LIQUIDOS DE

PUNCION
ESTUDIO
MICROBIOLOGICO DEL
LCR
BIOQUIMICA: MARIANA RICHARD
INSTITUTO SUPERIOR MADRE TERESA DE CALCUTA D-160
 ESTUDIO MICROBIOLOGICO DEL LCR

• La infección del SNC mas común y mas severa es la MENINGITIS.

• ESTA PUEDE SER INFECCIOSA Y NO INFECCIOSA
INFECCIOSAS NO INFECCIOSAS
1- PRIMARIAS TUMORES Y QUISTES INTRACRANEALES
MENINGITIS BACTERIANA DE LA
COMUNIDAD (MB)
MENINGITIS ASEPTICA
2- SECUNDARIAS MEDICAMENTOS
MENINGITIS POST TRAUMATICAS
ENFERMEDADES SISTEMICAS

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MENINGITIS
INFECCIOSAS
• PRIMARIAS:
• S. pneumoniae
• H.influenzae
• N. meningitidis
• S.agalactiae
• E.coli
• Listeria
• Meningitis aséptica:
• Virales
• Micoticas
• Tuberculosas
• Parasitarias
• sifilíticas

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MENINGITIS
INFECCIOSAS MENINGITIS BACTERIANA: agente etiológico según la edad
MENORES A 2 MESES S. agalactiae
• Secundarias: Bacilos Gram (-)E. coli k1
Lysteria monocytogenes.
• Meningitis post-traumáticas:
2 meses a 6 años S. pneumoniae
• S.pneumoniae H. Influenzae b
N: meningitidis
• H.influenzae
6- 50 años S. Pneumoniae
• S.pyogenes N. meningitidis
• Bacilos G(-) Mayores a 50 años S. Pneumoniae
N. Meningitidis
• Meningitis post quirúrgicas: L. Monocytogenes
Bacilos Gram (-)
• S.aureus
• Estafilococos coagulasa (-)
• Bacilos G(-)
• Corinebacterias.

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MENINGITIS BACTERIANA PATOGENIA

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MENINGITIS BACTERIANA PATOGENIA

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 URGENCIA

ESTUDIO DEL LCR

ES UNA EMERGENCIA MEDICA Y DEL LABORATORIO

IDENTIFICACION RAPIDA DEL AGENTE CAUSAL

TRATAMIENTO ADECUADO
PREVENIR SECUELAS IRREVERSIBLES
ESTUDIO DEL LCR
 PUNCION LUMBAR: LA REALIZA EL MEDICO EN EL ESPACIO INTERVERTEBRAL
 SE RECOLECTA SIN ANTICOAGULANTE
 SE COLOCA EN TUBO ESTERIL PREFENRENTEMENTE CON TAPA A ROSCA.
 LA MUESTRA DEBE LLEGAR INMEDIATAMENTE AL LABORATORIO
 DEBE SER PROCESADA ANTES DE LAS 2HS
 NO COLOCAR EN LA HELADERA (EXCEPTO PARA ESTUDIOS DE VIRUS)

EXAMEN MICROSCOPICO: OBSERVACION DEL LCR CON OBJETIVO DE 40X

BUSQUEDA DE PARASITOS(T.cruzi, trofozoitos de amebas)

Post-centrifugación: Del sedimento

TINTA CHINA: búsqueda de levaduras capsuladas.

PREPAR FROTIS CON EL SEDIMENTO, DEJAR SECAR Y FIJAR CON CALOR
REALIZAR COLORACIONES
GRAM
GIEMSA
ZN
KINYOUN
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 Tinción de Ziehl -Neelsen
levaduras

Trypanosoma.cruzi en LCR

N.meningitidis H. Influenzae S. pneumoniae

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 SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD DEL GRAM
Es una MB y no veo bacterias en el Gram

GRAM:

VENTAJAS
BAJO COSTO DESVENTAJAS
SENCILLA SENSIBILIDAD EXPERIENCIA
RAPIDA ESPECIFICA 60-90% ENTRENAMIENTO CONTINUO
Sensibilidad: se refiere a la Especificidad mayor a 97%
probabilidad de que el
resultado de la prueba de
una enfermedad sea
positivo si realmente tiene la
enfermedad.
GRAM: INOCULO---------- MAYOR A 10000 UFC/ML
ESPECIFICIDAD: CUANTAS PERSONAS SANAS SON
IDENTIFICADAS COMO NO ENFERMAS

