Replicación

Propiedades generales del proceso de replicación

Biosíntesis del ADN

El mecanismo de la replicación

La maquinaria de la replicación

La Replicación en Eucariotas

Telómeros y Telomerasas
La replicación del ADN y medicina

• La replicación del material genético es esencial a la vida

mitosis

• Errores en la replicación son el origen de las enfermedades

meiosis hereditarias

• Errores en la replicación son causa primaria de cánceres

• Existen patologías por incapacidad de reparar errores cometidos en

la replicación

mitosis • Los patógenos también replican. Entender estos procesos permite

establecer terapias específicas

• Muchos antibióticos inhiben la replicación de microorganismos

Modelos de replicación
El experimento de Meselson y Stahl

La replicación es semiconservativa
• Cada hebra se usa como molde para sintetizar otra
• Los nucleótidos se unen por complementariedad
• Se sintetiza una cadena nueva a partir de cada hebra vieja
• Se respeta la disposición antiparalela de las hebras

http://www.sumanasinc.com/webcontent/animations/content/meselson.html
Orígenes, burbujas y horquillas de replicación

La replicación se inicia en sitios

particulares (orígenes de replicación)

Cada origen define un replicón (unidad

de replicación independiente)

A partir de cada origen la replicación

avanza bidireccionalmente.
Se forma una burbuja de replicación
formada por dos horquillas que avanzan
en direcciones opuestas.

horquilla 1 horquilla 2
Replicación de ADN circular y lineal
Theta (θ) Cromosoma bacteriano Lineal Cromosoma eucariota
Reacción de Síntesis

En la síntesis de la nueva
cadena se generan:
• enlaces fosfodiester
(covalentes)
• puentes de H
entre las bases
complementarias

La síntesis ocurre en dirección 5´→3´

La replicación es semidiscontinua
• Todas las polimerasas catalizan la elongación de cadena in dirección 5´-3´.
• Las dos hebras están orientadas en dirección antiparalela.
• Solo una hebra avanza continuamente leyendo una hebra molde en dirección 3´- 5´.
• La hebra complementaria se debe sintetizar en fragmentos discontinuos.
 La hebra retrasada se sintetiza
en fragmentos de Okazaki

9
10
La replicación es un proceso complejo

• Señales:
• Ori C
• Ter

• Enzimas principales:

• ADN polimerasas
• Primasas
• Ligasas
• Helicasas
• Topoisomerasas
El mecanismo de la replicación

• INICIACIÓN
• Reconocimiento de orígenes de replicación.
• Separación de hebras.
• Posicionamiento de maquinaria de replicación.

• ELONGACIÓN
• Crecimiento bidireccional de las horquillas de replicación.
• Replicación semiconservativa, semidiscontinua, coordinada.

• TERMINACIÓN
• Reconocimiento de señales de terminación.
• Desensamble de replisomas.
 Inicio de la replicación en procariotas:
Separación de las hebras

Proteína
DnaA
Repetidos 13 pb ricos en
AT Repetidos 9
pb

Proteína DnaA se une a ADN

superenrollado en OriC.

Genera tensión disociando

repetidos adyacentes.

La helicasa comienza la
disociación de hebras.

Se asocian proteínas de unión

a cadena simple.
Helicasa: Separación de las hebras de ADN
Girasa (topoisomerasa II)
Eliminación de tensión durante la replicación

• QUINOLONAS
(ácido nalidíxico)
Se une a la subunidad A de la
DNA girasa (topoisomerasa)
Espectro: Gram-positivos e
infecciones urinarias
Primasa: síntesis del cebador
Ensamblaje del replisoma
Elongación
ADN Polimerasa I
Kornberg, 1957

ACTIVIDAD POLIMERASA
• Necesita Mg++ como cofactor
• La energía es provista por la liberación de PPi
• El ADN actúa como molde
• Necesita un cebador que ofrezca un extremo
3´OH libre para agregar nucleótidos
• La elongación ocurre en dirección 5´→ 3´
• Corrige errores de 3´→ 5´
ADN Polimerasa I

ACTIVIDAD EXONUCLEASA

•3´→5´ “Proofreading”
corrección de síntesis

•5´→3´ “Nick Translation”

reemplazo de cebadores
ADN Polimerasa III
• La DNA Pol III es la enzima principal en la replicación.
• Multimérica, con varias subunidades.
???
3’→5’ exonucleasa
core

Pol C: polimerasa

dimerización
Anillo corredizo

clamp loader
(cargador del anillo)
ADN polimerasa III
El anillo corredizo y la procesividad
• Enzima multimérica, pieza clave en la replicación
• El core de DNA Pol III es poco procesivo.
• El anillo corredizo asegura una muy alta procesividad.
Avance de la horquilla de replicación
• La DNA Pol III funciona como dímero.

• Las hebras crecen de modo

coordinado, avanzando en la
dirección de la horquilla.
Resolución de la replicación en la hebra retardada
Resolución de los cromosomas duplicados
Terminación

• Secuencias terminadoras.

• Retienen las horquillas de

replicación.

• Contienen secuencias que

facilitan la decatenación y
separación de los
cromosomas resultantes.

• Requieren elementos de
terminación particulares.
La replicación en los eucariotas es similar
La horquilla de replicación eucariota

𝜀
El problema de replicar los extremos de moléculas de
ADN lineales

¿Cómo se inicia la
replicación en el
extremo 5´?
 Replicación en los telómeros

Telomerasa
•Enzima que cataliza la síntesis de los extremos.
•Ribozima que contiene una molécula de ARN que sirve
como molde.
•El ARN guía la adición de los nucleótidos correctos.
•Niveles variables de actividad de la telomerasa.

•Regulan la división celular y el envejecimiento.

REPLICACIÓN DE LA CROMATINA
FIDELIDAD DE LA REPLICACIÓN
• Está dada por la actividad exonucleasa 3´- 5´.
• Requerimiento de cebadores.
• Imposibilidad de la polimerasa de agregar nucleótidos si no hay
apareamiento exacto en los nucleótidos previos.
• Implica la imposibilidad de replicación en dirección 3´-5´.