PROBLEMAS DE ACTIVIDAD ENZIMTICA.

Unidad Internacional= cantidad de enzima necesaria para transformar un micromol

de sustrato por minuto. 1 U= 1 mol/min.

Actividad especfica= AE= Unidades de enzima por mg prot. totales= U/mg.

Actividad total= AT= Unidades totales de enzima en el extracto= U.

Porcentaje de recuperacin= (ATfinal/ATinicial) x 100.

Factor de purificacin= AEfinal/AEinicial.

Nmero de recambio=
(moles de sustrato/min)/moles de enzima x sitios activos= min-1.

1. Una reaccin transcurre con una velocidad mxima de 5 mmoles de sustrato

transformado por minuto y litro de medio. Si el sustrato est en exceso: Qu cantidad
se habr transformado al cabo de 10 min de reaccin si el recipiente contiene 20 litros
de medio?
Sol.: 1 mol

2. Una preparacin enzimtica tiene una actividad especfica de 74 U/mg de protena y

contiene 21 mg de protena/ml. Calcular la velocidad de reaccin en una mezcla de
reaccin estndar que contiene:
a) 5 l de la preparacin enzimtica;
b) 25 l de la preparacin enzimtica
c) 50 l de la preparacin enzimtica.
Sol.: a) 7,77 moles/min; b) 38,85 moles/min; c) 77,7 moles/min

3. Una preparacin enzimtica tiene una actividad especfica de 42 U/mg de protena y

contiene 12 mg de protena/ml. Calcular la velocidad inicial mxima de la reaccin en
una mezcla de reaccin estndar que contiene:
a) 20 l de la preparacin enzimtica.
b) 10 l de la preparacin enzimtica.
c) 60 l de la preparacin enzimtica.
Sol.: a) 10,08 moles/min; b) 5,04 moles/min y c) 30,24 moles/min.

4. Una disolucin al 2% de sacarosa se digiere a pH 5 con 25 g de invertasa. La

velocidad inicial mxima de liberacin de productos reductores fue de 29 mg/min.
Calcular la actividad especfica de la preparacin enzimtica (expresada como
desaparicin de sustrato). (Pm de sacarosa: 342,2; Pm de glucosa: 180).
Sol.: A.E.= 3388 U/mg de protena.

5. Un extracto de bacterias contiene 24 mg de protenas por mililitro. 20 l de este

extracto en un volumen estndar de incubacin de 0,1 ml catalizan la produccin de 1,6
moles de producto en un minuto. Calcular:
a) La concentracin del enzima en U/ml de extracto.
b) La actividad especfica del enzima en el extracto.
c) La actividad total del enzima si tuviramos 200 ml de extracto.
Sol.: a) 80 U/ml; b) 3,3 U/mg; c) 16000 U.

6. Un extracto enzimtico crudo contiene 20 mg de protena/ml. 10 l de ese extracto

en un volumen de reaccin de 0,5 ml catalizaron la produccin de 3 moles de producto
en un minuto en condiciones ptimas de trabajo. Calcular:
a) La velocidad de reaccin en moles/min/ml.
b) La concentracin del enzima en U/ml de extracto.
c) La actividad especfica del extracto.
d) La actividad total del extracto si tenemos 100 ml del mismo.
Sol.: a) 6 moles/min/ml; b) 300 U/ml; c) 15 U/mg prot; d) 30000U.

7. Un extracto de bacterias contiene 50 mg de protenas por mililitro. 50 l de este

extracto en un volumen estndar de incubacin de 1 ml catalizan la produccin de 3,8
moles de producto en un minuto. Calcular:
a) La concentracin del enzima en U/ml de extracto.
b) La actividad especfica del enzima en el extracto.
c) La actividad total del enzima si tuviramos 200 ml de extracto.
Sol.: a) 76 U/ml; b) 1,52 U/mg de protena; c) 15200 U.

