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Agar Chocolate

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Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base.

Por esta razón el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos ymeningococos) y Haemophilus, pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma diferente según las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido al cual se ha añadido unamezcla de tres antib ióticos específicos que impedirán el crecimiento del resto de la flora acompañante. La sangre de carnero es la más adecuada para la preparación de Agar Sangre y Agar Chocolate. Comúnmente se utiliza la sangre de carnero entre 5 - 10% como un medio de enriquecimiento nutritivo en la preparación de medios de cultivo. Éste es utilizado principalmente para el crecimiento, identificación y observación de las reacciones hemolíticas causadas por algunas bacterias con importancia clínica.

El Agar chocolate lleva Hemoglobina que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o Hemina termoestable. Otros factores, en particular el factor V (dicotín-adenina nucleótido) termosensible, que no se encuentran en el Agar chocolate pueden aportarse en una mezcla químicamente definida: el PolyViteX. El Agar chocolate con PolyViteX permite el cultivo de la mayor parte de los gérmenes encontrados en patología humana o veterinaria. La siembra de líquidos cefalorraquídeos, pus, resiembra de hemocultivos, etc., es favorable en este medio, pero está particularmente indicado para aislamiento de las Neisserias patógenas y de los Haemophilus. Aislamiento e identificación de Haemophilus Los microorganismos del género Haemophilus se cultivan en Agar chocolate con PolyVitex. Como en el caso del gonococo el cultivo es rápido y abundante sobre todo en atmósfera rica en C02. Estos gérmenes encuentran en este medio los factores X y V necesarios para su crecimiento. El diagnóstico de la serie al respecto puede conducirse de la manera siguiente: Si se siembra en cuatro medios diferentes: - Agar Trypcase-soja que no contenga ni factor V, ni factor X - Agar Trypcase-soja con PolyViteX (factor V)

De acuerdo con el Comit Nacional de Estándares en Laboratorio Clínico (NCCLS-USA) el Agar chocolate no debe usarse para efectuar antibiograma de Haemophilus. parainfluenzae crece en Trypcase soja con PolyViteX (V) y en chocolate con PolyViteX (V yX) H. aegiptius aglutina hematies humanos (prueba en porta). # UFC / ml = # de colonias * factor de dilución ml sembrados en la placa 0 ¦©  © § ©  % ¦(¨§ ) ¥ ¦ ¨     ¦©  §(©©§§  $ ¥ § ¦   ©¨ §¥ ¥ §¦¥   ' ©§  #  ©§¦ ¦¥   & § ©§¨ % $ ©§   © ¥ § ¦ " §  ¦    ¤ ¡¢  #    ! ! ¡ ¡ ¡ ¤ ¡£ ¡ ¡ ¢ ¤ ¡ ¡ ¤¢   ¡ § §¥   ¨   ¡¢ £ ¢ ¤¢¤£  ©  §   ¡ ¡£ ¢ ©  §§   §¦¥   § §¥©¨ ©¨ £ ¤ ¢ ¤ §¦ ¥  ¢¡   Cho ol t Th y M tin t ipti s TSA nim l d sfib in d y l nt d es ye e c V D e e c v e e eyv s . H. se necesita preparar un medio especial que además de la base de Mueller-Hinton contiene 15ug/mL de beta-NAD. Incube las cajas en 5% de C 2. Para calcular la cantidad de bacterias en cada placa. Para realizar la lectura después del período de incubación. haemolyticus da hemólisis en Agar con 5% de sangre de caballo Debido a que Haemophilus influenzae no crece en los medios rutinarios para efectuar antibiograma. 15ug/mL de hematina bobina. ¢¡ ¢¤ ¡ ¤¡ £ A Me n iqu ido e c e se c infusión b o o zón BHIA s e e c s n 80ºC du nt 10 min veces e c e e e ces v se s e e c es e c s e ec es ec es e e s e e s ce s Recuento del inoculo bacteriano utilizado El recuento del inóculo se realiza con el fin de determinar la exactitud de la concentración de bacterias de la suspensión utilizada en la siembra.Agar chocolat con Pol it (factores X y V) El recuadro que se da a continuaci n indica los resultados obtenidos en estas condiciones con los principales Haemophilus: H. Extienda el inóculo en cada caja de agar con un bastón de vidrio o con asa bacteriológica. H. influenzae. influenzae no los aglutina H. tenga cuidado de no tocar los bordes de la caja. Si alguna de las placas presenta demasiadas colonias.4. ya que es difícil contar las colonias que crecen en los bordes. actividad que puede realizar con ayuda de un cuenta-colonias.2 a 7. H.Agar chocolat (factor X) . multiplique el número de colonias en cada una por el factor de dilución y por la inversa del volumen de inoculo utilizado y expresar el conteo como UFC/ml. aegiptius crecen en los 4 medios otras pruebas que ayudan a diferenciarlos: H.. de 18-20 horas a 35ºC. 5mg/mL de extracto de levadura y un pH de 7. aphrophilus crece Chocolate (X) y en chocolate con PolyViteX (V yX) H. informe el recuento como "demasiadas para contar". cuente las colonias aisladas en cada una de las placas. haemolyticus.

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