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GRAM: MICROORGANISMO
Microorganismo Sensibilidad
S.pneumoniae 90 %
N.meningitidis 75
H.influenzae 86
BGN 50
L.monocytogenes Mayor a 50

LA SENSIBILIDAD DEL GRAM DEPENDE: DE LA CONCENTRACION DEL INOCULO, DEL TIPO DE MICROORGANISMO
Y POR SUPUESTO DE LA EXPERIENCIA O ENTRENAMIENTO DEL PROFESIONAL.

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 CULTIVOS:
 Sembrar con pipeta Pasteur estéril del sedimento.
 El medio de cultivo agar sangre ovina proporciona el
crecimiento de la gran mayoría de las bacterias Gram-
positivas y Gram-negativas así como de hongos (mohos y
levaduras), a partir de una base rica y complementada,
ofreciendo óptimas condiciones de desarrollo para
microorganismos no fastidiosos.
Medios solidos:
• Agar Sangre
• Agar chocolate
• Agar EMB (en sospecha de meningitis post-quirúrgica)
 El Agar Eosina Azul de Metileno , agar EMB , es un medio de cultivo selectivo
y diferencial utilizado para el aislamiento de bacilos gramnegativos en
alimentos, productos lácteos y muestras clínicas.

Este agar proporciona propiedades selectivas y diferenciales, lo que lo convierte

en un medio valioso en los laboratorios de microbiología.

Como medio selectivo, el agar EMB contiene inhibidores, como la eosina y el azul
de metileno, que suprimen el crecimiento de bacterias Gram positivas.
Como medio diferencial, puede diferenciar entre diferentes tipos de bacterias
Streptococcus pneumoniae gramnegativos en función de su capacidad para fermentar lactosa .

 Agar Chocolate (CHOC) es un medio de cultivo enriquecido y no

selectivo. Es una variante del agar sangre. Contiene glóbulos rojos
que han sido lisados por el suave calentamiento a 56 °C. Este agar
se usa para el delicado y exigente crecimiento de bacterias
respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae.
 El medio de Tayer Martin al ser selectivo, contiene antibióticos
que inhiben el crecimiento de otros microorganismos y en él solo
crece la cepa de Neisseria gonorrhoeae.
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MEDIOS LIQUIDOS: Medio de enriquecimiento Tioglicolato
Medio de enriquecimiento de uso general utilizado para el
aislamiento y cultivo de bacterias aerobias, anaerobios y
bacterias exigentes. Se utiliza como medio de enriquecimiento
para muestras clínicas.
Fácil y práctico de usar. Compatible con sistemas manuales y
automatizados de cultivo microbiológico y apto para ensayos
moleculares.
Incubar 7 días, atmosfera normal a 35-37°C

PARA LAS MUESTRAS DE PROCEDENCIA DE SITIOS NORMALMENTE ESTERIL SE SIEMBRA EN LAS

PLACAS EN UNA ESTRIA. CUANDO SE TRATA DE LIQUIDOS O MATERIALES DE SITIOS CON FLORA
HABITUAL SE DEBE SEMBRAR EN 5 ESTRIAS.

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ESTUDIOS COMPLEMENTARIOS

 Proteína C reactiva/ Procalcitonina

 ADA (TBC)
 Lactato
 Detección de antígenos bacterianos o de levaduras
 Biología molecular:PCRconvencionl o Multiplex

Se han desarrollado varias pruebas de diagnostico rápido de la meningitis bacteriana.

Estas detectan los ANTIGENOS, de H.influenzae, S.pnuemoniae, N. meningitidis y E.coli K1 y S.agalactiae.

Las guías NO recomiendan el uso de rutina de estas pruebas, sino en presencia de LCR patológicos y ausencia
de gérmenes en la coloración de Gram.

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 Contrainmunoelectroforesis.- En un par de pocillos
practicados en un gel de agarosa se enfrentan la
muestra en la cual deseamos estudiar la presencia
de antÌgeno y el antisuero homólogo. Se aplica un
campo eléctrico a través del gel.