8. Al hacer una purificacin de una enzima el extracto crudo tiene una actividad total de
45 U y una actividad especfica de 29 mU/mg. En el ltimo paso de purificacin se
obtuvo una actividad total de 19,8 U y una actividad especfica de 780 mU/mg.
Calcular:
a) Cantidad de protenas en mg en ambas fracciones.
b) Porcentaje de recuperacin.
c) Factor de purificacin.
Sol.: a) 1551,7 mg y 25,38 mg; b) 44,0%; c) 26,9 veces

9. Al hacer una purificacin de una enzima el extracto crudo tiene una actividad total de
53,70 U y una actividad especfica de 20 mU/mg. En el ltimo paso de purificacin se
obtuvo una actividad total de 24,16 U y una actividad especfica de 604 mU/mg.
Calcular:
a) Cantidad de protenas en mg en ambas fracciones.
b) Porcentaje de recuperacin.
c) Factor de purificacin.
Sol.: a) 2685 mg y 40 mg; b) 44,9%; c) 30,2 veces

10. Un extracto crudo contiene 25 mg de protenas/ml. 35 l de este extracto

catalizaron la transformacin de 0,22 moles de sustrato por minuto. 85 ml de este
extracto se fraccionan con sulfato amnico. La fraccin que precipit entre el 25 y el
50% de sulfato amnico se redisolvi en 15 ml. Estos 15 ml contienen 67 mg de
protenas por ml y 35 l de este extracto catalizan la transformacin de 0,9 moles/min.
Calcular:
a) El porcentaje de recuperacin de la enzima en la fraccin precipitada.
b) El factor de purificacin obtenido en el fraccionamiento con sulfato amnico.
Sol.: a) 72,19%; b) 1,5 veces.
11. Se dispone de 200 ml de una disolucin proteica al 2%, conteniendo una enzima
que se desea purificar. La mitad de la muestra se somete al mtodo A, consistente en
precipitaciones fraccionadas, y se obtienen 5 ml de disolucin final, de concentracin
proteica igual a 5 mg/ml y actividad enzimtica igual a 2000 U/ml. La otra mitad se
somete al mtodo B, consistente en cromatografa de intercambio inico, y se obtienen
una disolucin final de 10 ml, de riqueza proteica igual a 10 mg/ml, y con un actividad
enzimtica igual a 2000 U/ml. Se desea saber:
a) Cul de los mtodos ha aportado el enzima ms puro.
b) Por cul de los mtodos se ha obtenido mayor cantidad de protena.
Sol.: a) A enzima ms puro; b) B mayor cantidad de protena.

12. Para purificar un determinado enzima, a partir de un extracto crudo que lo contiene,
se ensayan sucesivamente precipitaciones fraccionadas, cromatografa de intercambio
inico y cromatografa de exclusin, con los resultados que registra la siguiente tabla:
________________________________________________________________
Volumen de disolucin (protena) Actividad enzimtica
(ml) (mg/ml) (U/ml)
_________________________________________________________________

I 2000 10 50
II 500 5 160
III 100 4 400
IV 50 2 700
V 10 9,1 3200
__________________________________________________________________
a) Calcular el porcentaje de recuperacin del enzima despus de cada una de las
manipulaciones a las que se le ha sometido
b) Indicar si procede seguir purificando el enzima o cabe esperar haber alcanzado su
homogeneidad electrofortica.
Sol.: a) AT(I)= 80%, AT(II)= 40%, AT(III)= 35%, AT(IV)= 32%; b) no procede
seguir purificando.

13. Smith y colaboradores han logrado purificar hasta homogeneidad la nitrato

reductasa de la cianobacteria Anacystis nidulans mediante un procedimiento que se
resume en la tabla siguiente:
Fraccin V (ml) Prot (mg) AE (U/mg)
Extracto crudo 195 10126 0,087
Enzima solubilizada 175 5596 0,120
Precipitado etanol (50-70%) 38 152 3,400
Eluato en cromatografa en DE-S2 95 43 10,19
Eluato cromatogrfico en Fd-sefarosa 60 0,46 588,70
Eluato concentrado de filtracin en ACA49 1,15 0,26 874,80
A partir de estos datos calcular:
a) Actividad total en unidades despus de cada paso de purificacin.
b) Porcentaje de recuperacin final.
c) Nmero de veces que se ha logrado purificar el enzima.
Sol.: a) 880,9 U; 671,52 U; 517 U, 438,17 U; 270,8 U; 227,4 U; b) 25,9%;
c) 10055 veces.
14. En la purificacin de la nitrito reductasa de espinaca, Ramrez et al. obtuvieron los
resultados que se recogen en la siguiente tabla:
Fraccin Vol (ml) Prot (mg/ml) AE (mU/mg)
I Homogenado 1100 44 8,2
II Precipitacin acetnico 120 11 215
III Eluato libre de ferredoxina 140 8 272
IV Eluato de DEAE-celulosa 17,5 32 400
V Eluato de DEAE-celulosa 135 0,28 3250
A partir de estos datos calcular:
a) Actividad total en unidades despus de cada paso de purificacin.
b) Porcentaje de recuperacin final.
c) Nmero de veces que se ha logrado purificar el enzima.
Sol.: a) AT(I)= 397 U; AT(II)= 284 U; AT(III)= 305 U; AT(IV)= 224 U;
AT(V)= 123 U b) 31% c) 396,3 veces

