Curso:

Microbiología

Docente:

Liz Mayra Isabel Rodriguez Portilla

Tema:

“TINCIONES”

Presentado por:

Chávez Vega, Valeria

Nina Gomez, Sharon
Pinilla Angeles, Natalia
Torres Egúsquiza, Cielo

Lima, Perú
2023
RESUMEN

Este informe tuvo como objetivo poder identificar la morfología y la composición de los
microorganismos, mediante la realización de 4 tipos de tinciones, teniendo en cuenta lo que
se desea identificar para cada tinción: a) forma, b) tipo de membrana plasmática, c)
presencia de cápsula y d) presencia de esporas.

Con respecto a la metodología empleada, para las 4 tinciones primero se sembraron los
microorganismos en el portaobjetos, para posteriormente proceder con la aplicación de las
diferentes tinciones, tendiendo en cuenta el orden y la duración para cada uno de ellos,
siguiendo la teoría y práctica de los autores.

En los resultados se obtuvieron la presencia de bacterias tanto gram negativas como

positivas para un tipo de tinción diferencial. Por otro lado, se pudo observar la tinción de las
esporas con un color verde debido a la tinción con verde malaquita.

Palabras clave: bacterias, tinciones, morfología, esporas, cápsula, membrana plasmática.

I. INTRODUCCIÓN

1.1 Tinciones

La tinción es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se absorben a una

superficie, el uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los
microorganismos y poder realizar la observación en un microscopio óptico. Dado que las
bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se encuentran
suspendidas y no pueden observarse claramente sin algún tratamiento previo.
(Santambrosio, E. 2009).

Las tinciones son técnicas auxiliares utilizadas en microscopía para mejorar el contraste en
la imagen vista al microscopio y se pueden diferenciar dependiendo de la reacción y los
colorantes utilizados.

2
1.2 Tinciones simples

La tinción simple es aquella en la cual se usa un solo colorante, estas sirven para denotar la
morfología celular. Uno de los colorantes más utilizados en esta tinción es el azul de
metileno, que actúa sobre todas las células bacterianas y no oscurece los detalles
celulares. Además, es especialmente útil para detectar la presencia de bacterias en
muestras naturales puesto que la mayor parte del material no celular no se tiñe.
(Monteagudo, J. et al 2021)

Figura 1. Tinción con azul de metileno

1.3 Tinciones diferenciales

Las tinciones diferenciales utilizan dos o más colorantes para poder generar contraste.
Estas usualmente se fijan con calor y además de visualizar la morfología nos permiten
observar la composición de la pared bacteriana y su resistencia a la decoloración ácida,
entre otras cosas. Dentro de estas tinciones las más conocidas son la tinción Gram y la
tinción Ziehl-Neelsen. (Monteagudo, J. et al 2021)

La tinción Gram es denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la
desarrolló en 1844, esta tinción divide a las bacterias en dos grandes grupos,
Gram-positivas y Gram-negativas, dependiendo de sus paredes celulares. Para esta tinción
se utiliza el colorante Violeta Cristal y la Safranina, las bacterias gram-positivas se quedan
de color morado, mientras que las bacterias gram-negativas tienen un color rosado.
(Santambrosio, E. 2009)

3
 Figura 2. Tinción gram

La tinción Ziehl-Neelsen se basa en se basa en colocar carbol-fucsina y calentar la

preparación ligeramente para solubilizar las ceras, lípidos y otros ácidos grasos de la pared
celular para que permita el paso libre del colorante, el cual tiene una enorme afinidad por
los ácidos micólicos presentes en la pared, al enfriar con agua, los componentes de la
pared vuelven a solidificar, resistiendo la acción abrasiva del alcohol-ácido, y el azul de
metileno se utiliza como colorante de contraste. Esta sirve para la identificación de
Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae. (Monteagudo, J. et al 2021)

Figura 3. Tinción de ácido-alcohol (Ziehl-Neelsen)

4
1.4 Tinciones especiales

Dentro de las tinciones especiales vamos a encontrar la tinción de cápsula, también

conocida como tinción negativa y la tinción de esporas, también conocida como tinción
Wrirtz Conklin.

La tinción negativa no necesita fijación previa y nos permite visualizar sobre un fondo oscuro
la forma de la bacteria además de alguna otra característica estructural, como es la
presencia de cápsulas, para esta se utiliza la tinta china y la safranina. (Monteagudo, J. et al
2021)

Figura 4. Tinción negativa (cápsulas)

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La tinción Wrirtz Conklin utiliza los colorantes verde de malaquita y safranina, Se usa verde
de malaquita en contraste con safranina. La envuelta de la endospora es más compleja e
impermeable que la envuelta de las células vegetativas en las que se forma. Sólo se puede
teñir el contenido de la espora alterando su envoltura. La impermeabilidad de las cubiertas
dificulta que las endosporas se decoloren una vez teñidas, esta debe ser calentada para que
el colorante tiña las esporas.

