SEMANA 14.

Replicación del ADN, Transcripción del código genético

y síntesis de proteínas.
 El DNA estirado alcanza aprox. 2 m
Estructura del DNA
Ácido desoxirribonucleio

•Nucleótido 3.4 Asmtrong=0.000003m

grupo fosfato
azúcar Enlace fosfodiéster
base nitrogenada

• Puentes de hidrógeno
• Antipalelo
• Doble hélice
Apareamiento de las bases nitrogenadas
CROMOSOMAS EUCARIOTAS
 SUPERENROLLAMIENTOS SUPERENROLLAMIENTO DEL DNA
▪ El término superenrollamiento se
refiere al enrollamiento de una hélice
sobre sí misma

▪ El DNA con vueltas

superhelicoidales se llama
DNA superenrollado.

▪ Cuando no hay
enrollamiento neto del eje
del dúplex sobre sí mismo,
el DNA está relajado
 SUPERENROLLAMIENTO CAUSADO POR LA SEPARACIÓN DE LAS DOS HEBRAS

Al separar las dos hebras, la tensión resultante produce superenrollamiento

 ¿En qué momento de la vida de la célula ocurre?

EXPRESIÓN

La información genética fluye de ácido nucleico a ácido nucleico y de ácido nucleico a

proteína
 ¿En qué momento de la vida de la célula ocurre?
REPLICACIÓN
EXPRESIÓN

▪ Ocurre justo antes de que una célula se divida.

▪ Es necesaria para que la célula hija tenga su propio
genoma.
CARACTERISITCAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN
Replicación semiconservativa del ADN
 CARACTERISITCAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN
Modelos de replicación, la replicación del ADN es semiconservativa

Se producen dos doble hélices,
una de ellas tiene las dos hebras
viejas (está intacta, se conserva) y
la otra doble hélice posee ambas
hebras de nueva síntesis.
Se producen dos doble hélices,
recién sintetizadas poseen una
hebra vieja (una mitad vieja) y
otra hebra nueva (mitad nueva).
Se producen dos doble hélices,
cada una de ellas con hebras que
poseen tramos viejos y tramos de
nueva síntesis en diferentes
proporciones.
 CARACTERISITCAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN
La replicación es bidireccional

▪ El proceso se inicia en localizaciones especificas del genoma, el origen de replicación, y se desarrolla a ambo lados del mismo
formando la correspondiente horquillas de replicación.

▪ El origen de replicación es único en procariotas, mientras que en eucariotas, debido a su alta complejidad y tamaño de ADN,
presenta múltiples origines de replicación.

▪ Replicón o unidad funcional de replicación: cantidad de ADN que se puede sintetizar a partir de un único origen de replicación.
▪ En procariotas existe un origen de replicación único, Ori C; todo el genoma bacteriano constituye una unidad de replicación o
replicón.

▪ El origen de replicación contiene las secuencias de reconocimiento para que se una la maquinaria de la replicación, regiones ricas en
Adenina y Timina que facilitan la apertura de la doble hélice.
 ¿cuáles son los requerimientos básicos para que ocurra?

▪ Cadena molde.
▪ Cebador (iniciador a primer) de
RNA, proporciona un extremo libre
3´-OH
▪ Nucleótidos libres:
Desoxirribonucleósidos
5´-trifosfatos: dNTPs
▪ Magnesio.
▪ Enzimas:
▪ Helicasa
▪ Primasa
▪ ADN-polimerasa
▪ Topoisomerasa.
▪ Ligasa
▪ Proteínas de unión a ADN
monocatenario..
DNA POLIMERASAS EN PROCARIOTAS
Enzimas que participan en la duplicación del
ADN en células procariotas:
Topoisomerasas: desenrollan y enrollan el ADN.
Helicasa: rompe los puentes de hidrógeno,
separa la doble cadena.
DNA polimerasa III: coloca los nucleótidos de
ADN, reconocimiento y corrección de
ensamblaje.
Primasa: coloca fragmentos cortos de ARN en los
fragmentos de Okasaki de la hebra rezagada.
Ligasa: se encarga de unir fragmentos de Oasaki.
DNA polimerasa I: con actividad de
exonucleasas, retira los fragmentos cortos de
ARN y los reemplaza por ADN.
DNA polimerasa II: rellena brechas y facilita la
síntesis de DNA dirigida por plantillas dañadas.
DNA POLIMERASAS EN EUCARIOTAS
Enzimas con la capacidad de copiar exactamente una hebra molde
de ADN.
1. Polimerasa alfa: nuclear, participa conjuntamente con la
Primasa en la síntesis de los fragmentos de Okasaki
2. Polimerasa beta: nuclear, reparación de DNA dañado.
3. Polimerasa gamma: mitocondria, síntesis de DNA, corrección
de errores.
4. Polimerasa delta: nuclear, ensambla la hebra líder y rezagada
(polimerasa III).
5. Polimerasa épsilon: nuclear, reparación de DNA.
▪ α, δ y ε: son activas en las células en división (DNA polimerasa
III)
▪ β: funciona como reparadora de DNA dañado (DNA polimerasa
I).
▪ γ: se localiza en la mitocondria.
DNA POLIMERASA BACTERINAS Y DE EUCARIOTES
Características del DNA POLIMERASAS

