UNIDAD 2: REPLICACIÓN DEL DNA

• La replicación del DNA es la base

molecular de la transmisión de la
vida.
• La reproducción va unida a la
replicación del DNA.
REPLICACIÓN:
“ Por cada molécula de DNA que se
replica surgen 2 moléculas idénticas entre si e
idénticas a la molécula que las origino. ”
• Proceso altamente eficiente sin embargo cuando falla ,
una o ambas moléculas hijas resultan diferentes a la
molécula original: Mutación
• Los fallos en la replicación son eventos muy raros, por lo
que el proceso es muy eficiente:

LA SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS VA PASANDO

A LAS CÉLULAS HIJAS FIELMENTE DURANTE
MUCHAS GENERACIONES.

• Mutaciones Variantes genéticas

Eliminadas
Indiferentes Caracteres que
darán ventaja biológica frente a otros individuos
 EL DNA SE REPLICA
SEMICONSERVATIVAMENTE:
• Las dos hebras de la molécula parental
se separan rompiéndose los puentes
de hidrogeno y cada hebra de la
molécula parental sirve de molde para
fabricar la complementaria.
• Modelo semiconservativo:
1 hebra nueva
1 hebra vieja (molde)
EXPERIMENTO DE RADIOMARCAJE
• E.coli 1. Cloruro amónico
(15N) Bases nitrogenadas
2. Cloruro amónico (14N)
(N normal) bases
nitrogenadas
• Las 2 hebras se separan para que suceda la replicación.
• Para la replicación es necesario que el superenrrollamiento de la
molécula se relaje y que la doble hélice se abra.
• LK Numero de veces que una hebra de DNA se enrolla en
sentido dextrógiro alrededor del eje de la hélice.

LK DNA relajado Tienen diferente LK por lo

LK DNA superenrrollado que se dicen que son isómeros
topológicos (Topoisómeros)
• Densidad de superenrrollamioento (σ):
El grado de superenrollamiento del DNA
• La σ del DNA que se encuentra en la naturaleza es: - 0.06
• El superenrollamiento ( - ) prepara el DNA para procesos que
requiere separación de las hebras: Replicación, recombinación y
transcripción.
LAS TOPOISOMERASAS:
• Son proteínas que deshacen el superenrollamiento
del DNA necesario para iniciar la replicación.
• Alteran el LK del DNA en tres pasos:
1. Corte de una o ambas hebras de de DNA.
2. Paso de un segmento de DNA a través de la brecha
producida.
3. Cierre de la brecha.
• Topoisomerasas tipo I 1 hebra
• Topoisomerasas tipo II 2 hebras ( GIRASAS)
• Antibióticos Girasas
Novoblianina:
Impide la unión del ATP a las girasas
Ác. nalidixico y ciprofloxacina:
Interrumpe la ruptura y el empalme de las hebras de
DNA
LAS HELICASAS:
• Separan o abren las 2
cadenas de DNA
rompiendo los puentes de
hidrógenos.
• Se unen a las 2 hebras:
1 hebra 5’ 3’
1 hebra 3’ 5’

LAS SSB:
• Las proteínas SSB se unen a las hebras recién abiertas
impidiendo que se vuelvan a formar los puentes de
hidrogeno entre las bases complementarias.
LAS DNA POLIMERASAS
• Leen la secuencia de nucleótidos de la hebra molde y
polimerizan la hebra complementaria.
LA DNA POLIMERASA I: HEBRA MOLDE
HEBRA
• Monómero de 103 kd que SINTETIZADA

cataliza la adición paso a

paso de unidades de BAS
E
BASE

desoxirribonucleótidos al
extremo 3’ de la cadena de
DNA.
BAS
DNA POL I BASE
E
(DNA)n residuos + dNTP (DNA)n+1 + ppi

• Los precursores son.

BAS
dATP, dGTP, dCTP y dTTP E
BASE

• La DNA POL I adiciona dNTP

en el 3’-OH libre de la
cadena. ADICIÓN DE UN
BASE
DESOXIRRIBONUCLEÓTIDO
• La elongación es en TRIFOSFATO

dirección: 5’ 3’
• Necesita un cebador con
BASE
3’-OH libre
La DNA POLIMERASA I es una exonucleasa 3’ 5’ que corrige sus
errores

• La actividad nucleasa 3’ 5’ tiene

una función correctora en la
polimerización.
• La DNA POL I elimina los residuos
incorrectamente apareados antes de
polimerizar el siguiente dNTP.

La DNA POLIMERASA I también es una exonucleasa 5’ 3’

• La DNA POL I también puede hidrolizar a partir del extremo 5’ de la

cadena.

• Exonucleasa 5’ 3’ = 3’ 5’
• La actividad 5’ 3’ elimina el cebador y complementa la
actividad exonucleasa correctora 3’ 5’.
Estructura de la DNA POLIMERASA I :
N Exonucleasa Exonucleasa Polimerasa C
5’ 3’ 3’ 5’
Fragmento pequeño Fragmento grande de Klenow
Las DNA POLIMERASAS II y III:
• Se parecen a la DNA POL I en varios aspectos:
1. Catalizan la síntesis de DNA dirigida por un molde a partir de
dNTPs.
2. Requieren un cebador con grupo 3’- OH libre.
3. Poseen actividad exonucleasa 3’ 5’.

