UNIDAD 2: MUTACIÓN Y REPARACIÓN DEL DNA

MUTACIÓN: Cualquier cambio de nucleótid

en la secuencia de bases del DNA
respecto al DNA del que procede.
Las mutaciones pueden ocurrir
espontáneamente o después de la
inducción con agentes mutagé

Las mutaciones espontáneas:

Pueden ocurrir debido a la acción

de las radiaciones naturales e
durante la replicación del DNA de
errores en la lectura de las base
UNIDAD 2: MUTACIÓN Y REPARACIÓN DEL DNA
MUTACIÓN: Cualquier cambio de nucleótidos
en la secuencia de bases del DNA
respecto al DNA del que procede.
Las mutaciones pueden ocurrir
espontáneamente o después de la
inducción con agentes mutagénicos.
Las mutaciones espontáneas:
Pueden ocurrir debido a la acción
de las radiaciones naturales e incluso
durante la replicación del DNA debido a
errores en la lectura de las bases.
• Errores en replicación frecuencia de 10-7 - 10-11
por pares de bases.
• La frecuencia de mutación (la proporción de mutantes en la
población) puede aumentarse significativamente con el uso de
mutágenos.
• Importancia:
1. La mutación es la fuente primera de variación del material
hereditario y la fuente del cambio evolutivo.
2. El análisis genético es posible gracias a las mutaciones que
proporcionan alternativas alélicas que se quieren investigar.
Tipos de mutaciones según su
localización:
• Germinales (células sexuales).
• Somáticas (localizadas)
• Espontáneas
• Inducida (Agentes mutagénicos)
Tipos de mutación según su efecto:
• Mutación neutra o silenciosa:
Mutación que no tiene efecto.

Cambia un codón que codifica para

el mismo aa.
(Degeneración del código
genético)
• Mutaciones de cambio de sentido o contrasentido:
Transforman codones con sentido a sin sentido (genera codón stop).

• Mutación por cambio de fase del marco de lectura:

Se producen por adición o deleción de bases.
Tipos básicos de mutaciones en el DNA (Mutación puntual):
• Sustitución de un par de bases por otro
• Deleción: eliminación de una o más pares de bases.
• Inserción de uno o más pares de bases.
Sustituciones:
• Tipo de mutación más común cambio de un par de
bases por otro.
• Pueden sen ser:
Transiciones purina por purina ó pirimidina por pirimidina.
Transversiones Purina por pirimidina ó pirimidina por purina.
• 4 tipos de transiciones: A - T G -C T-A C-G
G-C A - T G-C T-A
• 8 tipos de transversiones: A - T T-A A-T C - G etc...

A C

G T
• Transiciones Cuando algún agente reactivo altera los átomos
de H de las bases nitrogenadas

CAMBIA SU ESPECIFICIDAD PARA FORMAR P. DE H

Ej: Adenina – citosina
Adiciones o deleciones:
• Desplazamiento en la pauta de lectura del DNA.
• Replicación: El cambio en el número
de nucleótidos se produce por que durante la replicación ocurre en
la hebra de DNA un DOBLEZ que la DNA POL pasa por alto.
• DOBLEZ Hebra molde Hebra nueva n - 1
• DOBLEZ Hebra nueva Hebra nueva n + 1

REPLICACIÓN

Sobrecruzamientos iguales:

Adiciones o deleciones de grandes Alteración transmitida a

trozos de DNA, se generan por: las nuevas generaciones
• Apareamientos erróneos en la
meiosis:
Desplazamiento de bloques de
secuencia.
• Sobrecruzamiento:
Cromosoma con bloque de más
Cromosoma con bloque de menos
Translocaciones: Grandes trozos de DNA que se transportan a
otro lugar dentro del genoma.
Inversiones: Giros de 180º en el orden de la secuencia de
nucleótidos.
• Requieren 2 giros 2 hebras paralelas.
• 1 giro secuencia invertida con el esqueleto azúcar
fosfato en dirección contraria.
Agentes capaces de producir mutaciones:
• Agentes físicos: radiaciones ( Luz ultravioleta, rayos X)
• Agentes químicos
Radiaciones ionizantes:
• Rayos X: primer mutagénico conocido, comprobándose que la
radiación con rayos X aumentaba la frecuencia de
aparición de mutaciones 10 veces.
• Agentes mutagénicos radiaciones ionizantes
Rayos X, gama, alfa y beta
• Acción: Desplazamiento de electrones (e-)
molécula con carga (+) átomos ionizados
• Mutación células somáticas células
germinales
• Dosis semiletal genera mutaciones sin matar un organismo:
mata al 50% produce organismos
mutados sin trastornos graves.
Radiaciones ionizantes:
• Luz ultravioleta X: produce mutaciones ya que las bases
nitrogenadas absorben luz a una longitud de
onda de 260 nm.
• Luz U.V. Dimeros de pirimidinas adyacentes.
• Dimeros: DOBLEZ

