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Resumen……………………………………………………………….1
Introducción……………………………………………………………2
I.- Proteínas…… ……..…………………………………………….…….……....3
II.- Aminoácidos………………………………………………………….…….….6
III. Identificación de proteínas y aminoácidos…………………………………9
IV. Propiedades ácido-base de los aminoácidos……………………….…11
Objetivo……………………………………………………………..…13
Hipótesis……………………………………………………………….13
Material………………………………………………………………...13
Metodología y Resultados ……………………………………………..14
Discusión de Resultados………………………………………… …….24
Conclusiones……………………………………………………………24
Referencias…………………………………………………………...…25
RESUMEN:
Las proteínas son compuestos orgánicos constituidos por aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que
intervienen en diversas funciones vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta
inmunológica; sus moléculas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido conectivo y el pelo, hasta
los glóbulos compactos solubles, capaces de atravesar la membrana celular y desencadenar reacciones
metabólicas. Tienen un peso molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno de sus órganos.
Las proteínas sirven sobre todo para construir y mantener las células, aunque su descomposición química también
proporciona energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo, similar al de los hidratos de carbono.
En esta práctica se observan algunas reacciones características de las proteínas para la identificación ya sea de
estas o de algunos de los residuos de aminoácidos que estas contengan ya sea su identificación por métodos
colorimétricos o químicos, como lo es la prueba de biuret que da soluciones de color violeta o rosa dependiendo
de la proteína o la xanproteíca que da precipitados amarillos al dar positivas las pruebas para aminoácidos o
residuos aromáticos.
También se realizaron pruebas para reconocer proteínas por las características que estas presentan al ser
desnaturalizadas como lo es la precipitación o turbidez que se observa como por ejemplo al ser desnaturalizadas
por efecto del calor al estas formar coágulos al perder sus propiedades originales a más de 60ºC.; estas
características son propiamente de tipo fisicoquímicas y las presentan la mayoría de las proteínas como por
ejemplo la acción de los alcoholes o acetonas que son agentes desnaturalizantes típicos de las proteínas ya que
estos las deshidratan y por lo tanto las precipitan, lo que da una prueba positiva a este efecto.
Por último se prepararon varias soluciones en tubos de ensaye de una solución de caseína en acetato de sodio y
ácido acético, para que por medio de la ecuación de Hendersson - Hasselbalch se realizara la determinación del pH
teórico de estas soluciones y observar sus propiedades de precipitación o turbidez, es decir, que tanto se
desnaturalizaba la proteína a diferentes pHs.
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INTRODUCCIÓN: enlaces débiles como enlaces de hidrógeno, iónicos e
hidrofóbicos se forman entre una parte de la cadena de
Las proteínas son compuestos a base de carbono, péptidos y la otra parte, de modo que la cadena se
hidrógeno, oxígeno, nitrógeno y generalmente azufre y desdobla de una manera específica para dar una
fósforo. El elemento característico es el nitrógeno. estructura general específica de la molécula proteínica.
Todas las enzimas, algunas hormonas y muchos Enlaces covalentes como los de disulfuro (-S-S-) son
componentes estructurales importantes de la célula son importantes en la estructura terciaria de muchas
proteínas. proteínas. La actividad biológica de una proteína
depende en gran parte de la estructura primaria
Las moléculas de proteína son muy grandes y específica que es mantenida junta por esos enlaces.
contienen miles de átomos; su estructura es
extremadamente compleja. Gran parte de las proteínas Cuando una proteína se calienta o trata con cualquiera
intracelulares son enzimas, sustancias que regulan la de una variedad de productos químicos, se pierde la
rapidez con que se han de tener numerosas reacciones estructura terciaria. Las cadenas de péptidos
celulares. espiralazas se desdoblan para dar una configuración
aleatoria acompañada por una pérdida de la actividad
Las moléculas de proteína están formadas por biológica de la proteína. Este cambio se llama
componentes más simples llamados aminoácidos. “desnaturalización”.
Puesto que cada proteína puede tener cientos de
aminoácidos combinados en ciertas proporciones y Los 20 aminoácidos aminados que suelen encontrarse
orden es posible una variedad prácticamente infinita de en las proteínas poseen todos un grupo amino (-NH2) y
moléculas de proteína. Se han ideado métodos de un grupo carboxílico (-COOH), pero sus cadenas
análisis para reconocer la disposición exacta de laterales son distintas. El mas simple de todos, la
aminoácidos en una molécula proteínica. La insulina, glicina, tiene como cadena lateral un H; la alanita, un
hormona secretada por el páncreas y utilizada en el grupo –CH3. El grupo amino permite al aminoácido
tratamiento de la diabetes, fue la primera proteína cuya aminado actuar como base y combinarse con ácidos; el
estructura se conoció. La ribononucleasa, secretada por grupo ácido, le permite combinarse con las bases.
el páncreas, fue la primera enzima de la cuál se
conoció el orden exacto de aminoácidos. Los aminoácidos y las proteínas sirven de
amortiguadores y pueden resistir a cambios de acidez
Pueden distinguirse varios niveles de organización en y alcalinidad. Los aminoácidos se unen entre sí para
la molécula de proteína. El primer nivel es la llamada formar proteínas mediante un enlace peptídico entre el
estructura primaria, que depende de la serie de grupo amino de una molécula y el grupo carboxilo de
aminoácidos en la cadena de polipéptidos. Esta serie, la otra.
está determinada a su vez, por la serie de nucleótidos
de RNA y DNA del núcleo de la célula. Un segundo Los aminoácidos puros obtenidos de las proteínas
nivel de organización de las moléculas proteínicas tienen sabor dulce. Cuando se ingieren proteínas son
supone la adopción de la forma de hélice u otra hidrolizadas a aminoácidos antes de ser absorbidas a la
configuración regular por la cadena de polipéptidos. corriente sanguínea. Los aminoácidos son llevados a
Estas cadenas ordinariamente no se encuentran planas todas las regiones del organismo, donde sirven para la
en una molécula de proteína, sino que adoptan formas elaboración de nuevas proteínas, o son metabolizados
espiralazas para dar una estructura tridimensional. Una para liberar energía. Las proteínas tienen importancia
de las estructuras secundarias comunes de las primordial como componentes estructurales de las
moléculas proteínicas es el hélice en α , que se supone células y como constituyentes funcionales de enzimas
una formación espiralaza de la cadena de polipéptidos y algunas hormonas, pero pueden servir también como
básica. La hélice en α es una estructura geométrica combustible para producción de energía. Los
muy uniforme con 3.6 aminoácidos que ocupan cada aminoácidos pierden primero su grupo amino por una
vuelta de la hélice. La estructura helicoidal es reacción enzimática llamada desaminación. El grupo
determinada y mantenida por la formación de enlaces amino reacciona con otras sustancias para formar urea,
de hidrógeno entre residuos de aminoácidos en vueltas que se excreta. El resto de la molécula puede
sucesivas de espiral. transformarse por una serie de fases intermedias en
glucosa, que se utiliza pronto como combustible, o
Un tercer nivel de estructura de moléculas proteínicas almacenarse como glucógeno.
