Informe #10 de Bioquímica

Tema: Hidrólisis enzimática de lípidos

Alumno: Enrique Sebastián Núñez del Arco

Profesor: Javier Jack Calderón Gómez

Horario: Martes 13:10-15:00

Aula: Lab. Química 4

Carrera: Medicina Humana

Ciclo: 2016-1
 SUMARIO

1. OBSERVACIONES

2. RESULTADOS

3. CONCLUSIONES

4. COMENTARIOS O CRITICAS

5. ANEXO
OBSERVACIONES

En 4 tubos de ensayo colocamos lo siguiente:

Blanco Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

mL de tampón fosfato 2.0 2.0 2.0 0
0.05M Ph 7.8
mL de aceite 1.0 1.0 1.0 1.0

mL de sales biliares al 2.0 2,0 0 2.0

1%
mL de agua 5.0 0 2.0 2.0

Una vez que tengamos los 4 tubos listos, lo homogeneizamos y lo sometemos a baño
maría durante 38°C por 10 minutos, luego añadir 2 gotas de fenolftaleína a cada uno
de los tubos, luego adicionar gota a gota una solución de NaOH 0.1N hasta que
aparezca una coloración débilmente grosella estable, luego adicionar la enzima que es
la lipasa pancreática

Blanco Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

mL de solución de lipasa 0 5.0 5.0 5.0
pancreática al 1%

Posteriormente incubamos los tubos a la misma temperatura durante 1 hora,

agitándolos cada 5 minutos.

Al finalizar el tiempo de incubación adicionar nuevamente a cada tubo 2 gotas de

fenolftaleína y proceder a titular, utilizando una bureta, con una solución de NaOH
0.1N hasta que aparezca nuevamente la coloración roja ligeramente grosella. Apuntar
el volumen de gasto de titulación de cada tubo para hacer la cuantificación de aceite
liberado.
RESULTADOS

OBJETIVO:

Comprobar en laboratorio in situ la acción de la lipasa pancreática en la hidrolisis de los

lípidos y por otro lado tenemos la parte cuantitativa que la vamos a realizar por
titulación y cuantificación de ácidos grasos liberados por acción de la hidrolisis
enzimática.

Blanco Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

mL de tampón fosfato 0.05M Ph 7.8 2.0 2.0 2.0 0
mL de aceite 1.0 1.0 1.0 1.0
mL de sales biliares al 1% 2.0 2,0 0 2.0
mL de agua 5.0 0 2.0 2.0
mL de pancreatina al 1% 0 5,0 5,0 5,0

1. CÁLCULO DEL NÚMERO DE MILIGRAMOS DE ACEITE LIBERADO:

Volumen de gasto de la titulación X 0.05N NaOH X374 (P.M del ácido esteárico)

 Blanco: 0.1mL X 0.05N NaOH X 374 = 1.87mg

 Tubo n°1: 0.3mL X 0.05N NaOH X 374 = 5.61mg

 Tubo n°2: 0.2mL X 0.05N NaOH X 374 = 3.74mg

 Tubo n°3: 0.15mL X 0.05N NaOH X 374 = 2.805mg

El menor volumen de gasto se obtuvo en el blanco y por ende tuvo menor cantidad de
aceite liberado por hidrolisis. El tubo n°1 obtuvo el mayor volumen de gasto y se
obtuvo mayor cantidad de aceite liberado y mayor gasto de NaOH.

En el blanco no se produjo hidrólisis, esta las sales biliares que emulsionan pero no se
le adicionó lipasa pancreática que es la que hidroliza, en el tubo n°2 no hay estabilidad,
lo que significa que si la grasa previamente no se emulsiona, no se puede hidrolizar, y
en el tubo n°3 la alteración del ph puede variar la acción de la enzima.

2. CÁLCULO DE EQUIVALENTES-GRAMOS DE PRODUCTOS DE HIDROLISIS DEL ACEITE:

Volumen de gasto de la titulación X 0.05N NaOH /374 (P.M del ácido esteárico)

 Blanco: 0.0001L X 0.05N NaOH / 374 = 1.5 meq de ácido esteárico

 Tubo n°1: 0.0003L X 0.05N NaOH / 374 = 4.58 meq de ácido esteárico

 Tubo n°2: 0.0002L X 0.05N NaOH / 374 = 2.22 meq de ácido esteárico

 Tubo n°3: 0.00015L X 0.05N NaOH / 374 = 2.7 meq de ácido esteárico

CONCLUSIONES

 Los ácidos biliares o las sales de ácido biliar se generan en el hígado y se

almacenan en la vejiga. Cuando comes alimentos con grasa, la vejiga libera
esta sustancia a través del tracto digestivo, que son las encargadas de
emulsionar lípidos para facilitar la absorción de este en los intestinos.
  La bilis cumple con una función emulsionante debido a que tiene dos partes:
una es hidrofóbica y la otra hidrofílica. Esto hace que se puedan mezclar
lípidos con agua, ayudando así en la digestión.

 La bilis está hecha de una molécula esteroide, que viene del colesterol y una
pequeña cadena con secciones hidrofílicas.

 En la presente práctica utilizamos a la pancreatina o lipasa pancreática que es

una enzima digestiva producida por el páncreas que tiene como función la
hidrólisis de las grasas.

 La hidrólisis de grasas de como producto glicerol (alcohol) y ácidos grasos

(carboxílicos).

 Concluimos de la práctica que a mayor hidrolisis de lípidos, se producirá

mayor ácido y en consecuencia será mayor el gasto de energía.

