PRCTICA # 5

TCNICAS BSICAS PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS: SIEMBRA Y

ESTUDIO DE BACTERIAS
INTRODUCCIN
Para efectuar el estudio de los microorganismos, se an dise!ado di"ersos m#todos $ue %ermiten culti"arlos &a'o
condicione artificiales, en los $ue es %osi&le culti"arlos &a'o condiciones e(%erimentales ) mane'ar un solo ti%o de
microorganismo* Una de las t#cnicas m+s usadas en el la&oratorio de micro&iolog,a consiste en transferir una
muestra micro&iol-gica de un am&iente determinado a un medio de culti"o, lo $ue %ermite o&tener culti"os
micro&ianos* A l efectuar este %rocedimiento, es necesario considerar $ue en el +rea de tra&a'o, e(isten mucos
otros microorganismos. de&ido a esto, es necesario tomar %recauciones %ara im%edir $ue #stos %enetren )
contaminen los culti"os en estudio* Por otra %arte, %ara considerar no s-lo el as%ecto nutricional, sino tam&i#n las
condiciones am&ientales de su +&itat natural, %or lo $ue en el medio de culti"o se de&e a'ustar el %/ )
concentraci-n de sales ) durante la incu&aci-n condiciones tales como la tem%eratura, aireaci-n la luminosidad*
0a a%licaci-n de estos %rocedimientos a %ermitido %ro%agar a los microorganismos en culti"os mi(tos, as, como
su aislamiento ) la o&tenci-n de culti"os %uros, facilitando de este modo, el estudio, caracteri1aci-n, a%licaci-n )
control de los mismos* 0a forma de sem&rarlos ) culti"arlos de%ende del ti%o de microorganismo ) %ro%-sito
es%ec,fico del estudio*
O234TI5O67
A%licar la t#cnica adecuada %ara %re%arar el +rea de tra&a'o ) e"itar contaminaciones*
Organi1ar el material %ara su f+cil mane'o e identificaci-n*
8ani%ular adecuadamente los culti"os %uros*
6eleccionar ) a%licar las t#cnicas de siem&ra adecuadas %ara alcan1ar %ro%-sitos es%ec,ficos*
Identificar ) descri&ir correctamente las caracter,sticas culturales ) microsc-%icas de algunas &acterias*
Organi1ar e inter%retar los resultados del estudio macrosc-%ico ) microsc-%ico de &acterias*
8ARCO T4RICO7
Culti"ar un microorganismo significa %romo"er intencionalmente el desarrollo de #ste en medios de culti"o )
condiciones de la&oratorio controladas* 0a %o&laci-n de microorganismos desarrollada en un medio se denomina
culti"o* Cuando #ste contiene una sola es%ecie de microorganismo, se denomina cultivo u!o o "#$%ico, cuando
contiene m+s de una es%ecie de microorganismos se denomina cultivo &i#to* Un culti"o ti%o contiene una es%ecie
conocida de microorganismos ) es conser"ada en el la&oratorio %ara reali1ar di"ersos ensa)os ) estudios*
Un culti"o a(#nico consiste en una sola es%ecie micro&iana, %ro"eniente de una sola c#lula* 0os culti"os a(#nicos
son mu) raros en la naturale1a* 4n los medios naturales 9%or e'em%lo, en el suelo, agua, o en el cuer%o umano9
e(isten culti"os mi(tos* 4n un culti"o mi(to, "i"en mucas ) diferentes es%ecies de forma con'unta* Un culti"o
a(#nico se o&tiene artificialmente en el la&oratorio* A la ora de o&tener un culti"o a(#nico se an de tomar
%recauciones es%eciales, )a $ue los microorganismos est+n %or todas %artes, en la naturale1a, en el la&oratorio )
en los instrumentos ) reci%ientes usados en los e(%erimentos* 4stos microorganismos no deseados o
contaminantes de&en ser eliminados de un culti"o %ara $ue #ste %ueda ser a(#nico* 4l segundo %aso %ara
o&tener un culti"o a(#nico es inocular o introducir, una sola c#lula de un microorganismo en un medio s-lido o
li$uido, esterili1ado %re"iamente* De esta manera, aislamos un solo microorganismo del resto ) se %odr+
multi%licar en condiciones fa"ora&les* Un clo% est+ constituido %or una %o&laci-n de c#lulas descendientes de un
solo microorganismo* Una colonia es un clon lo suficientemente grande como %ara ser "isi&le so&re la su%erficie
de un medio s-lido*
Un culti"o micro&iano $ue a estado creciendo %or cierto tiem%o en el mismo tu&o o matra1, de&e ser transferido
a un medio de culti"o nue"o, de otra manera el crecimiento ) so&re"i"encia no %ueden continuar* 4n esta
transferencia se de&en considerar dos as%ectos &+sicos referentes a7 no introducir microorganismos indesea&les
:contaminantes; ) concentraci-n o carga micro&iana de la muestra :in-culo; a sem&rar*
Para im%edir la contaminaci-n de los culti"os, es necesario tener %lena conciencia de la u&icuidad de los
microorganismos, lo $ue determina $ue el a,re ) todas las su%erficies est#n densamente %o&ladas %or
microorganismos, de este modo en la transferencia de una muestra micro&iol-gica a otro reci%iente, se de&en
tener una serie de cuidados $ue eliminen los riesgos de contaminaci-n* 4stos inclu)en el +rea de tra&a'o, el
la"ado de las manos, la esterili1aci-n de todos los utensilios ) medios de culti"o a em%lear ) reali1ar la
transferencia del microorganismo en una 1ona est#ril, la $ue se o&tiene tra&a'ando cerca de la flama del mecero*
Al con'unto de %rocedimientos reali1ados %ara %re"enir o e"itar la contaminaci-n se le llama t#cnica as#%tica. el
seguimiento cuidadoso ) detallado de la misma e"ita accidentes tales como7
o 0a contaminaci-n ) %#rdida del culti"o en estudio
o 0a salida ) dis%ersi-n de microorganismos del culti"o, lo $ue ocasionar,a la contaminaci-n de utensilios,
%roductos ) del %ersonal* 4ste <ltimo as%ecto es %articularmente im%ortante cuando se tra&a'a con
culti"os de microorganismos %at-genos*
Con relaci-n a la concentraci-n del in-culo, un error frecuente del %rinci%iante consiste en tomar muestras
grandes, lo $ue es innecesario* Una colonia de &acterias del tama!o de la ca&e1a de un alfiler contiene "arios
millones de microorganismos, es o&"io $ue con una cantidad %e$ue!,sima :casi in"isi&le; $ue se adiera al asa,
ser+ m+s $ue suficiente %ara efectuar una transferencia e(itosa*
Di'o'itivo' (&l(")o' (% l" t!"%'*(!(%ci" )( &u('t!"' &ic!o+i"%"': iso%o, %i%eta :%ara uso micro&iol-gico son
