Métodos y Técnicas de Estudio Microbiológico I r.a.c.j.

GUÍA PRACTICA N° 11
COPROCULTIVOS
INTRODUCCIÓN

Si nos ponemos a recordar en realidad existe una amplia gama de agentes infecciosos que
causan diarrea por diversos mecanismos y que pueden ser ubicados en diversos grupos de
microorganismos, ya sean: virus, bacterias y protozoos, fundamentalmente.
Se denomina coprocultivo a la siembra de una muestra adecuada de heces en medios de cultivo
apropiados para el desarrollo de bacterias entéricas patógenas. Debemos entender que una
muestra adecuada es aquella que ha sido recolectada durante el periodo agudo de la enfermedad,
cuando es más fácil comprobar presencia de pus, moco o sangre, y antes de la administración
de antimicrobianos.
El coprocultivo es un método de diagnóstico microbiológico que permite identificar diferentes
organismos causantes de enfermedades gastrointestinales como casos de diarrea severa,
persistente o recurrente sin causas conocidas, y en caso de diarreas asociadas al consumo de
antibióticos. Al igual que otras pruebas también se aplican las técnicas de estudio de
sensibilidad a los antibióticos. Antibiograma.
Ante una solicitud de “coprocultivo” los laboratorios utilizan medios para el aislamiento de
Salmonella y Shigella porque éstos son los agentes más frecuentes de diarrea, pero la realidad
es otra; el Campylobacter, es un patógeno tan o más frecuente que los anteriores, pero el
problema es que el método de cultivo para Campylobacter es enteramente diferente. Algunos
laboratorios lo incluyen como parte del coprocultivo rutinario, otros lo hacen por solicitud
expresa del médico y la mayoría no tiene la capacidad instalada para hacer estos cultivos.

OBJETIVOS

1. Utilizar métodos de coprocultivo en una muestra de heces con fines diagnósticos y/o
terapéuticos.
2. Manejar correctamente los protocolos para coprocultivo y aplicar las técnicas de estudio de
sensibilidad a los antibióticos. Antibiograma para estos casos.

FUNDAMENTO

El Coprocultivo, se usa de preferencia en la búsqueda de patógenos intestinales productores de

enterocolitis aguda. La muestra se obtiene directamente de la deposición recientemente emitida
o bien de un hisopado rectal. La selección de los medios de cultivo, así como el procedimiento
de aislamiento a seguir, dependen del agente etiológico que se esté investigando. Si no se
explicita otra situación, rutinariamente, la búsqueda se concentra en los patógenos habituales
como Salmonella y Shigella. En los casos especiales, debe indicarse si se sospecha de
Escherichia Coli enteropatógena, enteroinvasora, enterotoxigénica, enterohemorrágica, o
entero agregante; Campylobacter, SPP., Vibriocholera, Yersinia enterocolitica, etc.
El grupo de las bacterias tienen dos mecanismos principales de patogenicidad, la producción de
entero toxinas y la invasión de la mucosa intestinal. En el primer caso, el mecanismo es

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eminentemente bioquímico, la diarrea es generalmente acuosa y por lo general no se observan

leucocitos en las heces. En las diarreas invasivas, participan mecanismos toxigénicos distintos
que ocasionan daño estructural de las células intestinales, es frecuente encontrar leucocitos en
las heces, a veces acompañados de eritrocitos si el daño ha ocasionado erosión de la mucosa
intestinal. Algunos de los agentes ofensores pueden actuar por ambos mecanismos.

MATERIALES

El material básico para la toma de muestras y coprocultivo es el siguiente: Guantes no estériles,

Recipientes estériles con cierres de rosca, Cucharilla estéril, Depresores estériles, Hisopo, Papel
adhesivo transparente, caldo de tetrationato, agar entérico Hektoen, caldo nutritivo; Cestos o
Tachos, Otros.

Cary-Blair

MUESTRAS

 Informar al paciente de la técnica.

 Informar a la familia si requiere preparación previa (dieta, etc.).
 Indicar al paciente que realice la higiene genital y la recogida de muestra en el baño.
 Recomendaciones para que los pacientes colaboren:
- Se les pondrá un pañal limpio (lactantes), que se irá cambiando cada hora para evitar la
contaminación de la muestra por orina (persona adulta).
- Una vez realizada la deposición, póngase los guantes. Evitar la contaminación y los
malos olores.
- Si las deposiciones son líquidas o irritantes, inspeccionar la zona anal en busca de
microlesiones o irritaciones.
- Utilice dos depresores linguales para recoger la deposición y transferirla al recipiente.
(una muestra como una castaña).
- Tape el frasco.
- Identificar el recipiente con la etiqueta del paciente y el tipo de muestra.
- Remita la muestra al laboratorio de inmediato, o manténgala a temperatura ambiente
hasta su envío, si este se demora más de 30 minutos, se recurre a utilizar conservantes
(10ml de alcohol polivinílico PVA) y se mantiene en el frigorífico hasta su envío.