es el desdoblamiento de la cadena de péptidos sobre sí
misma para formar proteínas globulares. De nuevo
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Las plantas pueden sintetizar todos los aminoácidos a Las proteínas son polímeros de condensación de los
partir de sustancias simples. Los aminoácidos que los aminoácidos, algunas proteínas contienen cientos de
animales no pueden sintetizar y que deben obtener en aminoácidos, y en algunos casos miles, en estructuras
su alimentación se llaman aminoácidos esenciales. de cadenas altamente organizadas. La polimerización
Debe comprenderse que estos aminoácidos no son más de los aminoácidos se hace con la formación de
esenciales que otros; sólo lo son respecto a la enlaces peptídicos (amida), al unirse el grupo carboxilo
alimentación, pues no es posible sintetizarlos. [1] del ácido de un aminoácido con el grupo amino del
siguiente aminoácido y produciendo una molécula de
I.- PROTEÍNAS: agua. Por eso, la unión de varios aminoácidos origina
los oligopéptidos y polipéptidos (proteínas de más de
El nombre proteína proviene de la palabra griega 50 aminoácidos).[2]
proteios, que significa lo primero. Las proteínas
constituyen gran parte del cuerpo animal: lo mantienen B) CLASIFICACIÓN DE LAS PROTEÍNAS
como unidad y lo hacen funcionar. Se las encuentra en
toda la célula viva. Son el material principal de la piel, La clasificación de las proteínas se realiza desde varios
los músculos, tendones, nervios y la sangre, enzimas, puntos de vista, así:
anticuerpos y muchas hormonas. (Sólo los ácidos
nucleicos que controlan la herencia pueden desafiar la 1. SEGÚN SU COMPOSICIÓN
posición de las proteínas, además aquellos desafían la
síntesis de estas.) Proteínas simples u Holoproteínas: Las cuales están
formadas exclusivamente o predominantemente por
Desde un punto de vista químico las proteínas son aminoácidos.
polímeros grandes. Son poliamidas, y los monómeros Proteínas conjugadas: Poseen un componente de
de los cuáles se derivan los ácidos α - proporción significativa no aminoacídico que
aminocarboxílicos. Una sola molécula proteínica recibe el nombre de grupo prostético. Según la
contiene cientos, e incluso miles de unidades de naturaleza de este grupo consideramos:
aminoácidos, que pueden ser de unos 20 tipos Glicoproteínas: Se caracterizan por poseer en su
diferentes. El número de moléculas proteínicas estructura azúcares. Se pueden citar como ejemplo:
diferentes que pueden existir es casi infinito. las inmunoglobulinas, algunas proteínas de
membrana, el colágeno y otras proteínas de tejidos
A) ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS: conectivos (glucosaminoglicanos).
Lipoproteínas: Proteínas conjugadas con lípidos
A primera vista podría pensarse en las proteínas como que se encuentran en las membranas celulares.
polímeros lineales de aminoácidos unidos entre sí por Nucleoproteínas: Se presentan unidas a un ácido
medio de enlaces peptídicos. Sin embargo, la secuencia nucleico, como en los cromosomas, ribosomas y en
lineal de aminoácidos puede adoptar múltiples los virus.
conformaciones en el espacio. La estructura primaria Metaloproteínas: Contienen en su molécula uno o
viene determinada por la secuencia de aminoácidos en más iones metálicos que no constituyen un grupo
la cadena proteica, es decir, el número de aminoácidos hem. Por ejemplo algunas enzimas.
presentes y el orden en que están enlazados. La
Hemoproteínas o Cromoproteínas: Proteínas que
conformación espacial de una proteína se analiza en
tienen en su estructura un grupo hem. Ejemplo:
términos de estructura secundaria y estructura terciaria.
Hemoglobina, Mioglobina y ciertas enzimas como
La estructura secundaria es el plegamiento que la
los citocromos.
estructura primaria adopta gracias a la formación de
puentes de hidrógeno entre los átomos que forman el
2. DE ACUERDO CON SU MORFOLOGIA Y
enlace peptídico. La estructura terciaria, en cambio, se
SOLUBILIDAD
refiere a la disposición tridimensional de todos los
átomos que componen la proteína. La asociación de
varias cadenas polipeptídicas origina un nivel superior Proteínas fibrosas:
de organización, la llamada estructura cuaternaria. Son insolubles en
Por último, la asociación de proteínas con otros tipos agua, presentan
de biomoléculas para formar asociaciones formas moleculares
supramoleculares con carácter permanente da lugar a la alargadas, con un
estructura quinaria. número variado de
cadenas
polipeptídicas que
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constituyen fibras resistentes, con cierto grado de proteínas denominadas interferones cuya función
elasticidad, fragilidad o ductilidad. Funcionan como es inhibir la proliferación de virus en células
proteínas estructurales o de soporte. Las más infectadas e inducir resistencia a la infección viral
comunes son: Elastina, Colágeno, Queratina, en otras células, el fibrinógeno de la sangre
Fibrina, etc. importante en el proceso de coagulación.
Proteínas hormonales: Se sintetizan en un tipo
Proteínas Globulares: Tienden a ser más solubles en particular de células pero su acción la ejercen en
agua, debido a que su superficie es polar. Sin otro tipo. Ejemplo, la insulina.
embargo, pueden presentar mayor solubilidad en Proteínas como factores de crecimiento: Su función
otros solventes como soluciones salinas, ácidos o consiste en estimular la velocidad de crecimiento y
bases diluidas o alcohol. Su estructura es compacta la división celular. Como ejemplo se puede citar la
con formas casi esféricas. La mayoría de las hormona de crecimiento y el factor de crecimiento
proteínas conocidas son globulares, dentro de las derivado de plaquetas.
que se consideran todas las enzimas, las proteínas Proteínas catalíticas o enzimas: Permiten aumentar
del plasma y las presentes en las membranas la velocidad de las reacciones metabólicas. Dentro
celulares. A su vez las proteínas globulares se de las células son variadas y se encuentran en
pueden clasificar de acuerdo con su solubilidad: cantidad considerable para satisfacer
Albúminas: Proteínas fácilmente solubles en agua, adecuadamente sus necesidades. Entre otras se
que coagulan con el calor y precipitan con las consideran las enzimas proteolíticas cuya función
soluciones salinas saturadas. Por ejemplo la es la degradación de otras proteínas, lipasas,
Lactoalbúmina, albúmina del suero, la ovoalbúmina amilasas, fosfatasas, etc.
(presente en la clara del huevo). Proteínas contráctiles: Son proteínas capaces de
Globulinas: Escasamente solubles en agua pura, modificar su forma, dando la posibilidad a las
pero solubles en soluciones salinas diluidas como células o tejidos que estén constituyendo de
cloruro de sodio, entre ellas se encuentran las desplazarse, contraerse, relajarse razón por la cual
seroglobulinas (sangre), ovoglobulina, se encuentran implicadas en los diferentes
inmunoglobulinas, etc. mecanismos de motilidad. Las proteínas más
Glutelinas: Solubles en ácidos y bases diluidos, conocidas de este grupo son la actina y la miosina.