Impide la replicación Deleciones en la hebra nueva

AGENTES QUÍMICOS
• Gas mostaza primer mutágeno conocido.
• Mutágenos más empleados:
Análogos de bases:
Son mutagénicos químicos totalmente específicos.
• Moléculas cuya estructura es parecida a las bases naturales
• Diferentes propiedades de apareamiento: Transiciones.
5-bromouracilo 2-aminopurina
• DNA
Debido a su similitud estructural los análogos de bases como el 5-
Bromouracilo o la 2-Aminopurina se incorporan en el DNA en la
replicación en lugar de las bases correspondientes timina y
adenina.
• La replicación incorporación de bases erróneas
en la copia de DNA.
• Así por ejemplo, el 5-Bromouracilo se puede aparear con guanina
(la timina se aparea con adenina) ocasionando la transición de AT a
GC (la guanina se aparea con citosina). La 2-Aminopurina puede
aparearse con citosina ocasionando la transición de AT a GC.

• El 5-bromouracilo es
análogo de timina y se CH3
empareja con guanina
produciendo transiciones
Br
AT GC.
• Si se añade Bdu a la Tiamina
H
replicación. se incorpora:

5-Bromouracilo
Bdu T
Citosina

Bdu - A (Ceto) CETO: Bdu - A ENOL: Bdu - C

Normal
Tautomerización
• La 2-aminopurina es analogo
de la adenina pero en lugar de
emparejar con la timina
escoge al citosina.
• Existen numerosos agentes
químicos capaces de modificar
nucleótidos causando.
Cambios Tautomericos
Desaminación
Metilación

Alteran la capacidad para

formar:

Puentes de
hidrogeno.
• Cambios tautomericos Transiciones espontáneas
durante la replicación.

• Tautomerización:
Cuando la base durante la
replicación se tautomeriza
(cambia algunos de sus
radicales) y se forman pares
atípicos que encajan dentro
de la doble hélice.
Tautomerización:
• El cambio se produce
después de 2 generaciones A T C
Ej: T A G
G C T
G–T C–T.
C G A
Agentes mutagénicos:
5-Bromouracilo
• Análogos de bases:
2-Aminopurina
Gas mostaza
Nitrosoguanidina (NS)
Etil metano sulfonato (EMS)
• Sustancias químicas:
Etil etano sulfonato
alteran la estructura
de las bases, y Ácido nitroso (HNO2)
desaminan Hidroxilamina (NH2OH)

• Agentes intercalantes: Naranja de acridina

Bloquean, absorben
UV, Son de 3 anillos
Bromuro de etidio
Mutágenos químicos:
Existen una serie de agentes químicos que reaccionan
directamente sobre el DNA que no se está replicando ocasionando
cambios químicos en las bases lo que provoca un apareamiento
incorrecto.

• Acido nitroso (HNO2): Potente agente mutagénico que produce

cambios directos del grupo amino por ceto.
• Desamina la adenina a hipoxantina

HNO3

Hipoxantina (Hx)
• Desamina la citosina a uracilo.

HNO3

Uracilo (U)
• Agentes alquilantes: Junto con la luz ultravioleta son los sistemas
mutagénicos más potentes para aplicaciones prácticas:
Etil metano sulfonato (EMS) Metil
metano sulfonato (MMS) Dietil sulfato (DES)
Diepoxi butano (DEB)
N-metil-N-nitro-N-nitrosoguanidina (NTG) N-
metil-N-nitroso urea Gas mostaza.
• Estos agentes producen bases alquiladas en el DNA lo que origina
transiciones y delecciones.
• Etil metano sulfonato o etil etano sulfonato: Cede grupos
metilo o etilo AGENTE AQUILANTE
• El etil metano sulfonato (EMS) (CH3) Guanina
Adenina
• Transiciones GC AT

• El N-metil-N-nitro-N-nitrosoguanidina (NTG), cancerígeno, es uno

de los mutágenos químicos más efectivos. Se obtienen, en
condiciones óptimas, un gran número de mutantes con una tasa
de muerte baja.
• La hidroxilamina (NH2OH) Reacciona con C y empareja con A.
• Radicales libres Grupos químicos con carga que reaccionan
con las bases:
O- Súperoxido H 2O2
Súperoxido de hidrogeno OH- Oxidrilo
Transversiones
Agentes intercalantes:
Son moléculas planas que se insertan entre dos pares de bases
del DNA, separándolas entre sí. Durante la replicación, esta
conformación anormal puede conducir a microinserciones o
microdelecciones en el DNA, originando mutaciones por
corrimiento de lectura.
• Las acridinas
• Bromuro de etidio
• Proflavina
• Dioxina

Los 3 anillos planos se

colocan entre las bases
desplazándolas
ligeramente.
• Producen dobleces en le hebra Inserciones
Deleciones.
ALTERACION DE UNA SOLA
BASE
• Depurinación
• Desaminación de A a Hx
• Desaminación de C a U
• Alquilación de las bases
• Inserción o supresión de

nucleótidos
• Incorporación de análogos de
bases

ALTERACIÓN DE DOS BASES

• Dimeros T – T (luz U.V.)

