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Tinciones

Laboratorio de microbiología y biología celular


Daniel Eduardo Quiroga
Mayra Alejandra Alzate
Tinciones
1. Objetivos
2. Base teórica: tinción simple y tinción de Gram
3. Materiales y reactivos
4. Procedimientos
1. Objetivos
• Observar en el microscopio distintas tinciones.
• Diferenciar características generales de los microorganismos según su tinción.
• Trabajar ordenadamente y con un lenguaje apropiado.
2. Base teórica
• La coloración es posible gracias a los radicales cromóforos.(Los grupos
cromóforos son los grupos funcionales de la molécula responsables de la
absorción. Principalmente son: dobles y triples enlaces carbono-carbono, sistemas
aromáticos, grupo carbonilo, imino (C=N), diazo (N=N), nitro y enlaces C-Y (Y es
un átomo con pares libres).
Tinción simple

Azul de metileno Cristal violeta

Un
colorante Pares Tetradas

Safranina Fucsina
Cadenas Racimos
Tinción de Gram
Gram positivo Gram negativo
Preparación
1. Examen fresco: microorganismos vivos. Movilidad de bacterias.
2. Frotis fijado. Microorganismos muertos. Detalles morfológicos.
3. Materiales y reactivos
4. Procedimientos
4.1 PREPARACIÓN DE FROTIS FIJADO

Flamear asa, tomar


Gota de agua en el muestra del cultivo
portaobjetos y transferirlo a la
gota de agua.

Esperar que el
Formar suspensión
líquido se evapore o
homogénea
acelerar el proceso
extendida.*
con el mechero.**
4.2 TINCIÓN SIMPLE
Observar al
microscopio.
Cubrir
Realizar
totalmente el Escurriendo sobre
esquemas de
extendido con una toalla de
forma y
el colorante. papel,
distribución.
Aplicar un solo
colorante.

Colocar la Lavar las


lámina placas con Pares: diplococos, diplobacilos
preparada Azul de metileno ->5 min agua y dejar Tétradas (grupos de cuatro)
previamente Fucsina->30 s secar al Cadenas: estreptococos o
sobre la ambiente. estreptobacilos.
bandeja de Racimos: estafilococos
coloración. Sin agrupación específica.
4.3 TINCIÓN DE GRAM
Cubrir con
Lugol
Cubrir
totalmente el
extendido con 1min
el colorante.
Aplicar un solo lavar con
colorante. agua

Colocar la Lavar las


lámina placas con
preparada Cristal violeta o Violeta de agua y dejar
previamente geneciana -> 1 min secar al
sobre la ambiente.
bandeja de
coloración.
Decolorar con

Alcohol-Acetona
Lavar exceso
con agua
hasta que deje
Fucsina o Safranina -> 1
de perder color
min

30 Seg

Drenar y dejar secar en


posición vertical o suavemente Observar bajo el
Agregar con papel filtro. microscopio
el segundo
colorante
¿Preguntas?