PRCTCA # 11

ENTEROBACTERACEAE
OBJETIVOS:
Enumerar las principales especies pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, sealando su importancia en salud
publica y en los laboratorios farmacuticos
Familiarizarse con las caractersticas microscpicas y las propiedades culturales de este importante grupo bacteriano
Elegir los medios de cultivo involucrados en el aislamiento y la diferenciacin presuntiva de estas bacterias,
sealando los componentes que los hacen selectivos y diferenciales
Seleccionar los medios de cultivo empleados en la diferenciacin bioqumica de los diversos gneros involucrados en
este grupo bacteriano.
Describir tcnicas y fundamentos relacionados con la deteccin de estos microorganismos en las muestras clnicas,
en materia prima y en productos farmacuticos.
INTRODUCCIN
ENTEROBACTERIACEAE
Este grupo de organismos incluye a varios que causan infecciones primarias del tracto gastrointestinal humano. Por
tanto, se les refiere como entricos (sin importar si causan o no enfermedades intestinales). Las bacterias que afectan el
tracto gastrointestinal, incluyen a ciertas cepas de E. coli y Salmonella, a las 4 especies de Shigella y a Yersinia
entercoltica. La enfermedad reumtica, el sndrome de Reiter, puede ser resultado de una previa exposicin a
Salmonella, Shigella, o Yersinia.
Enterobacteriaceae es una familia de bacterias Gram negativas que contiene ms de 30 gneros y ms de 100 especies
que pueden tener morfologa de bacilos o cocos. Los miembros de esta familia forman parte de la microbiota del
intestino (llamados coliformes) y de otros rganos del ser humano y de otras especies animales. Algunas especies
pueden vivir en tierra, en plantas o en animales acuticos. Sucumben con relativa facilidad a desinfectantes comunes,
incluido el cloro. Con frecuencia se encuentran especies de Enterobacteriaceae en la bio-industria: para la fermentacin
de quesos y productos lcteos, alcoholes, tratamientos mdicos, produccin de toxinas en el uso de cosmticos,
fabricacin de agentes antivirales de la industria farmacutica, etc.
Caractersticas
En la definicin clsica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios bsicos, adicional a la aparicin de nuevos
mtodos taxonmicos para incluir a ciertos gneros que no cumplen con todos los siguientes criterios, pero que forman
parte de esta familia:
Son bacterias gram negativas, la mayora bacilos, otros cocobacilos y otros pleomrficos.
No son exigentes, son de fcil cultivo.
Son oxidasa negativo, es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.
Son capaces de reducir nitrato en nitrito.
Son anaerbicos facultativos.
Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaerbicas con o sin la produccin de gas
Muchos gneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos gneros no son mviles.
Adicional a ello, las Enterobacteriaceae no forman esporas, algunas producen toxinas y pueden ser encapsuladas y son
organismos catalasa positivos. Son quimioauttrofos, y necesitan para su crecimiento compuestos simples de carbono y
nitrgeno, generalmente slo con D-glucosa, aunque algunas requieren aminocidos y vitaminas. La temperatura
ptima de crecimiento es de entre 22C y 37C.
Las diferencias entre los nombres de los diversos gneros provienen de criterios ms precisos, como la fermentacin de
los diferentes azcares, la produccin o no de azufre, la presencia de enzimas metablicas (-galactosidasa,
desaminasas, descarboxilasas), etc. Los serotipos de importancia medica y sanitaria pueden distinguirse entre s por la
presencia o ausencia de antgenos en su constitucin celular, tales como en el lipopolisacrido (antgeno O), el antgeno
flagelar (antgeno H) o el antgeno capsular (antgeno K).
Ecologa
La mayora de las especies pueden aislarse del intestino del hombre y de otros animales, de all su nombre
enterobacteria (del griego entron, intestino. Pueden ser flora o ser transitorias en la cavidad bucal, en las regiones
hmedas de la piel, en especial el perineo, las fosas nasales y las vas genitales femeninas. Son abundantes en la
naturaleza, en particular en medios hmedos y, por ser expulsadas por las heces, funcionan como medidores
epidemiolgicos de salubridad e higiene poblacional.
En el intestino, representan una fraccin importante de la flora aerbica, se encuentran en grandes nmeros en el colon,
donde contribuyen a la degradacin de residuos alimenticios y a la produccin de gas intestinal como parte de la
fermentacin.
La especie Escherichia coli juega una funcin importante en el control de otras especies intestinales, constituyendo
cerca del 80 por ciento de la flora aerbica intestinal en una concentracin aproximada de 10
8
en la materia fecal. Otras
especies de Enterobacteriaceae con una presencia numerosa intestinal son Proteus y lebsiella, mientras que otras
especies, como Citrobacter, !a"nia, Pro#i$encia y Enterobacter estn presentes de manera irregular.
En ciertas oportunidades, los comensales del intestino pueden resultar patognicos como oportunistas en infecciones
urinarias, pulmona, septicemia o sobreinfecciones, en especial en inmunosuprimidos, en el uso de ciertos antibiticos,
desnutricin, etc.
La presencia de Enterobacteriaceae dentro del organismo es anormal y determina la aparicin de infecciones, cuya
gravedad depende del punto de entrada. ntroducidas por los alimentos, provocan problemas intestinales al adherirse y
atravesar la barrera de la mucosa gastrointestinal, manifestada por diarreas y deshidratacin. Ciertas especies provocan
patologas especficas:
La especie Salmonella t%&hi es responsable de la fiebre tifoidea.
La especie Shigella $%stenteriae es el agente responsable de la disentera bacilar.
La especie Escherichia coli enterot'(ica es responsable de la gastroenteritis infantil.
La especie Yersinia &estis es responsable de la peste.
La especie Serratia marcescens usualmente causa infecciones nosocomiales como resultado de tratamiento en
un hospital.
Las Enterobacteriaceae incluyen a organismos que resultan patgenos para el ser humano como la Escherichia coli o la
Salmonella, especialmente importantes en la mortalidad infantil en pases en desarrollo

y patgenos para las plantas
como Erwinia, en la mayor parte de los casos causando infecciones oportunistas. Todos los bacilos de
Enterobacteriaceae son resistentes a antimicrobianos comunes, tales como la penicilina, la meticilina y la clindamicina,
entre otros.
Aislamiento e i$enti"icaci'n $e Enterobacteriaceae
Estas bacterias son bacilos Gram-negativos anerobios facultativos. Carecen de la enzima citocromo oxidasa y por ello
se mencionan como oxidasa negativos. Frecuentemente son aislados a partir de materia fecal en agar conteniendo
lactosa y un indicador de pH. Las colonias que fermentan la lactosa producirn suficiente cido para causar el vire del
indicador. E. coli es un fermentador de la lactosa, mientras que Shigella, Salmonella y Yersinia no son fermentadores.
Las cepas "No-patgenas" de E. coli (y otras bacterias entricas lactosa-positivas)
frecuentemente se encuentran en heces normales. Debido a que es difcil diferenciarlos de
las cepas "patgenas" de E. coli) las colonias lactosa-negativas con frecuencia son las que
se identifican en las heces. Todas las Enterobacteriaceae aisladas de otros sitios del
organismo (los cuales contienen menor nmero de bacterias [ej. la orina] o que
normalmente son estriles [ej. sangre]) se identifican bioqumicamente. Los serotipos
importantes se pueden diferenciar por sus antgenos como el antgeno O
(lipopolisacrido), el H (flagelar) y el antgeno K (capsular). Sin embargo, la serotipificacin
generalmente no se realiza en el laboratorio clnico de rutina.

Fermentadores de lactosa en agar Hektoen, el cual contiene sales biliares e indicadores de la presencia de cido (azul
de bromotimol y fuchsina cida). Las bacterias gram-positivas se inhiben en estos medios ya que el agar es selectivo
para las gram-negativas. Las bacterias fermentadoras de lactosa forman colonias anaranjadas
mientras que las no fermentadoras aparecen en verde o verde-azul. Esto es especialmente til para
distinguir patgenos potenciales de la flora normal en muestras fecales. Sin embargo, es difcil
distinguir entre los mismos no-fermentadores. El microorganismo en sta placa podra ser
Salmonella, Proteus, o Shigella.

Crecimiento de un no fermentador de la lactosa en agar de MacConkey el cual contiene sales biliares y cristal violeta,
componentes que inhiben el crecimiento de las bacterias gram-positivas. El agar tambin contiene lactosa y un
colorante rojo que diferencia a los fermentadores de lactosa de los no-fermentadores. Las colonias de las bacterias que
fermentan la lactosa van desde un color rosa hasta rojo mientras que las no fermentadoras son incoloras o
2
transparentes. Este agar no distingue entre las no- fermentadoras de lactosa; un crecimiento como este podra indicar la
presencia de varios microorganismos como- Proteus, Salmonella o Shigella, por ejemplo. En una muestra fecal, estas
colonias seran suficiente evidencia para continuar con ms pruebas de identificacin.
Crecimiento de bacterias gram-negativas que no son capaces de fermentar la lactosa en agar de
eosina azul de metileno (o EMB por sus siglas en ingls) el cual contiene sales biliares y colorantes
que inhiben a las bacterias gram-positivas. El crecimiento en agar EMB es una herramienta
diagnstica til para distinguir entre los fermentadores de lactosa de los no-fermentadores, los
cuales aparecen incoloros. Salmonella y Shigella son patgenos que no fermentan la lactosa, as
pueden ser distinguidos de la flora intestinal mas comn, la cual s lo hace.