LA REPLICASA SÍNTETIZA LA MAYOR

PARTE DEL DNA NUEVO Y LA DNA POL I
ELIMINA EL CEBADOR Y RELLENA
ESPACIOS VACIOS
• La REPLICASA (DNA POL III) 1000 nucleótidos / seg.
• La DNA POL I 10 Nucleótidos / seg.
• DNA POLIMERASA III 10 Cadenas polipeptídicas
900 kd.
• 4 subunidades:
Subunidad α Polimerasa
Subunidad ξ Exonucleasa 3’ 5’
Subunidad β2 y T2 Progresividad y
desplazamiento a través del DNA
molde.
• Subuniadad β2 Desplaza toda la DNA POLIMERASA a
lo largo del DNA reconociendo la hebra
completaría.
• La DNA POLIMERASA II
Es una enzima de emergencia; participa en la reparación de
huecos si se producen en algún momento.
• DNA POLIMERASA I Correctora de pruebas

Relee, establece
errores y corrige

DNA DNA
POLIMERASA I POLIMERASA III
• Frecuencia de error 1 / 5.000.000.000 nucleótidos

La perfección de las DNA POLIMERASAS asegura la

transmisión fiel y estable de la información genética de una
generación o otra.
LA PRIMASA:
• Sintetiza el cebador de RNA que permite que inicie la síntesis de
DNA.
• RNA (cebador) 3’-OH DNA POL III REPLICACIÓN
• Primasa DNA PRIMOSOMA RNA (Aprox. 5 NTPs)
ORIGEN DE REPLICACIÓN:
• Punto donde la doble hélice vieja se separa en sus dos hebras
para iniciar la replicación.
E. coli y plasmidos: El cromosoma circular comienza a abrirse
por el origen de replicación (OriC) hasta generar 2 cromosomas
completos.
Replicón:
Una molécula de DNA que contiene un origen de replicación.
(Unidad de replicación).
• Ej: Cromosoma de virus 1 origen de replicación
Cromosoma bacteriano 1 origen de replicación
• Cromosomas eucariotas Múltiples orígenes de replicación
Múltiples replicones.

Ori C:
• Es el locus cuya función es iniciar la replicación en E. coli.
• La replicación comienza con el desenrollamiento del punto ori C.
• 3 secuencias en tandem (13 nucleótidos) 5’- GATC -3’ (11X)
• Secuencias ricas en A – T.
 LA REPLICACIÓN ES “ Una hebra se sintetiza en
SEMIDISCONTINUA fragmentos y la otra en horma
• Las 2 hebras sirven como continua ”
molde.
• Las hebras son antiparalelas
• Todas las DNA
POLIMERASAS sintetizan en
dirección 5’ 3’.
• Una hebra crece
continuamente sobre el
molde de la hebra vieja en
dirección 3’ 5’ (hebra guía
o conductora).
• La hebra nueva crece sobre
la otra hebra en dirección
5’ 3’en fragmentos de
1000 nucleótidos llamados Cadena
de OKASAKI (hebra Fragmentos
de síntesis
de Okasaki
retrasada). continua
• Los fragmentos de OKASAKI se unen por medio de la DNA ligasa.
• DNA LIGASA Cataliza la formación de un enlace fosfo
diéster de una cadena de DNA con el 5’-
fosfato de la otra.
LA REPLICACIÓN
LA REPLICACIÓN
 PROTEÍNAS DE REPLICACIÓN
EN E.coli:

PROTEÍNA FUNCIÓN
Helicasa Desenrolla la doble hélice.
Topoisomerasa Relaja el superenrollamiento
(girasa) ocasionado por el desenrrollamiento.
Introduce superenrrolamientos (-)
Primasa Sintetiza el RNA cebador.
SSB Estabiliza las hebras sencillas.
DNA Pol III Sintetiza el DNA.
DNA pol I Elimina el cebador y rellena huecos.
DNA ligasa Une los extremos del DNA.
REPLICACIÓN EN VIRUS:
• El modelo de CIRCULO RODANTE ocurre en virus con cromosoma
circular de DNA de doble hélice.

• Los retrovirus infectan

la célula e inyectan su RNA y
la enzima transcriptasa
inversa.
REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS:
• Los eucariotas tiene tres tipos de DNA polimerasas (α,β,y γ).
• Las DNA POLIMERASAS α y β Núcleo
• La DNA POL α La DNA POL III.
• La DNA POL β Procesos de reparación.
• La DNA POL γ Mitocondrias.
•
• El DNA eucariota
contiene múltiples
replicones.
• La replicación es
bidireccional.
• Sec ARS (Levaduras):
Secuencias de
replicación autónoma:
Origen de
replicación
independiente.