PRODUCCION DE

El
ANTIBIOTICOS
descubrimiento de los antibióticos y el desarrollo de la
industria de su producción es el ejemplo mas exitoso de la
unión entre ciencia básica y aplicada.
A su vez, el crecimiento de este campo marca el nacimiento
de la moderna industria farmacéutica. Compañías como
Squibb, Merck, Lederle y Eli Lilly, de vasta trayectoria en la
industria química, se convirtieron en grandes emporios a partir
del descubrimiento y explotación de los antibióticos.
Fermentation technology had to be re- invented: a slowly growing strain on rich medium
with aeration posed new requirements onthe sterility of equipment. Temperature and pH
regulation turned out to be critical for yield
Los ANTIBIOTICOS son los METABOLITOS
SECUNDARIOS mas importantes desde el punto de
vista MEDICO Y ECONOMICO.
     Han sido la causa principal del aumento de la
longevidad y de las expectativas de vida ocurridos
durante este siglo.
     La producción actual alcanza las 100.000 Ton/
anuales con un valor de 5 billones de U$S (datos del año
 Principales productos de fermentacion:
usos y volumenes de produccion
Product Production [t/a] Use

Ethanol 24’000’000 Food, fuel, chemistry

Citric acid 450’000 Food (acidfier), pharma,
industry (complex formation)
Baker’s yeast 300’000 Food
Glutamic acid (monosodium 270’000 Food
glutamate)
Lysine 90’000 Aminal feed
Lactic acid 50’000 Food, 50’000 Food, pharma
Glucono-δ-lactone 50’000 pharma, chemistry (complex
formation with Ca2+)
Antibiotics 30’000 pharma
Biopolymers 10’000 oil prodution, emulsifiers,
gelling agents, etc.
Características de los metabolitos secundarios o
especiales

   No esenciales para el crecimiento

   Pueden ofrecer ventajas para la sobrevivencia en ambientes
competitivos
   Provienen del metabolismo general pero pueden contener
precursores no usuales (D-Aminoacidos, etc)
   Se encuentran solo en algunos géneros microbianos
   Se forman por reacciones poco especificas originando
familias de compuestos.
 Biosíntesis compleja, multienzimatica, con numerosas etapas
de síntesis y control, que involucra un conjunto de genes.
  Son compatibles con una baja velocidad de crecimiento.
 Su producción esta ligada a la limitación en algunos
nutrientes y al exceso de otros (condiciones no balanceadas).
Los rendimientos son en general bajos pero debido a su gran
actividad los procesos son económicamente rentables
  Estructuras químicas complejas y diversas
 Microorganismos productores

Hongos filamentosos (Eumycetes) : Producen el 25 % de los

antibioticos conocidos
Géneros principales: Aspergillus , Monilia, Penicillum,
Cephalosporium

In Penicillium there is no foot-cell, the

stalk arising from an undifferentiated cell
of the mycelium. The conidiophore is
septate and ends in a whorl of short
branches, the metulae, each of which •Key to Aspergillus shown
bears a whorl of little branches or
sterigmata, which forms the conidia. The • . cp - conidiophore
spore heads of Penicillium are seen to be v - vesicle
looser than those of Aspergillus. They s - sterigmata
are more brush-like in appearance as
compared with the compact globular or c -chains of
conidia
cylindrical spore heads of Aspergillus.
Bacterias:
Bacterias Producen el 75 %
de los antibioticos conocidos

Actinomycetes : Generos
Streptomyces y Nocardia
(65%)

Pseudomonales y Bacillus
(10%)
 Algunos antibióticos producidos comercialmente
Antibiótico Método de producción Microorganismo
Bacitracina Fermentación Bacillus
licheniformis
Cefalosporina Fermentación y Cephalosporium
semisintesis sp.
Cloramfenicol Síntesis química ---------------
Eritromicina Fermentación aeróbica Streptomyces
sumergida erythreus
Neomicina Fermentación Streptomyces
fradiae
Nistatina Fermentación con Streptomyces
control de oxigeno noursei
Penicilinas Fermentación y Penicillium
semisintesis chrysogenum
Polimixina Fermentación Bacillus polymyxa
Estreptomicina Fermentación Streptomyces
griseus
Tetraciclinas Fermentación directa o Streptomyces
modificación química rimosus, flavus,
de la clortetraciclina aureofaciens,
antibioticus
 Los antibióticos beta-lactamicos son los mas importantes y constituyen el 65% del mercado.
     H S1 CH3
5 2
structura general de las penicilinas R1 N CH3
3
C N O
O C O-