E. Coli del tipo hemorrgico. Son bacilos procariontes Gram-negativos, entricos, anaerobios facultativos.
Potencialmente fatales a los humanos, que se contraen cuando la carne contaminada se cocina de manera inadecuada.

In"ecciones &or enterobacterias
El grupo de enterobacterias incluye la bacteria Enterobacter) Escherichia) lebsiella) *organella) Proteus) Pro#i$encia)
Salmonella) Serratia) Shigella % Yersinia. Aunque Escherichia coli +E. coli, normalmente habita en el intestino,
determinadas cepas de E. Coli puede causar infecciones intestinales que producen sangre, acuosa o diarrea
inflamatoria (diarrea del viajero). En los nios, la diarrea causada por determinadas cepas de E. Coli puede conducir a
la destruccin de los glbulos rojos y la insuficiencia renal (sndrome hemoltico-urmico). E. Coli tambin pueden
causar infecciones del tracto urinario (especialmente en mujeres) y la bacteriemia y meningitis en recin nacidos
(especialmente los recin nacidos prematuros). Las infecciones causadas por E. Coli son diagnosticadas por la
bsqueda de las bacterias en cultivos de sangre o fluidos corporales. La infeccin se trata con antibiticos, como
trimetoprim-sulfametoxazol
lebsiella) Enterobacter) Serratia y las infecciones son usualmente adquiridos en el hospital, principalmente por
personas que tienen una disminucin de la capacidad para luchar contra las infecciones. Estas bacterias suelen infectar
la orina o de las vas respiratorias, a pesar de las quemaduras y las heridas a veces se infectan. La neumona causada
por lebsiella es una rara, pero grave, la infeccin pulmonar que es ms comn en los alcohlicos, las personas
mayores y las personas con diabetes. Normalmente, las personas con esta infeccin tosa y pegajoso de esputo que es
de color marrn oscuro o rojo oscuro. La neumona puede llevar a la formacin de abscesos (colecciones de pus) en el
pulmn o en el revestimiento de los pulmones (empiema). Si tratan con tiempo suficiente, esta neumona puede curarse
con antibiticos por va intravenosa, por lo general las cefalosporinas o quinolonas.
Proteus normalmente est presente en el suelo, el agua y las heces. Tambin puede causar infecciones profundas, en
particular en el tracto urinario y de la cavidad abdominal.
1
Los bacilos gramnegativos pertenecientes a Enterobacteriaceae son los aislamientos bacterianos recuperados con ms
frecuencia de muestras clnicas. Distribuidos en la naturaleza en forma amplia, estos microorganismos se encuentran en
el suelo y el agua, sobre las plantas, y como lo indica el nombre de la familia, dentro del tracto intestinal de seres
humanos y animales. Antes del advenimiento de los antibiticos, la quimioterapia y las medidas inmunosupresoras, las
enfermedades infecciosas causadas por Enterobacteriaceae estaban relativamente bien definidas. Se saba que los
sndromes diarreicos y disentricos, acompaados por fiebre y septicemia en los casos clsicos de fiebre tifoidea eran
causados por especies de Salmonella y Shigella. Se saba que los casos clsicos de neumona, caracterizados por la
produccin de esputo rojo ladrillo o jalea de grosella, eran causados por el bacilo de Friedlander (Klebsiella
pneumoniae). Escherichia coli, especies de Proteus, y varios miembros del grupo Klebsiella-Enterobacter se
recuperaban comnmente de heridas traumticas, contaminadas con tierra o material vegetal o de incisiones
abdominales luego de una ciruga gastrointestinal.
Por lo tanto, los miembros de Enterobacteriaceae pueden ser incriminados en virtualmente cualquier tipo de enfermedad
infecciosa y recuperados de cualquier muestra recibida de laboratorio. Los pacientes inmunocomprometidos o
debilitados son altamente susceptibles a las infecciones adquiridas en los hospitales, despus de la colonizacin con
cepas ambientales o a continuacin de procedimientos invasivos, como caterizacin, broncospopa, colposcopia o
biopsias quirrgicas, en las cuales las membranas mucosas se traumatizan y se cortan.
El shock endotxico es una manifestacin potencialmente letal de la infeccin por bacterias gramnegativas, incluidas las
Enterobacteriaceae. Las endotoxinas son lipopolisacridos farmacolgicamente activos que estn contenidos dentro de
las paredes celulares de las especies gramnegativas. Estos lipoposacridos estn estructuralemente en tres capas:
1) una porcin variable externa de carbohidratos que determinan la especificidad antignica.
2) Un core medio de polisacrido que es estructuralmente similar entre las especies y
3) Una porcin lipdica central altamente conservada llamada lpido A.
1
http://www.merck.com/
3
Los efectos biolgicos de las endotoxinas se han demostrado en forma experimental-. Cuando se inyectan en animales
pequeas cantidades por va intravenosa producen fiebre, leucopenia, hemorragia capilar, hipotensin y colapso
circulatorio.
2
Enterobacteriaceae
-neros.
Alishe/anell
a
Alterococcus A0uamonas Aranicola Arseno&honu
s
A1oti#irga
Blochmannia Brenneria Buchnera Bu$#icia Buttiau(ella Ce$ecea
Citrobacter 2ic3e%a E$/ar$siell
a
Enterobacter Er/inia Escherichia
E/ingella -rimontella !a"nia lebsiella lu%#era 4eclercia
4eminorella *oellerella *organella Obesumbacteriu
m
Pantoea Pectobacteriu
m
Phlomobacte
r
Photorhab$u
s
Plesiomona
s
Pragia Proteus Pro#i$encia
Rahnella Raoultella Salmonella Samsonia Serratia Shigella
So$alis Tatumella Trabulsiella 5iggles/orthia 6enorhab$us Yersinia
Yo3enella
Escherichia coli
A nivel de especies, E. coli % Shigella son indistinguibles. Por razones prcticas (principalmente para evitar confusin),
no estn colocadas en el mismo gnero. No es sorprendente que haya mucho traslapamiento entre las enfermedades
que causan ambos microorganismos.
1) E. coli Enteropatgena (EPEC). Ciertos serotipos se encuentran comnmente asociados con diarrea en nios.
Aparece una lesin morfolgica con destruccin de las micro-vellosidades intestinales sin invasin del microorganismo,
lo cual sugiere que es importante la adherencia. Clnicamente se observa fiebre, diarrea, vmito y nusea. Normalmente
no se presenta sangre en las heces.
2) E. coli Enterotoxignica (ETEC) produce una diarrea parecida al clera pero en grado mucho mas leve. Estas cepas
causan tambin la "diarrea del viajero". Producen dos tipos de toxinas codificadas en plsmidos.
a) Toxinas lbiles al calor o termolbiles (HLT), son similares al colergeno. Activan a la adenil-ciclasa produciendo
AMP-cclico con un incremento en la secrecin de agua y de iones.
b) Toxinas termo estables (HST). Activan a la guanilato ciclasa con inhibicin de la incorporacin de iones desde el
lumen intestinal. Diarrea acuosa, fiebre y nusea es el resultado en ambos casos.
3) E. coli Enteroinvasiva (EEC ) produce una disentera.
4) E. coli Enterohemorrgica (EHEC).
3
Escherichia coli es una de las bacterias ms abundantes en el tubo digestivo de los mamferos. En condiciones
normales, constituye una parte esencial de la flora bacteriana humana, a la que se atribuyen efectos beneficiosos para
la salud. Existen, sin embargo, cepas capaces de provocar alteraciones graves en forma de enteritis. Los sntomas
pueden revestir ocasionalmente gravedad en lactantes.
Las cepas responsables de patologa se han venido describiendo desde la dcada de los aos 40 bajo la denominacin
de Escherichia coli enteropatgena clsica (ECEP clsica). Con posterioridad, se han ido aadiendo a este grupo otras
cepas igualmente patolgicas que causan enteritis por un mecanismo invasor rigurosamente idntico al de las shigelas,
el microorganismo responsable de la disentera bacilar. A este grupo se le denomin E. coli enteroinvasora (ECE).
No son estos dos los nicos grupos patgenos. Desde finales de los 60 tambin se conocen otros tipos que producen
enteritis por liberacin de enterotoxinas de dos tipos, termoestable (ST) y termolbil (LT); este grupo de cepas se
denomina E. coli enterotoxignica (ECET) y son poco frecuentes en nuestro medio, pero causan diarrea en los viajeros
a pases exticos. La lista se completa con un grupo de patgenos que causa enteritis por liberacin de verotoxina (VT),
para la que distintos organismos internacionales de salud recomiendan, como objetivo prioritario, extremar su vigilancia.
Causa $e la enteritis hemorr7gica
E. coli forma parte de la flora intestinal y slo unas cepas especficas de transmisin feco-oral son las causantes de
brotes infecciosos El descubrimiento de esta bacteria como causa de enteritis hemorrgica se confirm en Estados
Unidos y Canad a principios de los 80. Su comportamiento y su difusin, al ser un microorganismo intestinal, se asocia
a Salmonella, por lo que las medidas preventivas bsicas a tomar son similares para ambos casos. Esto es, debe
extremarse la higiene personal, sobre todo en el caso de ser portadores del patgeno, y evitar el consumo de alimentos
crudos o poco o deficientemente cocinados.
2
Diagnstico Microbiolgico. Koneman, etal. Editorial Panamericana. Quinta edicin pag: 172.
3
http://pathmicro.med.sc.edu/Spanish/chapter11.htm
4
Su deteccin, por otra parte, es relativamente simple por los sistemas de control rutinario de cualquier laboratorio.
Aunque la normativa actualmente vigente no lo exija, desde distintos sectores se ha venido insistiendo en la necesidad
de aplicar estas rutinas con el fin de limitar un riesgo considerado evitable. El control se plantea de forma especial para
con los alimentos crudos como la carne y sus derivados, el pescado y sus derivados, y los vegetales. La simple
presencia de este microorganismo, o un recuento superior a 100 ufc/g o ml indicar una contaminacin fecal con el
consiguiente riesgo de que existan cepas patgenas.
4as #as $e in"ecci'n
Aunque en general las enteritis cursan de forma caracterstica (colitis hemorrgica afebril), la causada por la bacteria
verotoxignica da lugar a manifestaciones variables que van de formas muy leves a formas graves con sangre (colitis