• Todas las DNA Polimerasas sintetizan DNA solo en dirección 5´→ 3´añadiedo a la cadena en crecimiento un
dNTP al grupo 3´-oH.

▪ No son capaces de iniciar la síntesis del DNA de novo sino que necesitan de un cebador o incitador
preformado, esto solo pueden hacerlo las RNA polimerasa.
 ¿qué es una secuencia de consenso?
▪ Secuencia ideal que representa los nucleótidos o aminoácidos que se encuentran con mayor frecuencia en cada
posición de un fragmento de DNA o de una proteína, respectivamente.

▪ Secuencia de nucleótidos (o aminoácidos) que se encentran conservados en el DNA (o las proteínas) en una
determinada posición relativa y que tienen un significativo biológico determinado.
 Iniciación: Apertura de la doble héice
▪ En el origen de replicación.

• Secuencia corta: 245 pares de bases.

• Ricos AT.
• DUE=elemento donde se va abrir el DNA.

• 8 sitios de unión de DnaA:

• R→ unión de DnaA – ADP o DnaA-ATP.
• I → unión sólo de DnaA-ATP.
Iniciación: Apertura de la doble héice

• Exponer la región con el origen de replicación.

• 8 moléculas de DnaA (unida a ATP) se une a los sitios R e I en el origen de replicación.
• El ADN y la proteína DnaA forman un complejo, el ADN se enrolla alrededor del complejo.
• El complejo provoca un estrés de torsión en la cadena que hace que la región DUE se abra.
• Hexámeros de DnaB, Helicasa, (con forma de disco) se une a cada cadena de nucleótidos.
• La apertura dela hélice, la unión de DnaB y DnaC a la cadena de ADN, y el movimiento de DnaB a los largo de la doble hélice son
dependientes de ATP.
• Hay que estabilizar las cadenas separadas para que no se apareen nuevamente, SSB (singlr strand binding protein).
Iniciación: Apertura de la doble hélice
Replicación del ADN
1. El DNA se desenrolla

2. La enzima Helicasa rompe los puentes de hidrógeno entre las dos cadenas,
3. Las proteínas enlazantes a cadena sencilla (SSBs) evitan que las cadenas se vuelvan a
unir.

Burbuja de replicación

Las burbujas de replicación se forman

en múltiples lugares a lo largo de la
molécula de DNA, aumentando
considerablemente la velocidad de la
replicación.
BURBUJA DE REPLICACIÓN HORQUILLA DE REPLICACIÓN

▪ Hebra conductora, cuya copia coincide con la dirección 5´→ 3´, se sintetice en forma continua.
▪ Hebra rezagada, lo hace de forma discontinua a través de fragmentos de Okasaki.

▪ La replicación es semicontinua, si se observan simultáneamente las dos horquillas de replicación

Replicación de la hebra conductora
La DNA polimerasa lee de 3´a 5´y polimeriza la nueva cadena en
dirección 5´a 3´.

La RNA primasa coloca los primeros nucleótidos de la nueva cadena.

El segmento resultante de RNA cebador proporciona un extremo 3´
libre al que enlazarse.
Replicación de la hebra conductora
▪ La DNA polimerasa puede ahora ir colocando los nucleótidos complementarios a medida que se desplaza a los largo de la
cadena molde.
▪ La DNA polimerasa lee la cadena molde en dirección 3´a 5, mientras que construye la nueva cadena en la dirección opuesta
5´a 3´.
▪ La hélice continúa desenrollándose y abriéndose, permitiendo a hebra conductora crecer de modo continuo en la dirección
de la horquilla de replicación.
Replicación de la hebra conductora
▪ La DNA polimerasa reemplaza al cebador RNA por DNA.
 Se produce una
liberación de energía
cuando el enlace se
rompe

▪ El fosfato se une al grupo OH libre.

▪ Se forma puentes de hidrógeno entre los nucleótidos.

▪ Esta energía se usa para polimerizar la nueva cadena de DNA.

▪ La polimerización es el proceso por el que se forman las nuevas cadenas.
 Replicación de la hebra rezagada
▪ La hebra rezagada se sintetiza en dirección opuesta a la del avance de la horquilla.
▪ La hebra rezagada es la nueva cadena que crece de modo discontinuo alejándose de la horquilla de replicación.