terminales ) la %arte su%erior o &o$uilla de&e estar %rotegida con filtro de algod-n;, %i%eta %asteur, ca&le de =olle
o %ortasa con alam&re de %latino dis%uesto en forma de7 agu'a, asa, es%+tula )>o ganco*
4n la transferencia de microorganismos se em%lean agu'as, asas de inoculaci-n, iso%os, %i%etas o %i%etas
%asteur $ue de&er+n esterili1arse %re"iamente* 0a utili1aci-n de estos dis%ositi"os, as, como de los diferentes
medios de culti"o tienen a%licaciones es%ec,ficas* Por e'em%lo7 los medios l,$uidos se %re%aran en tu&os o
matraces $ue se cu&ren con ta%ones de algod-n o ta%ones es%eciales* Un culti"o l,$uido %uede ser transferido
mediante un asa micro&iol-gica, un iso%o, %i%eta o %i%eta %asteur. el in-culo se de%osita dentro del caldo o
medio l,$uido* 4n este ti%o de culti"os los microorganismos %resentan un desarrollo %articular $ue se manifiesta
en la su%erficie o a tra"#s de todo el l,$uido* Una de las "enta'as $ue %resenta este ti%o de culti"o se refiere a la
%osi&ilidad de agitarlos acelerando la "elocidad de microorganismos anaero&ios, %or otra %arte, en este ti%o de
culti"os, las %o&laciones se encuentran sus%endidas ) e f+cil omogeni1arlas, lo $ue %ermite estandari1ar la
concentraci-n del in-culo* 0a des"enta'a $ue %resentan, e $ue en ellos e dif,cil detectar contaminaci-n a sim%le
"ista*
0os medios semis-lidos e %re%aran en tu&os, se inoculan con agu'a de siem&ra :asa recta; o %i%eta %asteur. en
este <ltimo caso es necesario calentar el medio ) cuando se encuentra en estado l,$uido ) a una tem%eratura de
a%ro(imadamente ?@AC se agrega el in-culo, se omogeni1a ) se de'a solidificar* 4stos medios se em%lean %ara
estudiar la mo"ilidad de los microorganismos ) %ara fa"orecer la se%araci-n de microorganismos con diferentes
re$uerimientos de o(,geno*
0os medios s-lidos e %re%aran en tu&os o matraces de%endiendo de la cantidad o de las necesidades, des%u#s
de esterili1arlos, estos se inclinan o "ierten en ca'as de %etri* 0a siem&ra se reali1a con el asa, inoculando la
su%erficie del agar con muca sua"idad. en estos medios, los microorganismos al multi%licarse forman agregados
$ue se acen "isi&les a sim%le "ista. a estos agregados se les denominan colonias, las $ue %resentan
caracter,sticas $ue "ar,an con el ti%o de microorganismo culti"ado ) el medio de culti"o em%leado*
4n cual$uier medio de culti"o es de %rimordial im%ortancia a'ustar el %/, )a $ue a<n cuando la ma)or,a de los
microorganismos crecen me'or en %/ neutro, algunos re$uieren de %/ alcalino o +cido, %or lo $ue al %ro%orcionar
un %/ adecuado se fa"orecer+ el crecimiento del microorganismo de inter#s ) la o&tenci-n del culti"o* Con este
mismo %ro%-sito durante la incu&aci-n se de&en %ro%orcionar las condiciones adecuadas %ara el microorganismo
en estudio* 4l crecimiento -%timo de los microorganismos se %resenta a tem%eraturas $ue la ma)or,a de las
"eces est+n relacionadas con la de su +&itat natural*
Algunos microorganismos crecen %or de&a'o de B5AC, otros re$uieren tem%eraturas m+s ele"adas :CD a ?5AC; )
algunos asta EDAC* Para alcan1ar ) mantener estas tem%eraturas se %uede usar una incu&adora micro&iol-gica
o un &a!o de agua a tem%eratura constante, en tanto $ue %ara lo microorganismos $ue %resentan su crecimiento
-%timo a tem%eraturas entre @D ) @5AC se %ueden incu&ar en la ga"eta o ca'-n del la&oratorio, a tem%eratura
am&iente*
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4n general las incu&adoras micro&iol-gicas satisfacen las necesidades en cuanto a los rangos de tem%eratura
re$ueridas %or los microorganismos* 0a des"enta'a $ue tienen es $ue estos a%aratos funcionan con a,re seco, lo
$ue determina la desidrataci-n de los medios de culti"o* Por lo tanto, el crecimiento de cual$uier culti"o
e(%erimental $ue se realice en incu&adora no de&e %rolongare %or m+s de nue"e d,as* Con relaci-n a las
necesidades gaseosas, no todos los microorganismo crecen en %resencia de o(,geno atmosf#rico. los $ue s-lo
crecen en %resencia de a,re se llaman aero&ios o&ligados. los $ue s-lo crecen en ausencia de o(,geno se
denominan anaero&ios o&ligados o estrictos, un tercer gru%o se ada%ta a las dos condiciones ) se le conoce
como facultati"os* 4(iste una cuarta categor,a $ue com%rende &acterias $ue re$uieren o(,geno, %ero s-lo lo
utili1an cuando #ste e(iste en concentraciones reducidas. a estos se les llama microaerof,licos* 4l desarrollo de
estos diferentes gru%os e fa"orece mediante la agitaci-n de los culti"os o mediante la e(clusi-n de o(,geno %ara
lo $ue se em%lean sustancias reductoras o e$ui%os es%eciales*
0as &acterias son organismos %rocari-ticos, se encuentran am%liamente distri&uidas en la naturale1a, a&itan en
el agua, el suelo, en la su%erficie o en el interior de %lantas ) animales inclu)endo al om&re* Pueden "i"ir en
forma li&re o en sim&iosis con otros organismos, )a sea como %ar+sitos, comensales o mutualistas*
Fisiol-gicamente este gru%o %resenta caracter,sticas mu) "aria&les, a) &acterias m-"iles e inm-"iles
fotosint#ticas ) $uimiotr-ficas, aut-trofas ) eter-trofas. se desarrollan en un rango mu) am%lio de tem%eratura,
%/ ) condiciones gaseosas*
4n el estudio de culti"os &acterianos algunos de los criterios $ue se em%lean %ara caracteri1arlas inclu)en7
tama!o, morfolog,a celular, forma de agru%aci-n, reacci-n a la tinci-n de Gram, formaci-n de es%oras, mo"ilidad,
%resencia de inclusiones de reser"a ) caracter,sticas culturales en medios l,$uidos ) s-lidos en los $ue %resentan
%atrones de desarrollo en cuanto a la forma, tama!o, ele"aci-n ) color de las colonias*
T$c%ic"' )( 'i(&+!":
El &$to)o )( 'i(&+!" o! ('t!," (% l"c"
4s el m#todo m+s f+cil ) el m+s usado %ara o&tener culti"os a(#nicos* Para ello, con un asa de siem&ra se toma
una muestra de la %o&laci-n mi(ta ) a continuaci-n se acen estr,as so&re la su%erficie de un medio s-lido