hemorrgica). Se ha podido constatar que la fiebre es relativamente frecuente en los casos de enteritis causada por la
variante O157:H7, as como la complicacin con el sndrome hemoltico-urmico. Los mecanismos por los cuales se
producen no se conocen con precisin.
La infeccin por E. coli verotoxignica parece ser de distribucin universal, aunque irregular, pero su prevalencia
solamente se conoce con cierto detalle en los Estados Unidos, Canad, Argentina y Europa Occidental, ya que en el
resto de pases no ha sido estudiada sistemticamente. Diversos autores han estudiado en Espaa la frecuencia de La
enfermedad se transmite por va feco-oral y el vehculo ms frecuente de infeccin humana es la carne de bovino,
fundamentalmente las hamburguesas poco hechas. Tambin se ha documentado la infeccin vehiculada por otros
alimentos como carne de pavo, salami, leche, yogur, mayonesa, ensaladas, vegetales crudos y agua. Los brotes
epidmicos son frecuentes en diversos pases como Estados Unidos, Reino Unido, Australia, Argentina y Japn, entre
otros. La transmisin de persona a persona tambin ha sido demostrada y la dosis infectante mnima se estima
alrededor de las 100 bacterias. Las distintas formas de Escherichia coli suelen ser resistentes a las temperaturas
extremas y a los cidos dbiles.
Los bvidos parecen constituir el principal reservorio de E. coli O157:H7, encontrado con diferentes prevalencias que
oscilan, en animales sanos, entre el 7% y el 30% de los casos estudiados. Parece que estas cepas no son patognicas
para los animales, aunque algunos investigadores las encuentran con ms frecuencia en aquellos que tienen diarrea. La
prevalencia de otros serotipos de E. coli verotoxignicos en los animales se desconoce, aunque hay informes de su
aislamiento en bvidos, vidos, cabras, perros y gatos. Desde 1986, diversos grupos han efectuado estudios
prospectivos en nuestro pas, que muestran una incidencia muy baja de E. coli verotoxignica, inferior al 0,3% de los
pacientes estudiados. En nuestro pas se han detectado algunos brotes, todos ellos con un limitado nmero de personas
afectadas.
4
Escherichia coli enteropatgena (EPEC) es una de las principales causas de diarrea en nios menores de dos aos en
pases en vas de desarrollo. La principal caracterstica histopatolgica de la infeccin es una lesin que induce la
EPEC en el intestino conocida como la lesin A/E (adherencia y eliminacin). Las bacterias se a$hieren a los enterocitos
y permiten la acumulacin de la actina del citoesqueleto en la regin apical de la clula, hasta formar una estructura de
tipo pedestal y causar la eliminaci'n de las microvellosidades intestinales. A pesar de que se conoce de modo
detallado el proceso de formacin de los pedestales de actina, an no se ha esclarecido el mecanismo global de la
diarrea que induce EPEC. La diarrea se ha vinculado con: a) la destruccin de las microvellosidades del enterocito, b) la
salida masiva de iones hacia la luz intestinal y c) la secrecin de alguna enterotoxina.
En estudios realizados en pases en vas de desarrollo se ha demostrado que EPEC es uno de los principales agentes
participantes en la diarrea infantil, con elevadas tasas de morbilidad y mortalidad. El diagnstico microbiolgico de la
infeccin se realiza con metodologas adicionales a las utilizadas con regularidad en el laboratorio de microbiologa
clnica, entre ellas las siguientes: a) serotificacin, b) ensayo de adherencia, c) prueba de FAS (tincin fluorescente para
actina) y d) deteccin especfica de genes que codifican a protenas incluidas en la patognesis, como el b"&A y eae.
E scherichia coli es el principal anaerobio facultativo de la flora microbiana que reside en el colon humano.
El husped se coloniza desde el nacimiento con una o dos cepas que residen de manera permanente en el intestino y
establecen una relacin simbitica con el individuo durante toda la vida.1,2 Sin embargo, se ha precisado que seis
grupos patgenos o patotipos de E. coli ocasionan diarrea en sujetos sanos: E. coli enterotoxignica (ETEC),
enteroinvasiva (EEC), enterohemorrgica (EHEC), enteroagregativa (EAEC), adherente difusa (DAEC) y
enteropatgena (EPEC).
E. coli enteropatgena (EPEC, por sus siglas en ingls) fue la primera en describirse y es tal vez uno de los
microorganismos ms estudiados. La infeccin con EPEC es una de las causas ms comunes de diarrea infantil en
pases en vas de desarrollo, como Mxico.
Esto ltimo se debe en gran medida a que en el mbito local se desconocen muchos aspectos relevantes acerca de la
virulencia y el diagnstico eficaz de EPEC, lo que repercute en el control adecuado de la enfermedad diarreica en los
nios.
4
http://www.consumaseguridad.com/sociedad-y-consumo/2003/11/07/9262.php
5
Escherichia coli entero&at'geno
A mediados de la dcada de los cuarenta se identificaron en nglaterra brotes de diarrea en nios de guarderas
asociados a E. coli. Las bacterias se llamaron E. coli enteropatgenas (EPEC) para diferenciar a este tipo virulento de
las bacterias de flora normal. Una de las principales caractersticas de la infeccin es la diarrea de tipo acuoso, que
puede ocurrir en diversos grados de intensidad. Adems, es comn que los nios infectados presenten vmito y fiebre.
El periodo de incubacin vara de 3 a 24 horas despus de que el individuo ingiere en condiciones experimentales es un
inculo grande de bacterias (109 a 1010 UFC); se cree que el inculo que infecta de manera natural a los nios es
mucho menor.
Una vez que la bacteria alcanza la mucosa intestinal, comienza a desencadenarse un mecanismo de patogenicidad
complejo, que tiene como resultado la produccin de diarrea. Los nios menores de dos aos son la poblacin infantil
con mayor susceptibilidad a la infeccin, y de ellos, la mayor prevalencia se ha observado en lactantes hasta de seis
meses.
5
Salmonella t%&hi % &arati&h%
Salmonella t%&hi , y Salmonella &arati&h% A, B o C. colonizan nicamente a los humanos, lo cual hace necesaria para la
transmisin la presencia de casos humanos o de portadores crnicos; ingresan por va digestiva y llegan al intestino,
pasando finalmente a la sangre, causando una fase de bacteriemia hacia la primera semana de la enfermedad. La
cantidad necesaria para producir la infeccin es de 10-5 y 10-9. Las Salmonellas penetran por la boca llegan al intestino
delgado y se multiplican durante un periodo de incubacin de 3 a 4 das implantndose en las vellosidades del leon. A
travs de las placas de Peyer llegan al Epitelio ntestinal
Serotipo: Serogrupo: Sndrome
Salmonella &arati&hi A Fiebre entrica
Salmonella &arat%&hi B Fiebre entrica
Salmonella &arat%&hi C Fiebre entrica
Salmonella t%&hi D Fiebre entrica
S. Typhi tiene una cantidad extraordinariamente grande de cepas: ms de 2.000 estn descriptas; es el agente
infeccioso de la fiebre tifoidea. Otras serovariedades son Typhimurium (o S. typhimurium) puede producir
gastroenteritis humana, referida como una salmonelosis.
Esta bacteria se encuentra a menudo en pollos y sus huevos y en reptiles como las tortugas, por eso no es
recomendable mantener a estos animales como mascotas.
S. t%&hi es la nica serovariedad que no produce gas en la fermentacin de los azcares.
Clsicamente se distinguan tres nicas especies patgenas primarias: S. t%&h%, S. cholerae8suis y S. enteriti$is. A su
vez, segn la serotipificacin de Kauffman y White, eran clasificadas en ms de 2000 serotipos en base a los antgenos
flagelares H (proteicos) y antgenos somticos O (fraccin polisacrida de lipopolosacarido bacilar). S. t%&hi posee
adems un antgeno de virulencia (Vi).
S. Parat%&hi se clasi"ica en9 Paratyphi A, Salmonella Paratyphi C y Salmonella Paratyphi B (fiebre paratifoidea). Los tres
primeros microorganismos son patgenos exclusivos del hombre y S. Paratyphi B se puede encontrar tambin en
animales.
6
Proteus
Clasi"icaci'n cient"ica
Bacteria
Filo: Proteo bacteria
Clase: Gamma Proteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Gnero: Proteus
Es&ecies.
P. mirabilis
P. morganii
P. &enneri
P. rettgeri
P. #ulgaris
5
http://www.insp.mx/rsp/_files/File/2007/Septiembre%20Octubre/7-patogen.pdf
6
Biologa de los Microorganismos Brock PAG. 938,978974,977-78
6
Proteus es un gnero de bacterias gramnegativas, que incluye patgenos responsables de muchas infecciones del
tracto urinario. Las especies de Proteus normalmente no fermentan lactosa por razn de tener una galactosidasa, pero
algunas se han mostrado capaces de hacerlo en el test TS (Tri&le Sugar Iron). Son oxidasa-negativas y ureasa-
positivas. Algunas especies son mtiles. Tienden a ser organismos pleomrficos, no esporulados ni capsulados y son
productoras de fenilalanina desaminasa. Con la excepcin de P. mirabilis, todos los Proteus reaccionan negativos con la
prueba del indol.
!7bitat. Proteus es un gnero $e bacterias ubicuo) resi$ente $el tracto intestinal $el hombre % otros animales.
Culti#o. Crecen en medios corrientes y moderadamente selectivos a temperatura corporal de 37C. Crecen formando
capas diseminadas por virtud de su gran motilidad. Existen variantes inmviles que forman colonias lisas.
*or"ologa
La estructura antignica est compuesta por antgeno somtico O, flagelar H y superficial K. El antgeno flagelar H
contribuye a la capacidad invasora de las vas urinarias. La variante X del antgeno somtico O est presente en
algunas cepas de P. mirabilis. Otros grupos antignicos definidos son el OX2, OX19 y OXK.4 El grupo OX19 (y a veces
el grupo OX2) da reacciones cruzadas (aglutinacin) en pacientes con Ric3ettsia &ro/a1e3ii y sa es la base de la
prueba de Weil Flix.
Patogenia
Hay tres especies que causan infecciones oportunistas en el hombre: P. #ulgaris, P. mirabilis, y P. &enneri. Causan
infecciones urinarias (ms del 10% de complicaciones del tracto urinario incluyendo clculos y lesiones celulares del
epitelio renal), enteritis (especialmente en nios), abscesos hepticos, meningitis, otitis media y neumona con o sin
empiema, entre otros.

