EN LAS CÉLULAS

López Anyeli1, Martínez Luisa2, Motta Veronica3, Ruiz Eliana4

Anyeli.lopez00@usc.edu.co1 - - Luisa.martinez01@usc.edu.co2-
veronica.motta00@usc.edu.co3 - - eliana.ruiz03@usc.edu.co4.

Universidad Santiago de Cali, Facultad de Ciencias Básicas, Laboratorio de Bioquímica.

Informe presentado a la profesora Omaira Lizcano

Fecha de entrega 00/00/2021

RESUMEN: En esta práctica experimental se realizó xxx

INTRODUCCIÓN

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Se adiciono una cucharada de levadura y arena

lavada debidamente seca a un mortero, se trituró
cuidadosamente durante 5 minutos, una vez
triturado se le adiciono ácido tricloroacético al
5% y se continuó macerando durante 3
minutos.se espero a que precipitara la arena y se
transvaso el sobrenadante para ser llevado al
equipo de centrifugado por un tiempo de 8
minutos y a 3000 rpm. Del sobrenadante obtenido inicialmente, se tomó
1 mL que fue llevado a un tubo de ensayo al cual
se le adiciona 2 mL de alcohol etílico. La
solución homogénea obtenida, se llevó a un baño
Finalizados los 8 minutos de centrifugado se de hielo.
observó en el tubo de ensayo dos fases
conformadas por sobrenadante y precipitado; en
el sobrenadante se encuentra el GLUCÓGENO y
en el precipitado ÁCIDOS NUCLEICOS Y
PROTEÍNAS.
Del sobrenadante obtenido inicialmente, se tomó
1 mL que fue llevado a un tubo de ensayo al cual
se le adiciona 2 mL de alcohol etílico. La
PRECIPITACIÓN DEL GLUCÓGENO solución homogénea obtenida, se llevó a un baño
de hielo.
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Se trasvasa a un tubo de centrifugado y se lleva sobrenadante y un precipitado. (El sobrenadante

al correspondiente equipo durante 5 minutos a
3000 rpm. Una vez finalizado el proceso de
centrifugado, se obtuvieron dos fases
sobrenadante y precipitado.
El sobrenadante se descarta y al precipitado se le
adiciona el mismo volumen de agua destilada
(Muestra problema)
ácidos nucleicos y precipitado proteínas)
PRECIPITADO DE PROTEÍNAS
El precipitado que contiene las proteínas se
sumergió en un baño de temperaturas bajas por
un tiempo y se le realizó prueba de biuret lo cual
verifica la presencia de proteínas en muestra
problema.

Al precipitado se le adiciono 2 ml de la solución

PRUEBA LUGOL de NaCl al 0.15 M (solución No 1)

Se trabaja con la muestra problema, un blanco

del proceso y su respectivo patrón en una lámina
de vidrio, se le adiciono reactivo de orcinol 2
gotas y se observa el cambio de color en las
muestras. (De color claro a color oscuro,
determina la presencia de dicho analito en
muestra)
BIURET
En dos tubos de ensayo: Al tubo No 1, se le
adiciono 1 mL de solución No 1 y tubo No 2, se
le adiciono 1 ml de solución de NaCl al 0.15 M.
Para finalizar a los dos tubos de ensayo se le
adiciono 0.5 ml de solución de sulfato de cobre y
1 mL de NaOH 10 M, se esperó por 10 minutos
observándose un cambio de color en unos de los
tubos de ensayo lo cual contenía proteínas. (De
color azul a color purpura)

PRECIPITADOS ÁCIDOS NUCLEICOS Y

PROTEÍNAS (SEPARACIÓN No 1)

