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Metodos de Siembra y Cultivo Maryyy

Metodos de Siembra y Cultivo Maryyy

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METODOS DE SIEMBRA Y CULTIVO

INTRODUCCION: Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos que permiten cultivarlos bajo condicione artificiales, en los que es posible cultivarlos bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de microorganismo. Una de las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología consiste en transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos. A l efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en el área de trabajo, existen muchos otros microorganismos; debido a esto, es necesario tomar precauciones para impedir que éstos penetren y contaminen los cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no sólo el aspecto nutricional, sino también las condiciones ambientales de su hábitat natural, por lo que en el medio de cultivo se debe ajustar el pH y concentración de sales y durante la incubación condiciones tales como la temperatura, aireación la luminosidad. La aplicación de estos procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos en cultivos mixtos, así como su aislamiento y la obtención de cultivos puros, facilitando de este modo, el estudio, caracterización, aplicación y control de los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y propósito específico del estudio. OBJETIVOS: • •

Aprender los principales métodos de siembra de microbiología Aprender los principales métodos de cultivo existentes Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones. Seleccionar y aplicar las técnicas de siembra adecuadas para alcanzar propósitos específicos.

FUNDAMENTO TEORICO: Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de éste en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas. La población de microorganismos desarrollada en un medio se denomina cultivo. Cuando éste contiene una sola especie de microorganismo, se denomina cultivo puro oaxénico, cuando contiene más de una especie de microorganismos se denomina cultivo mixto. Un cultivo tipo contiene una especie conocida de microorganismos y es conservada en el laboratorio para realizar diversos ensayos y estudios. Un cultivo axénico consiste en una sola especie microbiana, proveniente de una sola célula. Los cultivos axénicos son muy raros en la naturaleza. En los medios naturales -por ejemplo, en el suelo, agua, o en el cuerpo humanoexisten cultivos mixtos. En un cultivo mixto, viven muchas y diferentes especies

es necesario tener plena conciencia de la ubicuidad de los microorganismos. cable de Kolle o portasa con alambre de platino dispuesto en forma de: aguja. hisopos. ya que los microorganismos están por todas partes. asa. debe ser transferido a un medio de cultivo nuevo. lo que determina que el aíre y todas las superficies estén densamente pobladas por microorganismos. Estos microorganismos no deseados o contaminantes deben ser eliminados de un cultivo para que éste pueda ser axénico. Al conjunto de procedimientos realizados para prevenir o evitar la contaminación se le llama técnica aséptica. espátula y/o gancho. Con relación a la concentración del inóculo. pipeta (para uso microbiológico son terminales y la parte superior o boquilla debe estar protegida con filtro de algodón). se deben tener una serie de cuidados que eliminen los riesgos de contaminación. Unclon está constituido por una población de células descendientes de un solo microorganismo. En esta transferencia se deben considerar dos aspectos básicos referentes a: no introducir microorganismos indeseables (contaminantes) y concentración o carga microbiana de la muestra (inóculo) a sembrar. la esterilización de todos los utensilios y medios de cultivo a emplear y realizar la transferencia del microorganismo en una zona estéril. productos y del personal. una sola célula de un microorganismo en un medio sólido o liquido. La utilización de estos dispositivos. de otra manera el crecimiento y sobrevivencia no pueden continuar. Por ejemplo: los medios .de forma conjunta. asas de inoculación. el seguimiento cuidadoso y detallado de la misma evita accidentes tales como: • • La contaminación y pérdida del cultivo en estudio La salida y dispersión de microorganismos del cultivo. la que se obtiene trabajando cerca de la flama del mechero. Para impedir la contaminación de los cultivos. Este último aspecto es particularmente importante cuando se trabaja con cultivos de microorganismos patógenos. Una colonia de bacterias del tamaño de la cabeza de un alfiler contiene varios millones de microorganismos. En la transferencia de microorganismos se emplean agujas. A la hora de obtener un cultivo axénico se han de tomar precauciones especiales. esterilizado previamente. Estos incluyen el área de trabajo. así como de los diferentes medios de cultivo tienen aplicaciones específicas. será más que suficiente para efectuar una transferencia exitosa. Un cultivo axénico se obtiene artificialmente en el laboratorio. El segundo paso para obtener un cultivo axénico es inocular o introducir. el lavado de las manos. lo que ocasionaría la contaminación de utensilios. pipeta pasteur. pipetas o pipetas pasteur que deberán esterilizarse previamente. aislamos un solo microorganismo del resto y se podrá multiplicar en condiciones favorables. un error frecuente del principiante consiste en tomar muestras grandes. en la naturaleza. Una colonia es un clon lo suficientemente grande como para ser visible sobre la superficie de un medio sólido. Dispositivos empleados en la transferencia de muestras microbianas: hisopo. en el laboratorio y en los instrumentos y recipientes usados en los experimentos. lo que es innecesario. Un cultivo microbiano que ha estado creciendo por cierto tiempo en el mismo tubo o matraz. de este modo en la transferencia de una muestra microbiológica a otro recipiente. De esta manera. es obvio que con una cantidad pequeñísima (casi invisible) que se adhiera al asa.