Es un frecuente invasor secundario de quemaduras y heridas, as como infecciones
nosocomiales.
Todas las especies de Proteus son resistentes a la ampicilina. P. mirabilis es sensible a la penicilina.
Factores de virulencia
Flagelos
Fimbrias
Protenas de membrana
Ureasa
Hemolisinas
No producen toxinas solubles
7
*e$ios $e culti#o.
*AC CONEY
Medio empleado ampliamente para aislar e identificar selectivamente a enterobacterias como Salmonellas, Shigella y
coliformes a partir de heces fecales, orinas, aguas negras y diversos alimentos.
:sos. El espcimen puede sembrarse directamente en la placa por estra superficial, o bien inocularlo en medios
lquidos d enriquecimiento, tales como caldo tetrationato, caldo selenito cistina o caldo GN. ncubar placas y caldos a
35C de 18 a 24 horas. Hacer resiembras de estas ltimas en placas de Agar de Mac Conkey y volver a incubar.
Se recomienda sembrar simultneamente las muestras en otros medios mas selectivos tales como Eosina y Azul de
metileno, Agar SS, Agar Tergitol 7, Agar XLD, Agar Entrico Hektoen, Agar Sulfito de Bismuto (altamente especfico
para Salmonella tiphy), Agar Verde Brillante, especial para Salmonellas.
Los grmenes Gram positivos son inhibidos por las sales biliares y el cristal violeta. Las enterobacterias fermentadoras
de la lactosa bajan el pH del medio que es detectado por el indicador rojo neutro dando colonias rojas o rosadas. Las no
fermentadoras de la lactosa dan colonias transparentes, incoloras o ambarinas.
En el Agar MacConkey crecen tambin bacilos Gram negativos que no pertenecen a la familia Enterobacteriaceae,
como Pseudomonas y Aeromonas. Asimismo, pueden desarrollarse en nmero reducido colonias puntiformes de
Stre&tococcus ;ecales de color rojo y de algunos estafilococos cuyas colonias son pequeas, opacas de color rosa
plido.
Por ltimo, este medio puede usarse en la diferenciacin de especies de Mycobacterium. (MANUAL BOXON 26)
CARACTER<STICAS 2E 4ASA CO4ONIAS *ICROOR-ANIS*
7
Guentzel MN (1996). Escherichia) lebsiella) Enterobacter) Serratia) Citrobacter) an$ Proteus. In. Barron=s *e$ical
*icrobiolog% +Barron S et al) e$s.,) >th e$.) :ni# o" Te(as *e$ical Branch.
7
O
Puntiformes, rosa plido, opacas y escasas Estafilococos
De rojas o rosadas. No son mucoides.
Pueden rodearse de un precipitado opaco de sales biliares.
E. Coli
Grandes, rosadas. No mucoides Enterobacter
ncoloras, hasta caf verdosas. Olor dulzaino caracterstico Pseudomonas
Escasas, puntiformes, rojas, opacas y
con un halo claro como de 1mm de dimetro alrededor de la
colonia
Enterococos
A-AR *:E44ER !INTON
Pruebas de sensibilidad a antibiticos y cultivo de Neisseria
En un medio muy rico en nutrientes que se recomienda para el aislamiento y desarrollo de gonococos y meningococos.
Tambin se emplea, sobre todo, en las pruebas de sensibilidad (antibiogramas)
Si se desea, pueden prepararse placas o tubos de agar chocolote, previa adiccin de sangre de carnero o humana,
preferiblemente la primera, calentando en bao Mara a 80C 10 minutos. No sobrecalentar el medio en ningn
momento.
:sos. Es un medio til para el desarrollo de bacterias del genero Neisseria. Se recomienda incubar las cajas a 35C, en
atmsfera de CO2. El medio deber mantenerse hmedo en su superficie; esto puede lograrse si dentro de la jarra,
envases de hojalata, frasco de vidrio de boca ancha, etc., se coloca una esponja o algodn hmedo y una vela
encendida, cerrando luego hermticamente.
Para realizar las pruebas de sensibilidad con sulfonamidas, las cajas deben examinarse despus de 12 a 18 horas de
incubacin. Despus de este tiempo se tendrn que revisar peridicamente las zonas de inhibicin ya que el
microorganismo puede desarrollar cuando la concentracin del agente antimicrobiano comienza a disminuir.
Se obtiene mejores resultados para aislar Neisserias patgenas preparando un agar chocolate con el Mueller Hinton
adicionndole a cada 100 ml del medio terminado y fluido 1.0 ml de la suspensin VCN, mas 1.0 ml del
polienriquecimiento. (MANUAL BOXON 28)
BASE 2E CA42O RO?O @ENO4
Fermentacin de carbohidratos; Medio usado para determinar las reacciones de fermentaciones.
:sos. El base de caldo rojo de fenol puede usarse en los estudios de fermentacin de muchas especies bacterianas.
Los tubos de control sin carbohidratos deben inocularse e incubarse en paralelo con las pruebas de fermentacin.
Deben examinarse los cultivos frecuentemente ya que los diferentes carbohidratos pueden ser utilizados a velocidades
variables. La aparicin de color amarillo es indicio de fermentacin.
Para el cultivo de microorganismos anaerobios, el medio debe estar preparado recientemente o calentarse y enfriarse
antes de su uso. (BOXON 41)
Ingre$ientes. +&! ;.> A.B,
Peptona (proteosa o digerido pancretico de casena) 10g
Extracto de carne 1g
Cloruro de sdio 5g
Rojo fenol 0.018g
gua desionizada 1000ml
RoCo "enol como in$ica$or $e &!
a) cido (fermentacin): color amarillo, pH 6.8
b) Alcalino: color rosado rojo, pH 8.4
c) Medio sin inocular: color naranja rojizo, pH 7.4
nterpretacin:
1) Positivo (A/F)
a) cido: color amarillo, pH 6.8
b) Produccin de gas variable
Positivo para el gas (G, A )
8
Negativo para el gas
2) Tardo: Color anaranjado
3) Negativo
a) Color rosa rojizo
b) Peptonas utilizadas con la resultante alcalinidad, pH 8.4
8
AGAR SALMONELLA SHGELLA !SS"
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de
heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.
@un$amento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas,
de la mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio.
El indicador de H2S es el citrato frrico.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo
el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y
producen colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro de
hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo.
@'rmula +en gramos &or litro,
nstrucciones
Pluripeptona 5.0
Suspender 60 g del polvo por litro de agua
destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta
homogeneizar. Calentar a ebullicin durante 2
o 3 minutos. NO ESTERLZAR EN
AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y distribuir
unos 20 ml por placa. Secar la superficie del
medio unos minutos en la estufa.
Extracto de carne 5.0
Lactosa 10.0
Mezcla de sales biliares 8.5
Citrato de sodio 8.5
Tiosulfato de sodio 8.5
Citrato frrico 1.0
Agar 13.5
Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0.025
pH final: 7.0 0.2
Siembra
Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo
Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M.B. o de agar Mac Conkey.
Incubaci'n
Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resulta$os
Microorganimo Co!onia
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro
Shigella flexneri ncoloras
Shigella sonnei ncoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro
Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas
Enterococcus faecalis ATCC 29212 ncoloras, de muy escaso crecimiento
Caractersticas $el me$io. Medio preparado: rojo naranja.
9
8
MacFaddin, Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia clnica 3!"dicin# "$%
Panamericana, &uenos ares ar'entina 2((3% pp% 5), 67, 68
)
http://www.mcd.com.mx/
)
A-AR S:4@ITO 2E BIS*:TO
Es un medio de Wilson y Blair modificado y altamente selectivo para asilar Salmonella typhi, asi como otros bacilos
entericos de heces, aguas negras, aguas de bebidas y diversos alimentos.
Formula aproximada en gramos:
Mezcla de peptonas....................10.0
Extracto de carne.........................5.0
Dextrosa.......................................5.0
Fosfato disdico...........................4.0
Sulfato ferroso..............................0.3
ndicador de Sulfito de Bismuto....8.0
Verde Brillante............................0.025
Agar............................................20.0
Usos:
Junto a este medio, por ser fuertemente inhibidor, se aconseja inocular tambin otros medios selectivos menos
inhibidores, tales como Agar Eosina y Azul de Metileno, Agar Mac Conkey, Agar Tergitol 7, Agar Entrico Hektoen, Agar
SS, etc.
Por lo comn, el agar Sulfito de Bismuto se siembra por estra superficial tratando de obtener colonias muy bien
aisladas. Pueden hacerse inoculaciones por vaciado de una suspensin de heces como del 10% en agua destilada o en
solucin salina estriles. Vaciar aproximadamente 5 ml de la suspensin en no menos de 20 ml del medio previamente
fundido y enfriado a unos 45-50C. Mezclar perfectamente, dejar que solifique e incube de 24 a 48 hrs.
Las placas una vez solidificadas deberan presentar una opacidad crema uniforme,y gradualmente un color verde muy
plido. Si se guarda en refrigeracin, el medio que esta en forma reducida, se ira oxidando poco a poco hasta adquirir
un color francamente verde. Al llegar a este momento descrtelo. Cook (1952) recomienda dejarlo en refrigeracin
durante 4 dias antes de usarlo para aislar Salmonella typhimurium con el fin de hacerlo menos inhibidor. En presencia
de H2S, las Salmonellas reducen las sales de hierro y bismuto a sulfuro de hierro negro que se deposita en la colonia, y,
a bismuto metlico que se precipita en el medio de cultivo, formando un halo brillante pero menos oscuro alrededor de la
misma.
Tanto el color negro de la colonia como el brillo metlico del halo aumentan si la placa se deja de 2 a 3 horas a
temperatura ambiente y en presencia de la luz.
Las colonias de coliformes, Shigella y Proteus presentan un color verde, caf o negro y no ennegrecen el medio. Las