La DNA polimerasa lee de

3´a 5´y polimeriza la nueva
cadena en dirección 5´a 3´.

La RNA primasa coloca

los primeros nucleótidos
de la nueva cadena.
El segmento resultante
de RNA cebador
proporciona un extremo
3´ libre al que enlazarse.
 Replicación de la hebra rezagada
▪ Antes de que pueda continuar la síntesis de la hebra rezagada, la hélice debe de continua desenrollándose. Así la hebra se
sintetiza de manera discontinua.
▪ Los tramos discontinuos se denominan fragmentos de Okazaki.
▪ Al igual que en la hebra conductora, una DNA polimerasa diferente cambia el cebador de RNA por DNA.

▪ Una DNA ligasa sella la unión de los fragmentos de DNA. Enlaz el extremo 3´-OH de un fragmento con el 5´P del fragmento
siguiente.

▪ La DNA polimerasa reemplaza al cebador RNA por DNA.

▪ La nueva cadena es una copia exacta de la otra
cadena parental
TRANSCRIPCIÓN
 TRANSCRIPCIÓN
Conceptos necesarios.

Intrón: secuencias no codificadoras de ADN que son separadas

por exones.

Exón: secuencias codificadoras de DNA en genes.

Promotor: una región del DNA a la que puede unirse la RNA

polimerasa para comenzar la transcripción.

Operón: un grupo de genes cuya expresión ésta controlada por

un único operador. Un operón consisite en:

▪ un operador: controla el acceso de la ARN

polimerasa al promotor
▪ un promotor: donde la ARN polimerasa reconoce
el sitio de inicio de la transcripción
▪ un gen regulador: controla el tiempo y velocidad
de transcripción de otros genes
▪ un gen estructural: codifican las enzimas
relacionadas o las proteínas estructurales
TRANSCRIPCIÓN

INTRODUCCIÓN
En las rutas de transmisión de la
información genética, se denomina
transcripción al proceso de trasvase de la
información contenida en el ADN, a la
molécula de ARN. Constituye el primer
paso en la expresión de los genes, y
mediante esta ruta se sintetizan todos los 5´ 3´ 5´ 3´ 3´
tipos de ARN que existen en la célula. En la
transcripción cada ARN formado T-A T-A -A
corresponde a la copia de una porción o A-T A-U -U
segmento de ADN. La información escrita en
una secuencia de desoxirribonucleótidos se C-G C-G -G
convierte en información escrita en una T-A T-A -A
secuencia de ribonucleótidos cuyas bases
son complementarias a las del ADN. El C-G C-G -G
lenguaje escrito en bases nitrogenadas A-T A-U -U
continúa siendo el mismo, con la salvedad
de que cambia una base pirimidínica, la T-A T-A -A
timina del ADN que es sustituida por el
3´ 5´ 3´ 5´ 5´
uracilo del ARN.
Tipos de RNA y sus funciones

Mensajero: mRNA Ribosomal: rRNA Transferente: tRNA

ESTRUCTURA: ESTRUCTURA: ESTRUCTURA:

Cadena lineal que consta de tripletes de nucleótidos Proteínas y forma los ribosomas
llamados codones. Se obtiene a partir del ADN (cuando se Hoja de trebol.
FUNCIÓN: FUNCIÓN:
copia un fragmento de una cadena de ADN).
FUNCIÓN: Traduce el mensaje del ARNm para sintetizar la
proteína.
Transporta los aminoácidos para formar las
Transportar la información del ADN hasta los ribosomas
para que allí sea traducida. proteínas en los ribosomas según la
secuencia del ARNm.
CARACTERÍSTICAS DE LA TRANSCRIPCIÓN

La síntesis de ARN dependiente de ADN es un proceso muy parecido al de la replicación, existiendo una serie de similitudes que
establecen un estrecho modo de operación por parte de la célula a la hora de procesar el material genético. Así puede observarse el hecho
de que la reacción es igualmente de polimerización, se necesita también un molde para realizarla, y, por último, la dirección de síntesis es
fija al igual que en la replicación.
Sin embargo, la transcripción presenta una serie de características que la diferencian de la replicación,
como son:
1. El proceso se limita a una porción de ADN, se dice que es un proceso selectivo, ya que ha de reconocerse un punto de inicio y uno de
terminación en la molécula de ADN.
2. El proceso puede repetirse infinidad de veces a lo largo de la vida de la célula, a diferencia de la replicación que es un proceso que
marca la división celular, se dice que es reiterativo. Una región concreta de ADN puede ser copiada multitud de veces dando lugar a la
formación de múltiples moléculas iguales de ARN.
3. El proceso no afecta a la estructura del ADN, es un proceso conservador de la molécula de ADN, el gen o genes copiados permanecen
iguales.
4. El proceso es monocatenario, afecta a una sola de las cadenas del ADN, y la copia resultante, o ARN es una molécula de una única
cadena o monocatenaria. La situación de los genes a copiar puede localizarse en cualquiera de las dos cadenas del ADN, la cadena que
funciona como molde para la síntesis de ARN se la denomina hebra molde (-), y la cadena complementaria hebra no molde (+). Genes
diferentes pueden usar diferentes cadenas como molde.
 TRANSCRIPCIÓN

