Objetivos

1.- Conocer cmo y qu importancia tienen la formacin de osazonas al momento de

identificar azucares, y conocer la aplicacin de la reaccin de acetilacin en un
monosacrido.
2.- Conocer cmo funciona el poder reductor de algunos carbohidratos.
Introduccin
Los monosacridos pueden ser oxidados por agente oxidantes suaves como Fe +3 o Cu+2 en
estas reacciones l carbonilo se oxida a acido carboxlico. Esta propiedad es la base de la
reaccin de Fehling, ensayo que se usa para determinar la presencia o no de glcidos
reductores.
Los azcares reductores son aquellos azcares que poseen su grupo intacto, y que a travs
del mismo pueden reaccionar con otras molculas.
Los azcares que dan resultados positivos con las soluciones de Fehling se conocen como
azcares reductores, y todos los carbohidratos que contienen un grupo hemiacetal o
hemicetal (un hemiacetal es una molcula que contiene un grupo hidroxilo -OH y un residuo
alcxido OR) dan pruebas positivas. Los carbohidratos que solo contienen grupos acetal o
cetal no dan pruebas positivas con estas soluciones y se llaman azcares no reductores. (3,5)

Las osazonas se forman cuando las azucares reaccionan con fenilhidrazina. La reaccin
involucra la formacin de fenilhidrazona. La reaccin puede ser usada para identificar
monosacridos.
Involucra
dos
reacciones.
Primero
la
glucosa
son
fenilhidrazina
producen
glucosafenilhidrazona por eliminacin de un molcula de agua del grupo funcional. El
siguiente paso involucra la reaccin de un mol de glucosafenilhidrazina con dos moles de
fenilhidrazina (exceso)
El carbono alfa es atacado aqu porque es mas reactivo que los otros. Son compuestos
altamente coloreados, y pueden ser detectados fcilmente. (1,3)

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Teora
Disacridos:
Los disacridos se forman por la unin de dos monosacridos a travs de un enlace
covalente o glucosidico. Este enlace se da entre un hemiacetal y un alcohol.

Sacarosa: Se forma por glucosa y fructosa que se sintetiza en plantas. Sus dos carbonos
anomericos se encuentra formando el enlace glucosidico, por lo tanto, no es un glcido
reductor

Maltosa: La maltosa o azcar de malta es un disacrido formado por dos glucosas unidas
por un enlace glucosdico producido entre el oxigeno del primer carbono anomrico
(proveniente de -OH) de una glucosa y el oxgeno perteneciente al cuarto carbono de la otra.

Lactosa: La lactosa es un disacrido formado por la unin de una molcula de glucosa y otra
de galactosa, como se puede deducir observando su frmula, se trata de un disacrido
reductor.

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Polisacridos:
Los polisacridos son biomolculas formadas por la unin de una gran cantidad de
monosacridos. Se encuadran entre los glcidos, y cumplen funciones diversas, sobre todo
de reservas energticas y estructurales.(1,5)

DISCUSIONES:
1. Formacin de osazonas de monosacridos (glucosa y fructosa)
AZCAR.

PRUEBA DE
FEHLING.

FORMACIN DE
OSAZONAS.

FORMACIN DE
OSAZONAS.

FORMACIN DE
OSAZONAS.

SI

NO

TIEMPO (min)

Fructuos
a.

Positiva.

Galacto
sa.

Positiva.

Lactosa.

Positiva.

Sacaros
a.

Negativa.

Almidn
.

Negativa.

4:31

2. Formacin de osazonas de disacridos (sacarosa, maltosa y lactosa)

Se colocaron en dos tubos de ensaye 3 ml de Fenhilidrazina recin preparada, y 0.2 ml de
solucin saturada de bisulfito de sodio una vez con las muestras preparadas de sacarosa y
lactosa al 2%, se agregaron 5ml en los tubos; se mezcl y se coloco a bao mara, se midi el
tiempo al cual ocurri la formacin de osazonas.
Para verificar la formacin de osazonas se tomaron muestras de la reaccin en intervalos de
tiempo de 15, 20 y 30 minutos, la Lactosa torn su color de amarillo claro a naranja obscuro
y finalmente tom una coloracin escarlata. Por otra parte, la sacarosa, vir su coloracin de
amarillo claro a naranja obscuro. Se procedi a filtrar las muestras al igual que la mezcla de
reaccin y se observaron al microscopio las osazonas formadas.
La creacin de osazonas que se observ con la formacin de un precipitado color caf que
tena cierto parecido a pelusas.
Muestra

Tiempo

Formacin de
osazonas

Color final

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Lactosa
15 min
si
Rojo escarlata
Sacarosa
20 min
si
Naranja oscuro
El disacrido lacotosa, produce por hidrlisis D-galactosa y D-glucosa, puesto que posee un
carbono anomrico libre, la lactosa es un azcar reductor.
La sacarosa no tiene tomo de carbono anomrico libre, los carbonos de ambas hexosas se
hallan unidos entre si, no experimenta mutarrotacin ni reaacciona con fenilhidracina aunque
se hidroliza con ms facilidad que otros disacaridos, no es azucar reductor.
3. Formacin de osazonas de polisacridos.
Se colocaron 5 mL de una solucin de almidn al 2% se adicion fenilhidrina y bisulfito de
sodio, procediendo de la misma forma como para la prueba de los monosacridos, entonces
se pudo observar una coloracin amarilla, dando como resultado una prueba negativa,
demostrando que el almidn no es un azucar reductor.

