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Manual de prcticas de laboratorio de Microbiologa general. Prof. Diego M. Villamarn M.

LABORATORIO N1.
TECNICAS DE TRABAJO Y METODOS DE ASEPSIA EN EL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGIA UBICUIDAD DE LOS MICROORGANISMOS

1. INTRODUCCIN
El trabajo a nivel de laboratorio requiere de cuidado, preparacin previa de la practica,
concentracin y del manejo de tcnicas que permitan la obtencin de resultados
confiables y reproducibles. Lo mas importante es tener conciencia del trabajo que se
esta realizando, esto es fundamental porque se evitan los errores de procedimiento
que pueden afectar a las muestras (que pueden ser escasas) y en ocasiones al
estudiante por accidentes durante la prctica.
El ambiente que nos rodea presenta gran cantidad de microorganismos, estos son
transportados por el aire y tambin por las personas (en el cabello, la piel, la boca, las
manos, etc.), por esto se hace necesario utilizar tcnicas aspticas que reduzcan al
mximo o eviten la contaminacin de los medios y del rea de trabajo.
Por lo tanto, antes de iniciar la sesin de trabajo se hace necesario preparar el
material y los medios de cultivo bajo las condiciones de esterilidad y realizar la
descontaminacin de las superficies (mesones) con el fin de asegurar que las
condiciones estriles de los medios se mantenga libre de microorganismos
contaminantes y que crezcan en el solo los que nosotros inoculemos.
Este conjunto de actividades utilizadas para evitar contaminantes durante la
manipulacin de los medios y de los cultivos se denomina tcnica asptica (Madigan,
Martinko y Parker, 1999)
La ubicuidad microbiana se manifiesta en diversos ambientes y materiales donde
desarrollan

mltiples

funciones,

sean

estas

benficas

perjudiciales.

Los

microorganismos son componentes esenciales de la biosfera ya que estn presentes


en todos los lugares donde hay vida, donde pueden desarrollarse en condiciones
ideales y extremas.

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La ubicuidad de los microorganismos se basa en tres caractersticas principales:

su tamao pequeo, que les permite una gran capacidad de dispersin,

su variabilidad y flexibilidad metablica, que les permite tolerar y adaptarse


rpidamente a condiciones ambientales desfavorables,

su plasticidad gentica (o gran capacidad de transferencia horizontal de


genes), que les permite re-combinar y recolectar los caracteres positivos y
persistir durante largo tiempo adaptndose a condiciones ambientales
cambiantes.

Independientemente de la constante relacin rechazo (enfermedad, degradacin)


dependencia (utilizacin de microorganismos para fabricar productos, queso,
cerveza, antibiticos, enzimas, etc.) entre los humanos y los microorganismos, este
grupo de organismos "invisibles" representan un vasto terreno inexplorado de
conocimiento y diversidad biolgicas. Sin el conocimiento de los microorganismos la
biologa sera mucho ms limitada, no sabramos que hay vida incondiciones extremas
de temperatura, salinidad o pH, la fotosntesis solamente sera aerobia u oxignica y
los seres vivos ms longevos no superaran los mil aos de edad (como las secuoyas).
2. OBJETIVOS

Aprender el manejo de la tcnica asptica en el laboratorio de Microbiologa.

Observar la presencia de los microorganismos en el ambiente.

Validar el concepto de ubicuidad microbiana

3.MATERIALES
4 cajas de petri con agar nutritivo
4 cajas de petri con agar PDA
1 tubo con caldo de cultivo (bacteria,
levadura)
1 caja de petri con cultivo (bacterias,
hongos filamentosos, levadura)

1 tubo con agua destilada


estril
Asas bacteriolgicas
Hipoclorito de sodio al 1%
Encendedor
Cristaflex o Vinilpel

Mechero de alcohol

Alcohol al 70%

8 Aplicadores estriles

Incubadoras: a 25 C y 37C

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4. MTODOS
4.1 RECONOCIMIENTO DE LOS MATERIALES Y EQUIPOS UTILIZADOS EN EL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA.
Realizar la inspeccin visual y reconocimiento de los materiales a utilizar en las
prcticas de laboratorio.
Equipos: Incubadoras, balanza analtica, horno de esterilizacin, agitador magntico,
bao Mara, autoclave, cabina de bioseguridad, jarras anaerbicas.
Materiales: Asas bacteriolgicas (recta y de argolla), mechero, pipeteadores.
Vidriera: cajas de petri, tubos de ensayo, asa de Driglaski, pipetas.
4.2

Tcnica asptica y siembra de los microorganismos colectados en

diferentes ambientes (sustratos)

Realice la desinfeccin de la superficie del mesn de trabajo, utilice alcohol al


70%, posteriormente encienda el mechero para general su campo estril.