EUCRIOTA PROCARIOTA
▪ Transcripción y traducción separadas en tiempo y ▪ Transcripción acoplada a la traducción del ARNm.
espacio (membrana nuclear) ▪ ARN policistrónico, sin intrones.
▪ Maduración del ARN (modificaciones post
transcripcional.
▪ Compleja regulación.
La secuencia promotora y las regiones reguladoras funciona como un
interruptor que “prenden y “apagan” la expresión de un gen.
 Transcripción en PROCARIOTAS
INICIACIÓN:
promotor: TTGACA/TATAAT
ARN polimerasa

ELONGACIÓN:
ARN polimerasa lee de 3´→5´ y polimeriza de
5´→3´.
Ribonucleótidos trifosfato;
ATP/GTP/CTP/UTP.


TERMINACIÓN:
señal de terminación
(Secuencia palindrómica: C/G…TTTT). Forma un
bucle el RNA y se separa del ADN.


RNA polimerasa - procariotas
 Transcripción en eucariotas
Mucho más compleja. ¿ recuerda que el ADN en eucariotas está en el núcleo?¿Y que además está unido a
histonas para compactarlo?.
Se requieren RNA polimerasas mucho más complejas.
 Transcripción en eucariotas
Enhancer

INICIACIÓN:
CAAT/TATA
factores de transcripción.
ARN polimerasa

ELONGACIÓN:
ARN 5´→3´.
30 nucleótidos – metilguanosina trifosfato (5´)


TERMINACIÓN:
TTATTT
Adición cola poli-A: 200 nucleótidos en el 3´.


MADURACIÓN:
intrones y exones --- Splicing (corte y empalme).
Función del Cap: proteger al mensajero de la degradación
particular de las 5´exonucleasas) y unir el mensajero con
complejos proteicos o con el ribosoma.
 TRADUCCIÓN
▪ El proceso de traducir la secuencia de ARNm en una secuencia de aminoácidos durante la síntesis de proteínas.
▪ 90% de energía de una célula se utiliza en la síntesis de proteínas.
▪ En E. coli la síntesis de una proteína de 100 aa se hace en 5 segundos.
▪ Elementos involucrados:
TRADUCCIÓN en eucariotas- iniciación
TRADUCCIÓN en eucariotas- - iniciación

▪ Sitio A: entrada del ARNt cargado con aa o aminoacil-ARNt.

▪ Sitio P: cargado por el peptidil-ARNt. ARNt que lleva la cadena polipeptídica creciente.
▪ Sitio E: salida de los ARNT después de haber dejado el aa.
▪ El ARNt iniciador se ubica en el sitio P.
TRADUCCIÓN en eucariotas- - Elongación
TRADUCCIÓN en eucariotas- – terminación
TRADUCCIÓN en procariotas – iniciación

Secuencia Shine Dalgarno

ÁDN codificante 5´- A T T C G A T G C G T C C T T 3´
ADN molde 3´- T A A G C T A C G C A G G A A 5´

ARNm 5´- A U U C G A U G C G U C C U U 3´
Aminoácidos N Ile Arg Cys Val Lecu C
ÁDN codificante 5´- G T T A T A G C C A T G 3´
ADN nmolde 3´- C A A T A T C G G T A C 5´

ARNm 5´- G U U A U A G C C A U G 3´
Aminoácidos
ÁDN codificante 5´- A T G C C A T A C G A T G G G T C T G A C A G T T G A 3´
ADN molde 3´- T A C G G T A T G C T A C C C A G A C T G T C A A C T 5´

ARNm 5´- A U G C C A U A C G A U G G G U C U G A C A G U U G A 3´
Aminoácidos Met Pro tyr Asp Gly Ser Asp Ser stop
ÁDN codificante 5´- 3´
ADN molde 3´- T A C G A A T A T G C G T A A A C G A T T 5´

ARNm 5´- A U G C U U A U A C G C A U U U G C U A A 3´
Aminoácidos
ÁDN codificante 5´- C A T T C T C T T T A A 3´
ADN molde 3´- G T A A G A G A A A T T 5´

ARNm 5´- C A U U C U C U U U A A 3´
Aminoácidos His Ser Leu stop