R1 Penicilina Características
Penicilinas Sensible a ácidos
CH2—C OO- Penicilina G Sensible a -lactamasas
naturales
Bencilo Poco activa contra Gram -
Biosinteticas Penicilina G
CH2—COO-
Bencilo ------------------- --------------------------
* Acido resistente
O CH2 CO O Penicilina V
Fenoxiacetato
Semi-sinteticas  Acido resistente
CH CO
Ampicilina  Mayor espectro
PenGPenicilasa 6APA NH2 (D-) Sensible a -lactamasas

6 APA (método
químico) Acido resistente
Phe- CO Oxacilina Mayor espectro
N CH3 Resistente a -lactamasas
O

carbenicili Similar a la
na ampicilina
 ETAPAS DEL PROCESO DE PRODUCCCION

1- Mantenimiento y mejoramiento de cepas

2- Preparación del inoculo (puede incluir varias etapas segun la escala de producción)

3- Producción del antibiótico (Escala 240 m3 )

4- Cosecha

5- Purificación
Esquema de produccion de penicilina
1- MANTENIMIENTO
• Se puede partir de esporos o micelio conservados del modo
habitual
2- MEJORAMIENTO GENETICO
a- al azar con agentes mutagenicos
b- selección por resistencia a analogos de aminoacidos e
intermediarios metabolicos
c- selección de cepas incapaces de crecer en pOH-fenil-acetato
(no forman OH-penicilina)
d- Utilizacion del ciclo parasexual (recombinacion mitotica) y la
Fusion de protoplastos (con formacion de heterocariones)
e- Tecnologia de DNA recombinante para aumentar el dosaje
genetico de algunas enzimas (isopenicilin sintetasa)
3- INOCULO
Durante esta etapa se prefieren cultivos aireados y agitados en
medios ricos con alta velocidad de crecimiento (= 0.1 h-1).
Metabolismo aerobico con predominio de las vias de EMP, ciclo
de TCA y via de las pentosas.
Medio tipo: corn steep liquor+ 2% de un azucar (glucosa o
lactosa) + fosfatos + CaCO3 como buffer.
 PRODUCCION DE PENICILINA

140
120
lactosa
Biomasa (g/L), Hde C,

100
amonio, penicilina

80 penicilina
(g/Lx10)

60 celulas
40 amonio
20
0
0 50 100 150
TIEMPO DE CULTIVO (H)
4- Caracteristicas y requerimientos del proceso
productivo
Condiciones aerobicas. (aereacion y eliminacion del CO2)

Fuentes de carbono: lactosa, glucosa o sacarosa

(limitantes). Tambien se emplean almidones,
dextrinas.melazas, aceites vegetales y animales- Regulacion
catabolica: La glucosa no es compatible con la sintesis de
penicilina. Se utiliza entonces lactosa (que permite menor
) o una mezcla de ambos azucares. Ademas la glucosa
reprime la incorporacion de valina.

Fuentes de nitrogeno: corn steep liquor (contiene

precursores de cadena lateral, acetico y lactico, P y S. otra
posibilidad es el agregado de amonio durante el proceso.
Exceso de amonio: inhibicion de la glutamino-sintetasa
Falta de amonio: disgregacion del micelio.

Agregado de precursor de cadena lateral: pHO fenil

acetico o sus precursores (fenil alanina, fenetil alanina, etc).
Se requieren en alta cantidad (aprox. 0.5 g/ g penicilina) por
lo cual es uno de los insumos que incide mas en el costo.
 Datos del proceso

Y P/ S (PenG/ g Glucose) 1.13 g/ g

Y X/ S (Biomasse/ g Glucose) 0.45 g/ g
maintenance 0.027g/( g cells* h)
Fermentationsdauer
Wachstumsphase 25h
Produktionsphase 180h
Biomassekonzentration zum Ende 45 kg/ m 3
[PenG] zum Ende 50 kg/ m 3
Glucoseverbrauch:
- Glucose für Biomasse 100kg/ m 3
- Glucose für PenG 44 kg/ m 3
- Glucose für maintenance (180h) 219 kg/ m 3
Total 363 kg/ m 3
Effektiver Y P/ S 0.14 g/ g
CEFALOSPORINAS
BIOSINTESIS
 SINTESIS DE NUEVOS
ANTIBIOTICOS
Una metodologia que se aplica en la actualidad es la
combinacion dentro de un unico organismo, de dos
vias ligeramente diferentes de produccion de
antibioticos de la misma familia
NuevosAntibioticos producidos por cepas salvajes y
transformantes
Cepa Color del cultivo antibiotico
acido alcalino
S. coelicolor rojo Azul Actinorodina
Streptomyces sp amarillo Marron Medermicina
S. violaceoruber rojo Purpura No testeado
Streptomyces sp/pIJ2303 rojo Azul Medermicina y
actinorodina
Streptomyces sp/pIJ2315 rojo Purpura Mederrodina,
actinorodina
S. violaceoruber/pIJ2303 rojo Azul-violeta Granaticin, actinordina,
dihidro- Granaticin