Figura 5. Tinción Wrirtz Conklin (endosporas)

II. MATERIALES

Portaobjetos Asa de siembra Mechero de Bunsen

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 Puente Piseta con agua destilada Colorante azul de metileno

Bacillus 24 horas Pinza de madera Aceite de inmersión

Salmonella Cristal violeta Lugol

7
Alcohol acetona Safranina Klebsiella

Verde malaquita Bacillus 96 horas Pedazos de papel filtro

Pipeta Pasteur Tinta China Microscopio

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III. METODOLOGÍA

3.1 Tinción simple

Introducir en el tubo de
ensayo con los
microorganismos bacillus 24h
una asa de siembra y
después esparcir suavemente
en la superficie del
portaobjetos ya rotulado,
realizar fijación.

Colocar el portaobjetos sobre

un puente.

Encima de donde se fijaron

los microorganismos, echar
unas gotas del colorante azul
de metileno.

Enjuagar con una piseta con

agua destilada delicadamente.

9
 5

Para que seque un poco más

rápido, sujetar el portaobjetos
con una pinza de madera y
pasar por encima del fuego 3
veces.

Dejar secar completamente

dejándolo sobre el puente.

3.2 Tinción diferencial

3.2.1 Tinción Gram

1
Introducir en el tubo de
ensayo con los
microorganismos salmonella
una asa de siembra y
después esparcir suavemente
en la superficie del
portaobjetos ya rotulado,
realizar fijación.

Colocar el portaobjetos sobre

un puente y encima de donde
se fijaron los
microorganismos, echar unas
gotas de cristal violeta y dejar
1 minuto.

10
3

Enjuagar con una piseta con

agua destilada delicadamente.
.

Agregar unas gotas de lugol y

dejar 30 segundos.

Enjuagar con una piseta con

agua destilada delicadamente.

Agregar unas gotas del

decolorante alcohol acetona y
dejar actuar 1 minuto.

Enjuagar con una piseta con

agua destilada delicadamente.

11
 8

Agregar unas gotas de

safranina para la coloración
de contraste por 30 segundos,
enjuagar y dejar secar.

3.3 Tinción especial

3.3.1 Tinción negativa de cápsula

Con una pipeta pasteur

extraer y colocar una gota de
tinta china en el portaobjeto
previamente rotulado.

2 Con otra pipeta pasteur

colocar una gota de la
muestra de klebsiella al lado
de la gota de tinta china y
esperar a que se junten.

Agarrar otro portaobjetos y

colocarlo a 45º del otro
portaobjeto, retroceder un
poco y arrastrar esparciendo
todo el contenido.

12
4

Dejar secar sobre el puente

en el lavadero.

Una vez seco, colocar

colorante safranina sobre todo
el portaobjetos y enjuagar con
mucho cuidado, dejar secar
otra vez.

3.3.2 Tinción de esporas Wrirtz Conklin

Introducir en el tubo de
ensayo con los
microorganismos bacillus de
96 horas una asa de siembra
y después esparcir
suavemente en la superficie
del portaobjetos ya rotulado,
realizar fijación.

2
Colocar sobre el portaobjetos
un pedazo de papel filtrante.

13
3

Sobre el papel agregar una

gota de verde malaquita y
esperar a que se esparza.

Sujetar el portaobjetos con

una pinza de madera y
colocarlo a fuego por 30
segundos.

5
Retirar el papel del
portaobjeto y ponerlo sobre el
puente en el lavadero.

Agregar algunas gotas de

safranina y dejar 1 minuto.

Enjuagar con una piseta con

agua destilada delicadamente
y dejar secar.

14
3.4 Flujograma de procedimientos

Figura 6. Flujograma de metodología

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IV. RESULTADOS

4.1 Para observar los resultados se agregó una gota de aceite de inmersión en
cada portaobjeto seco.

Figura 7. Aplicación del aceite de inmersión

sobre el portaobjetos.

16
 4.2 Observaciones en el microscopio a 100X

T. simple T. diferencial
Bacillus 24h Gram - Salmonella

Explicación/Observación: Los bacillus de color Explicación/Observación: Por teoría

morado se pueden ver agrupadas en parejas, sabemos que la salmonella es un tipo de
mientras que las de color azul se encuentran en bacteria gram negativa, por lo que para este
parejas. Por otro lado, se puede observar que tipo de tinción se debería ver en el
presentan, para ambos casos, forma de coma. microscopio una tinción rosada.

T. especial T. especial
Cápsula - Klebsiella Endospora - Bacillus 96h

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Explicación/Observación: Se observa que la
gran mayoría de las bacterias (casi todas),
presentan una cápsula, los espacios muestran
las células sin cápsula.
Explicación/Observación: Debido a verde
malaquita, podemos observar que los
puntos verdes vendrían a ser las esporas de
los bacillus que se encontraron en la
muestra. Por otro lado, gracias a la
safranina se puede observar el color violeta
en diferentes microorganismos, esto es
porque esté compuesto de contraste tiñe las
paredes de los bacillus.

