ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA MÉDICA I

CICLO : IV
SEMESTRE ACADEMICO : 2020-1
 UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
“Dr. Wilfredo Erwin Gardini Tuesta”

ACREDITADA POR SINEACERE ACREDITADA INTERNACIONALMENTE POR RIEV

LABORATORIO

DOCENTES RESPONSABLES DE LA ASIGNATURA:

▪ LEGUA BARRIOS MIRIAM

▪ REYES RUIZ LILIANA
▪ ECOS ESPINO JULIO
NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

- Ventilar el ambiente antes de ingresar a los ambientes,

- Prestar atención a las indicaciones del docente, para cada procedimiento de la
práctica.
- Dentro de las instalaciones utilizar su mandil blanco (guardapolvos),
- Evitar utilizar brazaletes, aretes largos, cabellos sueltos, varios anillos de metal,
etc.
- Mantener el laboratorio limpio, cumplir con las normas de eliminación y
disposición de residuos instalados en el laboratorio respectivo.
- No beber, ni fumar,
- Guardar los alimentos durante el desarrollo de las practicas, no ingerir
alimentos,
- Lavarse la manos antes y después de cada practica.
- Utilizar guantes descartables y mascarillas para manipular muestras biológicas,
muestras químicas, material infeccioso, etc.
- Utilizar una pipeta por cada reactivo y marcr con un plumón indeleble que
sustancia manipula.
- Nunca pipetea con la boca, utilizar las bombillas de succión. Leer con
detenimiento las etiquetas de los reactivos, - Determine previamente su
naturaleza para los cuidados respectivos o su manipulación y en sus diferentes
formas de preparación.
- Utilizar las campanas extractoras para todos los procesos de trabajo con
reactivos, ejemplo. acido clorhídrico, acetona, éter, cloruro de amoniaco, etc.
 NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

- Al encender un mechero abra lentamente la llave de gas y debe

ubicarse a un costado, nunca por encima de este, utilizar llama
moderada, no utilizar el cabello suelto en el caso de las damas,
revisar las condiciones físicas de las manguerillas, por donde circula
el gas. De ocurrir un probable incendio utilizar los extintores que se
encuentran cerca a la puerta de salida y en los pasadizos, evacue el
laboratorio, brindar la señal de alarma al personal de seguridad de
los alrededores.
- Tener en cuenta probable reacciones de los reactivos, siempre
consultar a su docente o responsable del procedimiento, que va a
realizar, ante cualquier incidente, derrame o salpicadura de un
liquido o solido lavarse inmediatamente en las duchas de lava ojos
con abundante agua y trasladarse al centro médico de la facultad con
el docente o asistente para su traslado a un especialista médico.
EL MICROSCOPIO
 COLORACION
•SIMPLE
 COLORACIÓN
AZUL DE
METILENO

1.- Colocar una gota del colorante

sobre la lámina portaobjetos

2.- Colocar una muestra de un

cultivo de hongo sobre el Resultado : Los microorganismos se
colorante, que va actuar por 3 observaran de color azul intenso
a 5 minutos .
L

3.-lavar con agua y dejar secar 4.- Observar con objetivo de

inmersión y aceite de cedro
 1. Preparar un frotis con la
mezcla bacteriana y fijar al
calor

FUNDAMENTO
-cuando las células están inmersas en el
azul de metileno este penetra dentro de 2. Cubrir el frotis con una gota
las células, se usa un único reactivo, que
preferentemente es de tipo básico y del colorante y dejar actuar
contiene un cromógeno (compuesto que por 3 – 5 minutos. Lavar con
da color al tinte) con carga positiva, ya
que la pared celular de las bacterias agua y dejar secar
posee componentes con carga negativa
que atraen y enlazan el cromógeno.

3. Observar al microscopio con

objetivo de inmersión y aceite de
cedro
IMAGEN DE S. aureus CON UNA
COLORACION SIMPLE CON AZUL
DE METILENO
 1. Colocar una gota de 2. Agregar una gota
tinta china sobre la de la mezcla
lámina portaobjetos bacteriana

FUNDAMENTO:
No son una verdadera tinción. Se llaman así
porque lo que realmente se tiñe es el fondo
sobre el que están los microorganismos 3. Cubrir la preparación
apareciendo los microorganismos sin teñir.
Se emplea para ver la cápsula de S. con una laminilla
pneumoniae y Cryptococcus neoformans en cubreobjeto
LCR.

