Laboratorio de Microbiología
PRÁCTICA NO.6
ANALISIS MICROBIOLOGICO DE HECES ( COPROCULTIVO)
OBJETIVO.
El alumno manejará los procesos
microbiológicos para la realización de coprocultivos.
Comprenderá los momentos en los cuales debe como
médico recurrir a ésta técnica. Identificará y múltiple, se incuba a 37oC por 24 a 48 horas
diferenciará las bacterias patógenas de la flora normal
del tracto gastrointestinal.
FUNDAMENTO TEÓRICO.
El tracto gastrointestinal contiene una flora
normal muy diversa, pero pertenecen a una sola
familia de bacterias, las Enterobacterias.
A). Recolección de la muestra: Para
enfermedades gastrointestinales es preferible el
examen de heces frescas o también un raspado del
ano con hisopo. La muestra debe ser refrigerada si no
se va a cultivar enseguida.
B). Examen directo: No es muy
recomendable antes del cultivo, debido a que la
FLORA NORMAL
Bacteroides fragilis.
Lactobacilus spp.( anaerobios).
Clostridium perfringens
Peptostreptococcus spp.
Proteus spp.
Candida spp.
Pseudomona spp.
CASO CLINICO
Paciente de 35 años de edad, sexo masculino,
serología positiva para VIH conocida desde 4 años
antes, el motivo de la consulta fue por fiebre y
repercusión general. Ingresó al hospital relatando una
historia de 1 mes de evolución caracterizada por
anorexia, decaimiento, pérdida progresiva de peso,
sensación febril, diarreas líquidas intermitentes, sin
sangre ni moco, no acompañadas de dolor abdominal.
Al realizar tinción de Gram encontramos bacilos
gram negativos y el crecimiento del coprocultivo en
agar SS fue positivo presentando colonias circulares
de coloración negra.
PREGUNTAS EXPLORATORIAS:
1.- ¿Cuáles son los microorganismos que
selectivamente crecen en el agar SS?
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morfología microscópica de las Enterobacterias es
muy similar entre ellas y no permitiría una
diferenciación entre ellas.
C). Cultivo: Se deposita la muestra con un
asa sobre un medio sólido y se procede por estría
D). Medios de cultivo: Agar sangre, Agar
desoxicolato, EMB, Mac Conkey, SS, etc.
.
La técnica de coprocultivo que aquí se
describe es un procedimiento de rutina para aislar
Salmonella, Shigella, y cepas comensales y patógenas
de Escherichia coli.(en ésta práctica no analizaremos
crecimiento de Yersinia enterocolítica .
Para aislar Staphylococcus aureus es recomendable
añadir una placa de agar sal y manitol, y para aislar
Candida albicans otra de agar Sabouraud.
E). Flora normal y patógena.
FLORA PATÓGENA
Salmonella typhi
Salmonella spp.
Shigella spp.
Escherichia coli (enterotoxina).
Klebsiella spp.
Yersinia enterocolítica.
Vibrio cholerae.
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2.- ¿Cómo se manifiesta clínicamente la salmonelosis
no tifoidea?
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3.- ¿Tiene algo que ver para la salmonelosis no
tifoidea el echo de que el paciente tenga VIH?
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4.- Investiga ¿cómo se manifiesta la gastroenteritis ___________________________________________

aguda en un paciente? ___________________________________________
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MATERIAL.
RECIPIENTE ESTERIL DE BOCA ANCHA ( O HISOPO ESTERIL CON MEDIO DE TRANSPORTE)
Cajas Petri con Agar Sangre.
Cajas Petri con Agar Salmonella-Shigella (SS).
Cajas Petri con Agar MacConkey.
Tubos de ensaye con rosca conteniendo un hisopo estéril.
Mecheros Meker.
Mechero Bunsen.
Asa de Nicromo.
Equipo de Tinción de Gram.
Portaobjetos.

Material Biológico.
Muestra de materia fecal.

TÉCNICA.

1. Método para el aislamiento de

microorganismos en material fecal. EXAMENES DE LOS CULTIVOS.

A). Toma con el asa estéril un poco de Agar MacConkey:

materia fecal y depositarla cerca de la orilla de cada
una de las placas.
(Agar sangre, , MacConkey, SS)
B). Proceder al aislamiento por el método de
estría cruzada (múltiple).
C). Incubar a 37oC por 24 a 48 horas.
D). Interpretar los resultados , anotando las
características morfológicas de cada colonia diferente
que haya crecido.
E). Hacer un frotis de cada colonia diferente,
y teñirlo con Gram.
OBSERVACIONES:
 Las muestras para coprocultivo deberían
tomarse antes de administrar antibióticos y
preferentemente antes de tomar
antidiarreicos.
 Indicar siempre el juicio diagnóstico de
presunción y si el paciente es menor de un
año.
 Solicitar las investigaciones especiales,
especialmente para (S.aureus).
 En el caso de búsqueda de portadores de
Salmonella, se deberá fundamentar
adecuadamente el pedido y se necesitan 3
muestras negativas para asegurarse que el
paciente no es portador.
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Características: Es un medio
moderadamente selectivo. Las sales biliares y
el cristal violeta inhiben a la mayoría de las
bacterias Gram-positivas y a algúnas Gram-
negativas. La fermentación de lactosa hace
virar el indicador a rojo.
Aspecto de las colonias: Los
fermentadores típicos de lactosa ( E. coli,
Klebsiella y Enterobacter ) dan colonias rosas
o rojas rodeadas de un halo de sales biliares
precipitadas. Las fermentadoras débiles o
lentas de lactosa (Citrobacter, Serratia)
pueden dar colonias incoloras a las 24 hrs. Y
rosadas a las 48 hrs. Proteus, Salmonella,
Shigella y Yersinia, dan colonias incoloras.
Enterococcus forma pequeñas colonias.
Agar Salmonella –Shigella (SS):
Característsicas: Es un medio
selectivo para Salmonella y Shigella. La alta
concentración de sales biliares y citrato
inhibe todas las bacterias Gram- positivas y
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muchas Gram- negativas, incluidos los entéricos Gram Negativos permite la