Rotule en la parte inferior las 8 cajas de petri (Fecha- Tipo de muestra- Nmero
del grupo).

En la llama del mechero realice la esterilizacin del asa de argolla, y destape


con cuidado el tubo que contiene agua destilada estril y tome una gota,
destape la caja de petri con agar nutritivo, deposite la gota y haga el rayado
sobre la superficie del agar, repita este procedimiento con una caja de petri con
agar PDA.

Repita el paso anterior pero esta vez con el tubo que contiene el cultivo
bacteriano.

Destape las cajas rotulada manos y pase suavemente sus dedos sobre la
superficie de los agares.

Destape la caja rotulada boca, tosa sobre el agar o lleve un aplicador a su


boca y raspe sus dientes, luego frote con el aplicador la superficie del agar
nutritivo; repita el procedimiento con un nuevo aplicador y realice la siembra en
al agar PDA.

Tome dos cajas de petri; una de agar nutritivo y otra con PDA, bralas en un
espacio escogido por usted y exponga al are por un perodo mnimo de 30
minutos. Tape, selle con cinta vinilpel y marque. Incube y observe el
crecimiento de los microorganismos que aparecern al cabo de 24 y 48 horas

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Tome las cajas , sllelas con parafilm o cristaflex y colquelas invertidas dentro
de la incubadora. Observe los resultados a las 24 y 48 horas.

5. TOMA DE DATOS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS.


Haga a mano un diagrama de flujo en donde se describa cada uno de los pasos
requeridos en el aislamiento de un microorganismo (entregar al inicio del laboratorio).
6. INFORME DEL LABORATORIO

Describa los microorganismos aislados en cada una de las cajas de petri,


teniendo en cuenta las caractersticas morfolgicas macroscpicas de las
colonias (Tabla 1), compare sus resultados con las figuras 1.1 y 1.2. Utilice
para la comparacin diagramas y/o fotos.

Calcular el rea de la caja de petri y reportar el resultado en UFC/cm2.

Realice una tabla donde describa y compare los medios de cultivo utilizados.
CUESTIONARIO.

Qu es una colonia bacteriana?.

Podra usted observar colonias de bacterias en un medio lquido?

Pueden incidir los microorganismos del aire en los trabajos de laboratorio?


Explique.

Cmo evitara que los trabajos de laboratorio se contaminen?.

Al incrementar el tiempo de incubacin se presenta aumento indefinido en el


tamao de las colonias?. Qu factor podra limitar este crecimiento?

Tabla 1. Descripcin morfolgica microscpica de las colonias bacterianas .


Medio de Cultivo:
Tiempo de cultivo:
Temperatura (C):
Dimetro de la colonia (mm):
Densidad:

Transparente (

Opaca

Superficie:

Brillante

Cerosa (

Consistencia:

Cremosa

Mucoide (

Forma:
Elevacin:
Borde:

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Figura 1.1 Forma, elevacin y borde de las colonias.

Figura 1.2 Colonias con morfologa compleja

BIBLIOGRAFA
Alves, S. B. 2006. Controle microbiano de insetos. Sao Paulo, Edit, MANOLE, 2da. Ediao.
407 p.
Madigan, M. T., Martinko, J. M. & Parker, J. 2004. Biologa de los microorganismos.
Madrid, Ed, Pearson educacin. 1011p.
Guerrero, R. & Berlanga, M. 2003. La Ecologa Microbiana se hace mayor de edad.
Departamento de Microbiologa, Universidad de Barcelona. 5p.
Hurst, J. C., Knudsen, G. R., McInerney, M.J., Stetzenbach, L. D. & Walter, M.V. 1997.
Manual of environmental microbiology. American Society for Microbiology. Washington, D.C.
894p.