Tunarosa, J

AMPLIACION DEL ADN GENOMICO MEDIANTE

LA REACCION EN CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR)
Tunarosa Delgado Juan Luis
Estudiante De Medicina
Cod: 19181025
Juanluisudes@gmail.com
Universidad de Santander (UDES)

Abstract En la siguiente practica se amplificará una pequeña sección

de ADN extraída anteriormente y se amplificará por medio de
la reacción de la polimerasa (PCR).
It is vitally important for forensic sciences to be able to
duplicate small sections of DNA coding areas to help solve
cases that is why in this laboratory a small section of DNA 2. OBJETIVOS
that had been extracted through salting out was duplicated.
The creation of a new DNA chain was achieved based on  Describir los puntos importantes de control de la
what we already had thanks to (PCR). (PCR) para obtener una secuencia especifica de un
gen.

Resumen  Amplificar la secuencia especifica de ADN

mediante la técnica de (PCR)

Es de vital importancia para las ciencias forenses el poder

duplicar pequeñas secciones de áreas codificantes de ADN 3. METODOLOGIFERA
para ayudar a resolver casos por eso en este laboratorio se EXPERIMENTAL
duplico una pequeña sección de ADN que se había extraído
por medio de salting out.
AMPLIFICACION DE ADN USANDO LA TECNICA
Se logro la creación de una nueva cadena de ADN con base a
(PCR).
la que ya teníamos gracias a la (PCR).