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HORA DE LA RECOGIDA DE MUESTRAS

 Si son formadas o pastosas se toma una porción del recipiente donde hayan sido emitidas y
se transfieren al sistema elegido para el envío al laboratorio. Se seleccionan zonas donde
haya sangre, moco o pus. No son válidas las muestras contaminadas con orina. No debe
utilizarse para la recogida papel higiénico, porque suelen tener sales de bario que inhiben
algunas bacterias enteropatógenas.
 Heces formadas o pastosas: al menos 1 ó 2 gr. para virología, añadir de 2 a 4 gr. más.
Muestras del tamaño de una nuez son muy adecuadas pues permiten realizar la mayoría de
las investigaciones posibles. Heces líquidas: entre 5 y 10 ml.
 Muestras inadecuadas.
 Muestras de restos fecales.
 Heces emitidas anteriores a dos horas y que no hayan sido refrigeradas.
MUESTRA DE HECES PARA COPROCULTIVO
El material fecal que se va examinar bacteriológicamente deberán ser evacuados por el paciente
en un envase esterilizado y procesarlas inmediatamente porque los microorganismos patógenos
se destruyen prontamente, o también se puede obtener de la ampolla rectal, usando hisopos
estériles, el hisopo se introduce hasta una profundidad de 3 cm. imprimiendo movimientos de
rotación. Tratando de obtener el material mucoso que se encuentra en la ampolla rectal e
introducirla en el caldo nutritivo o medio Cary y Blair, hasta su procesamiento, este medio
permite la conservación de Salmonella y Shigella hasta por 49 días y la Yersinia hasta por 75
días (según sus autores).
PRECAUCIONES
 Empaquete las muestras cuidadosamente para impedir que se rompa y se derrame.
 No permita que una muestra o un medio líquido, en un envase con tapón de algodón se moje.
 Las muestras deben ser suficientemente para todas las pruebas requeridas.

TÉCNICA
HECES FECALES. Coprocultivo. Aislamiento de enterobacterias.
AISLAMIENTO.
1. Sembrar una asada de materia fecal sospechosa en el tubo de caldo de tetrationato. Inocular
con asa por emulsión.
2. De la misma manera sembrar otra asada de la misma muestra en el tubo de caldo nutritivo.
3. Etiquetar con los datos respectivos
4. Llevar a la incubadora a 37ºC durante 24 horas. Colocar los tubos en gradilla, de tal manera
que se mantengan en posición vertical para evitar que el líquido se derrame.
5. A las 24 horas retirar los tubos de la incubadora.
6. Disponer sobre la mesa el medio selectivo (agar entérico Hektoen) para resembrar el
cultivo del caldo de tetrationato.
7. Resembrar en cada placa el inóculo correspondiente

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8. Tapar las placas. Etiquetar con los datos correspondientes

9. Llevar las placas a la incubadora. Colocarlas en posición invertida. Mantenerlas durante 24
horas.
10. Al día siguiente: Retirar las placas de la incubadora.
11. Efectuar análisis macroscópico de cada una para valoración de la prueba presuntiva.
12. Efectuar análisis microscópico por el método de Gram de cada una de las placas para
confirmación de la morfología de los bacilos entéricos gramnegativos

RESULTADOS / INTERPRETACION

COPROCULTIVO: Selección de colonias, Tipificación de colonias, Antibiograma

Campylobacter sp

Lectura
Escherichia coli

INTERPRETACIÓN DIAGNOSTICA DEL LABORATORIO CLÍNICO

Por medio del coprocultivo se puede establecer la etiología de los síndromes intestinales
caracterizados por diarrea u otras manifestaciones. Se pueden aislar parásitos como E.
histolytica, balantidio, estrongiloides y tricomonas enterobacteriáceas como shigelas,

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salmonelas, coli enteropatogeno y gérmenes de intoxicación alimenticia como estafilococo y

clostridio boltulino en el botulismo.
El más común e importante es el que identifica y aísla el colienteropatogeno. Escherichia coli
habita en el intestino del hombre normalmente, y sirve para la síntesis de algunas vitaminas,
ayuda al desdoblamiento de los carbohidratos e impide la implantación de otras bacterias. En
lactantes menores de un año (pero pudiéndose encontrar ocasionalmente hasta los tres años)
algunas cepas de E. coli se vuelven patógenas, llegando hasta el extremo de ocasionar la muerte
del niño a las pocas horas de iniciada la fiebre, sin síntomas diarreicos.
Generalmente después de uno a cinco días de incubación hay sintomatología ruidosa de diarrea,
fiebre y postración. En nuestro medio la cepa más frecuente es la 0 111 B4, siguiendo la 0 119
B14 y la 0 55 B5, la más virulenta y patógena. El coprocultivo permite aislarla, clasificarla, y
verificar el antibiograma correspondiente.

INFORME FINAL
Reporte Final del Cultivo es enviado al médico o al servicio de dónde provino la muestra.

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