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TEMA:
TOMA DE MUESTRAS, STAPHYLOCOCCUS Y STREPTOCOCCUS
1. OBJETIVOS
2. MARCO TEÓRICO
EXUDADO NASAL:
D. TRANSPORTE Y CONSERVACION.
Envío inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas).
EXUDADO FARINGEO
D. TRANSPORTE Y CONSERVACION.
Envío inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas).
Si no es posible, conservar en heladera a 4ºC hasta 12 horas.
D. OBSERVACIONES.
Se investigará rutinariamente la presencia de Streptococcus beta-hemolítico del
grupo A (S.
pyogenes) y otros grupos beta hemolíticos como C y G.
Género Staphylococcus
Son bacterias en forma de coco Gram positivas producen catalasa, son aerobios
facultativos. La temperatura ideal de crecimiento es de 37ºC,
Consumen lípidos, proteínas y fermenta una gran variedad de azucares, no es
formadora de esporas y crecen en niveles de salinidad 7.5-10%.
Morfología colonial.
En agar sangre, nutritivo chocolate, soya tripticasa, etc, se ven colonias pequeñas,
blanquecinas, de forma circular, bordes redondeados, superficie lisa y convexa.
Algunas cepas producen un pigmento carotenoide que les da un color dorado
(Staphylococcus aureus).
Staphylococcus aureus
Staphylococcus saprophyticus.
Casi nunca se asocia a enfermedades nosocomiales, muchas cepas son manitol
positivo, no producen beta-hemolisis en agar sangre, es causante de infecciones
urinarias,
carece de coagulasa y no produce ninguna
pigmentación.
Staphylococcus epidermidis.
.
Las infecciones por S. epidermidis son oportunistas, nosocomiales y generalmente
está asociado a los implantes de prótesis, catéteres e intervenciones quirúrgicas.
GÉNERO STREPTOCOCCUS
STREPTOCOCCUS PYOGENES.
STREPTOCOCCUS AGALACTIAE
Características generales
IDENTIFICACIÓN
STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
Se trata de una bacteria Gram. Positiva que presenta una forma oval y el
extremo distallanceolado. Es inmóvil, no forma endosporas, y es un miembro
alfa hemolítico del género Streptococcus. Generalmente, se presenta en forma
de diplococo, aunque existen algunos factores que pueden inducir la formación
de cadenas. Neumococo es un patógeno casi exclusivamente humano
causante de un gran número de infecciones como neumonía, endocarditis y de
procesos invasivos severos como meningitis, septicemia, etc. particularmente
en ancianos, niños y personas inmunodeprimidas. El hábitat natural de
neumococo es la faringe
Actividad Hemolítica
PRUEBA DE CAMP
STREPTOCOCCUS
STAPHYLOCOCCUS Microscopio
Bacitracina 0.04 Estufa a 35oC
Pinza Bilis esculina
Asas bacteriológicas Cloruro de sodio al 6.5%
Regla milimetrada Disco de optoquinina
Microscopio Regla milimetrada
Estufa a 35oC Asas bacteriológicas Cajas
Cajas con agar (sangre, con agar (sangre)
chocolate, Muller-Hinton) Discos de bacitracina 0.04u
Caldo de Tripticase soya Peróxido de hidrogeno
Cepa de Staphylococcus
aureus
4. PROCEDIMIENTO
Exudado nasal
Tomar muestra profunda de ambas fosas nasales con el mismo hisopo,
previamente embebido en suero fisiológico estéril.
Exudado faríngeo
Bajo visión directa, con la ayuda del bajalengua, se tocará con el hisopo en
todas las partes con
exudado, membranas o inflamación. Se deben frotar las criptas tonsilares y la
faringe posterior. En
lo posible no tocar la mucosa oral, lengua, úvula ni dientes.
STAPHYLOCOCCUS
Tinción de Gram
Con medios de cultivos ya crecidos realizamos la práctica
correspondiente a Sthaphylococcus
Cogemos un asa de siembra, la esterilizamos en el mechero de Bunsen
y con dicha asa cogemos una colonia del agar sangre.
Con la ayuda de la asa realizamos un extendido sobre un portaobjetos
de la colonia que cogimos.
Realizamos la tinción de Gram y esperamos que se seque la placa.
Observamos la placa en el microscopio con la lente de 100x con la
ayuda del aceite de inmersión.
Observamos y anotamos la micromorfología de la colonia.
Prueba de la catalasa
Colocamos en un portaobjetos limpio una gota de Peróxido de
Hidrógeno
Cogemos un asa de siembra, la esterilizamos en el mechero de Bunsen
y con dicha asa cogemos una colonia del agar sangre.
Mezclamos la colonia con la gota de Peróxido de Hidrógeno que se
encuentra en la placa y observamos que sucede.
Prueba de la coagulasa
Realizar la prueba de la coagulasa la ligada y la libre
En la C. Ligada:
Colocamos en un portaobjetos limpio dos gotas de solución salina (una
como prueba y la otra como control).
Cogemos un asa de siembra, la esterilizamos en el mechero de Bunsen
y con dicha asa cogemos una colonia del agar sangre.
Mezclamos la colonia con la gota de solución salina de prueba que se
encuentra en la placa y colocamos una gota de plasma citratado.
Agitamos 10 segundos y observamos que sucede.
En la C. Libre
Colocamos plasma citratado en un tubo de ensayo pequeño.
Cogemos un asa de siembra, la esterilizamos en el mechero de Bunsen
y con dicha asa cogemos una colonia del agar sangre.
Mezclamos la colonia con el plasma citratado.
Agitamos y el resultado se leerá en una hora.
Prueba de sensibilidad
Cogemos con el asa de siembra una colonia de Staphylococcus.
Introducimos en un tubo con solución salina y homogenizar esta
dilución, debe estar 0,5 en la escala de Macfarland
Procedemos a hisopar en el agar Muller-Hinton, el mismo que debe ser
bipetri ya que en el otro lado hisoparemos la dilución del Micrococcus.
Colocamos el disco de Bacitracina (0.04 u) y la Novobiocina(30 mct) en
el Micrococcus, también colocamos la Novobiocina(30 mct) en el
Sthaphylococcus.
Prueba de Manitol
Cogemos con el asa estéril una colonia
Realizamos la picada en el tubo con manitol y la estriación.
STREPTOCOCCUS
Prueba de CAMP
Con un asa estéril cogemos una colonia se Staphylococcus aureus beta-
hemolítico y de manera vertical en la primera división inoculamos.
Esterilizamos el asa y cogemos una colonia de Streptococcus beta-
hemolítico del grupo A e inoculamos de manera horizontal al otrolado de
la línea verical.
Esterilizamos el asa y cogemos una colonia de Streptococcus beta-
hemolítico del grupo B e inoculamos de manera horizontal a un lado de
la línea verical.
5. RESULTADOS
STAPHYLOCOCCUS
Prueba de Catalasa
Resultado: debido a la aparición de burbujas el resultado es positivo, ya que el
peróxido de hidrógeno (H2O2) se convierte en agua y oxígeno.
Prueba de Manitol
Resultado: la prueba es positiva debido al cambio de color de rojo a amarillo.
STREPTOCOCCUS
Resultado de la sensibilidad
Sensible a la Bacictracina (Halo >18). Resitente a la Optoquinina
6. CONCLUSIONES
7. RECOMENDACIONES
8. BIBLIOGRAFÍA