Técnicas de aglutinación.- Sobre una tarjeta de

reacción se mezclan la muestra clínica que alberga
al antígeno con el reactivo que contiene a los
anticuerpos específicos. Al entrar en contacto los
anticuerpos mediante los dos puntos de unión con el
antígeno establecen entramados de muchas
moléculas de antígeno y de anticuerpos. Esta
aglutinación de partículas antigénicas forma grumos

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Inmunocromatografía.- Sobre una membrana de
nitrocelulosa o nylon se encuentran absorbidos en la
línea de reacción anticuerpos contra el antígeno que
buscamos y sobre la línea control anticuerpos anti conjugado,
de forma que cuando la muestra contiene
antígeno, este fluye por la membrana quedando
retenido en la línea de reacción.

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Enzimoinmunoanálisis (EIA).- Normalmente la
detección tiene lugar en placas de poli estireno,
donde los anticuerpos específicos están fijados
sobre la superficie de los pocillos. Estos anticuerpos
retienen a los antígenos presentes en la muestra y
su presencia es revelada posteriormente mediante la
utilización de anticuerpos también específicos del
antígeno conjugados con enzimas. Estas enzimas
provocan un cambio de color al interaccionar con el
sustrato específico

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USO DE BIOLOGIA MOLECULAR PCR

• DETECTA PEQUEÑAS CANTIDADES DE ADN Y SE PUEDE CUANTIFICAR

• NO REQUIERE BACTERIAS VIABLES, IMPORTANE EN PACIENTE CON ATB

• PCR BACTERIANA DE AMPLIO ESPECTRO. PERMITE EXCLUIR UNA MB

• MENINGITIS VIRAL

• MENINGITIS TUBERCULOSA

EN MUESTRAS DE LCR CON DIAGNOSTICO DE MB(Gram positivo y/o detección de Ag positivo y/o LCR alterado)
Y CULTIVO NEGATIVO: el uso de PCR mejora el dx.

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 N. meningitidis.

Habitualmente colonizan la garganta y nasofaringe de individuos que son portadores asintomáticos.

Características:
DIPLOCOCOS GRAM (-) ARRIÑONADOS EN “GRANOS DE CAFÉ”
OXIDASA (+)
FERMMENTADOES DE AZUCARES:GLUCOSA(+). Maltosa(+) y Sacarosa, fructuosa y lactosa (-)
Agar sangre: colonias grises convexas.

GRAM

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N. meningitidis

Se clasifica de acuerdo con la composición de su cápsula en 13 serogrupo. Los serogrupo predominantes en

Argentina son: W135 y B, seguidos del C y el Y.

las proteínas de la membrana externa son clave en la patogenia y en la clasificación inmunológica y permiten
identificar serotipos y subtipos según sus proteínas Por B y Por A, respectivamente.

La serotipificación es de gran importancia para el desarrollo de estrategias de vacunación. Los meningococos tienen
la capacidad de intercambiar el material genético responsable de la producción de la cápsula y, por lo tanto, pueden
experimentar cambios de serogrupo.

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INMUNIZACIÓN
Vacuna antimeningococcica conjugada tetravalente(ACYW). Se incorporo al calendario de vacunación en 2017

Lactantes:
3 meses: 1 dosis
5 meses: 2 dosis
15 meses: 1 refuerzo

Adolescentes.
11 años: dosis única.

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 S.pneumoniae

GRAM
Cultivo de S. pneumoniae en agar
sangre. El halo verdoso alrededor de
Importante patógeno asociado a alta morbi-mortalidad en el mundo las colonias nos indica que es α-
Coloniza naso y orofaringe hemolítico.​Se observa una zona
donde no hay crecimiento alrededor
Mas de 90 serotipos conocidos, 18 son responsables del 82% de los casos de meningitis. del disco blanco, que contiene
optoquina. La sensibilidad del
Características: neumococo a este compuesto se
Diplococo GRAM (+), lanceolado o en cadenas cortas, con capsula. utiliza en su identificación
En Agar sangre sus colonias son alfa hemolíticas, transparentes y pueden ser mucosas.
En agar chocolate, colonias verdosas.
Son catalasa negativa, optoquina sensible y solubilidad en bilis positiva.

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 INMUIZACION
VACUNA CONJUGADA DE 13 SROTIPOS.(VCN13)incluye 13 serotipos, a diferencia de las vacunas polisacáridos, las
conjugadas tienen una respuesta inmune T-dependiente por lo que presentan memoria inmunológica y son efectivas en
menores de 2 años.