%re%arado en una %laca Petri :a las %lacas Petri tam&i#n se les denomina sim%lemente %lacas;* Conforme se "an
aciendo estr,as en 1ig1ag con el asa, cada "e1 se "an de%ositando en la su%erficie del medio menos
microorganismos* A continuaci-n, se flamea el asa, se toca en la regi-n donde se an reali1ado las <ltimas
estr,as ) se contin<a la siem&ra con la misma t#cnica, en la su%erficie de medio sin sem&rar a<n* Re%itiendo este
%roceso "arias "eces se logra se%arar c#lulas indi"iduales* A continuaci-n, las %lacas se incu&an en un lugar
adecuado, %ermitiendo $ue las c#lulas aisladas e(%erimenten un n<mero suficiente de di"isiones %ara formar
colonias "isi&les* Aun$ue cada colonia %osi&lemente re%resenta un clon deri"ado de una sola c#lula, no %odemos
asegurarlo* Hui1+s, dos c#lulas $uedaron de%ositadas tan 'untas $ue an originado una <nica colonia mi(ta* Por
tanto, %ara asegurarnos de $ue emos o&tenido un culti"o a(#nico, con"iene re%etir el %rocedimiento a %artir de
una colonia &ien aislada en la %rimera %laca* 0as colonias $ue se desarrollen la segunda "e1, ser+n, casi con toda
seguridad, culti"os a(#nicos*
Lo' &$to)o' )( v(!ti)o (% l"c" - (#t(%'i.% (% l"c"
4n estos m#todos, las sus%ensiones de c#lulas micro&ianas se dilu)en "%t(' de su siem&ra en %laca* 6e siguen
estas t#cnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos, $ue la diluci-n no se %uede reali1ar en una
sola eta%a* Por e'em%lo, una sus%ensi-n con mil millones de c#lulas %or mililitro de&e ser diluida BD
I
"eces %ara
o&tener una sus%ensi-n con un centenar de c#lulas %or mililitro, Por tanto, se reali1an diluciones seriadas :en
"arias eta%as;, normalmente de die1 en die1, %ero a "eces de cien en cien* Para reali1ar diluciones de die1 en
die1, se a!ade B ml de la sus%ensi-n &acteriana a J ml :le medio est#ril o soluci-n salina, igualmente est#ril* 6e
agita "igorosamente %ara diluir las c#lulas ) el %roceso se re%ite cuantas "eces sea necesario* A continuaci-n, se
%uede %roceder de dos maneras diferentes*
4n el m#todo de "ertido en %laca, las muestras diluidas se me1clan con agar fundido ) se "ierten en %laca*
Algunas colonias $uedar+n em&e&idas en el agar ) otras crecer+n en la su%erficie* 0as colonias su%erficiales se
e(tender+n ) ser+n m+s grandes* 4n el segundo m#todo :e(tensi-n en %laca;, las muestras diluidas se siem&ran
directamente en la su%erficie de la %laca de agar, e(tendi#ndolas con a"uda de un asa de DiralsK) de cristal
est#ril* 0a sus%ensi-n se a&sor&e en el agar, de'ando las c#lulas micro&ianas so&re la su%erficie* 4n am&as
t#cnicas las %lacas se incu&an asta la a%arici-n de las colonias* Como en el m#todo de siem&ra %or estr,a, no
e(iste la seguridad de $ue las colonias $ue a%arecen en las %lacas sem&radas %or e(tensi-n o en el agar
solidificado sem&rado %or el m#todo del "ertido en %lacas sean culti"os a(#nicos asta $ue se re%ita el %roceso*
0as dos t#cnicas de siem&ra %or diluci-n %resentan la "enta'a de $ue %ermiten o&tener un ma)or n<mero de
colonias aisladas $ue el m#todo de siem&ra %or estr,a, %or tanto se eligen cuando se a de seleccionar una ce%a
a %artir de una me1cla con "arios ti%os de microorganismos*
3
Para o&tener un culti"o a(#nico mediante este m#todo7
:a; /acer diluciones seriadas de la sus%ensi-n &acteriana asta o&tener una muestra con s-lo unos %ocos
cientos de &acterias
:&; "erter la muestra en un tu&o con agar a so&refusi-n, me1clar ) "erter el contenido en una %laca Petri*
:c; Des%u#s de la incu&aci-n, se desarrollan colonias en el agar :m+s %e$ue!as; ) en su su%erficie :m+s
grandes;*
8#todo de aislamiento %or siem&ra %or estr,a en %laca7 Para o&tener un culti"o a(#nico7
:a; esterili1ar un asa de siem&ra %or flameado en la llama de un mecero
:&; introducirla en la sus%ensi-n &acteriana %ara recoger una muestra
:c; sem&rar aciendo estr,as so&re la su%erficie de un medio s-lido en una %laca Petri, )
:d; "ol"er a esterili1ar el asa, tocar en la 1ona de la %laca )a sem&rada ) acer un segundo gru%o de estr,as en
una regi-n nue"a de la %laca* Re%etir el %roceso una tercera ) una cuarta "e1, asta conseguir $ue los gru%os de
c#lulas se dilu)an ) se se%aren c#lulas aisladas*
:e; Des%u#s de la incu&aci-n, se desarrollan colonias aisladas* Para estar seguro de $ue el culti"o es %uro,
re%etir el %roceso entero. %ara ello tomar una colonia aislada ) sem&rar %or estr,as una segunda %laca*
El c!(ci&i(%to )( lo' cultivo' "#$%ico'
Una "e1 $ue se o&tiene un culti"o %uro, normalmente se a de %ro%agar :se le ace crecer de nue"o;* Para
culti"ar microorganismos en el la&oratorio, se a de %re%arar un medio de culti"o, l,$uido o s-lido, con todos los
nutrientes necesarios %ara su crecimiento* 0os medios s-lidos se acen generalmente, a!adiendo agar a los
l,$uidos*
Tio' )( &()io' )( cultivo
4l ti%o de medio $ue utili1a un micro&i-logo de%ende del microorganismo $ue est+ culti"ando ) el %or$u# de dico
culti"o* 0os microorganismos %resentan una enorme "ariedad de re$uerimientos nutricionales* 6e utili1a un medio
m,nimo %ara determinar los re$uerimientos nutricionales de un organismo ) un medio rico si se desea o&tener
masa celular de una forma r+%ida* 0os medios se %ueden formular %ara el desarrollo de una es%ecie o %ara
distinguir entre es%ecies o ce%as* Por tanto, los medios se clasifican en definidos, com%le'os o indefinidos,
selecti"os, diferenciales, selecti"os9diferenciales ) de enri$uecimiento, de%endiendo de su com%osici-n ) uso*
M()io' )(*i%i)o'
4
Un medio definido es a$uel del cual conocemos su com%osici-n $u,mica e(acta, %or$ue a sido %re%arado a
%artir de com%uestos $u,micos %uros* Ec/(!ic/i" coli es ca%a1 de crecer en un medio $u,micamente definido, de
com%osici-n &astante sencilla* 4ste microorganismo re$uiere una fuente de car&ono org+nica :%or e'em%lo,
glucosa;, %ero %uede o&tener el resto de los nutrientes esenciales a %artir de sales minerales* 4n cam&io, otros