placas debern incubarse hasta 48 horas.
Caractersticas de las colonias
Salmonella
t%&hi
Elevadas con centro negro, bordes claros y translucidos. Colonias en ojo de pescado o de conejo.
Se vuelve uniformemente negras a las 48 hrs. Entre las 18 y 24 hrs se forma en el medio de cultivo
un halo negro grisceo y con brillo metlico rodeando a la colonia
Otras
Salmonellas
Elevadas y generalmente mas pequeas que las de S. typhi. Negras si producen H2S. halo negro
grisceo con brillo metlico despus de 36 a 48 hrs de incubacin.
Verdosas si no son productoras de sulfuros como S. paratyphi A. Pequeas y pardas como S.
choleraesuis y S. gallinarum, que son bastante inhibidas.
Ari1ona %
Citrobacter
Grandes elevadas, negras grisceos, como gotas de plomo. Halo gris negro y con brillo metlico.
Las cepas no fermentadoras de la lactosa varan del verde al caf
Coli"ormes)
Proteus
Desarrollo ocasional. Colonias que pueden ser verdes, cafs y an negras. Estas ltimas mas
pequeas que S. typhi y por lo general sin brillo metlico en el medio que rodea a la colonia
Shigella Casi todas inhibidas. En el caso de crecer. Sh.flexneri y Sh.sonnei son de color caf, deprimidas en
el centro y con borde elevados (crateriformes).
A-AR !IERRO Y TRIP4E AD:CAR +TSI,
Diferenciacin e identificacin de enterobacterias
Medio diferencial muy usado en la identificacin de enterobacterias patgenas y saprofiticas en los anlisis
bacteriolgicos rutinarios de heces, principalmente. Este medio se usa como clave para iniciar la identificacin de
enterobacterias en algunos esquemas del FDA. Medio universalmente empleado para la diferenciacin de
enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.
Formula aproximada en gramos por litro:
1(
Mezcla de peptonas.................................20.0
Cloruro de sodio.........................................5.0
Lactosa.....................................................10.0
Sacarosa..................................................10.0
Dextrosa.....................................................1.0
Sulfato de Amonio Frrico.........................0.2
Rojo fenol...............................................0.025
Agar..........................................................13.0
Tiosulfato de sodio.....................................0.2
:sos.
Su modo de accin es semejante al medio de Kligler que contiene dos azucares, adicionado adems con 1% de
sacarosa. Esto permite el reconocimiento y exclusin de Proteus.
Hafnia y Providencia no fermentan la lactosa o lo hacen muy lentamente y si en cambio fermentan la sacarosa con
bastante rapidez, lo cual permite excluir a ese grupo de bacterias de Salmonella y Shigella.
@un$amento.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo
bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato
necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe
"#
, los cuales se
combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el
cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al
color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal
de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Siembra: A partir de un cultivo puro, sembrar en TS, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
ncubacin a 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resulta$os
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico.
Microorganimo $ico%&ondo $roducci'n de ga $roducci'n de(cido
u!)*drico
E. coli ATCC 25922 A/A + -
K. pneumoniae ATCC 700603 A/A + -
P. mirabilis ATCC 43071 K/A + +
S. typhimurium ATCC 14028 K/A - +
S. enteritidis ATCC 13076 K/A + +
S. flexneri ATCC 12022 K/A - -
P. aeruginosa ATCC 27853 K/K - -
A: cido
K: alcalino
A-AR !IERRO Y 4ISINA +4IA,
Diferenciacin temprana de Salmonella y Arizona
Medio muy til para diferenciar tempranamente cepas de Salmonella y Arizona de Citrobacter. Se basa en las
descarboxilacin de la lisina, formacin de sulfuros y fermentacin de glucosa. Tambin podemos detectar la
desaminacin del aminocido lisina.
Formula aproximada en gramos por litro:
Peptona de Gelatina................................5.0
Extracto de Levadura...............................3.0
Dextrosa...................................................1.0
L-Lisina....................................................10.0
Citrato de Amonio Frrico........................0.5
Tiosulfato de Sodio.................................0.04
Purpura de Bromocresol.........................0.02
11
Agar desecado........................................13.5
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La
glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las
enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la
produccin de cido sulfhdrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual
o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.
Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del
indicador al color violeta. La decarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la
glucosa sea previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un
viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color violeta
debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro
de hierro. Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto
produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo
en la superficie del medio.
Usos:
Algunas cepas de arizona pueden fermentar, o no rpidamente la lactosa y formar colonias incoloras o de color rosa
hasta el rojo en medios tales como el Mac Conkey o el Agar Desoxicolato. Las cepas que fermentan rpidamente la
lactosa producen una gran cantidad de cido cambiando al amarillo el color original de esos medios. Esto puede
interpretarse errneamente y confundir una cepa de Arizona como si fuera coliforme.
El medio de Agar de Hierro y Lisina esta especialmente adaptado para evitar dicha confusin, Salmonella y Arizona
alcalinizan el medio al descarboxilar la lisina comunicndole a este un color azulado prpura en toda la superficie.
Proteus y Providencia presentan en la superficie del medio un color caracterstico rojo-anaranjado. Y en el fondo existe
produccin de acido que se manifiesta por un color amarillento, y que es debido a la desaminacin de la lisina.
Resultados
1- Decarboxilacin de la lisina:
-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
2-Desaminacin de la lisina: Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y alguna
cepas de Morganella spp.
3-Produccin de cido sulfhdrico: Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico y
fondo)
GERMENES SUPERFCE NCLNADA FONDO H2S
Arizona Alcalino Alcalino +
Salmonella Alcalino Alcalino +
(excepto S. paratyphi A) Alcalino Acido -
Enterobacter
aerogenes
Alcalino Alcalino -
Enterobacter cloacae Alcalino Alcalino -
Klebsiella Alcalino Alcalino -
Hafnia Alcalino Alcalino -
Serratia Alcalino Alcalino -
Citrobacter (E. Freundii) Alcalino cido +
Escherichia Alcalino cido o
neutro
-
Alkalescens-Dispar Alcalino cido o
neutro
-
Shigella Alcalino cido -
Proteus rojo cido -
Providencia rojo cido -
10
1(
Manual de BOXON. P.p. 22,23-24, 30-31
12
A-AR *IO
Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a su movilidad, actividad de ornitina decarboxilasa y
produccin de indol.
@un$amento
Medio de cultivo semislido, altamente nutritivo debido a la presencia de extracto de levadura, peptona y triptena.
Adems, la triptena aporta grandes cantidades de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la
prueba del indol. La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la deteccin de la
enzima ornitina decarboxilasa, el prpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color
prpura y en medio cido es amarillo.
Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina decarboxilasa
e indol. La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas all de la lnea
de inoculacin.
La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio. Debido a la fermentacin de la glucosa se
reduce el pH produciendo una condicin cida y originando que el indicador de pH prpura de bromocresol vire al
amarillo. La presencia de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina decarboxilasa, la
cual decarboxila la ornitina presente. Por decarboxilacin, se alcaliniza el medio, con el consecuente viraje del indicador
hacia el color prpura.
El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo
de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo.
@'rmula +en gramos &or litro, Instrucciones
Dextrosa 1.0
Suspender 31 g del polvo en un litro de agua
destilada. Calentar a ebullicin hasta completa
disolucin. Distribuir en tubos y esterilizar 15
minutos a 121C.
Extracto de levadura 3.0
Peptona 10.0
Triptena 10.0
Clorhidrato de L-ornitina 5.0
Agar 2.0
Prpura de bromocresol 0.02
pH final: 6.5 0.2
Siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, inocular por puncin profunda con asa recta.
Incubaci'n
En aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37 C.
Resulta$os
1-Movilidad:
-Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de siembra.
-Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra.
2-Ornitina decarboxilasa:
-Resultado positivo: color prpura.
-Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio.
3-Prueba del indol:
La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina.
-Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador.
-Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.
*icroorganismo Crecimiento *o#ili$a$ In$ol Ornitina $ecarbo(ilasa
