UROCULTIVO

Urocultivo

 Esel análisis que se le realiza a la

orina para detectar con exactitud y
precisión cual es el agente
microbiano que esta causando una
infección en un organismo
 La orina

 Es
un liquido biológico considerado
estéril debido a su vaciado
constante y su pH ácido que inhibe
el desarrollo de algunos
microorganismos
INDICACIONES PARA TOMA DE MUESTRA

 La orina es tomada por el paciente en su domicilio

con previo aseo general, haciendo énfasis en los
órganos genitales externos.
 La orina se recolecta en un frasco estéril.

 No requiere ayuno

 No beber agua en exceso antes de la recolección

de la muestra (al menos 4 horas antes).

 No estar bajo tratamiento con antibióticos o tener
menos de 72 hrs. antes de recolección de muestra.
 No colocarse medicamentos tópicos (pomada

ungüentos o talco), en la región genital, 72 hrs

antes de la recolección de muestra.
 Muestras etiquetadas, nombre y apellido completo,

edad, sexo
INDICACIONES DE TOMA DE
MUESTRA
Paciente pediátrico se recomienda la toma de
muestra en el laboratorio, en los niños también se
asean los órganos genitales externos y regiones
vecinas, se aplica después el dispositivo de
Machuca o bolsas de plástico adhesivas.
Paciente femenino no estar en menstruación, esta
en este periodo deberá esperar días después del
termino del periodo para la recolección de la
muestra.
Paciente con sonda vesical se recomienda que el
medico tome la muestra.
El urocultivo debe hacerse, dentro de la hora
siguiente a la recolección de la orina, o bien si esto
no es posible, debe guardarse la orina en el
refrigerador a 4°C hasta que pueda cultivarse, sin
exceder de algunas horas.
 TOMA DE MUESTRA
 Una vez que se empieza a orinar, se
desecha la primera orina que
arrastrará los organismos
contaminantes.
 Se interrumpe el paso de la orina
para recoger el frasco estéril y
recolectar la porción media de la
muestra.
 Y por ultimo se desecha el resto de
la orina.
 INFECCIÓN DE VÍAS
URINARIAS
Pielonefritis
• Fiebre
• Dolor lumbar
Vías urinarias altas • Disuria (ardor al orinar).
• Riñones • Polaquiuria (ir mucho al
• Uréteres baño).
• Tenesmo (dificultada
para orinar).

Vías urinarias bajas

• Vejiga Cistitis
• Uretra • Disuria
• Dolor
MICROORGANISMOS OBSERVADOS
 Organismos que son uropatógenos reconocidos y
crecen bien en medios de rutina en 24 hrs: Estos
incluyen E.coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, y
Pseudomona aeruginosa. Estos patógenos constituyen la
causa del 80% de los bacilos gram negativos aislados.
Enterobacter y Citrobacter son también comúnmente
aislados. Enterococcus, Staphylococcus saprophyticus,
Staphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae son los
gram positivos más frecuentemente aislados.
 
 Organismos que son uropatógenos reconocidos y no
crecen en medios de rutina: Mycobacterium
tuberculosis, Chlamidia trachomatis, Neisseriae
gonorrhoeae se desarrollla.
 
 Organismos que pueden ser uropatógenos, pueden requerir
medios especiales y más de 24 hrs: Corynebacterium
urealyticum, Corynebacterium seminale éstos se desarrollan en
A.Sangre CNA.; Haemophylus influenzae, H. parainfluenzae, estos
de desarrollan en A. chocolate Gardenella vaginalis en altos
recuentos se ha asociado a UTI éste se desarrolla en Human Blood
Agar. Todos estos medios especiales deben incubarse por 48 hrs. En
CO2.
 
 Organismos que no son uropatógenos pero pueden aislarse
de uretra y orina: Gran variedad de gérmenes colonizan la
uretra y el área genitourinaria, estos incluyen anaerobios,
Actinomyces spp, Lactobacillus, Streptococcos alfa-hemolíticos,
Staphylococcos coag-negativa, y pequeños números de gram
negativos.
MÉTODOS
 Métodode conteo en placa o recuento de colonias (Método
de Kass):

 Se homogeniza la muestra mediante agitación.

 Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1ml de orina en 9.9ml

de caldo tripticasa o de suero fisiológico estéril.

 Se preparan diluciones de 1:1000 y 1:10 000 a partir de la dilución

1:100.
 Se deposita 1ml de cada dilución en placas petri estériles que

contienen agar Tripticasa o medio CLED, Mediante rotación suave

se favorece la distribución homogénea de la siembra.
 Se incuban todas las muestras a 37 0C de 24 a 48 horas.