organismos, denominados (#i0(%t(', re$uieren medios $u,micamente mu) com%le'os* Por e'em%lo, la &acteria
L(uco%o'toc cit!ovo!u& es e(traordinariamente e(igente )a $ue re$uiere un medio con mucos ingredientes* 0os
medios definidos se usan generalmente %ara reali1ar estudios gen#ticos, %ero sus incon"enientes a menudo
so&re%asan sus "enta'as* As,, se re$uiere un tiem%o considera&le %ara %re%arar un medio definido ) las &acterias
crecen m+s des%acio en ellos* Adem+s, no conocemos los re$uerimientos nutricionales de todas las &acterias ),
%or tanto, no siem%re %ueden utili1arse*
M()io' co&l(1o'
6e desconoce la com%osici-n $u,mica e(acta de un medio com%le'o* 4stos medios se %re%aran a %artir de
e(tractos de %roductos naturales tales como carne, sangre, case,na :la %rote,na de la lece;, le"aduras o so'a* Un
medio l,$uido com%le'o se denomina c"l)o* 0a case,na u otras %rote,nas $ue se a!aden a los medios son
usualmente idroli1adas con en1imas o en medio +cido, %ara acerlas m+s solu&les ), %or tanto, m+s f+ciles de
utili1ar nutricionalmente* Una idr-lisis %arcial rom%e las %rote,nas en %#%tidos* Una idr-lisis total las degrada
asta amino+cidos* A las %rote,nas %arcialmente idroli1adas se les denomina (to%"'* 4ntre las %e%tonas
comerciales se encuentra la %roteosa9%e%tona, la tri%tona ) la tri%tosa* A la case,na totalmente idroli1ada se le
denomina idroli1ado de case,na*
0os di"ersos com%onentes de un medio com%le'o se "enden como %ol"os desidratados* Tam&i#n e(isten )a
cientos de me1clas com%le'as $ue se comerciali1an como medios com%le'os es%ec,ficos* Uno de estos medios es
el c"l)o %ut!itivo, %ro&a&lemente el medio com%le'o $ue m+s se utili1a* Cuando este medio se solidifica con agar,
se denomina "0"! %ut!itivo2 Generalmente se %refiere la utili1aci-n de los medios com%le'os, )a $ue son f+ciles de
%re%arar ) %ermiten un crecimiento r+%ido de los microorganismos*
M()io' '(l(ctivo'
Un medio selecti"o fa"orece el crecimiento de ciertos microorganismos, mientras su%rime el crecimiento de otros*
0os medios selecti"os se utili1an %ara aislar es%ecies %articulares a %artir de una me1cla com%le'a* Por e'em%lo,
se utili1a un medio selecti"o, %ara aislar S"l&o%(ll" t-/i3 agente causal de la fie&re tifoidea, a %artir de eces
donde e(isten cientos de microorganismos diferentes* Algunos medios son selecti"os %or$ue contienen un
%roducto $u,mico, como la a1ida s-d,ca, el telurito %ot+sico o el cristal "ioleta, $ue ini&en el desarrollo de
algunos microorganismos %ero no de otros* 4l agar 6P6 :denominado de esta forma %or$ue contiene sulfadiacina
) sulfato de %olimi(ina; se utili1a %ara identificar Clo't!i)iu& +otuli%u&, agente causal de una gra"e into(icaci-n
alimentaria* 4l medio 6P6 %ermite el crecimiento de esta &acteria, %ero ini&e el de otras es%ecies de
Clo't!i)iu&* otros medios de culti"o selecti"os utili1an un "alor e(tremo de %/ o una fuente de car&ono %oco
com<n*

M()io' )i*(!(%ci"l('
6e utili1a un medio diferencial %ara identificar las colonias de un determinado microorganismo* Por e'em%lo, %ara
identificar St!(tococcu' -o0(%('3 la &acteria $ue causa la escarlatina, se utili1a el medio de agar sangre es un
agar $ue contiene emat,es* 0as colonias de esta &acteria muestran a su alrededor una 1ona trans%arente de&ido
a $ue %roducen em-lisis :muerte ) lisis de los emat,es;* E'c/(!ic/i" coli ) las &acterias relacionadas con ella
se identifican en medios con un indicador de %/ %or$ue originan %roductos meta&-licos +cidos, $ue cam&ian el
color del indicador ) %or tanto de sus colonias*
M()io' '(l(ctivo'4)i*(!(%ci"l('
Algunos medios son selecti"os ) diferenciales al mismo tiem%o* 4l agar 8acConKe) es un e'em%lo de medio
selecti"o9diferencial, utili1ado %ara detectar ce%as de S"l&o%(ll" ) S/i0(ll"3 &acterias ent#ricas :del intestino; $ue
causan disenter,as* Cual$uier muestra de eces en"iada al la&oratorio esta %lagada de &acterias %ertenecientes
a mucas es%ecies* 4l agente selecti"o del 8acConKe) act<a como una es%ecie de tami1 grosero $ue disminu)e
el cam%o de identificaci-n* 4l cristal "ioleta ) las sales del medio ini&en el crecimiento de la ma)or,a de las
&acterias Gram %ositi"as 5S"l&o%(ll" ) S/i0(ll" son Gram negati"as;* A %artir de a$u,, el com%onente diferencial
del medio, en este caso la lactosa, comien1a a ser im%ortante* S"l&o%(ll" ) S/i0(ll" no fermentan la lactosa,
%ero la ma)or %arte de las entero&acter,as s, lo acen* Por tanto, las colonias de estas dos &acterias ser+n ro'as,
mientras $ue las restantes no lo ser+n*
M()io' )( (%!i6u(ci&i(%to
5
Un medio de enri$uecimiento se utili1a %ara aislar un ti%o %articular de microorganismo a %artir de una %o&laci-n
mi(ta de gran tama!o* Por e'em%lo, las &acterias formadoras de endos%oras %ueden aislarse ir"iendo una
muestra de suelo ) culti"ando los su%er"i"ientes* 6olamente las endos%oras resistir+n el tratamiento ) %odr+n
crecer* 0as &acterias li'adoras de nitr-geno %ueden seleccionarse culti"ando el in-culo de suelo en un medio li&re
de nitr-geno, donde s-lo ellas %odr+n crecer %or$ue o&tienen el nitr-geno de la atm-sfera* 0os ec-logos
micro&ianos usan frecuentemente medios de enri$uecimiento* Por e'em%lo, %ara encontrar un microorganismo
$ue degrade un determinado com%uesto $u,mico t-(ico, se %uede inocular la muestra de suelo en un medio en el
cual la <nica fuente de car&ono sea dico com%uesto* 4l microorganismo $ue %ros%ere en #l %odr+ ser utili1ado
en &iorremediaci-n*
Co%)icio%(' "&+i(%t"l(' i).%("' "!" (l cultivo (% (l l"+o!"to!io
Un medio se formula %ara suministrar todos los nutrientes $ue un microorganismo necesita %ara crecer, %ero esto
no es suficiente* 4n el la&oratorio, tam&i#n es %reciso a%ortar las condiciones am&ientales adecuadas* Tanto la
tem%eratura como el %/ de&en estar dentro del inter"alo a%ro%iado. con res%ecto al o(igeno, seg<n el caso, ser+
a%ortado o eliminado*
T(&(!"tu!"