4. Observar con lente

de menor y mayor
aumento.
IMAGEN DE Cryptococcus CON
TINTA CHINA
 COLORACIÓN FUNDMENTO:
Está basada en la afinidad del colorante por componentes de las
AZUL DE células, en este caso por las estructuras fúngicas.

LACTOFENOL -El fenol destruye la flora acompañante que juntos a los hongos
pueden crecer colonias de bacterias)
-El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas con una una
película que las protege provocado por un cambio de gradiente
osmótico entre el interior y el exterior de dicha estructura.

1.- Colocar una gota del colorante

sobre la lámina portaobjetos

2.- Colocar una muestra de

un cultivo de hongo sobre
el colorante

3.- Cubrir con una laminilla 4.- Observar con lente de menor
cubreobjetos y mayor aumento
IMAGEN DEL HONGO Aspergillus CON
AZUL DE LACTOFENOL
COLORACION
•GRAM
PASO 1. FIJACION DE LA MUESTRA
PROCEDIMIENTO
•
- Se toma el portaobjeto se agrega una
gota de solucion salina y se fija la muestra
- Se esteriliza el asa microbiológica, se
deja enfriar cerca al fuego .
- Se extrae la muestra y se diluye en la
lamina portaobjeto con movimiento circular
- Se deja secar a temperatura ambiente o
calor sin quemar la muestra
PASO 2.--CUBRIR EL FROTIS CON VIOLETA DE GENCIANA Y
LUEGO AGREGAR 1- 2 GOTAS DE SOLUCIO DE BICARBONATO DE SODIO,
DEJAR ACTUAR POR 2 MINUTOS
 Tinción de Gram
Tinción del frotis Un colorante básico que en
. Previamente fijado al calor, contacto con las células
Paso 1 . Tiñe con violeta de cargadas negativamente,
genciana reacciona con ellas
Luego se agrega 2 gotas de coloreándolas.
solución de bicarbonato de
sodio
Se deja actuar por 2
minutos2 minuto.
. Todas las células se tiñen
Paso 2 de color azul-violeta.
. Lavar con agua Fija las tinciones y aumenta
la afinidad entre el
. Añadir Lugol, colorante y las células.
. dejar actuar 2 minutos
. Todas las células siguen
de color azul-violeta. Gram +
. Lavar con agua
. Decolorar con alcohol
Paso 3 acetona por 30 segundos
. Las células Gram +
siguen de color azul-violeta.
. Las Gram negativas
se decoloran..
. Se lava con agua Las Bacterias Gram.
positivas posee una malla
Tinción de contraste de peptidoglucano en su
Con fuscina básica por 30 parte mas externa.
segundos Mientras que las Gram.
Las células G+ negativas recubriendo una
Paso 4
se ven azul-violeta. fina capa de peptidoglicano
y presentan una membrana
Las G- rosas o rojas. externa.
Gram -
IMAGEN DE BACILOS GRAM
NEGATIVAS
IMAGEN DE COCOS GRAM POSITIVAS
COLORACION
ZIEHL NEELSEN
PASO 1. FIJACION DE LA MUESTRA
PROCEDIMIENTO
•
- Se toma el portaobjeto se agrega
una gota de solución salina y se fija
la muestra
- Se esteriliza el asa microbiológica,
se deja enfriar cerca al fuego .
- Se extrae la muestra y se diluye
en la lamina portaobjeto con
movimiento circular
- Se deja secar a temperatura
ambiente o calor sin quemar la
muestra
 Tinción Zielh - Neelsen
Manifiesta la capacidad de
resistir a la decoloración
gracias al alto contenido de
lípidos complejos (ácidos
micolicos) y ceras que
poseen algunos
microrganismo en su pared
celular
Procedimiento
Paso 1: Cubrir con fucsina
filtrada por 5 minutos
Paso2: Calentar hasta la
Fundamento emisión de 3 vapores
Paso 3: Lavar con agua
Paso 4:Cubrir con decolorante
alcohol acido durante 30
segundos
Paso 5:lavar con agua
Paso 6:Cubrir con azul de
metileno por 1 minuto
Paso 7: lavar con agua
Paso 8: Secar y observar
microscopio
IMAGEN DE Mycobacterium
tuberculosis ZIEHL NEELSEN
https://www.youtube.com/watch?v=SHtYccisU10 LA TINCION DE GRAM 6.30 m

https://www.youtube.com/watch?v=HANr6xMdqjA COLORACION CON ZIEHL NEELSEN 5.20m

https://www.youtube.com/watch?v=noPCVsWgpy8 TINCION SIMPLE 4.14 m