insolubles en solventes neutros. Ejemplo: La Proteínas receptoras: Proteínas encargadas de
Glutenina del trigo. combinarse con una sustancia específica. Si se
Prolaminas: Solubles en alcohol del 70 al 80%, encuentran en la membrana plasmática, son las
insolubles en agua, alcohol absoluto y otros encargadas de captar las señales externas o
solventes neutros, como la Zeína del maíz y la simplemente de inspeccionar el medio. Si
Gliadina del trigo. encuentran en las membranas de los organelos,
permiten su interacción. Sin embargo, no son
3. DE ACUERDO CON SU FUNCIÓN proteínas exclusivas de membrana ya que algunas
BIOLÓGICA: se encuentran en el citoplasma. El ejemplo más
típico de éstas son los receptores de las hormonas
Proteínas estructurales: Forman parte de células y esteroides. Casi todos los neurotransmisores, la
tejidos a los que confieren apoyo estructural. mayoría de las hormonas y muchos medicamentos
Dentro de estas podemos citar, el colágeno y la funcionan gracias a la presencia de estas proteínas.
elastina presentes en el tejido conectivo de los Proteínas de transferencia de electrones: Son
vertebrados. La queratinas de la piel, pelo y uñas y proteínas integrales de membrana, comunes en las
la espectirna presente en la membrana de los mitocondrias y cloroplastos cuya función se basa
eritrocitos. en el transporte de electrones desde un donador
Proteínas de transporte: Como su nombre lo indica, inicial hasta un aceptor final con liberación y
transportan sustancias como el oxígeno en el caso aprovechamiento de energía. Como ejemplo se
de la hemoglobina y la mioglobina, ácidos grasos citan a los Citocromos que hacen parte de la cadena
en el caso de la albúmina de la sangre, o las que respiratoria. [3]
realizan un transporte transmembrana en ambos
sentidos.
Proteínas de defensa: Protegen al organismo contra C) FUNCIONES DE LAS PROTEÍNAS:
posibles ataques de agentes extraños, entre las que
se consideran los anticuerpos (inmunoglobulinas) Función enzimática
de la fracción gamma globulínica de la sangre, las
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Las proteínas con función enzimática son las más · La dineína está relacionada con el movimiento de
numerosas y especializadas. cilios y flagelos.
Actúan como biocatalizadores de las reacciones Función de reserva
químicas del metabolismo celular.
La ovoalbúmina de la clara de huevo, la gliadina
del grano de trigo y la hordeína de la cebada,
constituyen la reserva de aminoácidos para el
Función hormonal desarrollo del embrión.
La lactoalbúmina de la leche.
Algunas hormonas son de naturaleza proteica,
como la insulina y el glucagón (que regulan los D) NIVELES DE ORGANIZACIÓN DE LAS
niveles de glucosa en sangre), o las hormonas PROTEÍNAS
segregadas por la hipófisis, como la del
crecimiento o la adrenocorticotrópica (que regula la En el estudio de la estructura de las cadenas
síntesis de corticosteroides) o la calcitonina (que polipeptídicas podemos distinguir hasta cuatro niveles
regula el metabolismo del calcio). de organización estructural.
Las inmunoglobulinas actúan como anticuerpos Las proteínas pueden clasificarse en dos grandes
frente a posibles antígenos. grupos, el de las proteínas fibrosas y las proteínas
globulares. Las proteínas fibrosas son generalmente
La trombina y el fibrinógeno contribuyen a la
proteínas estáticas, cuya función principal es la de
formación de coágulos sanguíneos para evitar
proporcinar soporte mecánico a las células y los
hemorragias.
organismos, suelen ser insolubles y están formadas por
Algunas toxinas bacterianas, venenos de serpientes, una unidad repetitiva simple que se ensambla para
son proteínas fabricadas con funciones defensivas. formar fibras. Entre las proteínas fibrosas podemos
encontrar la alfa-queratina, componente principal del
Función de transporte pelo y las uñas; el colágeno, presente en la piel, los
tendones, huesos y dientes.
La hemoglobina transporta oxígeno en la sangre de
los vertebrados. Las proteínas fibrosas tienen misiones estructurales en
La hemocianina transporta oxígeno en la sangre de los organismos y por tanto son muy abundantes y
los invertebrados. esenciales para el mismo. Sin embargo, la gran
La mioglobina transporta oxígeno en los músculos. mayoría de las funciones celulares las llevan a cabo
proteínas globulares. Su nombre se debe a que sus
Las lipoproteínas transportan lípidos por la sangre. cadenas polipéptídicas se pliegan sobre si misma de
Los citocromos transportan electrones. manera compacta. La gran variedad de plegamientos
diferentes que encontramos en las proteínas globulares
Función contráctil refleja la variedad de funciones que realizan estas
proteínas. A pesar de esta enorme variedad de
· La actina y la miosina constituyen las miofibrillas plegamientos podemos encontrar una serie de motivos
responsables de la contracción muscular. y principios comunes.
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Los aminoácidos desde el punto de vista químico son
F) ENLACES ácidos orgánicos (R-COOH), portadores de un grupo
amino (-NH2) y un radical variable R. Según la
Los enlaces covalentes son el principal factor de naturaleza del grupo R los aminoácidos pueden ser
estabilización de los compuestos orgánicos y también clasificados en cuatro grandes grupos: apolares,
mantienen a los átomos unidos en conformaciones polares sin carga, aniónicos y catiónicos. [6]
geométricas específicas. No obstante, a pesar de que
las energías de los enlaces no covalentes son inferiores A) ESTRUCTURA DE LOS AMINOÁCIDOS:
a las de los enlaces covalentes, las diversas fuerzas
atractivas no covalentes tienen una gran importancia. En la tabla se dan los nombres de los 20 aminoácidos
Este tipo de interacciones son las responsables de naturales encontrados en las proteínas, de los cuáles
mantener la estructura de las biomoléculas. algunos de ellos son esenciales y deben incluirse en la
dieta de animales y jóvenes para que su desarrollo sea
Los enlaces covalentes más importante en Bioquímica apropiado; estos son: (+)-Arginina, (-)-Histidina, (+)-
son los enlaces C–C, C–H, C–OH y C–NH2, cuya Isoleucina, (-)-Leucina, (+)-Lisina, (-)-Metionina, (-)-
energía de enlace oscila entre 300 y 400 kJ/mol. Las Fenilalanina, (-)-Treonina, (-)-Triptofano y (+)-Valina.
interacciones no covalentes son de 10 a 100 veces más Evidentemente estos aminoácidos no los puede
débiles. [5] sintetizar el animal de otros materiales que forman
parte de su alimentación.
II.- AMINOÁCIDOS:
Puede observarse que todos estos ácidos son alfa-
Los aminoácidos son las unidades constituyentes de las aminocarboxílicos. En dos casos (prolina e
proteínas, biomoléculas estas últimas de interés en las hidroxiprolina), el grupo amino forma parte de un
organizaciones estructurales y funcionales de células y anillo pirrilidínico. Esta característica común les
tejidos. Téngase en cuenta que todas las enzimas, confiere propiedades químicas que también les son
fundamentales para las reacciones bioquímica, y todos comunes, entre las que destaca su capacidad para
los anticuerpos, esenciales en los procesos de formar largas cadenas poliamídicas, características de
inmunidad, son proteínas y se encuentran por tanto las proteínas.
constituidos por aminoácidos.
