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Reporte de Laboratorio-genómica
Reporte de Laboratorio-genómica
PRÁCTICA NO. 2, 3 Y 4
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IDENTIFICACION Y MORFOLOGIA DE STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIS
OBJETIVO
En esta práctica buscamos hacer un cultivo de estafilococos epidermis, evitando
cualquier tipo de contaminación, esto con el objetivo de identificar su estructura y
comportamiento a lo largo del proceso, además de observar las diferencias que se
presentan en el uso de dos microscopios, el tradicional y uno digital de alta
resolución.
HIPÓTESIS
Se cree observar gran cantidad de células, muchas de ellas agrupadas con gran
tamaño, además creemos que podemos observar células tanto Gram-positivas,
como Gran- Negativas dentro de la misma muestra. Pensamos también que
podemos encontrar algunas con vida, con alguna presencia de movimiento.
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TEORÍA
Durante estas prácticas estuvimos trabajando con medios de esterilización y cultivos
bacterianos. Para ello primero tenemos que comprender que los medios de cultivo
son herramientas para el crecimiento y la identificación de microorganismos.
Proporcionándoles nutrientes necesarios para el crecimiento, la diferenciación y la
identificación de bacterias, hongos y virus. En nuestro caso utilizamos un medio de
cultivo selectivo, donde el crecimiento de microorganismos fue de un tipo
determinado, inhibiendo el desarrollo de otro.
En nuestro estudio, analizaremos la bacteria de la piel (Staphylococcus epidermis),
una bacteria normal de la piel de tipo Gram-positivas, haciendo alusión a que
después de un proceso de tinción químico, estas adquieren una coloración morada.
Estos microorganismos presentan una forma esférica, se agrupan en racimos y son
inmóviles. Estos se deben de conservar en temperaturas especificadas (de 6,5 a
50º C, siendo optimo 30-. 40º C) para evitar que se modifique su composición, y no
más allá del periodo de validez del producto. Al hablar de una bacteria, sabemos
que la manera en la que se reproducen es por fisión binaria, de manera asexual
siendo un proceso de bipartición, donde se duplica el ADN celular del individuo,
como paso previo a la división del citoplasma en dos. Así, da lugar a dos células
hijas con idéntico material genético. Dando como resultado el crecimiento de
colonias a pesar de estar en un medio sellado.
Sin embargo, ¿por qué es importante la correcta esterilización en este tipo de
experimentos?, el objetivo de este proceso es evitar la contaminación cruzada de
muestras o el crecimiento de microorganismos no deseados, de tal manera que
utilizamos materiales y procesos que favorecieran con las condiciones necesarias
para evitar esta contaminación. Justo para cumplir con lo anterior, utilizamos la
esterilización de calor húmedo, haciendo uso del alcohol para matar cualquier clase
de microorganismo que pudiera contener la caja Petri y el mechero bunsen para
conservar el ambiente estéril.
Los materiales que requerimos en la práctica fueron el agar, que es utilizado como
agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. Teniendo como
componente dominante un polisacárido que se obtiene de ciertas algas marinas. Un
gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los
40ºC, dependiendo de su grado de pureza.
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EXPERIMENTACION
Primera práctica: Esterilización de la caja Petri y elaboración del agar
Empezamos encendiendo el mechero con cuidado, manteniendo la flama baja, a
continuación, procedemos a acercar la caja Petri y, con precaución, la abrimos con
una sola mano, manteniéndola a unos 15 cm de distancia de la flama, y
desinfectamos cada una de las cajas con una torunda distinta. Cerramos nuestros
contenedores y los dejamos cerca del calor. Una vez finalizado nuestra
esterilización en autoclave, procedemos a realizar el agar.
En el matraz agregamos el agua y añadimos la sal de agar, mezclamos bien y lo
llevamos a calentar en el mechero hasta que comience a hervir. Una vez que haya
alcanzado este punto, lo vertimos con cuidado en nuestras cajas esterilizadas,
donde solo descubriremos un poco la tapa para verter la solución y no contaminar
el contenedor. Volvemos a cerrar las cajas Petri, acomodamos junto al mechero y
esperamos a que se solidifique.
Dejamos reposar en el refrigerador por 48 horas para su uso próximo.
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PARTE 1 DE LA PRÁCTICA
Tomamos nuestros cultivos y los llevamos al contador de colonias, donde veremos
más de cerca su composición y contaremos cuantas colonias se formaron, teniendo
siempre las pruebas cerradas y selladas.
PARTE 2 DE LA PRÁCTICA
Con nuestras colonias una vez formadas, encendemos el mechero bunsen y
mantenemos nuestras muestras cerca. Aprovecharemos el fuego para esterilizar el
asa bacteriológica, colocándola de manera vertical encima del mechero hasta que
el asa tome un color rojizo
Una vez se haya enfriado un poco, cogemos una muestra del cultivo y la colocamos
sobre un portaobjetos que contenga una gota de agua destilada, distribuimos bien.
A continuación, debemos fijar la muestra por medio del calor, pasando el
portaobjetos con movimientos circulares encima de la llama del mechero,
levantando constantemente la muestra el tiempo suficiente para que la muestra
quede totalmente seca y fijada. Repetimos este proceso con la segunda caja que
contiene cultivo bacteriano, no sin antes haber esterilizado nuevamente el asa
bacteriana.
