ENZIMOLOGÍA

Descargado por CARLOS ALBERTO OLIVARES SALAS

(carlos.olivares_s@umce.cl)
Encuentra más documentos en www.udocz.com
 ➢ Un extracto libre de células contiene 24 mg de proteínas/mL, 20 uL de este extracto
se colocan en un volumen de incubación estándar de 0.2 mL, catalizaron la
incorporación de glucosa al glucógeno con una velocidad de 1.6 nmol/min.
Calcular la actividad enzimática y la actividad específica en la cubeta y en la muestra.

DATOS:

Células → 𝟐𝟒 𝐦𝐠 𝐩𝐫𝐨𝐭𝐞í𝐧𝐚/𝐦𝐋
Muestra → 20 uL → 𝟎. 𝟎𝟐 𝐦𝐋

Cubeta → 𝟎. 𝟐 𝐦𝐋

1.6 nmol 1umol 1.6 × 10−3 umol

Unidad de actividad enzímatica (U) → × 3 = = 𝟏. 𝟔 × 𝟏𝟎−𝟑 𝐔
min 10 nmol min

Actividad específica y enzimática en la cubeta

U
Actividad enzimática =
v
1.6 × 10−3 U
A. enzimática =
0.2 mL
𝐀. 𝐞𝐧𝐳𝐢𝐦á𝐭𝐢𝐜𝐚 = 𝟖 × 𝟏𝟎−𝟑 𝐔/𝐦𝐋
Ae
Actividad específica =
⦋pT⦌

8 × 10−3 U/mL
A. específica =
24 mg/ mL

𝐀. 𝐞𝐬𝐩𝐞𝐜í𝐟𝐢𝐜𝐚 = 𝟑. 𝟑 × 𝟏𝟎−𝟒 𝐔/𝐦𝐠

Actividad específica y enzimática en la muestra

U
Actividad enzimática =
v
1.6 × 10−3 U
A. enzimática =
0.02 mL
𝐀. 𝐞𝐧𝐳𝐢𝐦á𝐭𝐢𝐜𝐚 = 𝟖 × 𝟏𝟎−𝟐 𝐔/𝐦𝐋
Ae
Actividad específica =
⦋pT⦌

8 × 10−2 U/mL
A. específica =
24 mg/ mL

𝐀. 𝐞𝐬𝐩𝐞𝐜í𝐟𝐢𝐜𝐚 = 𝟑. 𝟑 × 𝟏𝟎−𝟑 𝐔/𝐦𝐠

Descargado por CARLOS ALBERTO OLIVARES SALAS

(carlos.olivares_s@umce.cl)
Encuentra más documentos en www.udocz.com
 ➢ Resuelva lo siguiente:
a) A que concentración de sustrato una enzima con un Kcat=30 seg-1 y km=0.005M,
operaria a ¼ de Vmax
b) Determine la fracción de Vmax que se obtendría a las siguientes ⦋s⦌= 1.2 km;
⦋s⦌=2 km; ⦋s⦌=10 km
c) Determine la eficiencia catalítica

a) Datos
30
k cat =
s
km = 0.005 M
1
Vmax =
4

Vmax Vmax × [s]

k cat = V0 =
[ET] [s] + km
1 Vmax × [s]
Vmax Vmax =
[ET] = 4 [s] + 0.005 mol
k cat
1 [s]
1 =
4 [s] + 0.005 mol
[ET] = 4
30 0.005 mol = 4[s] − [s]
s
0.005 mol = 3[s]
𝟖. 𝟑 × 𝟏𝟎−𝟑
[𝐄𝐓] = [𝐬] = 𝟏. 𝟔 × 𝟏𝟎−𝟑 𝐦𝐨𝐥
𝒔

b)
Vmax × [s] Vmax × [s]
Vmax × [s] V1 = V2 =
V0 = [s] + km [s] + km
[s] + km
1 Vmax × [2 km] Vmax × [10 km]
Vmax × [ km] V1 = V2 =
V0 = 2 [2 km] + km [10 km] + km
1
[ km] + km
2
2 Vmax × km 10 Vmax × km
1 V1 = V2 =
Vmax × km 3 km 11 km
V0 = 2
3 𝟐
km 𝟏𝟎
2 𝐕𝟏 = 𝐕 𝐕𝟐 = 𝐕
𝟑 𝐦𝐚𝐱 𝟏𝟏 𝐦𝐚𝐱
𝟏
𝐕𝟎 = 𝐕
𝟑 𝐦𝐚𝐱