En otros aspectos las estructuras de estos compuestos
La hidrólisis de proteínas por los diferentes métodos varían considerablemente. Además del grupo carboxilo
(ácida, básica o enzimática) proporciona 20 y del grupo amino alfa con respecto a aquél, algunos
aminoácidos (alanina, prolina, lisina, ácido aspártico, de estos aminoácidos tienen un segundo grupo
ácido glutámico, asparagina, glutamina, histidina, carboxilo (por ejemplo, los ácidos aspártico y
glicina, serina, valina, tirosina, triptofano, fenilalanina, glutámico) u otro potencial en forma de carboxamida
treonina, isoleucina, leucina, cisteína, metionina y (por ejemplo la asparagina). Estos se denominan
arginina) como constituyentes universales de las aminoácidos ácidos. Otros contienen un segundo
proteínas. Éstos se distribuyen en esenciales grupo básico que puede ser amono (lisina, por
(fenilalanina, leucina, lisina, metionina, isoleucina, ejemplo), un guanidino (arginina), o el anillo del
treonina, triptófano y valina; aminoácidos esenciales imidazol (histidina). Estos se denominan aminoácidos
en niños, arginina e histidina) que deben ser básicos. Algunos de los aminoácidos contienen
suministrados por la dieta, y los no esenciales. sistemas bencénicos o heterocíclicos, grupos fenólicos
o alcohólicos o átomos de halógenos o de azufre. Cada
Existen otros aminoácidos no proteicos que aparecen uno de estos sistemas anulares o grupos funcionales
en ciclos pero no forman parte de la estructura sufre su propio conjunto característico de reacciones.
proteica, como es el caso de la ornitina, citrulina, 3- [7]
metilhistidina, GABA, L-azaserina, homoserina,
homocisteína, etc. Se conocen alrededor de 150. Tabla 1: Aminoácidos [8]
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B) METABOLISMO DE AMINOÁCIDOS Y • Exceso de metabolitos tóxicos
AFECCIONES RELACIONADAS • Deficiencia de metabolitos esenciales
Una enfermedad genética es una afección mórbida Los errores congénitos del metabolismo de
provocada por una variación del material genético aminoácidos provocan aminoaciduria o incremento de
humano. La enfermedad se produce cuando se lleva a aminoácidos en la orina. Las aminoaciduras son
cabo la mutación en un solo gen en forma espontánea o renales o de desbordamiento:
hereditaria. Si ésta se expresa, el gen mutante da lugar
a la síntesis de una proteína anormal o altera el nivel de * Aminoacidurias renales. Identificadas por tasas
producción de una proteína. plasmáticas normales de aminoácidos y elevación de
su presencia en orina. Este fenómeno se debe a una
Aplicaciones Clínicas reducción en la capacidad de reabsorción de los
túmulos renales
Por definición los errores congénitos del metabolismo * Aminoacidurias por desbordamiento. Elevación de
incluyen defectos que se encuentran en enzimas y que aminoácidos en plasma y en orina
interrumpen vías fisiológicas. Con esta interrupción, se
siguen tres cursos: Cistinuria.
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Los individuos excretan mayores cantidades de cistina, aumento en fenilacético provoca que el sudor y la orina
lisina, arginina y ornitina. El defecto parece localizarse tengan un olor a ratón o a rancio. Si la enfermedad no
en la proteína de transporte que se encuentra en la se trata a tiempo se manifiestan los trastornos
membrana de ciertos tipos de células epiteliales. neurológicos a los tres meses y alcanza su máxima
expresión a los tres años de edad. La restricción
La única manifestación de la enfermedad es la dietética de fenilalanina evita el retraso mental. En
formación de cálculos renales que se produce durante general, los análisis neonatales se llevan a cabo
la niñez y alcanza su máximo nivel en la tercera mediante la prueba de Guthrie, que es un análisis
década de la vida. Se trata de una aminoaciduria renal. microbiológico semicuantitativo. Esta prueba se basa
en que la presencia de fenilalanina evita la inhibición
Cistinosis. de beta-2-tienilalanina en la bacteria Bacillus subtilis,
fenómeno que permite el crecimiento de ésta. La
Es la afectación del almacenamiento de lisosomas que sangre del recién nacido se obtiene del talón y se
generalmente se debe a un defecto en el proceso de coloca sobre papel de filtro. El disco se pone en medio
transporte para el paso de cistina a través de las de cultivo que contiene beta-2-tienilalanina inoculada
membranas del lisosoma. Se producen manifestaciones con esporas de B. subtilis. Tras una noche de
sistémicas graves debido a los precipitados, que incubación se comparan las zonas de crecimiento con
afectan a diversos órganos (riñón, hígado y bazo) así discos control. Si la prueba de Guthrie indica un
como a los tejidos de la médula ósea, ganglios aumento de fenilalanina, se realiza una prueba de
linfáticos y córnea ocular. Se trata de una confirmación. La aminoaciduria provocada por este
aminoacidura renal. Esta suele ser una de las causas proceso es de desbordamiento.
del síndrome de Fanconi.
Tirosinosis y Tirosinemia
Síndrome de Hartnup.
Tirosinosis. Caracterizada por elevados niveles de
Se encuentra incrementada la excreción urinaria de tirosina en la sangre y en la orina. Los principales
alanina, treonina, glutamina, serina, asparagina, valina, síntomas clínicos se encuentran relacionados con daño
leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, triptofano, hepático y renal. La lesión hepática conduce a un fallo
histidina y citrulina. Fenómeno que origina una agudo o a un estado crónico que origina una cirrosis,
aminoaciduria renal. por su parte, la disfunción renal ocasiona el síndrome
de Fanconi.
Estos pacientes manifiestan erupciones escamosas de
color rojizo que aparecen durante la primera década de Tirosinemia. Caracterizada por la precipitación de
la vida. También presentan manifestaciones cristales de tirosina que conducen a la inflamación y
neurológicas como dolor de cabeza, falta de posterior lesión a nivel ocular y cutáneo. En ciertos
concentración, debilidad de los miembros y ataxia. Se casos ha sido documento un retraso mental.
caracteriza por una aminoaciduria renal. En ambas situaciones se origina una aminoaciduria por
desbordamiento.
Fenilcetonuria.
Alcaptonuria
Grupo de afecciones caracterizadas por defectos en la
conversión de fenilalanina a tirosina, debidos a la Caracterizada por excreción urinaria de ácido
deficiencia de la enzima fenilalanina hidroxilasa. Lo homogentísico. La única manifestación de la
anterior causa la acumulación de elevadas alcaptonuria en niños pequeños es el fenómeno de que
concentraciones de fenilalanina y sus metabolitos, los la orina se oscurece al contacto con el aire,
ácidos feniláctico, fenilpirúvico y fenilacético. Se trata incorporación de un álcali y exposición a la luz solar.
de un trastorno hereditario de carácter autonómico Esta situación persiste durante toda la vida y en general
recesivo. Se diagnostica durante la lactancia y produce no produce consecuencias aparentes. Induce una
(en caso de no recibir tratamiento a tiempo) retraso aminoacidura de desbordamiento.