Después de tener las 2 muestras fijas, procedemos a hacer la tinción de las
bacterias. Inclinando nuestros portaobjetos a un ángulo aproximado de 45°,
colocamos una gota de violeta de genciana, agitamos un poco para asegurar que el
líquido cubra parte de la prueba, y dejamos actuar por un minuto; transcurrido el
tiempo, retiramos con agua, sin hacer que esta toque directo a la muestra,
continuamos añadiendo Yodo lugol, de la misma manera en la que se añadió la
solución anterior y dejándolo actuar por la misma cantidad de tiempo, repetimos la
limpieza del portaobjetos con agua indirectamente sobre nuestras bacterias y
seguimos la coloración añadiendo ahora mezcla de Acetona-alcohol, dejamos
actuar por 1 minuto y enjuagamos, terminamos nuestra tinción con Serafina,
dejándola por 1 minuto y retirándola con agua.
Añadimos un cubreobjetos una vez seco nuestro portaobjetos y lo llevamos al
microscopio para su observación y análisis
Cuarta práctica: Observación y análisis de los cultivos de Staphylococcus
epidermis con microscopio digital
Finalizamos nuestras prácticas usando este aparato que nos apoyara con analizar
mejor nuestras colonias y verlas con mejor calidad por 5 minutos
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RESULTADOS
Preparación de agar.
Imagen referencia.
Imagen referencia. X4 P á g i n a 7 | 23
Muestra 1.
Imagen referencia. X4 Imagen referencia. X10
Muestra 2. Muestra 2.
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Análisis de resultados
En esta práctica aprendimos a como cultivar bacterias de la piel, poniendo como primer paso
agar en cagas Petri. Estas no se contaminaron debido a que tuvimos mucha precaución al
momento de abrir y cerrar las cajas cerca del área de asepsia.
Se sacaron dos muestras de la piel de dos compañeras para ponerlas encima del agar, estas
tuvieron un resultado exitoso puesto no se contaminaron y las bacterias crecieron
correctamente.
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CONCLUSIÓN
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CUESTIONARIO PRACTICA 1
Antes de la práctica:
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o 121°C a 15 Psi
o 132°C a 27 Psi
Después de la práctica:
1. Realiza un diagrama de flujo del procedimiento detallado de la
práctica.
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CUESTIONARIO PRÁCTICA 2
Antes de la práctica:
1) Investigar las especificaciones que vienen impresas en el cuello
de las pipetas graduadas:
o Características
o Núm. de lote
o Certificado de lote
o Tipo de exactitud
o Temperatura de calibración
o Tolerancia o margen de error
o Volumen máximo
o Tamaño de las divisiones
o Leyenda TD o TC
Durante la práctica:
Después de la práctica:
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ya que ayuda a garantizar la precisión y evitar desviaciones en las
mediciones.
CUESTIONARIO PRÁCTICA 3
Antes de la práctica:
5) Anota tres puntos básicos que hay que cuidar al preparar medio
de cultivo sólido.
o Factores de crecimiento
o Esterilización en autoclave a 121°C
o Repartir en cajas petri estériles y dejar en reposo para que se
solidifique.
6) Anotar tres puntos importantes que hay que tomar en cuenta para
la preparación de medios de cultivo líquido.
o Utilizar agua destilada
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o Ajustar pH entre 6.8 y 7.2
o Calcular la cantidad de agar-agar para obtener un medio semi-sólido
Después de la práctica:
1) ¿Cuáles métodos de esterilización y desinfección se usan en la
práctica? Autoclave y esterilización con el mechero.
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CUESTIONARIO PRÁCTICA 4
Después de la práctica:
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antibióticos,un promotor para estimular la expresión génica en las bacterias
y el gen blanco que se insertó durante la ligación.
4) ¿Por qué es necesario llevar el choque térmico una vez añadido el
plásmido GLO? Porque el choque térmico aumenta la permeabilidad de
la membrana celular al ADN.
5) ¿Cuáles son las aplicaciones o posibles aplicaciones del proceso de
transformación genética?
o Obtención de proteínas de seres vivos.
o Obtención de vacunas recombinantes
o Diagnóstico de enfermedades de origen genético.
o Obtención de anticuerpos monoclonales.
Fuentes de información:
• ¿Qué es la Esterilización? Diccionario Médico - Clínica U. Navarra. (s. f.).
https://www.cun.es.
https://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/esterilizacion
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• Tema 7: Métodos de esterilización. | UVS Fajardo. (s. f.).
http://uvsfajardo.sld.cu/tema-7-metodos-de-esterilizacion
https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-ii/pb-
ii2fisicos.htm#:~:text=los%20materiales%20h%C3%BAmedos%20conducen%20m
ejor,seco%20matando%20a%20los%20microorganismos
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/que-es-un-autoclave
https://tecnal.com.br/es/blog/190_esterilizacion_de_instrumentosmateriales_de_la
boratorio_por_calor_humedo_autoclave_y_calor_seco_horno#:~:text=La%20esteri
lizaci%C3%B3n%20en%20autoclave%20debe,durante%201%20a%202%20horas
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https://www.antonsl.es/blog/partes-delautoclave/Artedinamico (s. f.-a).
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articuloampliado/manejo-del-
autoclave-desinfecciOn-y-esterilizaciOn-del-laboratorio-y-sus-
materiales#:~:text=El%20material%20que%20puede%20esterilizarse,que%20circu
le%20el%20aire%20caliente
https://papelmatic.com/cual-es-la-diferencia-entre-asepsia-y-
antisepsia/#:~:text=La%20desinfecci%C3%B3n%20es%20otra%20medida,elimina
r%20todo%20tipo%20de%20microbios
https://www.tratamientosdeagua.com/ventaenlinea/blog-water-technologies/Linea-
de-laboratorio/Que-es-una-propipeta-o-pipeteador
https://genotipia.com/es-lo-mismo-un-organismo-modificado-geneticamente-que-
un-
transgenico/https://issuu.com/gwarisnais/docs/transformaci__n_bacteriana._manu
al
https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-cloning-
tutorial/a/bacterial-transformation-
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