ROPTURA DE CADENA
• Radiación ionizante
• Desintegración radiactiva
Mutagénesis dirigida:
Tecnología DNA recombinante mutagénesis dirigida
sobre el gen concreto que el investigador está interesado en
estudiar.
• Gen + plasmido plasmido recombinante EcoR I
• Traducción de ruptura:
La DNA POL I con la actividad exonucleasa
(Corrige) alarga la rotura en 5’ 3’ y
polimeriza la otra hebra.
• No se aporta dTTP N4-Hidroxi-CTP (C-OH)
• No se aporta dGTP Se para la reacción
clonación molecular Ligasa
• REPLICACIÓN C-OHleídos como C INCORPORA G
• En la siguiente generación se incorpora C y se efectúa una
transición AT GC.
• Usos en genética microbiana y en biología molecular y en estudios
sobre estructura y función de enzimas y otras proteínas.
REPARACIÓN DEL DNA
• El DNA está sometido continuamente a agentes naturales que
pueden dañarlo produciendo mutaciones espontáneas:
Radiación cósmica, luz ultravioleta, calor excesivo,
metabolitos, roturas sufridas durante el empaquetamiento de
cromosomas condensados etc..)
• Mecanismos de reparación producción de
mutaciones rara.
Célula + mutágeno Oscuridad

Autorradiografía Timidina triatada

Síntesis de DNA que no esta en fase S

Síntesis no programada Reparación de daños

producidos por el mutágeno.
 Reparación directa:
• Mecanismos de reparación:
FOTORREACTIVACIÓN:
1. Reparación directa
• Reparación de dimeros de
2. Reparación por escisión pirimidina
3. Reparación postreplicativa • En presencia de luz la enzima
• fotoliasa, reconoce los dimeros y
revierte la reacción.
 Reparación escindidora o
reactivación oscura:
• La enzima uvrABC cortan
unos nucleótidos de la
hebra dañada a ambos
lados el dímero DNA POL
+ LIGASA

• La enzima O6-metil-
guanosina
metiltransferasa, reconoce
metilos (CH3) en la guanina

ELIMINA
 Reparación escindidora
de sitios apurínicos
apirimidínicos:
• Las glicosilasas
detectan bases
normales y las eliminan
separándolas del
azúcar.
El sitio (pentosa +
fosfato – base N)
AP
• La AP endonucleasa
corta
DNA POL + LIGASA
 Reparación de falso
apareamiento:
• Además de la DNA POL
existen otras enzimas
que reconocen la hebra
nueva y corrigen los
falsos apareamientos
antes de que se metilen.
• Las dos hebras sirven de
molde, si están dañadas:
cromosoma diploide
sirve de molde
RECOMBINACIÓN
(copiado y transportado)

Rec A
REPARACIÓN SOS
• Las lesiones en el DNA inducen con rapidez la síntesis de más de
15 proteínas que intervienen en la reparación, incluyendo Rec A.
• En condiciones normales bloqueada por Lex A.
• La respuesta SOS ruptura de la Lex A.
• La Lex A se autodigiere al recibir las instrucciones del filamento
ss DNA-Rec A desencadena
SOS.

La timina en lugar de uracilo en el DNA permite la reparación de la

citosina desaminada:
T-CH3 C5 U-H C5
• El sistema reconoce a U como extraño Uracilo-DNA glicosidasa
• El metilo (CH3) de la T, la distingue de la citosina desaminada.
aumenta la fidelidad del mensaje genético
• Enfermedades genéticas humanas heredadas como autonómicas
recesivas fallos en la reparación del DNA.
• Células epiteliales MILES DE DIMEROS DE TIMINA / DIA

Enzimas necesarias para la reparación

Xeroderma pigmentosum

• Daño en el DNA desarrollo del cáncer

• Oncogenes : enzimas encargadas de la transformación
cancerosa
• Deleción, rotura, inserción oncogen proceso
canceroso
Un fenómeno fundamental tanto en la
carcinogénesis como en la mutagénesis es
la lesión del DNA
TEST DE AMES:
• Permite detectar si una sustancia que crea la industria es
mutagénica.
• Cepa de Salmonella typhimurium:
• Cepa Prototrofica = +his
• Cepa Auxotropica= -his

• Se mide es la
reversión de la
mutación
• Cepas son
mutantes del
sistema SOS
• La sustancia es
incubada en estracto
de hígado poderoso
mutágeno