mental grave. Los síntomas tempranos que pueden ser
observados: Dificultad para ingestión de alimento, Enfermedad de la orina color maple (olor a jarabe de
Vómito, Retraso en el desarrollo e Hipopigmentación arce, miel de maple)
Al tercer-cuarto día de vida extrauterina los niveles Se trata de una cetoacidura de α-cetoácidos e
séricos de fenilalanina comienzan a incrementar. El hidroxiácidos procedentes de aminoácidos con cadenas
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ramificadas (leucina, Isoleucina, valina). En caso de no Reacción para la detección de aminoácidos,
ser detectada o no poner el tratamiento temprano actualmente acoplada a sistemas de valoración
produce daño cerebral grave y generalmente la muerte automática Tiene como objetivo detectar y cuantificar
durante el curso del primer año de vida. Los síntomas cantidades de aminoácidos libres. Los aminoácidos, en
que pueden observarse son entre otros: hipoglucemia, general reaccionan con la ninhidrina cuando son
acidosis, letargo, falta de apetito, vómito y calentados con un exceso de la misma. Todos los
convulsiones. Conduce a una aminoacidura por aminoácidos que poseen un grupo amino libre
desbordamiento. reaccionan y forman dióxido de carbono, amoníaco y
un aldehído que contiene un átomo de carbono menos
Homocistinuria que el compuesto original. Esta reacción da lugar a la
formación de un producto color azul o púrpura (que
Caracterizada por el aumento de homocistina en el posteriormente puede ser utilizado para cuantificar el
organismo. Los síntomas se manifiestan tras el aminoácido). En el caso de la prolina, que
nacimiento, uno de los más frecuentes es la dislocación estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino
de la lente ocular. También, se presentan un grupo imino, la coloración final es amarilla. El
anormalidades mentales y en su conjunto los diferentes amoníaco, la mayoría de los polipéptidos y las
daños asociados a este tipo de trastorno conducen a la proteínas pueden desarrollar coloración en esta
muerte. La aminoacidura observada en este trastorno reacción, pero a diferencia de los aminoácidos, no
es del tipo de desbordamiento. liberan CO2. La coloración azulada o violeta será
proporcional a la concentración del aminoácido.
Albinismo
La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) es un
Se debe a la ausencia de la enzima tirosinasa que oxidante energético que por una desaminación
permite el paso de tirosina a melanina. Induce una oxidativa de los aminoácidos conduce a la formación
aminoacidura de desbordamiento. [9] del aldehído correspondiente, con liberación de
amoniaco y gas carbónico y formación de la ninhidrina
III.- IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS Y reducida o hidrindrantina. La molécula de hidridantina,
PROTEÍNAS en presencia de otra de ninhidrina, condensa a través
del amoniaco produciendo una estructura denominada
℘ Reacción de Ninhidrina indanona o púrpura de Ruhemann, manifestando un
color rojizo, excepto para la prolina, hidroxiprolina y
en menor medida para la histidina. Presenta su máximo
de absorbancia a los 570 nm, exceptuando los tres
aminoácidos reseñados anteriormente.
℘ Reacción de Biuret
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y péptidos dan un color rosado; la gelatina da un color Es una prueba para identificar aminoácidos azufrados y
azul. las proteínas que los contienen, se reconocen por la
℘ Reacción de Millón formación de una coloración negra o gris.
℘ Reacción de Xantoproteica
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o negro que se forman cuando reacciona con Acetato
de Plomo en medio alcalino. [10, 11, 12, 13]
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presentan actividades biológicas cuya finalidad es
V. CONSTITUYENTES DE LA CASEÍNA proteger e embrión (cuando el huevo está fecundado),
ya que actúan como enzimas, inhibidores, anticuerpos,
Caseína (del latín caseus, "queso"). Fosfoproteína etc., evitando que los microorganismos se desarrollen.
predominante de la leche y el queso. En la leche, se En el cuadro se muestra la concentración, el peso
encuentra en forma soluble asociada a calcio (sal de molecular y el punto isoeléctrico de las principales
calcio) o caseinógeno. fracciones proteínicas que la componen.
A diferencia de muchas otras proteínas, la caseína no Composición global del huevo (excluyendo la cáscara)
precipita al calor. Precipita bajo la acción de la renina
(enzima proteolítica presente en el estómago de Componente Huevo entero Yema Clara
terneros) para formar la paracaseína. Al precipitar por (%) (%) (%)
acción de ácidos se le llama caseína ácida. Este Agua 74.0 49.0 87.8
precipitado blanco forma la base para la elaboración de Proteínas 12.9 16.0 10.9
todo tipo de quesos. Carbohidratos 0.4 0.6 0.2
Lípidos 11.5 30.6 0.2
La enzima tripsina reduce la caseína a un hidrolizado Cenizas 0.7 2.0 0.3
fosfatado llamado peptona.
De todas estas la ovoalbumina es la más abundante, se
La secuencia peptídica de la caseína contiene un clasifica como fosfoglucoproteína por contener
número inusual de residuos de prolina (ca. 15%). hidratos de carbono y fósforo que esterifican a las
Como resultado, es relativamente hidrofóbica (poco serinas de acuerdo con el contenido de estos 2
soluble en agua) y carece de estructura secundaria o constituyentes, se separa en tres fracciones: A1, A2, A3.
terciaria definidas. En la leche se encuentra como Una de sus principales características es que tiene
suspensión de partículas que asemeja a las micelas de grupos sulfhidrilo que la hacen muy reactiva y
surfactantes (pequeñas esferas hidrofílicas en el fácilmente desnaturalizable, además durante el
exterior e hidrófobicas en el interior). Estas micelas de almacenamiento por un mecanismo de intercambio de
caseína se estabilizan por iones de calcio e disulfuros y sulhidrilos se convierte en una forma más
interacciones hidrofóbicas. estable, la S-ovoalbúmina, a la que se le atribuyen las
reacciones de hipersensibilidad que presentan algunas
La caseína se emplea en la fabricación de pinturas, personas después de consumir huevos. [15]
plásticos y preparados farmacéuticos, en el apresto de
tejidos, la clarificación de vinos y la elaboración de CASEÍNA: GENERALIDADES.
fórmulas hospitalarias. Representa cerca del 77% al
82% de las proteínas de la leche. Color: Blanco a crema.
Sabor/Aroma: Limpio, suave.
El punto isoeléctrico (pI) de la caseína es 4.6. A este Textura: Polvo fluido, granular.
pH, la caseína se encuentra en su punto de menos Solubilidad en H2O: baja, casi nula.
solubilidad, debido a la reducción de repulsiones
intermoleculares, por lo que precipita.[14] Se encuentra en la leche en forma de un complejo
soluble de calcio y fósforo. Representa un 80% de la
VI. PROTEÍNAS DEL HUEVO proteína presente en la leche de bovinos, mientras que
dicho porcentaje es sensiblemente menor (50%) en la
El huevo está constituido por 10.5% de cáscara, 58.5% leche de cerda. La caseína se obtiene por un proceso de
de albumen o clara y 31.0% de yema; los sólidos de su precipitación a partir de la leche previamente
parte comestible, es decir albumen más yema, están desnatada, mediante el uso de fermentos (quimosina en
integrados básicamente por proteínas y lípidos y entre queserías) o de ácidos fuertes (H2SO4 ó HCl). El
ambos suman aproximadamente 95% de la materia producto final es el caseinato sódico o cálcico, después
seca. de neutralizar la caseína con hidróxido sódico o
cálcico.
La clara contiene más de 13 polipéptidos con
características de glucoproteínas que integran una Relación entre punto isoeléctrico y absorbancia por
estructura bien organizada, gelatinosa y espesa y que turbidimetría:
representan 10.9% de esta fracción del huevo; además
de su alto valor nutritivo, muchos de estos polímeros
12
El punto isoeléctrico de una proteína es básicamente el
pH al cual esta no migra en un campo eléctrico. Ocurre
esto pues la concentración de protones es tal que se
produce una compensación de las cargas positivas y
negativas, dando como resultado una molécula sin
carga neta.