E. coli ATCC 25922 Bueno + + +
K. pneumoniae ATCC 700603 Bueno - - -
P. mirabilis ATCC 43071 Bueno + - +
Caractersticas $el me$io. Medio preparado: prpura transparente a ligeramente opalescente.
13
*E2IO Christensen +:rea Agar Base,
Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad uresica. Se utiliza para identificar bacterias que
hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras enterobacterias y estafilococos.
@un$amento
En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El cloruro
de sodio mantiene el balance osmtico, y el rojo de fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono. Estos
productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo. En este medio, la fermentacin de la
glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan
lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.
&'rmu!a +en gramo por !itro, Intruccione
Triptena 1.0 Suspender 24 g de polvo en 950 ml de agua
destilada. Dejar reposar 2 minutos. Esterilizar
en autoclave a 121C durante 15 minutos.
Enfriar a 50C y agregar 50 ml de una solucin
de urea al 40% previamente esterilizada por
filtracin o cloroformo. Fraccionar en tubos de
hemlisis y solidificar en pico de flauta con
fondo profundo.
Glucosa 1.0
Cloruro de sodio 5.0
Fosfato monopotsico 2.0
Rojo de fenol 0.012
Agar 15.0
pH final: 6.8 0.2
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, estriar la superficie del pico de flauta. Algunos microorganismos pueden
requerir mayor tiempo de incubacin. Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color.
Incubaci'n
En aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C.
Resulta$os
Microorganimo -cti.idad ure(ica Co!or de! medio
Proteus mirabilis ATCC 43071 Positiva Rojo-Rosado
K. pneumoniae ATCC 700603 Positiva dbil Rojo-Rosado
Escherichia coli ATCC 25922 Negativa Amarillo
S. flexneri ATCC 12022 Negativa Amarillo
S. typhimurium ATCC 14028 Negativa Amarillo
4imitaciones
-Bacterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter, viran al color rojo-rosado
de todo el medio de cultivo luego de varios das de incubacin.
-No calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se descompone fcilmente.
Caractersticas $el me$io. Medio preparado: amarillo
A-AR 642
El Agar XLD (por sus siglas Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es utilizado para el aislamiento y diferenciacin de bacilos
entricos Gram negativos, especialmente del gnero Shigella y Providencia.
El Agar XLD fue desarrollado por Taylor para incrementar la eficiencia en el aislamiento e identificacin de patgenos
entricos, particularmente de Shigella. Los patgenos son diferenciados no slo de los no patgenos fermentadores de
lactosa, sino tambin de varios no patgenos no fermentadores de la lactosa o sacarosa. Este medio presenta la ventaja
de facilitar el crecimiento de grmenes exigentes ya que otros medios contienen inhibidores excesivamente txicos. El
Agar XLD est incluido en la USP para los mtodos de lmite microbiano y las pruebas de presencia-ausencia de
Salmonella
En este medio el extracto de levadura provee la fuente de nitrgeno, carbono, vitaminas y cofactores. La xilosa, lactosa
y sacarosa son los carbohidratos fermentables. El tiosulfato de sodio y el citrato frrico son adicionados para ver la
produccin de H2S. El rojo de fenol acta como indicador. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el agar es
adicionado como agente solidificante.
14
@'rmula +gE4,.
Xilosa 3.5
Extracto de Levadura 3.0
L- Lisina 5.0
Rojo de Fenol 0.08
Lactosa 7.5
Desoxicolato de Sodio 2.5
Sacarosa 7.5
Tiosulfato de Sodio 6.8
Cloruro de Sodio 5.0
Agar Bacteriolgico 13.5
Citrato Frrico de Amonio 0.8
pH 7.4 0.2
*to$o.
Suspender 55g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y
hervir durante un minuto. Evitar el sobrecalentamiento. Enfriar a una temperatura entre 45- 50C y vaciar en placas de
Petri estriles.
Proce$imiento.
Las muestras fecales o hisopos rectales pueden ser sembradas directamente en las placas. Las muestras pueden ser
enriquecidas previamente utilizando Caldo Tetrationato o Caldo Selenito.
Resulta$os.
La degradacin de la xilosa, lactosa y sacarosa genera la produccin de cido cambiando el color del medio de rojo a
amarillo. La produccin de H2S bajo condiciones alcalinas, da colonias con el centro negro. Esta reaccin es inhibida en
condiciones cidas. La descarboxilacin de la lisina en ausencia de fermentacin de lactosa o sacarosa, ocasiona la
reversin del medio a alcalino y el color del medio regresa a rojo.
M-TERI-/
1 esptula 1 agitador de vidrio
30 tubos de ensaye chicos con tapa de
rosca
3 matraz erlenmeyer
500mL
Papel craft Gradilla
1 pipeta 5ml 30 cajas petri estriles
Mechero 5 asas y portasas
3 portaobjetos 1 probeta 250ml
1 vaso de pp. de 250ml Algodn
Gasa Papel filtro
Torundas con alcohol 2 Asa y portasa recta
Hisopos estriles
REACTVOS
Medio Mac Conkey
Base de Caldo Rojo Fenol
Base de Agar Salmonella y shigella
Base de Agar Sulfito de bismuto
Base de Agar Hierro y triple azcar (TS)
Base de Agar LA
Base de Agar MO
Base de Agar UREA
Base de Agar XLD
Aceite mineral
Cristal violeta
Lugol
Alcohol-acetona
Safranina
Alcohol
15
MATERAL BOLGCO
Microorganismos desconocidos a identificar (Cepa 1 y 2; sembrados en caldo)
Microorganismos de las especies: E.coli) Salmonella t%&hi) S. &arat%&hi) Proteus
EQUPO
ncubadora
Autoclave
Refrigerador
Parrilla elctrica
Balanza
Microscopio
$ROCEDIMIENTO
Primera sesi'n
Se procede a preparar los medios que se van a utilizar para la identificacin de posibles microorganismos.
Una vez preparados los medios
Se siembra en:
Mac Conkey cepa 1 sembrar estria cruzada E.coli
Mac Conkey cepa 2 sembrar estria cruzada Salmonella
Muller Hinton mezcla de los dos anteriores por estria cruzada
Se incuban a 35C por 24 horas
Segun$a sesi'n
Observacin de las caractersticas macroscpicas en cada medio sembrado
Realizacin de frotis al Gram de 2 colonias. Observacin a inmersin
Siembra de la colonia pura
Preparacin de las pruebas bioqumicas: urea, LA, TS, MO, rojo fenol.
Se inoculan las pruebas bioqumicas realizadas y se incuban a 35C por 24 horas
Tercera sesi'n.
Observacin de las caractersticas macroscpicas en cada medio sembrado
nterpretacin de las bioqumicas realizadas, identificacin de los microorganismos que presentan estas caractersticas
Siembra de colonia pura por estria cerrada, para poder hacer antibiograma con alguno de los siguientes antibiticos:
1. AM amopicilina
2. CF cefalotina
3. CTX cefotaxima
4. CAZ ceftazidima
5. CXM cefuroxima
6. DC dicloxacilina
7. E eritromicina
8. GE gentamicina
9. PEF pefloxacina
10. PE penicilina
11. TE tetraciclina
12. SXT trimetiopin con sulfametoxazol
Cuarta sesi'n
Observacin de las caractersticas macroscpicas en la prueba de sensibilidad.
Medir el halo de inhibicin se present) con un regla y determinar posible tratamiento.
Realizacin de frotis de Gram del cultivo obtenido. Observacin a inmersin.
dentificacin de microorganismo a partir de los resultados obtenidos.
RESU/T-DOS:
*E2IO YEO CARACTER<STICAS I*A-EN
16
PR:EBA
MEDO
MacConkey
CEPA:
E. Coli
Colonias moradas, rosas, opacas, cremosas, circulares,
convexas con elevacin y bordes uniformes, regulares,
no adherentes.
Medio morado con halo rosa alrededor de las colonias,
por lo tanto lactosa positiva (halo de lactosa y piruvato
ya que es grande).
La disponibilidad de carbohidratos es buena.
Bacilos gramnegativos pequeos
MEDO
MacConkey
CEPA:
Salmonella T%&hi
Vire del medio a naranja ya que no pudo desdoblar la
lactosa; bajan el pH del medio que es detectado por el
indicador rojo neutro dando colonias ambarinas,
pequeas, transparentes y butlicas no mucoides.
Bacilos gramnegativos demasiado pequeos.
MEDO
MacConkey
CEPA 1:
(problema)
I$enti"ica$o como
E. Coli
Colonias rosas mexicano, opacas, cremosas, circulares,
convexas con elevacin y bordes uniformes, regulares,
no adherentes. No son mucoides.
Rodeadas de un precipitado opaco de sales biliares.
Medio morado con halo rosa alrededor de las colonias,
lactosa positiva.
MEDO
MacConkey
CEPA 2:
(problema)
I$enti"ica$o como.
Salmonella
&arat%&hi
Vire del medio a naranja ya que bajo el pH ya que no
pudo desdoblar la lactosa.
Colonias mbar, pequeas, transparentes y butlicas no
mucoides, colonias expandidas, lo que da indicios de
ser paratiphy.
MEDO
Mueller-Hinton
MEZCLA DE
CEPA 1 Y 2:
(problema)
I$enti"ica$o como.
*u% &oca
Salmonella % m7s
E. Coli
Vire del medio se encontraba color amarillo-mbar
Salmonella: Colonias mbar, pequeas, transparentes y
butlicas no mucoides en poca cantidad.
E. Coli: Colonias mbar, grandes, opacas, cremosas,
circulares, convexas con elevacin y bordes uniformes
y regulares en gran cantidad.
17
MEDO
Mueller-Hinton
MEZCLA DE
CEPA 1 Y 2:
(problema)
I$enti"ica$o como.
m7s Salmonella %
&oco E. Coli
Medio amarillo mbar.
Salmonella: Colonias mbar, pequeas, transparentes y
butlicas en gran cantidad (casi toda la placa las
contiene).
E. Coli: Colonias mbar, grandes, opacas, cremosas,
circulares, convexas con elevacin y bordes uniformes
y regulares. En casi nula cantidad; solo se observan
algunas colonias asiladas.
MEDO
MacConkey
CEPA:
Proteus
Vire del medio a naranja.
Colonias pequeas, transparentes que se difunden en
el medio.
No fermentador de lactosa (lactosa-)
Base de Caldo
Rojo Fenol
E. Coli: amarillo, por lo tanto cido y fermentativo
(A/F)
Salmonella: Rosa, por lo tanto alcalino (K)
Proteus: Rosa, por lo tanto alcalino (K)
Control: Naranja rojizo