coliformes. La fermetación de lactosa hace
virar el rojo neutro a rojo. El SH2 formado a
partir del tiosulfato da un precipitado negro al
reaccionar con hierro.
Aspecto de las colonias. Los
fermentadores de lactosa están bastante
inhibidos y dan colonias rojas. Las colonias
de Salmonella aparecen sin inhibir,
transparentes con el centro negro. Las
especies de Shigella son mas o menos
inhibidas y dan colonias transparentes sin
centro negro. Las colonias de Proteus son
similares a las de Salmonella.
Agar EMB (eosina y azul de metileno):
Características: Es un medio
selectivo, utilizado para aislar bacilos
diferenciación de bacterias fermentadoras de
lactosa de las no fermentadoras. Este medio
permite diferenciar Salmonella y otros
organismos lactosa negativos de organismos
coliformes. Las colonias de Salmonella y
Shigella son traslúcidas, de color ámbar o
incoloras.
Los coliformes que utilizan lactosa y/o
sacarosa producen colonias de color azul o
negro con centros oscuros y brillo metálico.
Otros coliformes como Enterobacter
presentan colonias mucosas de color rosa.
Las cepas de Enterococcus faecales son
parcialmete inhibidas.

RESULTADOS.

1. Morfología macro y microscópica de bacterias aisladas de materia fecal.

Mac Conkey SS
CARACTERÍSTICA RESULTADO CARACTARÍSTICA RESULTADO
TAMAÑO TAMAÑO
FORMA FORMA
ELEVACIÓN ELEVACIÓN
MARGEN MARGEN
COLOR COLOR
SUPERFICIE SUPERFICIE
DENSIDAD DENSIDAD
CONSISTENCIA CONSISTENCIA
OLOR OLOR
PIGMENTACIÓN PIGMENTACIÓN

EMB
CARACTERÍSTICA RESULTADO
TAMAÑO
FORMA
ELEVACIÓN
MARGEN
COLOR
SUPERFICIE
DENSIDAD
CONSISTENCIA
OLOR
PIGMENTACIÓN

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Escriba el diagnóstico presuntivo de la muestra analizada.
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SIGNIFICADO CLINICO .
Los medios menos selectivos com o
Mac Conkey permiten apreciar la
composición de la microbiota normal aerobia
facultativa. En un sujeto sano debe
predominar E. coli, con pequeños porcentajes
de otras enterobacterias: Klebsiella,
Enterobacter y Proteus. En Mac Conkey
suelen detectarse también enterococos ( como
pequeñas colonias incoloras). Si se busca
Salmonella y no se detectó en el primer
cultivo, se sembrarán nuevas placas.
En el caso de Salmonella es necesaria
la confirmación serológica, y si se sospecha
de una gastroenteritis por E. coli debe
determinarse si se ha aislado una cepa
patógena, mediante serología u otras técnicas.
CUESTIONARIO.
1. Explique ¿por qué razón no podemos descartar
que un paciente sea portador de Salmonella si en
el primer cultivo obtuvimos un resultado
negativo para éste microorganismo?
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2. ¿Por qué es necesario refrigerar las muestras de
heces fecales si van ha ser tratadas
posteriormente?
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La presencia abundante de Candida
albicans, Staphilocuccus aureus y
Pseudomona aeruginosa en la materia fecal,
se considera patógena si al paciente se le ha
suministrado antibióticos previo. Estos
medicamentos alteran la flora habitual
cambiando el ambiente, de manera tal que los
microorganismos que normalmente eran
inocuos; se tornan patógenos.
La mayoría de las diarreas son
transitorias (1-30 días), se han reportado
casos de síntomas persistentes hasta de 10
meses, la etiología del agente detectado en
dichos casos ha sido la Shigella flexneri
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3. ¿Qué medios de cultivo se utilizarían si
desearamos aislar Yersinia enterocolítica?
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4. ¿Por qué es tan difícil el aislamiento de Yersinia
sp?
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5. ¿Por qué se debe tomar la muestra antes de la
administración de antibióticos?
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___________________________________________ EVIDENCIAS SI NO
___________________________________________ 1.- Formato completo
___________________________________________ 2.- Práctica realizada
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3.-Resultados de la
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___________________________________________ práctica completos
____________________________________ 4.-Material y equipo limpio
5.- Revisión bibliográfica

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES.
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INSTRUCCIONES: Marque con una paloma para

indicar que el alumno realizó la actividad y con
una X que no la realizó.

Participación individual
Nombre A B C D E

A) Al realizar la práctica toma en cuenta las

medidas de seguridad.

B) Demuestra habilidad y destreza al manejar el

material de laboratorio.

C) Al preguntarle sobre el tema, fundamenta

correctamente su respuesta.

D) Coopera con el resto del equipo para que

todos realicen su práctica.

E) Al término de la práctica elimina o conserva

adecuadamente su material y la muestra.

Evaluación del trabajo en equipo

EQUIPO SI NO
Planificamos el trabajo
Distribuimos bien las
actividades
El resultado fue el
esperado

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