Para alcanzar y mantener estas temperaturas se puede usar una incubadora microbiológica o un baño de agua a temperatura constante. estos se inclinan o vierten en cajas de petri. pipeta o pipeta pasteur. en este tipo de cultivos.líquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones de algodón o tapones especiales. Los medios sólidos e preparan en tubos o matraces dependiendo de la cantidad o de las necesidades. un hisopo. ya que aún cuando la mayoría de los microorganismos crecen mejor en pH neutro. en tanto que para lo microorganismos que presentan su crecimiento óptimo a temperaturas entre 20 y 25ºC se pueden incubar en la gaveta o cajón del laboratorio. La siembra se realiza con el asa. por otra parte. después de esterilizarlos. Un cultivo líquido puede ser transferido mediante un asa microbiológica. en estos medios. En cualquier medio de cultivo es de primordial importancia ajustar el pH. algunos requieren de pH alcalino o ácido. Por lo tanto. Con relación a las necesidades gaseosas. un tercer grupo se adapta a las dos . La desventaja que presentan. por lo que al proporcionar un pH adecuado se favorecerá el crecimiento del microorganismo de interés y la obtención del cultivo. lo que determina la deshidratación de los medios de cultivo. e que en ellos e difícil detectar contaminación a simple vista. las poblaciones se encuentran suspendidas y e fácil homogenizarlas. otros requieren temperaturas más elevadas (30 a 45ºC) y algunos hasta 80ºC. en este último caso es necesario calentar el medio y cuando se encuentra en estado líquido y a una temperatura de aproximadamente 42ºC se agrega el inóculo. lo que permite estandarizar la concentración del inóculo. los microorganismos al multiplicarse forman agregados que se hacen visibles a simple vista. el crecimiento de cualquier cultivo experimental que se realice en incubadora no debe prolongare por más de nueve días. Con este mismo propósito durante la incubación se deben proporcionar las condiciones adecuadas para el microorganismo en estudio. Los medios semisólidos e preparan en tubos. El crecimiento óptimo de los microorganismos se presenta a temperaturas que la mayoría de las veces están relacionadas con la de su hábitat natural. La desventaja que tienen es que estos aparatos funcionan con aíre seco. a temperatura ambiente. Una de las ventajas que presenta este tipo de cultivo se refiere a la posibilidad de agitarlos acelerando la velocidad de microorganismos anaerobios. En este tipo de cultivos los microorganismos presentan un desarrollo particular que se manifiesta en la superficie o a través de todo el líquido. inoculando la superficie del agar con mucha suavidad. Algunos microorganismos crecen por debajo de 15ºC. los que sólo crecen en presencia de aíre se llaman aerobios obligados. se homogeniza y se deja solidificar. En general las incubadoras microbiológicas satisfacen las necesidades en cuanto a los rangos de temperatura requeridas por los microorganismos. a estos agregados se les denominan colonias. no todos los microorganismo crecen en presencia de oxígeno atmosférico. las que presentan características que varían con el tipo de microorganismo cultivado y el medio de cultivo empleado. el inóculo se deposita dentro del caldo o medio líquido. se inoculan con aguja de siembra (asa recta) o pipeta pasteur. los que sólo crecen en ausencia de oxígeno se denominan anaerobios obligados o estrictos. Estos medios se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la separación de microorganismos con diferentes requerimientos de oxígeno.