Cada es%ecie &acteriana se caracteri1a %or un inter"alo de tem%eratura en el cual %resenta su crecimiento
-%timo* Pero, en general, los microorganismos crecen m+s r+%idamente cuando se aumenta la tem%eratura, sin
llegar asta un %unto en el cual se da!an las %rote,nas* As, %ues, %ara fa"orecer un crecimiento r+%ido, las
&acterias se suelen culti"ar a la tem%eratura m+s alta a la cual crecen &ien, ) $ue suele ser la de su medio
natural* E'c/(!ic/i" coli la &acteria $ue m+s frecuentemente se utili1a en in"estigaci-n, se encuentra en el
intestino umano ) de otros mam,feros* 4ste microorganismo crece -%timamente a CIAC, la tem%eratura del
cuer%o umano*
0os culti"os se mantienen a tem%eratura constante en i%cu+")o!(' o en +"7o' )( "0u", am&os controlados
termost+ticamente* 0os incu&adores, o estufas, son c+maras con aire adecuados %ara el crecimiento tanto de
culti"os s-lidos como l,$uidos, %re%arados en cual$uier reci%iente, inclu)endo %lacas Petri, tu&os de ensa)o, o
matraces* 0os medios l,$uidos, distri&uidos en tu&os o matraces, tam&i#n %ueden ser incu&ados en &a!os de
agua caliente* 4stos &a!os resultan c-modos %ara incu&ar los culti"os $ue tienen $ue mani%ularse con
frecuencia, en la misma mesa de tra&a'o*
8
4l %/ -%timo de%ende de la es%ecie &acteriana, %ero cada una de ellas crece en un inter"alo de %/ relati"amente
estreco* Casi todas las &acterias crecen me'or a "alores de %/ %r-(imos a la neutralidad, en el inter"alo de L,5 a
I,5* 6in em&argo, los ongos crecen me'or entre ?,5 ) L,D*
Aun$ue el %/ de un medio sea el adecuado cuando se inicia el culti"o, a menudo el crecimiento micro&iano lo
modifica* 4sto sucede %or$ue algunos microorganismos usan selecti"amente alg<n com%onente +cido o &+sico
del medio. o &ien, %or$ue alg<n %roducto de su meta&olismo es un +cido o una &ase* Para disminuir los cam&ios
de %/ en los medios definidos se suelen utili1ar tam%ones* 4n los medios com%le'os no suele ser esencial,
%or$ue sus materiales naturales act<an como tam%ones d#&iles* 0os tam%ones m+s eficaces %ara "alores
neutros de %/ son los fosfatos ) el car&onato c+lcico* Am&os se a!aden normalmente como nutrientes :fuente de
f-sforo ) calcio;. %ero si se desea $ue act<en como tam%ones se %recisar+n cantidades ma)ores*

O#,0(%o
0a concentraci-n de o(,geno del medio es un determinante cr,tico %ara el crecimiento &acteriano* Algunos
microorganismos, a los cuales se denomina "(!o+io' ('t!icto', no %ueden "i"ir sin o(,geno %or$ue lo necesitan
%ara o&tener energ,a* Otros microorganismos, llamados "%"(!o+io' ('t!icto', no %ueden "i"ir en %resencia de
o(,geno, %ara ellos es un agente t-(ico* Otros ti%os de organismos, como los "%"(!o+io' *"cult"tivo' o los
"%"(!o+io' "(!otol(!"%t('3 %ueden crecer tanto en %resencia de o(,geno como en su ausencia* 0os anaero&ios
facultati"os utili1an el o(,geno si dis%onen de #l, %ero tam&i#n %ueden crecer sin #l* 0os anaero&ios
aerotolerantes no utili1an el o(,geno, %ero tam%oco les afecta negati"amente* 0os organismos &ic!o"(!.*ilo'
re$uieren am&ientes con &a'as tensiones de o(,geno. las altas tensiones, como las $ue e(isten en el a,re son
t-(icas %ara ellos* Por tanto, de%endiendo del microorganismo $ue se "a)a a culti"ar, se tendr+ $ue suministrar,
restringir o eliminar el o(,geno*
6uministrar o(,geno a las &acterias $ue lo necesitan %ara crecer, o $ue crecen m+s r+%idamente en su %resencia,
re%resenta una dificultad t#cnica* 0os organismos aero&ios $ue crecen en la su%erficie de las %lacas de agar,
6
o&tienen suficiente cantidad de o(,geno de la atm-sfera, aun$ue el interior de toda colonia es com%letamente
anaero&io* Cuando los microorganismos crecen en medios l,$uidos es m+s dif,cil, %or$ue no e(iste demasiado
o(,geno disuelto en el agua ) los microorganismos aero&ios lo consumen r+%idamente* Todos los culti"os l,$uidos
con m+s de uno o dos cent,metros de %rofundidad de&en o(igenarse* 4sto se lle"a a ca&o aciendo %asar una
corriente de aire a tra"#s del culti"o o agit+ndolo "igorosamente de forma continua* 4n casi todos los la&oratorios
de micro&iolog,a e(isten agitadores, $ue son %lataformas en las cuales se %ueden colocar los matraces
con"enientemente su'etos, %ara ser sometidos a un mo"imiento de rotaci-n o a una agitaci-n de "ai"#n, $ue
me1clan el aire con el culti"o* 4l suministro de o(,geno a los culti"os de cientos de litros, como los $ue se utili1an
%ara %roducir anti&i-ticos, es un desafi- %ara la ingenier,a* 4stos culti"os se remue"en "igorosamente mediante
grandes %ro%ulsores, mientras se fuer1a a $ue %asen a tra"#s de ellos enormes cantidades de aire*
0a e(clusi-n del o(,geno del am&iente de los anaero&ios tam&i#n %lantea %ro&lemas t#cnicos* 8ucos
microorganismos anaero&ios se %ueden culti"ar en tu&os de ensa)o e(%uestos al o(,geno, s, el medio contiene
un com%uesto $u,mico $ue reaccione con el mismo, como el tioglicalato, $ue reacciona con el o(igeno
manteniendo la %arte inferior del tu&o li&re de o(,geno* 0os anaero&ios tam&i#n %ueden culti"arse en %lacas Petri,
si estas se incu&an dentro de unos contenedores, en los cuales se a)a eliminado totalmente el o(,geno ) se