Al precipitado inicial obtenido se le adiciono 15

mL de NaCl al 10% cuidadosamente se agitó, se
trasvasa a un tubo de centrifugado. Una vez se
trasvase se llevó a baño maría por 10 minutos y
se llevó al equipo de centrifugado por 5 minutos PRECIPITADO DE ÁCIDOS NUCLEICOS
a 3000 rpm. Se obtiene en dos fases: un
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De la separación No 1 se obtiene un
sobrenadante donde se encuentran los ácidos
nucleicos, del sobrenadante se tomó 1 mL y se
lleva a un balón de centrifugado. Se coloca en
una baño de temperatura bajas con el fin de
formar los ácidos a mayor escala,una vez
culmina el proceso de temperatura se lleva al
equipo de centrifugado por 8 minutos a 3000
rpm.
Pasado los 8 minutos se obtienen dos fases;
sobrenadante y precipitado, el sobrenadante se
desecha y al precipitado se le adiciono 1 mL de
amortiguador salino (solución No 2)
PRUEBA BIOQUÍMICA PARA ÁCIDOS
NUCLEICOS: BIAL
En dos tubos de ensayo: Tubo No 1 se adiciona
0.5 ml de solución No 2 y Tubo No 2 se adiciona
0.5 ml de amortiguador salino. Para finalizar a
los dos tubos de ensayo se le adiciono 1 mL de
reactivo de orcinol, se mezcló y se colocaron en
un baño de agua caliente durante 5 minutos.
Observándose un cambio de color en la muestra
problema (si la muestra problema contiene el
analito, el color de la muestra vira a un verde).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Para la precipitación de glucógeno
(carbohidratos) tratamos inicialmente la
levadura con ácido tricloroacético con el
propósito de separar por precipitación el
glucógeno de los ácidos nucleídos y proteínas de
Saccharomyces sp que es un hongo unicelular
que realiza la fermentación alcohólica, proceso
anaeróbico oxidativo donde se transforma
azucares en alcoholes (etanoles), para este
proceso el hongo necesita enzimas, que son
proteínas en su células.
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Para la precipitación de los ácidos nucleicos y
las proteínas que se encontraban en las células
de Saccharomyces sp. El ácido tricloroacético
(TCA) es un ácido débil, con pH bajo, por
lo cual no hidroliza los enlaces peptídicos de
las proteínas,
Observamos que después de la primera
centrifugada (para las proteínas no miscibles,
separación por densidad) se obtuvo el
precipitado beige espeso de ácidos nucleídos y
proteínas y el sobrenadante transparente de
glucógeno. Para compactar o mejorar la
molécula se utiliza etanol 96 % hace que las
moléculas menos solubles salgan de solución y
se obtiene un color blanco tiza evidenciando el
glucógeno.
Ahora con el objetivo de validar o comprobar
que el precipitado obtenido es glucógeno,
realizamos la prueba de lugol con reactivo de
yodo según procedimiento y observamos que la
prueba da positiva debido a que nuestro
precipitado cambian de color tonalidad diferente,
el blanco no cambia de color.
La reacción del Biuret sirve para analizar
proteínas solubles, pues los compuestos que
contienen dos o más enlaces peptídicos, péptidos
y proteínas, dan un color rosado o lila
característicos cuando se tratan con sulfato de
cobre diluido en solución alcalina. El color se
debe al complejo de coordinación que se forma
entre el átomo de cobre y cuatro átomos de
nitrógeno provenientes de enlaces peptídicos
(dos de cada cadena peptídica).
El reactivo de orcinol se usa para marcar los
ácidos nucleicos (ADN y ARN), debido a que
interactúa con las pentosas, en este caso con la
ribosa y la desoxirribosa, esta reacción libera
las pentosas y la transforma en un furfural
(un aldehído), con el cual con el orcinol
produce un marcaje de coloración verde.
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PREGUNTAS INFORME
1. Describa la apariencia del macerado inicial, la
apariencia del macerado inicial, fue homogénea
de color blanca arena.
2. ¿Cuál es la apariencia y el color del
precipitado y del sobrenadante obtenido después
de la primera centrifugación?
En el precipitado se observa una evidente
separación, es fácil de detectar por los dos
colores formados (el precipitado se divide en
dos: la parte de arriba es de color beige y la parte
de abajo es color gris) y su apariencia es
“solida”.
El sobrenadante es de color transparente,
apariencia física liquida que fue transvasada.
3. ¿Qué sucede con el sobrenadante cuando se le
agregan los volúmenes de etanol frío, color?
Se utiliza etanol a condiciones muy bajas de
temperatura con el fin de compactar mejor la
molécula que se quiere precipitar antes de
llevarlo al equipo de centrifugado. El color que
se obtuvo fue un blanco tiza.
4. ¿Cuál es la apariencia del precipitado después
de la segunda centrifugación?
Se obtiene un precipitado mínimo, pero fue justo
para poder determinar glucógeno.
5. Que observan cuando agrega el reactivo de
yodo (lugol)
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En la práctica se trabajó con un negativo, un
positivo y la muestra problema, el negativo y el
positivo fueron usados como referencia para
verificar que el resultado de glucógeno en la
levadura tuviera veracidad. (Básicamente el
negativo fue el blanco del proceso, y el positivo
el estándar de referencia).
A los mencionados se les adiciono la solución de
orcinol, si la muestra contiene el analito a
evaluar el color que se obtiene es un tono oscuro
entre negro y gris.
6. ¿Cómo interpretan este resultado?
La interpretación en los colores obtenidos es
objetiva a la presencia de los analitos a analizar,
si hay presencia de ellos en la muestra se obtiene
colores ya estandarizados. Ejemplo la muestra
problema levadura en este caso no presentó el
analito de glucógeno, mientras que el patrón de
referencia que fue almidón si viro al color oscuro
que rectifica que contiene glucógeno.
7. ¿Cómo interpretan lo que sucede al calentar el
tubo que contiene ácidos nucleicos y proteínas?
La interpretación que se le puede dar a este
proceso de calentar estas dos macromoléculas
que se encuentran contenidas en un solo tubo de
ensayo, es prepararlas para la debida separación
en el equipo de centrifugado. Lo anterior se
puede interpretar como parte del pretratamiento
de la muestra para obtener un precipitado y un
sobrenadante trabajable.
8. Describa el precipitado y el sobrenadante,
productos de la tercera centrifugación
El tercer centrifugado fue para la precipitación
de Ácidos Nucleicos y proteínas, se obtuvo en
proporciones muy mínimas. Por lo general el
precipitado se adhiere a las paredes del tubo de
centrífuga, proyectando una forma física sólida.
9. ¿Qué apariencia presenta el sedimento
después de la cuarta centrifugación?
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La apariencia de sedimento color blanco, posteriormente separarlas por los métodos