elevación y color de las colonias. Por tanto. Por ejemplo. Para ello. cultivos axénicos. En el estudio de cultivos bacterianos algunos de los criterios que se emplean para caracterizarlas incluyen: tamaño. dos células quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. pero sólo lo utilizan cuando éste existe en concentraciones reducidas. se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (le . Quizás. conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la primera placa. permitiendo que las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles. una suspensión con mil millones de células por mililitro debe ser diluida 107 veces para obtener una suspensión con un centenar de células por mililitro.condiciones y se le conoce como facultativos. en la superficie o en el interior de plantas y animales incluyendo al hombre. las suspensiones de células microbianas se diluyenantes de su siembra en placa. Los métodos de vertido en placa y extensión en placa En estos métodos. morfología celular. que la dilución no se puede realizar en una sola etapa. normalmente de diez en diez. presencia de inclusiones de reserva y características culturales en medios líquidos y sólidos en los que presentan patrones de desarrollo en cuanto a la forma. Se siguen estas técnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos. pH y condiciones gaseosas. en la superficie de medio sin sembrar aún. A continuación. Las bacterias son organismos procarióticos. movilidad. con un asa de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri (a las placas Petri también se les denomina simplemente placas). reacción a la tinción de Gram. se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza. forma de agrupación. tamaño. Por tanto. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula. Existe una cuarta categoría que comprende bacterias que requieren oxígeno. Las colonias que se desarrollen la segunda vez. cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. formación de esporas. ya sea como parásitos. A continuación. serán. se desarrollan en un rango muy amplio de temperatura. pero a veces de cien en cien. se flamea el asa. hay bacterias móviles e inmóviles fotosintéticas y quimiotróficas. casi con toda seguridad. Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa. las placas se incuban en un lugar adecuado. el suelo. no podemos asegurarlo. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar células individuales. autótrofas y heterótrofas. se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica. se realizan diluciones seriadas (en varias etapas). Para realizar diluciones de diez en diez. para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axénico. Pueden vivir en forma libre o en simbiosis con otros organismos. a estos se les llama microaerofílicos. comensales o mutualistas. Fisiológicamente este grupo presenta características muy variables. El desarrollo de estos diferentes grupos e favorece mediante la agitación de los cultivos o mediante la exclusión de oxígeno para lo que se emplean sustancias reductoras o equipos especiales. Técnicas de siembra: El método de siembra por estría en placa: Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. habitan en el agua.

En el método de vertido en placa. se puede proceder de dos maneras diferentes. A continuación. En ambas técnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. extendiéndolas con avuda de un asa de Diralsky de cristal estéril. Las dos técnicas de siembra por dilución presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor número de colonias aisladas que el método de siembra por estría. las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten en placa.medio estéril o solución salina. por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos. Como en el método de siembra por estría. En el segundo método (extensión en placa). dejando las células microbianas sobre la superficie. no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensión o en el agar solidificado sembrado por el método del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán en la superficie. Las colonias superficiales se extenderán y serán más grandes. MATERIALES: materiales reactivos . las muestras diluidas se siembran directamente en la superficie de la placa de agar. La suspensión se absorbe en el agar. Se agita vigorosamente para diluir las células y el proceso se repite cuantas veces sea necesario. igualmente estéril.

• • • • • placas petri tubo de ensayo pipetas asa aguja de kolle PROCEDIMEINTO: A) SIEMBRA EN TUBOS: 1. detal manera que los extremos de ambos tubos estén a un mismo nivel. se flamea el extremo de los dos tubos. Con la mano derecha se toman con el asa de kolle y se esterilizan en posición vertical en el mechero. luego de enfriarla y con cuidado se le traslada al tubo con el medio de cultivo. con la misma mano se extrae los dos tapones con el dedo meñique y el siguiente apoyándolos a la palma al mismo tiempo. Forma de retirar el algodón del tubo . con el asa se toma un poco de material de siembra. Siembra en tubos a. Siembra de un tubo de ensayo a otro El tubo con el material para la siembra y el tubo con el medio de cultivo se toman ambos con la mano izquierda en forma inclinada.