 Al producirse mayor ácido será necesario mayor hidróxido (NaOH) para

poder neutralizar la reacción (Esto significa equilibrar el ph).

COMENTARIOS O CRÍTICAS

 La gente encargada de la limpieza de los beakers y pipetas usan lejía pura para
desinfectar y limpiar todos los instrumentos del laboratorio, pero como la
práctica de hoy necesitaba el uso de enzimas, tuvimos que limpiar todos los
instrumentos ya que la lejía mata a las enzimas. Esto porque usamos lipasas y
necesitamos que el pH del medio en el que ponemos las enzimas sea neutro o
sino la enzima muere o no puede actuar de manera correcta.
  Usamos NaOH que puede ser nocivo para la salud y sabemos que al aspirar sus
vapores puedes sufrir daños en la nariz o en vías respiratorias, y no lo abrimos
ni manipulamos bajo un extractor ni con ninguna mascarilla.

 Rotular siempre los tubos de ensayo con plumón marcador negro para no
confundirnos al momento de realizar la práctica.

 En esta práctica usamos Fenolftaleína y esta estaba en un envase sin

pictogramas y sin fecha de vencimiento.

ANEXO
ALGUNOS TIPOS DE LIPIDOSIS SON COMO POR EJEMPLO:

ENFERMEDAD DE GAUCHER

Es el trastorno metabólico de depósito lisosomal más frecuente. Es un padecimiento

crónico, progresivo y multisistémico, se debe a mutaciones en el gen responsable de la
síntesis de la enzima lisosomal b-glucocerebrosidasa ácida, también llamada ß-
Glucosidasa ácida, (o ß-GA), cuyos locus se ubica en 1q21, es decir en la banda uno de
la región 2 del brazo largo del cromosoma 1.

La deficiencia enzimática favorece la acumulación de la glucosil-

ceramida en los lisosomas de macrófagos (células de Gaucher) y monocitos del sistema
monocito macrófago (SMM), llevando a la acumulación de glucocerebrósidos en la
médula ósea, el bazo, el hígado, los pulmones, tejido esquelético y en las formas
neurológicas en el cerebro, causando daño celular y disfunción orgánica.

Por lo tanto, la determinación del nivel de actividad de la ß-GA es indispensable para el

diagnóstico y esencial antes de iniciar el tratamiento con terapia de reemplazo
enzimática. La presencia de células de Gaucher en biopsias de hígado, bazo, pulmones
y médula ósea orienta el diagnóstico pero no reemplaza a la determinación de la
actividad enzimática.

Existen tres tipos:

 Tipo 1: Esta es la forma más común y causa un agrandamiento del hígado y el

bazo, dolor y fracturas de huesos y, a veces, problemas en los pulmones y
riñones. No afecta al cerebro. Puede ocurrir a cualquier edad.
 Tipo 2: Este tipo causa daño cerebral grave y aparece en recién nacidos. La
mayoría de los niños fallece antes de los dos años
 Tipo 3: En este tipo puede haber agrandamiento del hígado y bazo. El cerebro
se ve afectado poco a poco. En general, comienza en la niñez o adolescencia.

La enfermedad de Gaucher no tiene cura. Las opciones de tratamiento para los tipos 1
y 3 incluyen medicinas y terapia de sustitución de las hormonas, que suele ser muy
eficaz. No hay un buen tratamiento para el daño cerebral causado en los tipos 2 y 3.

ENFERMEDAD DE NIEMANN-PICK

Se trata de una enfermedad hereditaria en la cual, se acumulan esfingomielina y

lípidos en las células de diferentes órganos.

Actualmente están reconocidos los tipos A, B, C y D. Cada tipo involucra a diferentes

órganos pudiendo afectar o no al sistema nervioso central y al aparato respiratorio. De
la misma forma, cada tipo puede causar diferentes síntomas y manifestarse desde la
infancia hasta la edad adulta.
Los tipos A y B son consecuencia de la carencia de la enzima esfingomielinasa ácida,
encargada de metabolizar una sustancia grasa llamada esfingomielina. Esto da lugar a
una muerte celular y a un anómalo funcionamiento de los órganos afectados.

El tipo A que comienza en los primeros meses de vida se caracteriza por hinchazón
abdominal, dificultades en la alimentación y pérdida de las habilidades motrices
tempranas. Es casi incompatible con la vida.

En cambio, los afectados con el tipo B debutan hacia el final de la infancia con
síntomas más leves y menor compromiso neurológico.

El tipo C ocurre cuando las células no pueden descomponer el colesterol y otros lípidos
que se acumulan en el hígado y el bazo y también en el cerebro. Puede haber una
actividad disminuida de la esfingomielinasa ácida en algunas células. Este tipo puede
encontrarse desde la niñez hasta la edad adulta y entre algunos de sus síntomas
destacan la espleno y hepatomegalia así como pérdida del tono muscular y dificultades
en la marcha.

Los síntomas del tipo D son parecidos a los del tipo C.

La formación de células espumosas en la médula ósea es una característica que puede

ser compartida por más de un tipo.

Desde el punto de vista genético, se trata de una enfermedad autonómica recesiva en

la que si ambos padres son portadores tienen un 25% de tener un hijo afectado.

Los niños afectados suelen morir precozmente en los tres primeros años de vida. Las
características de la enfermedad en estas edades son el infantilismo y la presencia de
trastornos del desarrollo.

Hoy día se considera que el desarrollo de esta enfermedad se caracteriza por el

progresivo deterioro de las funciones básicas del organismo. La enfermedad es, por
tanto, degenerativa y, en consecuencia, letal en el 100% de los casos.