LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR

PRCTICA 1.
PRODUCCIN DE PROTOBIONTES
Objetivos.
1. Demostrar cmo molculas de varios pesos moleculares pueden combinarse para formar coacervados.
2. Relacionar las propiedades bioqumicas de las molculas con su papel en la formacin de coacervados.
Introduccin.
La evidencia sugiere que las primeras clulas fueron de tipo procariota. Probablemente eran clulas
anaerobias que vivan en una atmsfera carente de oxgeno, o al menos presente en cantidades insignificantes,
hetertrofas que utilizaban materia orgnica como fuente de carbono. Pero, cmo se originaron estas primeras
clulas? En la dcada de los 1930s, el cientfico Ruso A.I. Oparin sugiri que agregados moleculares, llamados
coacervados, los cuales pueden ser preparados en el laboratorio, pudieron ser los precursores de las primeras
clulas. Estos agregados estaban compuestos de sustancias de alto peso molecular las cuales, cuando se
disolvan en agua, se agregaban para formar gotas viscosas.
Aunque ests gotas no son clulas vivas, los coacervados y las clulas tienen varias caractersticas en
comn. Ambas son capaces de mantener un ambiente interno diferente del de su medio circundante y pueden
absorber sustancias del medio externo selectivamente. Las enzimas estn incluidas entre las sustancias de alto
peso molecular -usualmente una combinacin de lpidos, polipptidos, polisacridos y cidos nucleicos- usadas
para formar coacervados. Las enzimas pueden catalizar reacciones, incluyendo sntesis, hidrlisis y
transferencia de electrones.
Los coacervados no estn vivos, por lo tanto son llamados protobiontes (de proto, antes y bionts, vida).
Sin embargo, la formacin de coacervados puede haber permitido la interaccin entre molculas orgnicas para
formar nuevas entidades estructurales, los precursores de los organelos celulares.
Materiales y equipos.
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20 mL de Solucin de gelatina al 1%
20 mL de Solucin de goma arbiga al 1%
20 mL de Solucin de HCl al 1%
20 mL de Solucin de NaCl al 5%
Papel indicador de pH
Varilla de vidrio
2 tubos de ensaye
10 portaobjetos
10 cubreobjetos
2 Pipetas 10 mL
2 pipetas 1 mL
Microscopio.
Colorantes (10 mL de cada uno por grupo): rojo congo, rojo neutro, azul de metileno.

Nota: El azul de metileno se prepara al 0.3% en agua destilada; el rojo neutro se prepara el 0.1% en agua
destilada; el rojo congo se prepara el 0.2% en isopropanol al 70%.
Metodologa.
1.
2.

En un tubo de ensaye mezcle 5 mL de gelatina al 1% (protena) y 3 mL de goma arbiga al 1%

(carbohidrato). Cubra el tubo con un pedazo de parafilm y agtelo.
Mida el pH transfiriendo una gota de la solucin a una pequea seccin de papel pH con una varilla de
vidrio.
pH = __________.

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Prepare una muestra de la mezcla y obsrvela en el microscopio con el objetivo 10x. Guarde la laminilla.
Aada cido (HCl 1%) al tubo que contiene la mezcla de gelatina/goma arbiga, una gota a la vez, agitando
la mezcla despus de cada adicin. Despus de cada gota espera a ver si la solucin se vuelve turbia. Si
an permanece clara, aada otra gota. Cuando la solucin se vuelva turbia, agtela muy bien. Si clarifica de
nuevo, aada otra gota. Precaucin: el exceso de cido causara la prdida de turbidez; en este punto, la
acidez requerida para la formacin de coacervados ha sido excedida y el procedimiento deber repetirse.
Una vez que la solucin est permanentemente turbia, haga otra lectura de pH. Prepare otra muestra de la
solucin en un portaobjetos. En este momento, los coacervados deben ser visibles. Si usted tiene dificultad
para observarlos ajuste la luz o use un objetivo ms potente.
pH = __________.
Observe la laminilla original para asegurarse de que en esta solucin no hay coacervados.
a. Cmo piensa usted que el pH afecta a las molculas de protenas o de carbohidratos?
Utilice rojo congo, rojo neutro y azul de metileno para teir los coacervados. Coloque una gota de solucin
de coacervados en un portaobjetos y mzclela con una gota de colorante. Coloque un cubreobjetos sobre a
preparacin y observe al microscopio. Use una gota fresca de solucin de coacervado para cada tincin.
Nota: El rojo congo cambia de rojo a azul en presencia de cidos dbiles; es a menudo usado como un
indicador, pero tambin puede ser usado para teir carbohidratos. El rojo neutro es amarillo a valores altos
de pH pero se vuelve de rojo a rosa a pH ligeramente cido y azul a pH muy cido; a menudo es usado
como un indicador, tie el contenido de carbohidratos y protenas del citoplasma celular. El azul de metileno
tambin es usado como un colorante general para el citoplasma y el ncleo.
b. Todos los colorantes utilizados tien a los coacervados?
c. Cmo explicara usted sus resultados del teido de coacervados en base a las propiedades descritas
de los colorantes utilizados?
Aada una gota de NaCl al 5% en el extremo del cubreobjetos de cada laminilla teida. Observe los
coacervados conforme el NaCl se difunde en la solucin.
d. Qu pasa con los coacervados? Por qu?
Cuando haya finalizado de observar los coacervados, aada ms cido a la mezcla en el tubo de ensaye,
una gota a la vez. Mida el pH a intervalos de 3 gotas. Contine aadiendo cido hasta que la solucin se
clarifique.
e. Cmo afecta el pH la produccin de coacervados?
f. Cules molculas cree usted que son las responsables de formar la barrera (parecida a una membrana)
entre los coacervados y su ambiente? Por qu?

Actividades.
1. Elabore un marco terico referente al origen de la vida sobre el planeta.
2. Responda las preguntas (de la a a la f) marcadas con letra cursiva en la seccin de metodologa.