MATERIAL:
13
punto pH
isoeléctrico
1 vaso de precipitado de 400ml
1 probeta 100ml Las proteínas están formadas por aminoácidos, unidos
1 espátula por enlaces peptídicos y aunque presentan propiedades
1 piseta fisicoquímicas y biológicas características éstas son
3 vidrios de reloj reflejo de las de los aminoácidos que las constituyen.
Muchas de las reacciones coloridas que se utilizan para
20 tubos de ensayo
el análisis de las proteínas en realidad se deben a la
1 Gradilla presencia de un aminoácido específico.
Pinzas para tubos de ensayo
Agitador de vidrio A) REACCIÓN DE MILLON
Papel pH
La reacción de Millon es especifica para el grupo
REACTIVOS: fenolito y por tanto, la dan positiva todas las sustancias
que posen esta función, como el fenol, ácido salicílico,
Glicina al 0.5% timol, tirosina y todas aquellas proteínas que
Peptona al 0.5% y 2% contengan tirosina.
Gelatina al 0.5% y 2%
Caseína al 0.5% y 2% EXPERIMENTO 1
Albúmina al 0.5% y 2%
Hidróxido de sodio (NaOH) al 10% Prepare una serie de 4 tubos de ensaye numerados,
coloque en cada uno, 2ml de una de las soluciones
Acetato de plomo (Pb(CH3COO)2) al 2 y 10% siguientes: Peptona, Caseína, Gelatina, Albúmina y
Ácido acético (CH3COOH) 0.01N, 0.1N y 1N Glicina.
Sulfato de amonio ((NH4)2SO4) (35g/100ml)
Cloruro Férrico (FeCl3) al 3% Posteriormente añade 5 gotas del reactivo de Millón.
Caliente ligeramente hasta que la solución hierva.
Acetato de sodio (CH3COONa)0.1N
¡PRECAUCION!. La presencia de tirosina se pone de
Caseína al 5% en acetato de sodio 0.1N
manifiesto por la aparición de un precipitado blanco el
Ácido Tricloroacético (CCl3COOH) al 5% cual por acción del calor se vuelve rojo. La presencia
Cloruro de sodio (NaCl) al 5% de sales así como soluciones muy alcalinas pueden
1 clara de huevo interferir en esta reacción.
Reactivo de Biuret
Ácido Nítrico concentrado (HNO3) - Anote sus resultados en la tabla que se encuentra al
final del capitulo
Hidróxido de amonio (NH4OH)
Reactivo de Hopkins – Cole
- Explique en que consiste el reactivo de Millón y cual
Ácido sulfúrico concentrado (H2SO4) es el mecanismo que se ha propuesto para esta
Ácido sulfhídrico (H2S) reacción: Esta reacción se debe a la presencia de
Nitrato de plata (AgNO3) al 2% grupos hidroxifenilos (C6H5OH) en la molécula
Cloruro mercúrico (HgCl2) al 2% proteica. Cualquier compuesto fenólico que no esté
sustituido en la posición 3, 5, como la tirosina, fenol y
Sulfato de cobre (CuSO4) al 1%
timol, dan lugar a la reacción. De estos compuestos,
Etanol (CH3CH2OH) solamente la tirosina o tirosina halogenada se
Agua destilada encuentran presentes en las proteínas, de manera que
la reacción de Millon tiene lugar únicamente con las
EQUIPO: proteínas que tienen tirosina; La prueba no es
satisfactoria para soluciones que contienen sales
Parrilla de calentamiento inorgánicas en gran cantidad, ya que el mercurio del
Campana reactivo de Millon es precipitado y se vuelve inactivo,
Centrifugadora razón por la que este reactivo no se usa para medir
Balanza analítica albúmina en la orina. Si la solución a examinarse es
muy alcalina debe ser previamente neutralizada, ya
PROCEDIMIENTOS Y RESULTADOS: que el álcali precipita también el mercurio en forma
de óxidos amarillos.
1.- Algunas propiedades químicas de las proteínas:
14
Observaciones:
Todas las moléculas que contengas 2 o más uniones
TUBO PROTEINAS peptídicas, por lo tanto todas las proteínas y todos los
S péptidos no menores de 3 unidades, dan positiva a la
1 PEPTONA- resulto positiva, se observo reacción de Biuret. El nombre se debe al compuesto
en una sola capa y se puso de color rojo biurea (NH2-CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la
2 CASEINA- resulto positiva con leche, y prueba.
se observaron dos capas, una blanca por
la leche y la otra roja Cuando una proteína o un polipéptido se hacen
3 GELATINA- resulto positiva, pero fue reaccionar con sulfato de cobre en solución alcalina se
muy ligero su color rojo. produce un color característico púrpura o violeta; el
4 ALBUMINA- resulto positiva, aquí color se debe a un complejo que resulta al unirse el
existió la formación de un coagulo, el cobre con los átomos de nitrógeno de los enlaces
cual se acento en el tubo (color rojo) peptídicos. Esta reacción nos sirve para diferenciar las
5 GLICINA- aquí no resulto positivo, proteínas y péptidos de los aminoácidos y su utilidad
quedo incoloro principal es la de seguir el proceso de hidrólisis
proteica, la reacción será negativa cuando la hidrólisis
Como se observa cada una de las proteínas en estado sea completa.
normal, sin ninguna alteración
EXPERIMENTO 2
- Escriba la reacción
OH OH
Resulto de cada una de las proteínas después de haber
CO NH2 Cu NH2 CO
hervido, se muestra la forma en que quedo cada una de
ella. LA mayoría fue positiva, con una de ella NH HN
(caseína), se utilizo otra técnica. (Con leche) CO OC
NH2 K K H2N
- gelatina OH OH
- caseína
- albúmina Observaciones:
- peptona
- glicina
B) REACCIÓN DE BIURET
15
2 Caseína
3 Gelatina
4 Albúmina
5 Glicina
C) REACCIÓN XANPROTÉICA
16
- ¿Se puede considerar esta reacción general para todas
las proteínas? No, ya que es debida a la formación de
un compuesto aromático nitrado de color amarillo,
cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en
aquellas proteínas con aminoácidos portadores de
grupos bencénicos, especialmente en presencia de
tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza
con un álcali vira a un color anaranjado oscuro.
E) REACCIÓN DE AMINOÁCIDOS
AZUFRADOS
17
Los aminoácidos cistina, cisteína y las proteínas que
los contengan, cuando se tratan con álcalis
concentrados desprenden ácido sulfhídrico, el cual se
puede reconocer por su olor fuertemente desagradable
y característico, o bien, por la formación de un
precipitado negruzco (PbS). Esta reacción se basa en la
separación mediante un álcali, del azufre de los
aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución de
acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo. El oscurecimiento de la solución o la formación de un
precipitado negro indica la presencia de aminoácidos
azufrados.
Observaciones:
[17]
En el caso de la peptona se
EXPERIMENTO 5 puede observar un ligero
oscurecimiento lo que nos
Prepare una serie de 4 tubos de ensaye numerados, indica que hay presencia de
coloque en cada uno 2 ml de una de las siguientes proteínas.
soluciones:
En la gelatina no se observo la
1 Peptona formación de un precipitado
2 Caseína negruzco, ni se obtuvo ningún
cambio en su coloración.
