UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS
SUPERIORES CUAUTITLÁN
CAMPO 1

QUÍMICA INDUSTRIAL
BIOQUIMICA MICROBIANA
EQUIPO #4

PRÁCTICA 2.
“TINCIONES SELECTIVAS Y DIFERENCIALES DE
LA CÉLULA PROCARIOTA”

INTEGRANTES:



 TORRIJOS ESCAREÑO DAVID

27-FEBRERO-2020
INTRODUCCIÓN
El tamaño de los microorganismos nos impide detectarlos a simple vista, por lo que es
necesario el uso de un microscopio. Para que un objeto pueda ser percibido a través
del microscopio, este debe poseer cierto grado de contraste con el medio. Para
aumentar el contraste de los microorganismos y lograr una mejor observación de ellos,
se emplean diferentes técnicas de tinción, las cuales se basan en la capacidad de los
microorganismos para retener (o no) ciertos colorantes lo que depende de la carga de
la célula y del colorante.

Las tinciones de Gram (la tinción de Gram es una de las más importantes en un
laboratorio microbiológico) y de Ziehl Neelsen se basan en la composición y estructura
de la pared celular de las bacterias, que determina que unas bacterias retengan el
primer colorante, en tanto que otras lo pierdan, lo que les permite reaccionar con el
colorante de contraste utilizado. Las tinciones selectivas son aquéllas que permiten
observar una estructura celular determinada, algunas bacterias tienen la capacidad de
producir endosporas o producir exopolisacáridos conocidos como cápsulas. Las
endosporas bacterianas estructuras de resistencia que se caracterizan por presentar
varias capas compuestas de proteínas y azúcares complejos, mientras que en el
protoplasto de la misma existe un complejo de dipicolinato de calcio, debido a esta
composición, es muy difícil que los colorantes penetren, por lo que al aplicar una
tinción simple, estas aparecen como cuerpos incoloros (dentro o fuera de la célula).

Las bacterias Gram-positivas (azul) y Gram-negativas (rojas) tiñen de forma distinta

debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. En
donde las Gramnegativas se tiñen después con safranina la cual da el color rojo a este
tipo de bacterias.

No obstante, es posible teñirlas mediante la aplicación de métodos drásticos. Con

respecto a la cápsula, esta es una cubierta extracelular constituida por agua y
polisacáridos que se acumulan alrededor de la célula, estos componentes no se
combinan con los colorantes, por lo que para la observación de la misma se emplean
tinciones negativas con las que se oscurece el fondo de la preparación y de esta
manera se contrastan las cápsulas.

Las bacterias ácido-alcohol resistentes no pueden ser clasificados según la tinción de

Gram, la cual es la técnica más común en la microbiología contemporánea, sin
embargo puede ser teñido con algunas tinciones concentradas combinadas con calor.
Una vez teñida tiene la capacidad de resistir la decoloración de una combinación de
alcohol- ácido, el cual es el decolorante más común en los protocolos de tinción de
bacterias, de donde viene el nombre Alcohol-ácido resistente.

La alta concentración de ácido micolico en la pared celular es la causante, como las

bacterias del género Mycobacterium, de la baja absorción y alta retención de la tinción
(fucsina). La forma más común para poder identificar este tipo de bacterias es a través
de la técnica de tinción de Ziehl-Neelsen, donde la bacteria queda teñida en rojo y se
agrega una tinción de contraste de nombre azul de metileno la cual permite apreciar
de mejor forma la bacteria.
Objetivos:

 Conocer las diferentes tinciones selectivas y diferenciales que se utilizan para

cada una de las diferentes estructuras de las células.
 Aprender a preparar un frotis, que se utilizan en cada una de las tinciones
estudiadas.

MATERIAL, EQUIPOS Y REACTIVOS

MATERIAL MATERIAL EQUIPOS REACTIVOS

BIOLOGICO

Portaobjetos cajas petri con Microscopio Ssfe o agua

cultivos óptico compusto esteril
bacterianos

cubre objetos Escherichia coli Mechero bunsen lugol

1 gradilla Salmonella typhy Azul de metileno

Asas Pseudomona Cristal violeta

aeuginosa

Bacillus subtilis safranina

Procedimiento:
Tinciones Selectivas y
diferenciales de célula
Tincion de Gram
Realice el frotis y fije con
calor.
Cubra el frotis con Sol.
Cristal Violeta, espere
1min.
Ahora, cubra el frotis
con Lugol, durante 1
min., escurra y lave con
agua
Decolore de 5 a 15 s con
Sol. alcohol-acetona.
Lavar con agua corriente
Cubra el frotis con
Safranina, deje actuar 1
min., escurra y enjuague
con agua corriente
Deje secar el frotis y
anote sus observaciones
procariota.
Tincion Ziel-Neelsen
Realice el frotis y fije con
calor.
Cubrir con Fucsina
fenicida de 5-10 min.
Aplicar alcohol-acetona
por algunos segundos
Lavar con agua corriente
por 30s
Aplicar azul de metileno
durante 1 min.
Lavar con agua corriente
y observar.
Tincion de Esporas
Realice el frotis y fije con
calor.
Cubrir el frotis con verde
malaquita durante 10
min.
Lavar con agua coriente
por 30s
Agregue safranina por 2
min.
Lavar con agua corriente
deje secar el frotis y
observar.
RESULTADOS

ANALISIS DE RESULTADOS

Conclusiones:
Las tinciones nos ayudan a evidenciar ciertas características o estructuras de los
microorganismos, de acuerdo con la necesidad que se tenga es la tinción que deberá
utilizarse, es de suma importancia conocer cada una de ellas, así como su correcta
preparación ya que de esta manera se logrará el objetivo de la tinción que es observar
la estructura o característica de las bacterias. Es sustancial tener cuidado en los
puntos críticos que en el caso de las tinciones diferenciales es la decoloración realizar
una buena o mala decoloración nos dará el éxito o el fracaso en la preparación; para
las selectivas en el caso de la endospora son las emisiones de vapor y para cápsula el
extendido de la muestra. Para un microbiólogo es esencial desarrollar y perfeccionar
estas prácticas simples.

Bibliografía

 Tortora J, Gerard. Y Funke Berdell. (2007). Introducción a la Microbiología. 9ª

Edición. Editorial Medica Panamericana.: España