a)a reem%la1ado %or un gas inerte como nitr-geno o arg-n* Tam&i#n se %uede lle"ar a ca&o una eliminaci-n
$u,mica del o(igeno* Para ello, se comerciali1an %a$uetes con unas me1clas :le reacti"os $ue %roducen
idr-geno cuando se les a!ade agua. el idr-geno reacciona con el o(,geno en %resencia de un catali1ador. la
reacci-n consume el o(,geno %roduciendo agua* Un m#todo mu) sencillo %ara disminuir la concentraci-n de
o(igeno :) al mismo tiem%o %roducir an,drido car&-nico, el cual es &eneficioso %ara ciertos microorganismos; es
encender una "ela dentro de un reci%iente ) cerrarlo erm#ticamente. la "ela consumir+ o(,geno asta $ue se
e(tinga* 4sta t#cnica se utili1a&a %ara culti"ar anaero&ios aerotolerantes, como las &acterias del +cido l+ctico*
Tam&i#n a sido utili1ada %ara microacr-filos, es%ecialmente cuando el di-(ido de car&ono les fa"orece*
0os microorganismos anaero&ios estrictos, $ue mueren incluso con una &re"e e(%osici-n al aire, %ueden
culti"arse en 'arras de cristal erm#ticamente cerradas* Cuando se a&ren estos contenedores %ara a!adir medio
o tomar muestras, se utili1a una corriente de nitr-geno %ara sacar el aire de la "asi'a* A "eces, se re$uieren
t#cnicas m+s ela&oradas* 4s frecuente el uso de c+maras li&res de o(,geno, en las cuales se tra&a'a usando unos
guantes conectados a las mismas* Algunos la&oratorios tienen a&itaciones li&res de o(,geno, donde los t#cnicos
tra&a'an con m+scaras de o(,geno*
Co%'(!v"ci.% )( lo' cultivo' "#$%ico'
Una "e1 $ue se o&tiene un culti"o a(#nico, a) $ue mantenerlo en el la&oratorio %ara %oder tra&a'ar con #l o
intercam&iarlo con otros cient,ficos* 4sto se %uede lle"ar a ca&o aciendo resiem&ras en un medio fresco,
mensualmente o con otra %eriodicidad* Pero un culti"o %uro tam&i#n %uede mantenerse "ia&le durante a!os sin
acerlo crecer %eri-dicamente* A los culti"os $ue se mantienen en el la&oratorio %ara su estudio ) como
referencia se les denomina cultivo' )( col(cci.%. 8ucos la&oratorios %oseen una colecci-n de ce%as $ue se an
aislado en el mismo o $ue an o&tenido de las denominadas col(ccio%(' )( cultivo' tio3 $ue son organi1aciones
$ue mantienen un n<mero enorme de culti"os micro&ianos como un ser"icio a los micro&i-logos* 4(isten mucas
t#cnicas de mantenimiento de los culti"os %uros, %ero casi todas consisten en una desecaci-n :eliminaci-n del
agua; o en un almacenamiento a &a'a tem%eratura*
0os culti"os generalmente se desecan %or lio*ili9"ci.% :congelaci-n ) desecaci-n;* 4l m#todo consiste en lo
siguiente7 el culti"o l,$uido se "ierte en un %e$ue!o "ial o am%olla de "idrio ) se a!ade lece descremada %ara
%roteger las c#lulas durante el %roceso* 0a me1cla se congela en ielo seco ) se e(%one al "aci- %ara su
su&limaci-n :eliminaci-n del agua congelada;* Durante el %roceso de su&limaci-n las c#lulas %ermanecen
congeladas* Posteriormente se %rocede al sellado de los "iales, mientras a<n se mantiene el "ac,o* 0os culti"os
liofili1ados se almacenan a tem%eratura am&iente*
Para almacenar un culti"o em%leando &a'as tem%eraturas, se me1cla con sustancias %rotectoras, como la lece
descremada, el glicerol, o el dimetilsulf-(ido :D86O;* 0os tu&os de ensa)o se sellan ) se almacenan %or de&a'o
de los 9 5DoC, en nitr-geno l,$uido o en un ult!"co%0(l")o!3 ca%a1 de alcan1ar tan &a'as tem%eraturas*
O+'(!v"ci.% )( l"' +"ct(!i"':
": O+'(!v"ci.% &"c!o'c.ic": 4l tama!o de las &acterias im%ide "erlas a sim%le "ista* 6in em&argo, las colonias
$ue forman so&re medios s-lidos s, son "isi&les, ) en ellas se %uede estudiar una serie de caracter,sticas $ue nos
a)udan a su identificaci-n* A ni"el morfol-gico, %odemos estudiar la forma de las colonias, su tama!o, as%ecto
del &orde :liso, rugoso, ondulado, ramificado, etc*;, %resencia de &rillo, color, etc* Incluso so&re medio l,$uido las
&acterias %roducen modificaciones de inter#s %ara su clasificaci-n ) $ue tienen $ue "er esencialmente con las
7
caracter,sticas de su meta&olismo* As, se o&ser"a si la tur&ide1 es uniforme, si crecen en el fondo, si lo acen en
la 1ona su%erficial, si %roducen %igmentos, etc*
+: O+'(!v"ci.% &ic!o'c.ic": Puesto $ue la inmensa ma)or,a de las &acterias son incoloras, la <nica forma de
o&ser"arlas &ien en el microsco%io -%tico consiste en incrementar su contraste con res%ecto al medio* 4sto se
consigue mediante su te!ido con colorantes o mediante la dis%osici-n de una -%tica es%ecial de contraste,
generalmente de fases, en el microsco%io*
Para o&ser"ar las &acterias te!idas, a) $ue %roceder %re"iamente a su fi'aci-n* Inicialmente se %re%ara un frotis
a %artir de medio l,$uido o dis%ersando en una gota de agua una %orci-n de c#lulas crecidas en s-lido*
Posteriormente se desidrata el frotis %or calentamiento sua"e utili1ando el re"erso de la mano como control de
tem%eratura tras %asar re%etidamente el %ortao&'etos so&re la llama del mecero* Tras la fi'aci-n %or calor se
%rocede a la tinci-n*
CUADRO D4 CARCT4RM6TICA6 D4 2ACT4RIA6 PATG4NA67
GNN4RO O
46P4CI4
8ACRO6CPICA6 8ICRO6CPICA6 TINTORIA046
Mic!ococcu'
lut(u'