Base de Agar
Hierro y triple
azcar (TS)
E. Coli: Pico amarillo, fondo amarillo (A/A) con
produccin de gas.
Salmonella: Pico rojo, fondo amarillo (K/A) sin
produccin de gas y con produccin de cido
sulfhdrico.
Proteus: Pico rojo, fondo amarillo (K/A) con
produccin de gas y H2S (parte negra en el medio).
Base de Agar LA E. Coli: Pico prpura, fondo prpura; descarboxilacin
de lisina
Salmonella: Pico prpura, fondo prpura (A/A);
descarboxilacin de lisina con ennegrecimiento del
medio (produce H2S)
Proteus: Pico azul, fondo amarillo (K/A);
desaminacin de lisina

Base de Agar
UREA de
Christensen
E. Coli: Amarillo; Ureasa -
Salmonella: Amarillo; Ureasa -
Proteus: Rojo; Ureasa +

18
Base de Agar
Salmonella y
shigella
E. Coli: Colonias rosas (B)
Salmonella: Colonias transparentes con centro negro
(C)
Proteus: Colonias transparentes con centro negro (D)
* (A= Klebsiella pneumoniae; D = Pseudomona
aeruginosa)
Base de Agar MO E. Coli: Movilidad + (turbidez); ndol + (anillo rosa);
Ornitina descarboxilasa + (prpura/azul)
Salmonella: Movilidad +(turbidez); ndol - (anillo
amarillo); Ornitina descarboxilasa - (anillo amarillo)
Proteus: Movilidad +(turbidez); ndol (anillo
amarillo); Ornitina descarboxilasa + (prpura/azul)
DISCUSIN DE RESU/T-DOS
Se sembr primero en medio MacConkey las cepas de E. Coli y Salmonella, en donde aunque se sembr en el
mismo medio, las caractersticas observadas fueron muy diferentes ya que para E. Coli, el medio vario de color
dando un color del medio entre rosa y morado al bajar el pH con un halo turbio alrededor demostrando el
desdoblamiento de la lactosa, es decir que la fermenta (lactosa+), esto debido al indicador que contiene el medio
(rojo neutro), razn por la cual las colonias fueron rosa-moradas. Se realiz un frotis de las colonias y estas dieron
bacilos gramnegativos y eran pequeos, pero no se tomo foto ya que la cmara no pudo enfocar el microscopio.
Para Salmonella en MacConkey el medio vir a naranja ya que no es un microorganismo fermentador de lactosa, por
lo que las colonias dieron color mbar (por el color del medio). Se realiz un frotis y se observaron bacilos gram -
demasiado pequeos. No crecieron otro tipo de microorganismos en el medio ya que por ejemplo los gram+ son
inhibidos por las sales biliares y el cristal violeta que contiene el medio.
Despus se realiz la siembra de 2 cepas desconocidas (de un paciente) tambin en MacConkey. Se clasificaron
como cepa 1 y 2. Para la cepa 1 las colonias fueron de las mismas caractersticas que para E. Coli, por lo que se
dedujo que la cepa era de este microorganismo; Para la cepa 2, se observaron las mismas caractersticas que para
Salmonella, sin embargo haba una diferencia: las colonias se expandan levemente en el medio, lo que nos daba
indicios de que el microorganismo se trataba de Salmonella &arati&h%.
Se realizaron tambin 2 siembras de la mezcla de la cepa 1 y 2, realizada cada una por dos personas diferentes, por
lo que se encontraron algunas variantes en los medios: En la primer mezcla se observ que haban colonias tanto de
E. Coli como de Salmonella y estas se distinguan ya que las colonias de E. Coli eran ms grandes y haba mayor
cantidad de ellas en el medio; en cambio para la segunda siembra, las caractersticas eran iguales a la anterior, sin
embargo, haba mayor cantidad de Salmonella que de E. Coli ya que de este solo haba algunas colonias aisladas.
Estas variaciones se pueden ver debido a como se mezclaron las cepas por cada persona que realiz la siembra.
Se resembr en medio MacConkey la cepa de proteus, observando as un vire del medio a naranja, por lo que se
deduce que es lactosa negativo ya que contienen galactosidasa Las colonias fueron transparentes y se difunden
tambin en el medio, sin observarse realmente colonias aisladas en el medio.
Para el caldo rojo fenol apenas se observ una variacin en el medio, pero las caractersticas observadas fueron:
para E. Coli, un leve color amarillento, lo que indica acidez en el medio y por lo tanto fermentacin; para salmonella y
proteus se observ un color levemente rosado, por lo que indica a comparacin con el control una alcalinidad en el
medio, por lo que no son fermentadoras e indica que utilizaron las peptonas contenidas en el medio para su
En el medio TS, para E. Coli se observ el pico y fondo amarillos (A/A) por lo que son cidos ya que por la
fermentacin de los carbohidratos del medio (en el pico lactosa y sacarosa y en el fondo glucosa), el rojo fenol vir a
amarillo. Se observaron burbujas en el medio indicando la produccin de gas. Para salmonella se observ pico rojo
(alcalino) y fondo amarillo (cido) (K/A), lo que el microorganismo solamente fermenta la glucosa indica que sin
produccin de gas y hubo ennegrecimiento del medio lo que indica la produccin de cido sulfhdrico ya que el
tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el
tpico sulfuro de hierro de color negro. Por ltimo para proteus se observ pico rojo, fondo amarillo (ya que solo
fermenta glucosa) (K/A) con produccin de gas y H2S.
En el agar LA se observ para E. Coli el pico y fondo prpura lo que indica descarboxilacin de lisina detectndose
as la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. Aunque E. Coli es fermentador de glucosa, el medio dio
prpura debido a la desaminacin y produccin de la amina cadaverina que alcaliniz el medio. Para salmonella se
observaron las mismas caractersticas que para E. Coli, pero con produccin de H2S por medio de los indicadores de
citrato de hierro y amonio y el tiosulfato de sodio dndole una coloracin negra. Para Proteus se observ pico azul
1)
(aunque debera de haber salido rojo, posiblemente por una variacin en el indicador), con fondo amarillo indicando
alcalinidad en pico y acidez en fondo y la desaminacin de lisina por produccin de un cido alfa-ceto-carbnico, el
cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del medio, sin embargo
en nuestra prueba en vez de rojo nos dio un color azulado.
Por ltimo se realiz la prueba de la Urea en la que para E. Coli y salmonella el medio vir a Amarillo (por el rojo de
fenol) indicando actividad Uresica negativa y para proteus el vire fue a rojo indicando actividad uresica positiva ya
que hidroliza la urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono. Estos productos
alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al rojo.
Los medios SS y MO no se realizaron, pero las caractersticas que debieron haberse observado para cada bacteria
utilizada son: En el medio SS para E. Coli se acidifica el medio virndolo a rojo y obtenindose as colonias rosas
debido a la fermentacin de lactosa; Para proteus y salmonella se observan colonias transparentes con un centro
negro, lo que indica la produccin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio, y el indicador que le da el color
es el citrato frrico. No crecen otras bacterias ya que el medio contiene verde brillante que inhibe el desarrollo de
bacterias Gram positivas.
En el medio MO para E. Coli se observa movilidad + por reflejo de turbidez en el medio, ndol + por la formacin de
un anillo rosa en la superficie ya que el microorganismo contiene la enzima triptofanasa que produce el indol y
Ornitina + ya que contiene ornitina descarboxilasa dando as la coloracin prpura/azul del medio (K). Para
salmonella se observa movilidad +, ndol reflejado por un anillo amarillo ya que no contiene triptofanasa y Ornitina
descarboxilasa observndose as un anillo amarillo. Por ltimo para Proteus hay movilidad +(turbidez), ndol con
anillo amarillo y es Ornitina descarboxilasa + .
-NTIBIO0R-M-S:
CRTEROS DE NTERPRETACN BASADOS EN EL MTODO DE KRBY-BAUER DE PRUEBAS DE
SENSBLDAD PARA MCROORGANSMOS DE FCL CRECMENTO
Agente Antimicrobiano
Contenido
del disco
Dimetro de la zona de inhibicin
en mm
Resistente
< =
ntermedio
Sensible
> =
Am&icilina
Enterobacteriaceae
Estafilococos
Enterococos
Estreptococos
hemolticos