3 Gelatina
La glicina presentó un ligero oscurecimiento al igual
4 Albúmina que en el caso de la peptona.
5 Glicina
Agregue 2 ml de solución de hidróxido de sodio
(NaOH) al 10% ¡PRECAUCIÓN! Caliente ligeramente.
Añada a todos 0.5 ml de solución de acetato de plomo
(Pb (CH3-COO)2). Coloque los tubos en baño maría a
ebullición por 5 min.
18
La albúmina dio como resultado positivo ya que Al realizar la prueba con la caseína no se obtuvo el
presentó un oscurecimiento intenso sin la presencia de resultado esperado por lo que se utilizó leche, el
un precipitado oscuro. resultado que se obtuvo fue un oscurecimiento bastante
intenso con el cual se pudo comprobar la presencia de
proteínas.
Muchas de las propiedades químicas de las proteínas El calor es uno de los agentes primordiales de
son comunes a varias especies debido a que contienen desnaturalización, la mayor parte de las proteínas en
el mismo tipo de aminoácidos, por lo que es necesario solución son inestables a temperaturas superiores a
estudiar sus propiedades físicas y biológicas si se desea 60ºC. Las alteraciones que sufre la molécula
caracterizar una proteína. Las propiedades físico- disminuyen su solubilidad y generalmente precipitan
químicas de las proteínas dependen fundamentalmente en forma de agregados insolubles. Esta propiedad de
del peso molecular, de su carga eléctrica neta y de la las proteínas se denomina coagulación.
conformación que adopte la molécula (estructura 1ª, 2ª,
3ª y 4ª) EXPERIMENTO 6
19
La carga de las partículas coloidales se produce por
la ionización de grupos hidroxilo, carboxilos, fosfatos
o sulfatos, los cuales pueden estar presentes en la
superficie de los coloides. Estos grupos reaccionan
con los iones metálicos de los coagulantes lo que
genera la posterior precipitación. Así la
desestabilización de los sistemas coloidales se ve
TUBOS CON SU RESPECTIVA PROTEINA mejor bajo el punto de vista químico.
La impureza liofoba es más fácil de precipitar que una - Explique la diferencia entre coagulación y
liofílica. En cuanto al número de impurezas se obtiene desnaturalización
una mejor coagulación con un número mayor de
impurezas. LA DESNATURALIZACIÓN es un cambio estructural
de las proteínas o ácidos nucleicos, donde pierden su
Respecto al tipo de coagulante se pueden encontrar estructura nativa, y de esta forma su óptimo
además de las sales de aluminio, las de hierro y los funcionamiento y a veces también cambian sus
polielectrolitos. En general los coagulantes con mayor propiedades físico-químicas.
valencia actúan mejor debido a su mayor capacidad
de intercambio de carga. El Al+3 es muy efectivo. Las proteínas se
desnaturalizan cuando
Según el tipo de agua que se tenga es tipo de pierden su estructura
mecanismo de coagulación que más influye. En aguas tridimensional
poco turbias, la coagulación es principalmente por (conformación química) y
hidróxidos metálicos. Su efecto es el del barrido. En así su característico
aguas muy turbias en cambio se tiene gran plegamiento de su
participación también de los otros mecanismos y las estructura.
relaciones de dosis de coagulante y coloides son
prácticamente estequiométricas. Las proteínas son filamentos largos de aminoácidos
unidos en una secuencia específica. Son creadas por
Otros coagulantes comerciales son el sulfato de los ribosomas que "leen" codones de los genes y
aluminio, aluminato de sodio, sales de fierro, cloruro ensamblan la combinación requerida de aminoácidos
férrico y el sulfato ferroso. por la instrucción genética. Las proteínas recién
creadas experimentan una modificación en la que se
Los coagulantes metálicos se polimerizan en solución. agregan átomos o moléculas adicionales, como el
Los polielectrolitos (poliacrilamida, algianato de cobre, zinc e hierro. Una vez que finaliza este proceso,
sodio) son polímeros en sí. Actúan ambos de igual la proteína comienza a plegarse sin alterar su
forma.
20
secuencia (espontáneamente, y a veces con asistencia plata (AgNO3) cloruro de mercúrico (HgCl2) y acetato
de enzimas) de forma tal que los elementos básico de plomo (Pb(CH3-COO)2)) todos al 2%
hidrofobitos de la proteína son encerrados dentro de
su estructura y los elementos hidrofilitos son llevados
al exterior. La forma final de la proteína determina
cómo interaccionará con el entorno.
Si la forma de la proteína es alterada por algún factor
externo (por ejemplo, aplicándole calor, ácidos o
álcalis), no es capaz de cumplir su función celular.
EXPERIMENTO 8
B) PRECIPITACIÓN DE LAS PROTEÍNAS POR
METALES PESADOS: Coloque en tubos de ensaye numerados, 3ml de las
siguientes soluciones; peptona, gelatina, caseína y
Las proteínas cuando se encuentran en solución a pH albúmina al 2% y añada un volumen igual de acido
superiores a su punto isoeléctrico son capaces de tricloroacetico (CCl3COOH) al 5%
reaccionar con diferentes metales pesados formando
los correspondientes proteinados insolubles. - Anote sus resultados al final del capitulo
21
((NH4)2SO4). Sin embargo, la concentración para
Cuando las proteínas se mezclan con bajas precipitar diferentes proteínas es variable. Esta
concentraciones de ácido tricloroacético o diferencia en sensibilidad se ha utilizado para separar y
ferrocianida de potasio en ácido acético, se obtienen purificar proteínas, por ejemplo las albúminas y
resultados de turbidez. En condiciones controladas de globulinas a, b, g de la clara de huevo. En esta
temperatura, concentración y tiempo de exposición a determinación la proteína blanca del huevo (clara) será
agentes precipitantes, la densidad óptica resultantes a separada en fracciones de globulina y albúmina.
600mm ofrece un método rápido y semicuantitativo
para la determinación de proteína. Este método tiene EXPERIMENTO 9
grandes desventajas: no todas las proteínas tienen
precipitados parecidos y la precipitación ácida de Coloque en tubos de ensaye numerados, 2 ml de las
materiales no proteicos interfiere.[20] siguientes soluciones:
Observaciones:
Peptona 2%
Clara de huevo fresca diluida 1:2
Caseína; hubo un intenso precipitado, color blanco.
Gelatina; hubo un poco de turbidez. Añada a cada tubo 2 ml de solución saturada de sulfato
Peptona; no hubo reacción de amonio, agitar y centrifugar a 3000 rpm durante 5
Albúmina; aquí hubo también un intenso min.
precipitado, pero fue menor a la de la caseína.
Peptona: No se formo precipitado.
Clara: Se formo precipitado.
22
Coloque los tubos de ensayo 2ml de las siguientes
- ¿Qué resultado obtuvo? El resultado que se obtuvo soluciones: peptona, caseína, gelatina, albúmina al 2%,
con 1 ml de sobrenadante fue positivo. estratificando cuidadosamente agregue 3ml de alcohol
de 96% y observe lo que ocurre en la interfase.