4. Formacin de osazonas de disacridos y polisacaridos hidrolizados (sacarosa, y

lactosa).
Azcar
.

Prueba de
Fehling.

Sacaro
sa.

Positiva.

Almid
n.

Negativa..

Formacin de
osazonas.

Formacin de
osazonas.

Formacin de
osazonas.

SI

NO

TIEMPO (min)

La sacarosa es un azcar no reductor esto se debe a que le enlace glucosdico que presentan
no tienen carbonos anomricos y por ende no tendrn grupos OH anomricos libres.
Pero cuando el enlace glucosdico se rompe por la accin del cido sulfrico, se deja libre a la
fructosa, monosacrido no reductor y a la glucosa, monosacrido reductor, por presentar en
su estructura un grupo carbonilo que va a intervenir en la reduccin de los iones cprico
5. Pentaacetato de D-glucosa:
En un mortero se pulverizaron 2 g de glucosa anhidra y 1 g de acetato de sodio anhidro,
hasta dejar un polvo con las siguientes caracteristicas: blanco y fino. Se adicion tanto esta
sustancia como cuerpos de ebullicin a un matraz baln, los cuales se adaptaron a en un
sistema de reflujo al que se le adicion por el refrigerante 10 mL de anhdrido actico y se
calent directamente por aproximadamente 1 hora, tiempo tomado a partir de la completa
disolucin de la glucosa y acetato de sodio; efectuando as una reaccin de acetilacin sobre
los grupos hidroxilo de un monosacrido, en ste caso, glucosa.
La mezcla de reaccin se adicion a una mezcla agua hielo para cristalizar en fro, y debido a
que la molcula es poco o casi no polar se cristaliz al bajar la temperatura, pero se tuvo que
inducir la formacin de cristales con agitacin constante y rallado de paredes del vaso de
precipitados. Cuando se form un precipitado caf blanquecino se filtr a gravedad usando
ms agua fra como disolvente. El precipitado obtenido se disolvi de nuevo con agua
caliente (para aumentar la solubilidad del procurando disolver la mayor cantidad posible.
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Posteriormente se filtr utilizando agua caliente obteniendo residuos color caf en el papel
filtro y una sustancia amarillenta que se dej temperar y luego se enfri en un bao de hielo,
induciendo la cristalizacin. Despus se filtr al vaco usando agua fra y se obtuvieron unos
cristales amarillo muy claro; para eliminar toda coloracin y evitar usar carbn activado, se
disolvi por completo el producto en agua caliente procurando limpiar el papel filtro utilizado,
luego se volvi a dejar enfriar en un bao de hielo con lo que se cristaliz el producto,
entonces se filtr al vaco de nuevo, usando agua fra y se obtuvo el producto limpio, un
slido blanco y cristalino.

Cuestionario:
1.-Indicar la razn de usar clorhidrato de fenilhidrazina como reactivo en lugar de
fenilhidrazina base: Porque el compuesto clorhidrato de fenilhidrazina es ms estable que la
fenilhidrazina base
2.-Si se utilizara clorhidrato de fenilhidrazina en la reaccin de obtencin de osazonas Cmo
se obtendra la Fenilhidrazina base?
Cuando se utiliza la base, ste no reacciona fcilmente
3.-Indicar por qu se utiliza la solucin de bisulfito de sodio en la formacin de osazonas?
Porque es un catalizador cido que inhibe la energa de activacin para propiciar la reaccin,
para que se realice la adicin de la fenilhidrazina, es necesario comenzar con una reaccin
cido base. Adems, se trata de una adicin sobre el grupo carbonilo. La mayora de los
aldehidos , metil alquil cetonas y cetonas cclicas reaccionan fcilmente con NaHSO 3 en
solucin saturada, para formar compuestos de adicin (aldehidobisulfito o cetona-bisulfito).
(1,2)

4.-Explicar las diferencias en la formacin de osazonas entre monosacaridos y disacaridos:

La formacin de osazonas en los monosacridos se da de forma ms rpida debido a que su
grupo carbonilo est ms disponible y es ms fcil hacerlo reaccionar con la fenilhidrazina,
por otra parte, los disacridos tienen que romper su enlace glucosdico primero para que su
grupo carbonilo pueda reaccionar.(4)
5.-Indicar por medio de reacciones, cules azcares dan positivo a la prueba de Fehling:
Azucares reductorestienen una coloracin rojiza debido al oxido cuproso que es forma por
oxidacin del azcar por medio del catin Cu 2+.