Aero&io estricto, coagulasa
negati"a, forma colonias amarillo
&rillantes en agar nutriti"o
cocos Gram P
E'c/(!ic/i" Coli 8-"iles, aero&ias, anaero&ias
facultati"as, mesQfilas, %/ L9E,
indol, lactosa ) glucosa %ositi"o
2acilos, ca%sula o
microc+%sula, flagelos
%erRtricos
Gram 9
P'(u)o&o%"
"(!u0i%o'"
8-"iles, colonias gris con &rillo
met+lico, aroma seme'ante a u"a
fermentada
2acilos, un flagelo %olar o
un mec-n de @ a C
flagelos, %illis
Gram 9
St"/-lococcu'
"u!(u'
Inm-"iles, colonias %e$ue!as,
circulares, &orde continuo,
cremosas, anaero&ios facultati"os,
fermentadores de maltosa, lactosa,
glucosa, manitol, %roducci-n de
+cido l+ctico, catalasa
Cocos, racimos o cadenas
cortas, D*I a B*@ micras
Gram P
St!(tococcu' ' Inm-"iles, colonias ele"adas, lisas,
circulares, aero&io ) anaero&io
facultati"o
Cocos en racimos,
ca%suladas
Gram P
B"cillu' "%t/!"ci' 8-"iles o inm-"iles, es%orulados,
aero&ios
&acilos GramP
B"cillu' c(!(u' Aero&io o anaero&io facultati"o,
m-"il, idroli1a la lecitina de ue"o
) no fermenta el manitol
2acilos es%orulado Gram P
B"cillu' 'u+tili' Catalasa P, aero&io 2acilos $ue es%orulan Gram P
Y(!'i%i" ('ti' inm-"iles, aero&ios, anaero&ios
facultati"os, fermentadores, ureasa
) catalasaP, en ocasiones %rod gas
2acilos con e(tremos
redondeados, flagelos
%erRtricos o anfitricos,
%illis, c+%sula de %oco
es%esor
Gram 9
M-co+"ct(!iu&
l(!"(
No se %uede culti"ar in 5itro,
inm-"il
2acilo delgado recto, en
em%ali1ada o aces
cido alcool resistente
Gram*P
;l(i+'(ll"
%(u&o%i"(
Inm-"iles, aero&ios, anaero&ios
facultati"os, fermentadores )
catalasaP, %rod* gas
2acilos ca%sulados Gram 9
Clo't!i)iu& t(t"%i 8-"iles, colonias &rillantes,
traslucidas, gris amarillas &orde
irregular ri1oide, anaero&ios
estrictos, %/ I*@9I*L T CIAC, %rod
gas ) olor desagrada&le
2acilos solos en cadena o
%ares, flagelos %erRtricos,
%rod es%oras redondas
terminales
Gram P
Clo't!i)iu&
+otulli%u&
Colonias %e$ue!as, traslucidas,
&orde filamentoso, centro o%aco,
&lanco gris+ceo, anaero&ios
2acilos aislados en
%are'as o cadenas cortas,
flagelos %erRtricos
Gram P
8
estrictos
M-co+"ct(!iu&
tu+(!culo'i'
Forman un %igmento amarillo en
incu&aci-n, aero&ios estrictos
&acilo delgado, e(tremos
redondeados
Acido9alcool resistente,
Gram*P
Noc"!)i" 8icroaerofRlicos, anaero&ios,
fermentadores P
2acilos ) coco&acilos Gram P. d#&ilmente
acido9alcool resistentes
S"l&o%(ll" T-/i 8-"iles, colonias grandes de @ a
?mm rugosas o lisas, aero&ios,
anaero&ios facultati"os, mesQfilos,
fermentadores, %rod* /@6O?
2acilos, flagelos %erRtricos
no es%orulados
Gram 9
S/i0(ll"
)-'(%t(!i"(
Inm-"il, colonias redondas @mm,
con"e(as, trans%arentes, aero&ios,
anaero&ios facultati"os, glucosa P
indolP o 9
&acilos Gram 9
C/l"&-)i"
t!"c/o&"ti'
Inm-"iles, filtra&les cocoides Gram 9 . tinci-n con
giemsa, casta!eda o
macia"ello
B!uc(ll" ' Inm-"iles, aero&io, catalasa,
o(idasa ) ureasa %ositi"os
2acilos cortos.
coco&acilos
Gram 9
N(i''(!i"
0o%%o!!/o("(
Inm-"iles, aero&ios, anaero&ios
facultati"os, %/ de L a E, o(idasa )
glucosa %ositi"a
Cocos en %ares,
ca%sulados de D*L a
Bmicra
Gram 9
St!(tococcu'
-o0(%('
Inm-"iles, colonias en forma de
disco, mucosas, mate, lisas o
rugosas con em-lisis alrededor,
anaero&ios facultati"os, %roducen
+cido l+ctico
Cocos en cadena, D*5 a
@mm
GramP
Ric<(tt'i"
"lli)u&
Inm-"iles, intracelulares o&ligados 2acilos o coco&acilos,
%ared formada %or C
ca%as a manera de
c+%sula, cu&ierta
mucilaginosa
Gram 9 . tinci-n con
Giemsa, 8acia"ello o
3im#ne1
Vi+!io C/ol(!"( 8-"il, aero&io, anaero&io
facultati"o, sensi&le a la acide1,
catalasa, indol, o(idasa, ro'o de
metilo, sacarosa ) fermentador P
2acilo cur"o, un flagelo
%olar
Gram 9
Co!-%(+"ct(!iu&
)i/t/(!i"(
Aero&io ) microaerofRlico,
inm-"iles, catalasa P
fermentadores P T C5AC %/ I*L
2acilo en forma de &asto
con uno de sus e(tremos
m+s angosto, agru%aci-n
en em%ali1adas*
Gram P. la tinci-n no es
uniforme de&ido a los
gr+nulos $ue contiene
en su cito%lasma, $ue se
ti!en m+s intensamente
8AT4RIA07
Pi%eta %asteur
est#ril
? tu&os con
caldo
? tu&os con medio 6I8
@ meceros Asa ) %ortasa 4ti$uetas o marcador
Culti"os de las siguientes &acterias7
E'c/(!ic/i" coli B"cillu' Su+tilli' St"/-lococcu' Au!(u'
St!(tococcu'
="(c"lli'
P'(u)o&o%"
Au!(0i%o'"
St"/-lococcu'
Ei)(!&i'
8NTODO0OGMA7
o 0im%iar ) esterili1ar el +rea de tra&a'o
o Prender los meceros, a'ustar la flama asta $ue esta %resente un cono a1ul &ien marcado*
o Identificar ) organi1ar el material dentro del +rea de tra&a'o*
o 8arcar los tu&os con iniciales de la ce%a a sem&rar ) feca*
a; Si(&+!" (% &()io l,6ui)o:
9
Transferir as#%ticamente, con el asa de siem&ra, una
%e$ue!a muestra de los microorganismos, desde el tu&o
$ue contiene el material %ro&lema al tu&o con medio de
culti"o est#ril* 6umergir el asa en el l,$uido ) agitar %ara
des%render ) diluir la muestra* Incu&ar el tu&o reci#n
sem&rado en estufa, durante @?9?E oras a la
tem%eratura -%tima de crecimiento*
&; Si(&+!" (% &()io '(&i'.li)o: 0a siem&ra en este ti%o de medio,
$ue contiene una %ro%orci-n menor de agar $ue los medios s-lidos )