Siembra en superficie . Ojo: El caldo del cultivo no debe mojar el tapón de algodón • Para sembrar un agar inclinado al asa con el material se le da movimientos de zig-zag en la superficie del agar de abajo hacia arriba. el asa con el material.Esterilización del asa • Cuando la siembra es de un caldo de cultivo. se introduce en un líquido por la pared inferior del tubo y se extrae por la pared superior.

se abre la placa bajo el mechero. La siembra se realiza como en los casos anteriores. se toma con el asa un poco de material. y con el material de siembra se introduce hasta el fondo y se lo retira (debe de ser en el medio de tubo sin rozar las paredes) Siembra por picadura • La siembra de en una caldo se puede realizar con una pipeta de Pasteur o una pipeta graduada. Luego de la siembra las pipetas se las coloca en un líquido desinfectante. Se esteriliza el asa. Siembra a un tubo con medio de cultivo desde una placa petri La placa petri con el material de siembra se coloca frente a uno con la tapa hacia arriba. la cual se esteriliza bajo mechero. se cierra la placa y con la mano izquierda se toma el tubo con el medio de cultivo. se retira el asa. se utiliza una aguja. . Las siembras también pueden realizarse con tampones • a.• Para sembrar en una columna de a agar vertical (por picadura).

Esterilizar el asa al terminar la siembra luego de cerrar la placa y colocar la placa con la tapa hacia abajo. sobre el agar realizando movimientos de zig-zag desde un extremo de la placa hacia en centro de ella. . La siembra se realiza con un asa (con material se siembra). Técnica de la placa estriada en sectores (en superficie) La placa petri con agar se divide en sectores (4 cuadrantes).2. Siembra en placa petri a. Es necesario que las estrías no toquen los sectores vecinos.

Técnica de siembra con un extensor (en superficie) Con la mano izquierda levantar la tapa de la placa petri bajo mechero. sosteniéndolo con el dedo índice y el pulgar. c. Con una asa o pipeta se vierte el material de siembra a la superficie del agar. Colocar la placa con la tapa hacia abajo.b. y con el extensor se cubre toda la superficie con el material haciendo movimientos giratorios. Al final se extrae el extensor. Técnica de vaciado en placa por incorporación . se cierra la placa y se coloca el extensor en una solución desinfectante.

Colocar las placas con la tapa hacia arriba hasta que enfríe el agar.). asas. CONCLUSION: . etc. realizar movimientos de vaivén para distribuir bien el material. Invertirlas en el momento de llevarlas a incubar. Marcar los tubos con la identificación del cultivo. En el caso de los tubos de ensayo.) éstos deben de ser esterilizados correctamente en el laboratorio tomando siempre las precauciones. tubos. la fecha y el nombre para no confundir las placas.Rotular las placas. Colocar el material de siembra con una pipeta en cada placa (1 ml. RECOMENDACIONES: • Antes de utilizar los materiales (pipetas. 5. • • 6. Agregar el agar. Cada vez que se termina una siembra siempre hay que esterilizar el asa de kolle (flameándola con el mechero) para obtener los resultados esperados en el experiemnto. flamear la boca de éstos antes de colocar el tapón.

monografias. 8.com http://es. BIBLIOGRAFIA Libro: • R. DÍAS. LOPEZ GOÑI microbiología Manual práctico de Referencias en WEB: • • • www.goolge.com RECOEMNDACIONES: .• Se pudo conocer los métodos de siembra y cultivo más utilizados en el laboratorio de microbiología y dándonos ha conocer correctamente el método que hemos utilizado en la practica. I.org/wiki/mediosdecultivo www. GAMAZO. C.wikipedia.

es/info/mfar/pdfs/GuiaMicro2.pdf .wikipedia. Microbiología y Parasitologìa Humana: Bases etiológicas de las enfermedades infecciosas.es/personal_pdi/ciencias/jolope/GUIONPRACTICAS050 6. Pp. Editorial Panamericana.CONCLUSION: Por medio de esta práctica se logró utilizar las técnicas aprendidas durante el transcurso del curso. Se logró aprender a realizar algunos de los métodos que existen para cultivar bacterias y de esta manera observar sus características tanto macroscópicas como microscópicas e interpretación de las mismas.ucm. 2ºed. con lo que se observó que para cada bacteria existen características diferentes que son las que las identifican y diferencian de otras bacterias.doc http://es.257-429 http://www.uam. BIBLIOGRAFIA: • • • • • Romero Cabello. México 2001.org/wiki/ http://www. R. por lo que de esta manera se le puede llegar a identificar con su correcta siembra y observación para análisis posteriores o simplemente para la identificación de una bacteria en algún medio u organismo.

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