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6.-Explicar por qu se utiliza cobre como tartarato y no como sulfato: Se pueden utilizar
ambos, pues ambos compuestos poseen Cu 2+que es el necesario para oxidar a los azcares.
ste cobre tambin se puede reducir de 2+ a 1+
7.-Dar 3 ejemplos de carbohidratos que den positiva la prueba de Fehling y tres que no la
den:
Positiva: Lactosa, Glucosa, Galactosa
Negativa: Sacarosa, Fructosa, Almidn
8.- Indicar que tipo de grupos funcionales reaccionan con fenilhidrazina.
Con el grupo carbonilo de los azucares.
Los aldehdos y las cetonas reaccionan con un equivalente de fenilhidrazina y forman
fenilhidrazonas.
Las aldosas y las cetosas reaccionan con tres equivalentes de fenilhidrazina y forman
ozasonas(1,2)
9.- Indicar cuantos moles de fenilhidrazina base se necesitan en la formacin de osazonas.
Explicar
10.- Explicar porque las osazonas se forman nicamente en los carbonos 1 y 2 de los
carbohidratos.
Porque en estas posiciones es donde se encuentra los carbonos carbonilos en los cuales es
ms fcil que ocurra la reaccin pues son los ms fciles de oxidar formando aldosas o
cetosas
11. En la sntesis de pentaacetato de B-D-Glucosa
a) Indicar cul es el papel del acetato de sodio anhidro
En esta prctica se utiliz como un sustrato para acetilar en la reaccin
b) Explicar porque se vierte la mezcla de reaccin en agua helada despus del calentamiento
a reflujo: Para que el producto recristalice y se obtenga el producto con mayor pureza
c) Indicar porque es importante que el slido formado se agite hasta que quede finamente
dividido: Para que el compuesto no se solidifique completamente hasta el punto de que sea
imposible disolverlo, y podamos de este modo eliminar la mayor cantidad de impurezas
posibles.
12.- Escribir las estructuras de Haworth de los pentaacetato de a-y B-D glucosa

13.- Dibujar las frmulas de haworth para los acetatos de maltosa, sacarosa y lactosa

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14.- Indicar por medio de reacciones como se hace la determinacin del tamao del anillo de
azcar que al metilarlo produce 2,3,4,6-tetra- O- metil-D-glucosa y al someterlo a una
oxidacin con cido ntrico concentrado, produce acido
15.- La hidrolisis de sacarosa produce lo que se conoce como azcar invertido. Investigar que
significa dicho trmino.
El azcar invertido es la combinacin de glucosa y fructosa. Su nombre hace referencia a que
el poder rotatorio de la solucin frente a la luz polarizada es invertido por el proceso de
hidrlisis que separar la sacarosa en sus dos subunidades (2)

+++++++++++++++++++++++
Conclusiones:

Las formas predominantes de muchas azcares como glucosa, fructosa o ribosa, en

disolucin, son formas de cadena cclica ya que stas formas son energicamente ms
estables, la ciclacin se lleva a cabo con la formacin de un hemiacetal intramolecular
(Reaccin entre aldehdo o cetona y alcohol) cuando el hemiacetal forma un anillo de 6
carbonos se le llama piranosa y si es con 5 carbonos, se le llama furanosa.
Los azcares reductores (glucosa, fructosa, maltosa y lactosa) dan positivo a la reaccin de
Fehling(color rojo), presentan equilibrio en la forma abierta de su ciclo, poseen un carbono
anomrico libre, promueven la reduccin (como sales cpricas) oxidandose, presentan
mutarrotacin(cambio espontneo entre las dos formas cicladas (alfa) y (beta) y forman
osazonas.(3)
Los azcares son en general solubles en agua y difcilmente pueden recristalizarse, sin
embargo, sus osazonas fcilmente se cristalizan en ste disolvente y adems presentan un
punto de fusin bien definido, por lo cual este tipo de derivados se utiliza para caracterizar
carbohidratos, as como tambin para determinar sus configuraciones.
La glucosa posee una mayor proporcin de forma carbonlica (abierta), an as, la sacarosa
es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres por lo que carece de poder
reductor y la reaccin con la prueba de Fehling es negativa. Azucares reductoresReducen al
producto de Fehling dndole un color rojo
Se observ que los monosacridos reaccionan de manera ms rpida que los disacaridos o
polisacaridos por la mayor disponibilidad de su grupo carbonilo

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Bibliografa:
1. M.BERG Jeremy, TYMOCZKO John L; Bioqumica 6 edicin, editorial Revert, Espaa, 2008
2. MATHEWS Christopher K, VAN HOLDE K.E., Bioqumica, 3 edicin, Pearson editorial, Madrid
2002.
3. BRADLEY Frank, ARMSTRONG Thomas, BENNETT Peter , Bioqumica, editorial Revert, Barcelona
1982
4. MOORE, J. A. y Dalrymple, D. L.Experimental Methods in Organic Chemistry 2a. Ed. W. B.
Saunders Co. U.S.A. (1976) Pag. 259-269.
5. Gilman Organic Chemestry, Jhon Wiley and Sons.Inc. N.Y (1943) Capitulo 36

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