$ue se en"asa en tu&os, se lle"a a ca&o con un ilo de siem&ra
esterili1ado, con el cual se toma la muestra* 4l medio $ueda inoculado
al introducir el ilo en %rofundidad asta el fondo del tu&o, retir+ndolo
%osteriormente %or la misma tra)ectoria utili1ada al reali1ar
T$c%ic"' )( ('t!i")o:
a; ('t!i")o 'i&l(: estriado continuo7 4sterili1a el filamento del asa de siem&ra ) toma la %arte de la ca'a
de %etri $ue contiene el medio de culti"o sem&rado* Cercas del mecero es%era $ue se enfr,e el asa )
toma una colonia de la %laca* Regresa la ca'a a su ta%adera, aora, toma una %laca con agar est#ril
:donde se "a)a a sem&rar; ) con cuidado de no rom%er el agar, inocula la muestra en un e(tremo de la
%laca ) con el asa en %osici-n ligeramente ori1ontal reali1a las estr,as :mu) 'untas;, oscilando el asa
de siem&ra so&re la su%erficie de una %orci-n %e$ue!a del agar. mediante un &alanceo sucesi"o )
r+%ido de la mu!eca*
&; ('t!i")o (% cu")!"%t(': la ma)or %arte del in-culo e descarga en los cuadrantes B) @, lo $ue %ermite
o&tener colonias se%aradas en C ) ?. Con un asa de siem&ra, %re"iamente esterili1ada, se toma una
muestra del culti"o de microorganismos ) se e(tiende so&re un +rea %e$ue!a de la su%erficie de la %laca
con medio, en forma de estr,as mu) 'untas, %ero sin acer %resi-n %ara no da!ar el medio* 6e flamea el
asa, se enfr,a ) des%u#s de ro1ar la siem&ra reali1ada %re"iamente, se e(tiende de nue"o %or otra 1ona
de la %laca aciendo nue"as estr,as* 4ste %roceso se re%ite sucesi"amente, flameando ) enfriando el
asa al comien1o de las sucesi"as siem&ras en estr,a* 6e lle"a la %laca a incu&ar, a la tem%eratura
adecuada, siem%re en %osici-n in"ertida* 8ediante esta t#cnica se o&tienen colonias aisladas a %artir de
una muestra $ue contenga un ele"ado n<mero de &acterias*
Gu," )( o+'(!v"ci.%:
o O&ser"e las caracter,sticas culturales de las colonias formadas %ara cada sem&rado en los diferentes medios
de culti"o*
o Descri&a las o&ser"aciones en la ta&la corres%ondiente*
o De cada microorganismo acer un frote ) te!ir mediante la t#cnica de gram*
o O&ser"e al microsco%io descri&ir las caracter,sticas de las diferentes &acterias en estudio en la ta&la
corres%ondiente*
o Com%are el desarrollo de las &acterias inoculadas en los diferentes medios %ara anaero&ios*
o Con &ase en los resultados o&tenidos, indicar cu+l &acteria es aero&ia, anaero&ia, anaero&ia facultati"a o
microaerof,lica*
A'(cto' &>' co&u%(' )( l"' )iv(!'"' colo%i"' &ic!o+i"%"' "i'l")"' 'o+!( &()io '.li)o:
10
R46U0TADO67
T"+l" )( l"' c"!"ct(!,'tic"' )( cultivo' +"ct(!i"%o':
CU0TURA046
2acteria E2
="(c"lli'
St"/-lococc
u' Au!(u'
B"cillu'
Su+tilli'
St"/-lococcu
' Ei)(!&i'
E'c/(!ic/i" coli P'(u)o&o%
"
Au!(0i%o'"
?: E% &()io l,6ui)o:
C!(ci&i(%t
o
'u(!*ici"l
Anaero&i
o
facultati"
o
Anaero&io
facultati"o
aero&io anaero&io 9 9
O"ci)") mediana nula mediana nula 9 9
S()i&(%to grumoso com%acto Com%acto "iscoso 9 9
@: E% &()io '(&i4'.li)o
=o!&" )(
l" l,%(" )(
l"
ic")u!"
Pa%ilar
m-"il 9 9 9
Pa%ilar m-"il 5ellosa
m-"il
A: Colo%i"' (% l"c"
M()io Mc
Co%<(-
4 S"l M"%itol 4 Mc Co%<(- EMB EMB
=o!&" Fusiforme 9 fusiforme 9 Circular Circular Circular
El(v"ci.% Plana 9 con"e(a 9 Con"e(a Con"e(a Con"e(a
Bo!)(' Filamentos
o
9 Ondulado 9 Ondulado Ondulado Ondulada
T(#tu!" Plana 9 8em&ranos
o
9 8em&ranos
o
mem&ranos
o
2utirosa
Colo! rosado 9 morado 9 ro'i1o morado 8etalico
8ICRO6CPICA6
=o!&" Cocos Cocos 2acilos Cocos 2acilos &acilos
A0!u"ci.
%
Cadenas Racimos 4n %ares )
en cadena
Racimos Cadenas Cadenas
G!"& Gram P Gram P Gram P Gram P Gram 9 Gram 9
DI6CU6IN D4 R46U0TADO67
6e reali1aron C t#cnicas %ara sem&rado de culti"o7 en medio l,$uido :con caldo nutriti"o;, en medio semi9
s-lido :medio 6I8; ) en %laca :con estriado sim%le ) en cuadrantes;, con L diferentes &acterias %ara
des%u#s de'ar incu&ar las &acterias*
Una "e1 incu&adas las &acterias se o&ser"aron sus caracter,sticas macrosc-%icas o culturales ) sus
caracter,sticas microsc-%icas. 0os resultados de estas o&ser"aciones reali1adas se %ueden "er en la ta&la
anterior, en la $ue se %uede o&ser"ar $ue cada una de ellas "ar,a de a cuerdo a sus caracter,sticas
es%ec,ficas de crecimiento en los diferentes medios*
CONC0U6ION467
Por medio de esta %r+ctica se logr- utili1ar las t#cnicas a%rendidas durante el transcurso del curso* 6e logr-
a%render a reali1ar algunos de los m#todos $ue e(isten %ara culti"ar &acterias ) de esta manera o&ser"ar sus
caracter,sticas tanto macrosc-%icas como microsc-%icas e inter%retaci-n de las mismas, con lo $ue se o&ser"-
11
$ue %ara cada &acteria e(isten caracter,sticas diferentes $ue son las $ue las identifican ) diferencian de otras
&acterias, %or lo $ue de esta manera se le %uede llegar a identificar con su correcta siem&ra ) o&ser"aci-n %ara
an+lisis %osteriores o sim%lemente %ara la identificaci-n de una &acteria en alg<n medio u organismo*
2I20IOGRAFMA7
Romero Ca&ello, R* 8icro&iolog,a ) ParasitologRa /umana7 2ases etiol-gicas de las enfermedades infecciosas*
4ditorial Panamericana, 8#(ico @DDB* @Aed* P%*@5I9?@J
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