I. Se tomo 1 rubos de eppendorf de 200 ml.

Palabras Clave
II. Al tubo se le agregaron los siguientes reactivos: 15
μL de solución buffer, 15 μL de H2O, 30 μL de
Buffer, Polimerasa, Eppendorf, ADN, Baño serologico DNTP´S, 15 μL de Primer F, 15 μL de Primer R, 15
μL de MgCl2 y 15 μL de TAQ.
III. Luego se coloco en voretex por 10 segundos
1. INTRODUCCIÓN
IV. Posterior a esto se toma un tubo de eppendorf de
2ml y en el se colocan 15 μL de la solución que se
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para encuentra en el tubo de eppendorf grande.
amplificar una secuencia de ADN desconocidas. Gracias a V. Se retira el ADN de baño serológico y se agregaron
esta técnica se han podido realizar estudios genéticos en 15 μL de ADN.
cualquier campo de la ciencia. Por ejemplo, se utiliza
diariamente para la identificación de cadáveres o en el VI. Se coloco la muestra en el termociclador durante 4
estudio de escenas del crimen para buscar rastros del horas para el resultado.
culpable. También se emplea en la biología, para identificar
cadenas genéticas de plantas, animales o, sobre todo,
microorganismos. En la medicina se reúne la experiencia de 4. RESULTADOS
todos esos campos y se usa principalmente para identificar
gérmenes agresores que se encuentran en nuestro organismo. Para concluir la practica los tubos de eppendorf fueron
llevados al termociclador para realizar la reacción de la
Esta técnica permite amplificar pequeñas regiones específicas (PCR).
del ADN en laboratorio. Es decir, consigue que un pequeño
segmento de ADN que pasaría desapercibido en un análisis
cualquiera se multiplique millones de veces y así sea fácil de 5. DISCUSION
detectar.
TIPOS DE (PCR)
Tunarosa, J
PCR Anidada: Técnica muy sensible de PCR en la que el
producto de una amplificación es utilizado como molde para
realizar una segunda amplificación con cebadores que se
ubican dentro de la primera secuencia amplificada, es decir,
cuando tenemos el primer, como su amplificación se pueden
unir los cebadores y se hace de nuevo una amplificación
dentro de la ampliación inicial. Este tipo de PCR tiene
la ventaja de brindar alta sensibilidad y especificidad. La
especificidad aumenta porque como es amplificación de una
ampliación obtenido previamente, los cebadores sólo van a
hibridar en un sitio dentro de la molécula y el resultado será
una única banda. Así, evitamos posibles hibridaciones
inespecíficas de los cebadores. La desventaja de esta técnica
es que no nos permite cuantificar la muestra.
PCR de extensión solapada (Mutagénesis): Se
introducen cambios de secuencia dentro de fragmentos
(clonados) de ADN. Se requieren 2 cebadores (primers)
mutagénicos y otros 2. Se amplifica un fragmento 5' y un
fragmento 3' que se solapan portando ambos la mutación. Se
usan los productos en otra reacción para producir el ADN
mutado de longitud completa.
PCR in situ: La PCR in situ consiste en una reacción de PCR
en secciones histológicas o células, donde los productos
generados pueden visualizarse en el sitio de amplificación. Es
realizada sobre preparaciones fijas en un portaobjetos. En la
técnica de PCR in situ se realiza una primera amplificación
de ADN blanco y luego detección mediante hibridación in
situ convencional con sondas de ADN/ARN. De esta manera
pueden detectarse cantidades pequeñísimas de genoma. Esta
tecnología es de gran alcance en la capacidad de amplificar
específicamente una población de secuencias de menor
representación.
PCR múltiple: PCR en la cual se amplifica
simultáneamente más de una secuencia. Para ello, se
combinan dos o más pares de cebadores en un mismo tubo,
junto con el resto de los reactivos de la reacción en
cantidades suficientes, para amplificar simultáneamente
varios segmentos de ADN. Ventajas: información sobre
varios locus en una sola reacción, menor cantidad de molde
para el análisis, menor cantidad de reactivos, rápida
construcción de bases de datos. Desventajas: para llevarla a
cabo adecuadamente y sin errores, se requiere de una
cuidadosa optimización del proceso.
PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR): Es una variante de
la PCR en la que usamos ARN como molde inicial en vez de
ADN, y emplea una transcriptasa inversa (como Tth) para
realizar la síntesis de un ADN complementario al ARN
(ADNc). De esta forma, el desarrollo inicial de una RT-PCR
sería:
 1.er paso: retrotranscripción a partir del ARN.
 2.º paso: amplificación a partir de la primera hebra
de ADNc.
 3.er paso: PCR estándar.
PCR en tiempo real o PCR cuantitativo (qPCR):
Reacción de PCR cuya principal característica es que permite
cuantificar la cantidad de ADN o ARN presente en la muestra
original, o para identificar con una muy alta probabilidad,
muestras de ADN específicas a partir de su temperatura de
fusión (también denominado valor Tm, del inglés melting
temperature).
Se puede dividir en las técnicas basadas en fluorocromos no
específicos y en las técnicas basadas en sondas específicas.
En las técnicas basadas en fluorocromos el ADN, que ve
multiplicada su cantidad con cada ciclo, se une al
fluorocromo (generalmente SYBR Green) produciendo
fluorescencia que es medida por el termociclador apto para
PCR en tiempo real. Permite cuantificar sólo una secuencia
por reacción, pero tiene la ventaja de utilizar cebadores
normales para su realización. Es mucho más económica que
la que usa sondas específicas.
En este laboratorio se usó la técnica conocida como PCR
anidad ya que esta brinda una mayor especificidad que brinda
y es la mejor opción teniendo en cuenta que ya teníamos una
fracción de ADN totalmente aislada.
6. INVITACION AL ESTUDIANTE
 Plantee tres factores que afecten la actividad
de las enzimas de restricción
RTA: Existen varios factores que son críticos al
trabajar con enzimas de restricción y que pueden afectar la
actividad de estas enzimas como:
1.      Pureza del DNA – la reacción de enzimas es muy
dependiente de la pureza, contaminantes como
proteínas, fenol, cloroformo, etanol, EDTA, SDS,
altas concentraciones de sal, etc. inhiben la
endonucleasa.
2.      Temperatura y pH – las enzimas son muy
sensitivas a temperatura y pH en lo que respecta a su
estabilidad y actividad.
3.      DNAsas – Las DNAsas degradan el DNA en
presencia de Mg++.
7. Conclusiones
 La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un
método por el cual se puede duplicar un pequeño
fragmento de ADN.
 Es de vital importancia contar con las respectivas
medidas de seguridad tanto para los estudiantes
como para la muestra para así evitar la degradación
del ADN por medio de las ADN asas.
 Es importante saber que tipo de PCR usar en los
diferentes casos que se necesiten y en las
condiciones en las que se encuentre el ADN para de
esta manera lograr una correcta amplificación y de
que se obtenga en resultado deseado.
Referencias
Este informe está basado en las fuentes bibliográficas que se
citan a continuación, así como en la propia experiencia de
Tunarosa, J en el laboratorio del curso de biociencias II
los participantes
grupo A2 (UDES).

I. Tipos de PCR. (2019). Retrieved 20 September

2019, from
http://apuntesbiologiamol.blogspot.com/2014/05/tip
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II. LEON, F., MATEUS SANCHEZ, J. and
GONZALES SEDANO, G. (2019). Manual De
Laboratorio Biociencias 2 Medicina. 1st ed.
Bucaramanga.

III. Acidosis y Alcalosis | Lab Tests Online-ES. (2019).

Retrieved 6 September 2019, from
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alcalosis