15. La siguiente tabla muestra los valores obtenidos al purificar la aldolasa de msculo
esqueltico de rata:
Fraccin V (ml) Prot (mg/ml) AT (U)
I Extracto crudo 1290 62,3 29,7
II Sobrenadante de 27000 g 1200 34,2 27,0
III Eluato de DEAE-celulosa 1150 29,7 31,0
IV Eluato de gel de fosfato clcico 210 3,0 37,2
V Precipitado de SO4(NH4)2 (0-50%) 30 36,3 24,3
VI Eluato de almina Cr 14,5 1,3 8,1
VII Filtracin en agarosa 20,5 0,15 2,0
A partir de estos datos calcular:
a) Porcentaje de recuperacin final.
b) Nmero de veces que se ha logrado purificar el enzima.
Sol: a) 6,7% b) 1760 veces

16. La deshidrogenasa del 3-fosfato de gliceraldehdo es un enzima tetramrico de Pm

40000 que contiene cuatro sitios activos. En condiciones ptimas, 5 g del enzima puro
catalizan la conversin de 2,8 moles de 3-fosfato de gliceraldehdo en fosfato de 3-
fosfogliceroilo por minuto. Calcular: a) la actividad especfica del enzima y b) el
nmero de recambio de cada sitio activo.
Sol.: a) 560 U/mg b) 5600 min-1

17. La -quimotripsina (Pm 24000) hidroliza el L-tirosinilbenzoato de etilo con una

actividad especfica de 45,0 moles/min por miligramo de enzima. Dado que la -
quimotripsina tiene un sitio activo, Cual es su nmero de recambio?
Sol.: 1080 min-1

18. Una solucin al 1% de almidn se digiere a pH 6,7 con 15 g de amilasa (Pm

152000). La velocidad inicial mxima de liberacin de maltosa (Pm 342) fue de 8,5
mg/min. Calcular el nmero de recambio de dicha enzima.
Sol.: 251824,1 min-1
19. La catalasa cataliza la descomposicin de 5x106 moles de H2O2 por minuto y por
mol de enzima y posee cuatro sitios activos por molcula de enzima. Calcular la
actividad por centro cataltico de dicho enzima.
Sol.: 1,25x106 min-1

20. a) Calcular el nmero de recambio de un enzima (Pm 30000), si 1,5 g de enzima

contenidos en alcuotas de 0,5 ml de una preparacin enzimtica actuaron sobre el
sustrato especfico con una velocidad mxima inicial de 3 moles de sustrato
transformados por minuto. b) Cul sera la actividad total de la preparacin enzimtica
si su volumen fuera de 100 ml?. c) Cul sera la actividad especfica?.
Sol.: a) 60000 min-1; b) 600 U; c) 2000 U/mg.

21. En una reaccin enzimtica en la que un sustrato (S) se isomeriza para dar un
producto (P), usando 2,5 mg de enzima (Pm 125000) se encontr una velocidad inicial
mxima de 275 moles/min. Calcular el nmero de recambio de dicha enzima en esas
condiciones.
Sol.: 13750 min-1.

22. La nitrito reductasa de espinaca se ha logrado purificar unas 2000 veces.

Suponiendo que la enzima es 100% pura, calcular su nmero de recambio si 8 g de
enzima reducen 0,15 moles de nitrito/min (Pm enzima 60000).
Sol.: 1125 min-1.

23. Una enzima tiene un peso molecular de 60000 y 6 sitios activos por molcula. La
velocidad inicial de la reaccin que cataliza es 12 moles de sustrato cada 2 minutos en
presencia de 18 g de enzima. Calclese la actividad molecular por centro cataltico de
la enzima.
Sol.: 3333 min-1.

24. Calcular el nmero de recambio de una enzima (Pm 100000) sabiendo que una
preparacin pura del enzima tiene una actividad especfica de 500 U/mg de protenas.
Calcular a partir de la siguiente tabla de purificacin la recuperacin y el factor de
purificacin.
Fraccin V(ml) A.T. (U) Prot. (mg/ml)
I 1000 500 10
II 500 300 3
-1
Sol.: a) 50000 min ; b) 60%; c) 4 veces.