Descargado por CARLOS ALBERTO OLIVARES SALAS

(carlos.olivares_s@umce.cl)
Encuentra más documentos en www.udocz.com
c)
k cat
Eficiencia catalítica =
km
30
Eficiencia catalítica = s
mol
0.005
L
𝟔𝟎𝟎𝟎 𝐦𝐨𝐥 × 𝐬
𝐄𝐟𝐢𝐜𝐢𝐞𝐧𝐜𝐢𝐚 𝐜𝐚𝐭𝐚𝐥í𝐭𝐢𝐜𝐚 =
𝐋

➢ Un extracto crudo contiene 20 mg de proteínas/ mL, 10 uL de este extracto con un

volumen total de reacción de 0.5 mL catalizaron la formación de 30 nMoles de
producto en 1 minuto. Bajo condiciones óptimas de ensayo.

a) Expresar la velocidad inicial en mmol/min

b) Determinar la actividad enzimática y la actividad específica

c) Determinar la concentración de la enzima

a) Expresar la velocidad inicial en mmol/min

30 nmoles 1 umol 1mmol
× 3 × = 𝟑 × 𝟏𝟎−𝟓 𝐦𝐦𝐨𝐥/𝐦𝐢𝐧
min 10 nmol 1000 umol

b) Determinar la actividad enzimática y la actividad específica de 0.01mL

Extracto crudo → 10 uL → 𝟎. 𝟎𝟏 𝐦𝐋
30 nmol 1umol 3 × 10−2 umol
enzímatica (U) → × 3 = = 𝟑 × 𝟏𝟎−𝟐 𝐔
min 10 nmol min
U
Actividad enzimática =
v
3 × 10−2 U
A. enzimática =
0.01 mL
𝐀. 𝐞𝐧𝐳𝐢𝐦á𝐭𝐢𝐜𝐚 = 𝟑 𝐔/𝐦𝐋
Ae
Actividad específica =
⦋pT⦌
3 U/mL
A. específica =
20 mg/ mL
𝐀. 𝐞𝐬𝐩𝐞𝐜í𝐟𝐢𝐜𝐚 = 𝟎. 𝟏𝟓 𝐔/𝐦𝐠

Descargado por CARLOS ALBERTO OLIVARES SALAS

(carlos.olivares_s@umce.cl)
Encuentra más documentos en www.udocz.com
b) Determinar la actividad enzimática y la actividad específica de 0.5 mL
U
Actividad enzimática =
v
3 × 10−2 U
A. enzimática =
0.5 mL
𝐀. 𝐞𝐧𝐳𝐢𝐦á𝐭𝐢𝐜𝐚 = 𝟔 × 𝟏𝟎−𝟐 𝐔/𝐦𝐋
Ae
Actividad específica =
⦋pT⦌

6 × 10−2 U/mL
A. específica =
20 mg/ mL

𝐀. 𝐞𝐬𝐩𝐞𝐜í𝐟𝐢𝐜𝐚 = 𝟑 × 𝟏𝟎−𝟑 𝐔/𝐦𝐠

c) Determinar la concentración de la enzima

[E]extracto = 𝟑 𝐔/𝐦𝐋

[E]volumen total = 𝟔 × 𝟏𝟎−𝟐 𝐔/𝐦𝐋

Descargado por CARLOS ALBERTO OLIVARES SALAS

(carlos.olivares_s@umce.cl)
Encuentra más documentos en www.udocz.com