Vacuna polisacárido de 23 serotipos(VPN23): es una vacuna que contiene polisacáridos purificados de 23 serotipos de
Neumococo con el agregado de fenol como conservante.

Las vacunas conjugadas unen un polisacárido capsular con una proteína transportadora, consiguiendo con ello
cambiar a una inmunidad Timo dependiente es decir lograr estimular a los linfocitos T.
La inducción de IgG, con niveles de IgG1 (la IgG1 fija bien el complemento, de importancia capital para
la fagocitosis bacteriana) superiores a los de IgG2.

La respuesta T-independiente se manifiesta por la inducción de Ac de tipo IgM.

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H. INFLUENZAE
• Habitualmente coloniza nasofaringe.
• Según los polisacáridos capsulares, hay 6 serotipos: a,b,c,d,e,f.
• El serotipo mas frecuente es el b
• Mayor incidencia en niños menores de 1 año.
• Gram: pleomorficos, coco-bacilo a bacilos largos Gram (-).
• Crece bien en Agar chocolate (requiere de factor V: NAD
Factor X. hemina

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INMUIZACION

Vacuna anti haemophilus influenzae b se incorporo al calendario de vacunación en 1998.

En menores de 1 año se utiliza combinada como vacuna quíntuple a los 2,4 y 6meses.
A los 18 meses como vacuna cuádruple.

S. agalactiae:
Habitualmente coloniza piel y mucosas del tracto genital (transmisión vertical).
Existen 4 serotipos: Ia, Ib, II Y III.
La mayoría de los casos de meningitis neonatal están producidos por el serotipo III.}.
Características:
Cocos Gram (+) en diplos o en cadenas cortas.
Colonias pequeñas en agar sangre, beta-hemolíticas.
Catalasa (-)
Esculina (-)

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 S.AGALACTIAE
Streptococcus agalactiae, también conocido como estreptococo del grupo B (GBS), es una bacteria Gram positiva
oportunista que normalmente forma parte del entorno intestinal humano; la microbiota Coloniza el 30% de los
tractos genitourinario y gastrointestinal (urinario y vaginal) de adultos humanos sanos.

Prueba de catalasa: Cuando observamos colonias beta-

hemoíticas en agar sangre, la realización de la prueba de
catalasa , ayuda a diferenciar entre estreptococos beta-
hemolíticos y estafilococos. Los estafilococos son catalasa
positivos mientras que los estreptococos son catalasa
negativos.

Prueba CAMP: La prueba CAMP se puede emplear para la

identificación presuntiva de estreptococos beta-hemolíticos
catalasa negativos. S. agalactiae produce una hemólisis beta
mejorada en punta de flecha en la unión de las estrías de S.
agalactiae y S. aureus ; cuando se raya en forma perpendicular
con S. aureus beta-hemolítico en agar sangre.

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Resistente a la bacitracina: la prueba de sensibilidad a la bacitracina ayuda a diferenciar entre dos
estreptococos beta-hemolíticos; Streptococcus pyogenes (GAS) y Streptococcus agalactiae (GBS).
GAS es sensible a la bacitracina mientras que GBS es resistente a la bacitracina.

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LISTERIA MONOCYTOGENES
Aunque la tasa de colonización son bajas, las mujeres embarazadas pueden ser portadoras de L. monocytogenes
de forma asintomática en el aparato genital y recto: y transmitir la infección a sus hijos.
Características:
Beta-hemolítico en agar sangre, colonias grises cremosas.
Bacilos Gram positivo. Cortos, solos o en cadenas cortas.
Bilis esculina (+)
Catalasa (+)
CAMP POSITIVO EN CABEZA DE FOSFORO.

A diferencia de la mayoría de las otras bacterias dañinas, L. monocytogenes crece lentamente en los
alimentos almacenados en el refrigerador (4 ° C). Se encuentra comúnmente en alimentos almacenados,
especialmente en quesos blandos curados, carnes envasadas, leche y ensaladas frías.
Dado que L. monocytogenes es capaz de atravesar la placenta, la listeriosis es una de las principales
causas de enfermedad perinatal y neonatal, que suele provocar abortos.

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