 Para calcular el número de colonias se eligen las placas que

contengan de 30 a 300 colonias. Contadas estas basta multiplicar

su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total.
 Método del asa calibrada:
Esta estimación cuantitativa
consiste en sembrar una
placa con medio de agar
sangre en una muestra de
orina, sin centrifugar,
empleando un asa de platino
calibrada (4mm. De
diámetro). Después de
incubar las muestras a 370C
durante 24 a 48 horas, se
cuenta el número de colonias
desarrolladas y el resultado
se multiplica por 100, ya que
el asa de platino contiene
0.01ml de orina.
Leucocitos
Eritrocitos
Células Epiteliales
Bacterias
INOCULACIÓN

 Usar el asa calibrada,

flamear, dejar enfriar,
mantener en posición
vertical introducir
solo el aro debajo Método para introducir el
del nivel de la asa calibrada
orina previa mezcla
de la orina sin
centrifugar.
 Estriar en la placas de cultivo de la siguiente manera:
 Estriarde arriba hacia el centro de la placa y estriar la orina en una
serie de pasos de ángulo de 90º a través del inóculo

Sin flamear el asa estriar

atravesándola línea del inoculo
en el sentido de las flechas.
Incubación
Una vez sembradas las placas deben
incubarse durante 24 horas a 35 - 37°
C.
ETIOLOGIA DE LAS INFECCIONES
DE VIAS URINARIAS
1. Escherichia Coli (80% al 90% de los casos)
2. Proteus sp.
3. Klebsiella sp.
4. Pseudonoma auruginosa
5. Enterobacter sp.
6. Staphylococcus saprophyticus
ESTIMACIÓN CUANTITATIVA DE LAS
COLONIAS
 La siembra en las placas se realiza por estría cruzada
con asas calibradas de 4 mm de diametro y 0.01 ml de
capacidad.
Criterio Colonias por ml.
Contaminación <10 000
Sospecha de infección 10 000 - 100 000
Infección >100 000

 *Hay casos de pielonefritis en los que el número de

bacterias es menor de 100 000 en un mililitro de
orina. Esos casos se presentan cuando un volumen de
orina es muy grande y por lo tanto disminuye la
concentración de bacterias en la unidad de volumen.
 MÉTODOS CUALITATIVOS
 Seusan para identificar que
microorganismos es el causante
de la enfermedad, se usan medios
de cultivo tanto enriquecidos como
selectivos.
AGAR GELOSA SANGRE
 Dada la excelente base nutritiva, permite el
crecimiento de prácticamente todos los
microorganismos que pudieran estar presentes.
Si se añade sangre se pueden determinar las
distintas formas de hemólisis que pudieran tener
lugar.
AGAR GELOSA CHOCOLATE
 El Agar Gelosa Chocolate es un medio utilizado
con varios suplementos para el aislamiento y
cultivo de Neisseria gonorrhoeae y otros
microorganismos fastidiosos. La hemoglobina al
2% provee la hemina (Factor X) requerida para el
crecimiento de Haemophilus y mejorar el
desarrollo de Neisseria, así como suplementos
(disponibles comercialmente) que proveen
glutamina, cocarboxilasa, levadura, glutamina,
coenzimas, hemina, vitaminas, aminoácidos,
dextrosa y otros factores de crecimiento, todos
ellos necesarios para el mejor desarrollo de
Haemophilus y Neisseria.
 Haemophilus influenzae: Colonias pequeñas,
húmedas, perladas con característico olor
húmedo
 Neisseria gonorrhoeae: Colonias pequeñas
grisáceas o incoloras, mucoides
 Neisseria meningitidis :Colonias medianas a
grandes, de color azul grisáceo, mucoides.
 Streptococcus pneumoniae: Colonias pequeñas,
planas, pueden aparecer verdes por la
decoloración del medio.
MEDIO CLED
 El Azul de Bromotimol cambia de color por la
fermentación ácida de la Lactosa. La Cistina
favorece el crecimiento de las Enterobacteriáceas
y el bajo contenido en electrolitos reduce la
difusión de Proteus. Las peptonas, el extracto de
carne y la Lactosa constituyen los elementos
nutrientes del medio.

 E. coli en Agar CLED

AGAR MCCONKEY
 El Agar MacConkey contiene cristal violeta y
sales biliares como inhibidores de organismos
Gram positivos. Las colonias aisladas de
bacterias que fermentan la lactosa son rosadas y
pueden estar rodeadas de una zona de
precipitado de sales biliares el cual es debido a
una caída en el pH por la fermentación de la
Lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa
permanecen incoloras.
AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO
(EMB)
 El uso de la eosina y del azul de metileno permite la
diferenciación de las colonias fermentadoras de lactosa
de las no fermentadoras. La sacarosa está incluida en
el medio para detectar a los miembros del grupo
coliforme que fermentan más rápidamente la sacarosa
que la lactosa.
 Las colonias de Salmonella y Shigella son
translúcidas, de color ámbar o incoloras. Los coliformes
que utilizan la lactosa y/o sacarosa producen colonias
de color azul a negro con centros obscuros y brillo
metálico. Otros coliformes como Enterobacter
presentan colonias mucosas de color rosa. Las cepas de
Enterococcus faecalis son parcialmente inhibidas.
AGAR BIGGY
 El Extracto de Levadura, la Glicina y la Glucosa
constituyen los elementos nutritivos y energéticos
necesarios para el crecimiento de las variedades
de Candida. El Sulfito Bismuto, que inhibe el
crecimiento de la flora secundaria, es reducido a
sulfuro por la acción del germen, dando lugar a
colonias pardas, que en algunos casos
determinan que, alrededor de la colonia, el medio
también presente el mismo color.