V. DISCUSIÓN

● En el caso de la Tinción Simple,la visualización de la morfología bacteriana se va a

dar debido a la aplicación de un solo colorante a la muestra, esta debe ser posterior
a la fijación de la misma. Este colorante debe ser básico, que son sustancias que
tienen una carga positiva y se unen a componentes de la célula que tienen carga
negativa, como los ácidos nucleicos y los grupos fosfato de los lípidos.
● En el caso de la Tinción Gram, nuestro mordiente (Lugol) tuvo un efecto oxidante; su
efecto, en general, consiste en dar a la sustancia oxidada un carácter más ácido.
Esto aumenta la afinidad de un microorganismo por los colorantes básicos.En
cambio, nuestro colorante de Contraste(Safranina):al ser catiónico tiñe las paredes
bacterianas ya que estas tienen cargas negativas, donde las Gram negativas se
tiñen de color rosa, pero las bacterias Gram positivas no se tiñen porque su pared
celular está saturada de cristal violeta impidiendo la entrada de la safranina.
● En el caso de Tinción especial de cápsula, utilizamos Klebsiella, La técnica de
tinción más comúnmente utilizada es la tinción de tinta china, que permite resaltar la
cápsula como un halo claro alrededor de la célula bacteriana, en el caso de este
microorganismo, sus cápsulas bacterianas pueden conferir resistencia a la
facocitosis, lo que puede contribuir a la virulencia.
● Respecto al caso de Tinción Especial de Endosporas, utilizamos bacillus a 96 horas,
A las 96 horas, es probable que los cultivos de Bacillus hayan alcanzado el punto de
madurez de las endosporas, lo que hace posible su detección mediante tinción,en
las que las esporas se visualizan como estructuras distintivas, generalmente con una
coloración distinta a la de las células vegetativas, en este caso se pudo notar la
coloración violeta.

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VII. CONCLUSIONES

● En el caso de la Tinción simple, a través de la aplicación de esta técnica, se logra

realzar la estructura y características morfológicas de las células microbianas, lo que
permite su identificación y clasificación. Además, permite el estudio de
microorganismos presentes en muestras ambientales, como suelos, aguas,
alimentos y superficies.
● En el caso de la Tinción Gram, los colorantes permiten hacer visibles los objetos
microscópicos y transparentes, conocer su forma y tamaño, así como sus estructuras
internas y externas. pudimos observar que tuvimos una tinción violeta , eso en
microbiología, se denomina bacterias Gram positivas a aquellas bacterias que se
tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram. Diferenciar Gram positivas de
negativas es importante para determinar el enfoque terapéutico adecuado, ya que
las bacterias Gram positivas y Gram negativas pueden responder de manera
diferente a los antibióticos.
● Respecto a la tinción especial de cápsula, la detección y caracterización de cápsulas
microbianas permite identificar la capacidad de ciertos microorganismos para resistir
condiciones adversas, evitar la acción de mecanismos de defensa del huésped y
colonizar diversos ambientes.
● Por otro lado, con respecto a la tinción especial de endosporas, el verde malaquita
es un colorante que permite hacer visibles las esporas de las bacterias, mientras que
para hacer un contraste de las membranas celulares de los microorganismos, es
necesario el uso de safranina.La capacidad de formar endosporas les permite
sobrevivir en el medio ambiente y persistir en diferentes fuentes, lo que puede tener
implicaciones en la contaminación cruzada y la propagación de enfermedades.
● Las tinciones no solo son importantes para la identificación de la morfología, tamaño
y agrupación bacteriana, sino también para la aplicación clínica en el diagnóstico y
tratamiento de enfermedades infecciosas.

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VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Beveridge TJ. Mechanism of Gram variability in select bacteria. J Bacteriol. 1990; 172:
1609-1620

Koneman E. Diagnóstico microbiológico. 6a ed. México DF: Editorial Médica

Panamericana S.A.; 2006

Monteagudo, J., Espartero, A., López, S., Urcía, Y., Bayod, A. y Jiménez, B. (2021).
Examen microscópico, tipos de tinciones bacterianas. Recuperado de:
https://revistasanitariadeinvestigacion.com/examen-microscopico-tipos-de-tincione
s-bacterianas/

Razin S, Yogev D, Naot Y. Molecular biology and pathogenicity of mycoplasmas.

Microbiol Mol Biol Rev. 1998; 62: 1094-1156

Santambrosio, E. (2009). Tinción y observación de microorganismos. Universidad

Tecnológica Nacional. Recuperado de:
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practi
co4.pdf

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