EXPERIMENTO 10
23
Caseína + -- --- --- + --- +
-
No. Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Sustancias ↓
CASEÍNA 5% en ACETATO DE SODIO 1 1 1 1 1 1 1 1 1
0.1N
AGUA DESTILADA 8.4 7.8 8.8 8.5 8.0 7.0 5.0 1.0 7.4
ÁCIDO ACÉTICO 1N - - - - - - - - 1.6
ÁCIDO ACÉTICO 0.1N - - 0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 8.0 -
ÁCIDO ACÉTICO0.01N 0.6 1.2 - - - - - - -
pH EXPERIMENTAL 6 5 5 5 4 4 4 4 3
pH TEÓRICO 5.97 5.67 5.44 5.05 4.75 4.45 4.15 3.85 3.55
Observación 15 min. xxx xxx x xx xxx xxx xxx xxx xxx
xxx xxx xxx xxx xx x
xx x xxx
Observación 30 min. xxx xxx x xx xxx xxx xxx xxx xxx
xxx xxx xxx xxx xx x
x xx xxx
24
residuos de aminoácidos de las proteínas punto isoeléctrico α de la caseína (investigado
obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo. teóricamente =4.6) y isoeléctrico β (=5) se
En la reacción de Hopkins-Cole dio positiva a observaba mayor turbidez que en los demás pHs.
las proteínas por la reacción del grupo indol del
triptofano con el ácido glioxílico en presencia de CONCLUSIONES:
ácido sulfúrico concentrado, dando así positivo al
observarse el anillo violeta y negativo para la glicina. Se observaron algunas de las propiedades de las
La prueba para los aminoácidos azufrados dio proteínas tanto físicas como fisicoquímicas, así como
negativa para la gelatina, glicina y para la caseína también las reacciones específicas para cada
(aunque al realizarlo con leche dio positivo), aunque aminoácido que las constituye.
debieron de dar positivos excepto la glicina y positiva
para peptona y albúmina dando una coloración negra Las reacciones coloridas como por ejemplo la
indicando así la presencia de aminoácidos azufrados. reacción de millón son sirve para identificar las
proteínas formadas por grupos fenólicos y también
En el experimento 6 todas las proteínas dieron
proteínas que contengan tirosina (ejemplo: albúmina,
positivas al observarse la coagulación, esto debido a
caseína, gelatina, y peptona). Otra reacción colorida
la desnaturalización de las proteínas por el efecto del
es la xantoproteíca en la cual las proteínas que
calor debido a que la mayor parte de las proteínas en
contengan grupos bencénicos darán positiva. En
solución son inestables a temperaturas superiores a
general las reacciones coloridas nos ayudan a saber
60ºC observándose así al coagularse las alteraciones
con que grupo funcional esta formada la proteína y
que sufre la molécula disminuyendo su solubilidad y
así también de que aminoácido esta formado.
precipitando en forma de agregados insolubles.
En la precipitación de las proteínas por Las propiedades fisicoquímicas dependieron
metales pesados sólo se realizó el experimento con la fundamentalmente del peso molecular de su carga
albúmina ya que teóricamente para las demás eléctrica y de la conformación que adopte la
proteínas también debería de dar positivo ya que las molécula, por lo cuál se pueden interpretar los
proteínas cuando se encuentran en solución a pH resultados de acuerdo a las características que se
superiores a su punto isoeléctrico son capaces de observen como por ejemplo la precipitación o
reaccionar con diferentes metales pesados formando turbidez que experimente la proteína en la reacción.
los correspondientes proteinados insolubles, como se
observó en la peptona formando así el peptonato de REFERENCIAS:
fierro.
En el experimento 8 dieron positivas todas [1] Ville, C. A.: Proteínas. En: Biología. 6ª ED.
menos en la peptona (tal vez debido a la solución o a Interamericana, México, 1974. 31-33.
que faltaba agregar un poco más de ácido), aunque de [2] Berezov T.T, Korovkin B.F: “Chemistry of
diferente intensidad los resultados para cada proteína Proteins”. En Biochemistry, 1ª ED. Mir Publishers
ya que se desnaturalizaron en diferente medida por el Moscow Moscú, Rusia, 1992. pp. 19 – 64.
ácido tricloroacético que es un ácido fuerte y forma [3]
metaloproteínas. www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/lec
Para el experimento 9 no se realizó ni para la ciones/cap01/01_01_12.htm - 12k -
gelatina ni caseína y sólo dio positivo para la [4] Lehninger, A. L. Principios de
albúmina separando a la proteína en su estado natural, bioquímica. Barcelona: Ed. Omega, 2ª ed., 1993.
es decir las globulinas a, b, y g de la clara del huevo [5]
precipitándolas. http://www.biorom.uma.es/contenido/av_biomo/Mat
En el experimento 10, todas dieron positivas 3.html
debido a que el alcohol es un agente desnaturalizante [6] González de Buitrago JM, Arilla E, Rodríguez-
de las proteínas al deshidratarlas al competir por el Segade M, Sánchez A: Alteraciones de la digestión
agua de solvatación, por lo cuál se precipitan. de proteínas y de la absorción y metabolismo de los
aminoácidos. En.: Bioquímica Clínica, 1ª ED.
Por último se determinó el pH teórico de la
McGraw-Hill Interamericana, Madrid, España, 1998.
caseína en soluciones de ácido acético a diferentes
181–190.
concentraciones por medio de la ecuación de
[7] Morrison, R. T. Y Boyd, R. N.: Aminoácidos y
Hendersson-Hasselbalch observándose así que a
Proteínas. En: Química Orgánica. 5ª ED. Pearson
mayor concentración de ácido acético, el pH
Educación, México, 1998. 1323 -1327
disminuía y la turbidez y/o precipitación de las
[8] www.monografias.com
soluciones variaba, observándose así que cercano al
25
[9] Anderson SC, Cockayne: Metabolismo de [16]
aminoácidos y afecciones relacionadas. En “Química http://quimica.unp.edu.ar/grado/qa2/2003/caseina.ht
Clínica”, 1ª ED. Interamericana McGraw-Hill, m(20/09/07:12:22p.m.)
México D.F., 1995. 213– 221. [17]
[10]Cabanes J (1988): Propiedades químicas y http://ellaboratorio.275mb.com/practicas/bioquimica/
separación de los aminoácidos. En Lozano JA, reconocimiento_proteinas.doc
Tudela J (eds): “Prácticas de Bioquímica. [18] Causa E. y Pinto C. Floculación de aguas en
Experimentación y Simulación”, 1ª Ed. Editorial plantas de Tratamiento En Investigación sobre
Síntesis (Madrid, España), . 87–92. procesos de coagulación”. Santiago, Chile, 1974.
[11] Holde, M. V.: Bioquímica. 3ª ED. Pearson, [19] Kemmer, F. y McCallion J. Manual del Agua.
España, 2004. 556-568 Su naturaleza, tratamiento y aplicaciones. Mc Graw
[12] BOHINSKI. Bioquímica. 5ed., Pearson. Hill, USA, 1979. 24
México.1991. 1220-1232 [20] Orten, M. J: Liquidos Organicos. En:
[13] http://www.pucmmsti.edu.do/ Bioquímica Humana. Panamericana, Argentina,
(7/09/07:12:52a.m.) 1998. 405,407
[14] http://es.wikipedia.org/wiki/Case%C3%ADna [21] Murray, K. R; Granner, K. D: Nutricion. En:
(30/Ago/07: 1:16PM) Bioquímica de Harper. Manual Moderno, Mexico
[15] Badui, S. D.: Química de los alimentos 3ªed. DF, 1990. 750
Alambra Mexicana, México D.F: 2004.188-189
26