10 g
10 g
10 g
10 g

13
28
16
18

14-16
.......
.......
1925

17
29
17
26
Penicilina -
Esta"ilococos
Enterococos
Estreptococos
hemolticos

10 U
10 U
10 U

28
14
19

.........
..........
2027

29
15
28
Ce"ota(ima 30 g 14 15-22 23
Ce"o(itina 30 g 14 15-17 18
Ce"taci$ima 30 g 14 15-17 18
Ce"uro(ima s'$ica &arenteral 30 g 14 15-17 18
Ce"alotina 30 g 14 15-17 18
-entamicina 10 g 12 13-14 15
Eritromicina 15 g 13 14-22 23
Tetraciclina 30 g 14 15-18 19
Trimeto&rima F Sul"ameto(a1ol
1.25/23.75
g
10 11-15 16
RESULTADOS:
MEDO DE CULTVO
Y
MCROORGANSMO
OBSERVACONES MAGEN
2(
*ueller8!inton
E. Coli
NHBCONES (SENSBLDAD)
Es inhibido por las tetraciclinas, sulfametaxol-
trimetropim, ampicilina, penicilina
Halo de inhibicin:
C (cloranfenicol) de 1mm (muy poco sensible o
casi resistente)
AM (ampicilina) de 2mm (muy poco sensible o casi
resistente)
PEF (pefloxacina) de 6 mm
NF (nitrofurantoina) de 4 mm
CF (ceftriaxona) de 6 mm
CRO (ceflaxona) de 8 mm
SXT (trimetroprim/sulfametoxazol) de 1 cm
CTX (cefotaxima) de 1cm
AK (amicacina) de 1 cm
NET (metilmicina) de1 cm
GE (gentamicina) 6 mm
RESSTENTE
Solo a CB (garbenmicina) no presento halo de
inhibicin
CONC/USIONES
En esta prctica se identificaron algunas de las bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae como fueron en
este caso: Proteus) E.coli) Salmonella. Determinando y afirmando sus caractersticas microscpicas, culturales y
bioqumicas de cada una de ellas, diferencindolas unas de las otras.
La familia de Enterobacteriaceae tiene como caractersticas generales ser bacilos Gram Negativos, sin agrupacin,
miden de 0.6 0.8 de ancho por 2 a 4 largo, son mviles o inmviles, no esporulados, catalasa positivo, oxidasa
negativos, reducen el nitrato a nitrito, son fermentadores de glucosa.
Este tipo de familia son recuperados muy fcilmente de muestras clnicas, especialmente de heces, ya que como su
nombre los dice se encuentran en los intestinos.
Para E.coli se sembr en una mezcla con Salmonella en el medio de Muller Hinton para poder diferenciar una de otra en
un mismo cultivo.
Donde se concluye que E.coli se determino del cultivo en Cepa 1 de un paciente, donde las colonias son de rojas a
rosadas. No son mucoides, rodeadas de un precipitado opaco que es de las sale biliares. En la prueba de rojo de fenol
se torno ligeramente a amarillo demostrando su capacidad de formacin de cidos y fermentacin. En la prueba de TS
se coloro todo el tubo de color amarillo por la formacin de cidos. En el medio LA el pico y el fondo se presento un
color prpura por la descarboxilacin con pH alcalino. Y por ultimo en urea viro el medio a color amarillo, dando como
prueba positiva ya que esto demuestra que la hidroliza la urea por medio de la enzima ureasa.
Salmonella en el medio Mac Conkey viro el medio a un color naranja esto debido a que fermenta la lactosa. Se
determino de la Cepa 2 que era Salmonella que cumpli con las caractersticas de crecimiento de esta misma como es
ser incoloras, transparentes o un rosa muy tenue, pero con la nica diferencia de que esta cepa se expandi por lo que
se determino que era Salmonella &arat%&hi. Para la prueba de rojo de fenol el color presentado fue un rosa lo cual nos
indica su alcalinidad en el medio. En TS se observo un pico alcalino y fondo cido esto debido a que se fermento la
glucosa y hubo produccin de cido sulfrico por la coloracin negra presentada en el medio. En LA hubo una
descarboxilacin con produccin de gas (CO2). Y en urea viro el medio a amarillo dando positivo esta muestra como fue
tambin el caso de E.coli.
Para Proteus se sembr en medio Mac Conkey donde viro el medio a naranja ya que son lactosa negativos y tiene beta-
galactamasa, las colonias fueron transparentes y se difunden en el medio. En el rojo fenol al igual que Salmonella
demostr alcalinidad por la misma coloracin presentada. En TS el pico fue alcalino y fondo cido. Y en urea solo
cambio un poco la coloracin del medio a un rosa mexicano dando una urea negativa con produccin de gas.
En la prueba del antibiograma se utilizo una cepa pura de E.coli donde se inoculo con estra cerrada con un hisopo
colocndole un disco con 12 antibiticos para bacilos gram negativos, en donde se observo que E.coli es sensible a casi
todos estos a excepcin de CB (garbenmicina) y un poco en C (cloranfenicol) y AM (ampicilina).
21
RE&ERENCI-S
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2. Diagnstico Microbiolgico. Koneman, etal. Editorial Panamericana. Quinta edicin pag: 172.
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5. http://www.insp.mx/rsp/_files/File/2007/Septiembre%20Octubre/7-patogen.pdf
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7% Guentzel MN (1996). Escherichia) lebsiella) Enterobacter) Serratia) Citrobacter) an$ Proteus. In.
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9. http://www.mcd.com.mx/pdfs/agar_casman.pdf
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22