adherido a las paredes del tubo de centrifugado
por las parte inferior.
10. ¿Cómo reaccionan las muestras de los
diferentes tubos con el reactivo de orcinol?
Cuando se le adiciona el reactivo de orcinol que
actúa como “indicadora” de color, este permite
el cambio de color en las muestras a analizar
confirmando la presencia del analito. Con
presencia ya sea de temperaturas altas o
simplemente el contacto instantáneo con las
muestras analizadas.
seleccionados.
· Se logró identificar los métodos
necesarios que se deben utilizar según el tipo
de macromoléculas para así realizar una
correcta separación
· Este laboratorio también nos sirvió para
entender las reacciones químicas de cada
método y las de mejor aprovechamiento

11. ¿Qué aspecto presenta la solución de

proteínas después de disolverlas con la solución
salina 0,15 M?

El color obtenido una vez se realice la respectiva

mezcla homogénea es blanco turbio.

12. ¿Qué observan al realizar el ensayo con

NaOH y CuSO4 con ambas muestras?

Se observa cambio de color de azul a purpura,

este cambio se ve reflejado en la muestra
problema ya que contiene la proteína, mientras
que el blanco del proceso quedo con el color azul
intacto falta del analito.

13. ¿Qué otros aspectos desean destacar de la

práctica realizada?

La forma correcta de tratar todas las mezclas de

las muestras con el analito a analizar, debe ser de
manera suave, porque las macromoléculas son
estructuras muy delicadas que pueden romperse
con facilidad.

14. Anexar las fichas técnicas de los reactivos y

sustancias empleadas en esta práctica.

15. Anexar las respuestas de las preguntas en el

laboratorio 2

CONCLUSIONES

· Esta práctica de laboratorio nos permitió

aprender a identificar de manera correcta y
cualitativa las macromoléculas para