Universidad del Quindío, Programa de Ingeniería de Alimentos

TITULO
Autores: Juan Sebastian Dorado Mejia. Diana Karina Ramon Tarazona, Samela Cundumi
Montaño
Profesora: Yenni Leandra Rodrigue Ruiz
Practica No.3: T
RESUMEN

En la práctica realizada en el laboratorio identificamos notablemente diferentes tipos de

microrganismos desde lugares comunes como la piel de una persona, hasta los
microorganismos que encontramos en el aire. Primero recogimos muestras de lugares en los
que habitamos o tenemos un constante contacto y a continuación generamos un cultivo,
para posteriormente visualizar en el microscopio las clases de bacterias que se reprodujeron
en el cultivo.
INTRODUCCION

La tinción de gram es una técnica fundamental en microbiología que consiste en la

coloración de algunas bacterias, permitiendo realizar su clasificación en dos grandes
grupos: Gram negativas y gram positivas; esta tinción se basa en la estructura de la pared
celular de cada una de ellas, las cuales poseen ciertas diferencias. Siendo así, se dice que las
bacterias gram Negativas están constituidas por una membrana externa, y una capa fina de
peptidoglicano, mientras que las gram positivas, carecen de membrana externa, pero de
forma similar se constituyen por una capa gruesa de peptidoglicano. En esta práctica de
laboratorio se observará como fue el proceso de esta técnica de tinción de gram, que se
realizó en ciertas bacterias tomadas de tres muestras de cultivos (boca, manos, superficie,
esquina) para determinar el comportamiento al momento de aplicarles los colorantes
(Cristal violeta, Lugol, acetona y safranina). Estos colorantes, fueron de gran importancia,
ya que cada uno cumple una función que permite el aumento del contraste en las bacterias,
y, por ende, con la ayuda de un microscopio poder observarlas y establecer su clasificación,
con respecto al color su la forma.
OBJETIVOS

 Conocer el fundamento de las coloraciones.

 Estudiar los diferentes tipos de coloraciones.
 Realizar practica de coloración de gram.
 Observar y diferenciar las diferentes morfologías bacterianas.
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MATERIALES Y METODOS

- Asa
- Microscopio
- Lugol
- Mechero
- Cristal violeta
- Safranina
- Porta objetos
- Acetona

Garganta y piel Superficie

Usar Hisopo esteril Destapar Caja de petri

frotar en la piel Poner celulares

previamente Agitar el hisopo
lavada
al lado de la durante 10 min
caja

Depositar Caja de petri con Proceder al

muestra hagar Incubar a 37°C
estudio en
de 24-48 horas
microscopio

Proceder al
Incubar a 37°C
estudio en el
de 24-48 horas
microscopio Esquina

Aire

Destapar Caja de petri

Durante 2 En un lugar a
horas elegir

Proceder al
Incubar a 37°C
estudio en el
de 24-48 horas
microscopio
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RESULTADOS

Muestra Resultado
Cavidad oral En esta muestra se pudo observar en su gran mayoría células epiteliales
gram positivas
Piel Se observaron bacilos gram positivos dispersos como también en
grandes grupos
Superficie En el caso de esta muestra, se pudo detallar que había en ella bacilos
gram negativos, dispersos y agrupados
Esquina Se pudo observar cocos gram positivos, bacilos y cocos gram
negativos, los cuales estos dos últimos se encontraban en mayor
cantidad
Aire En esta muestra no se pudieron obtener resultados, ya que hubo
presencia de microrganismos (gusanos) que dañaron el cultivo que se
había tomado, en este caso era el del patio de una casa

DISCUSIONES

 Muestra 1
En este caso se pudo observar a diferencia de las demás muestras, células epiteliales
escamosas de la parte interna de la boca. Se tiene entendido que el interior de la boca
está tapizado por un tejido formado por células planas: las células de la mucosa bucal.
Por tal razón el tejido que pudimos observar a través del microscopio es de tipo
epitelial, plano estratificado; (martin, 2019) las células de este tejido son transparentes
es por ello que con el colorante pueden ser observadas
 Muestra 2
En esta muestra se pudo evidenciar una gran cantidad de bacilos (bastones) gram
positivos. Se debe tener en cuenta que antes de realizar el frotis y tomar la muestra, las
manos pasaron por un correcto lavado. Con esto podemos darnos cuenta que, aunque se
tenga una correcta higiene y controlemos lo que manipulamos con nuestras manos,
siempre hay bacterias presentes, esto lo podemos ver en las fotos anexadas al final del
informe.
La mala higiene puede dar cavidad a bacterias infecciosas y producir una proliferación
de estos microorganismo y causar así infecciones y enfermedades cutáneas
 Muestra 3.
Considerando que esta muestra fue tomada de la superficie, se pudo observar la
presencia de dos tipos de bacterias gram positivas y gram negativas. Se puede decir que,
la diferencia en la resistencia de los colorantes, es debido a la composición de cada de
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ellas, por lo que podemos denotar en la imagen la presencia de color violeta y rosa
correspondientes a ambos tipos de bacterias.
En el caso de las bacterias gram negativas, lo que sucede en la coloración, es que el
cristal violeta no atraviesa con intensidad, ya que se le dificulta su paso, debido a que la
membrana externa hace que el cristal tenga poca afinidad con capa fina de
peptidoglicano, por ello, al enjuagar el cristal, se le adiciono Lugol para fijar lo que
quedo de este colorante. Por el contrario, en las bacterias gram positivas, al agregarles
el cristal violeta si lo retienen, debido al grosor del peptidoglicano y la afinidad que
tienen con este mismo.
 Muestra 4
En la muestra que tomamos de la esquina identificamos gran cantidad de bacterias gran
negativas, esto lo notamos gracias a su color rojo, y por su forma en forma de cono o
baston, podríamos decir que se trata de bacilos, este tipo de bacterias se caracterizan ya
que no todas actúan de manera negativa
También notamos unas pocas bacterias gran positivas que las podemos evidenciar
gracias a su color violeta esta característica está ligada a su estructura, gracias a su
forma algo circular podemos saber que son bacterias cocos, estas bacterias radican en la
producción de enfermedades pus o humos
CONCLUSIONES

Identificamos que los cultivos son primordiales ya que a si ph y diferentes características

favorece al crecimiento de los microorganismos de interés, con el mismo propósito la
incubación también debe proporcionar condiciones adecuadas para el microorganismo que
estudiamos, en general las incubadoras satisfacen las necesidades requeridas por los
microorganismos. En el estudio de los cultivos bacterianos empleamos criterios para
caracterizar los microorganismos, en estos incluimos tamaños, forma y la tinción de Gram
con estos patrones logramos identificar la clase de bacterias obtenidas en los cultivos
BIBLIOGRAFIA

Guia estetica . (08 de enero de 2018). Obtenido de

https://www.guia-estetica.com.ar/maquillaje/que-es-un-cromoforo/

martin, F. u. (2019). Tinción DE Células Epiteliales Escamosas EN LA Parte Interna DE LA BOCA.

Obtenido de https://www.studocu.com/co/document/fundacion-universitaria-san-
martin/medicina-interna/tincion-de-celulas-epiteliales-escamosas-en-la-parte-interna-de-
la-boca/5626548

Mora, O. (04 de Septiembre de 2019). Edulabc. Obtenido de Tincion de gram:

https://edulabc.com.mx/tincion-de-gram/
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Ormaechea, E. (11 de Marzo de 2021). Salud Canales Mapfre. Obtenido de

https://www.salud.mapfre.es/pruebas-diagnosticas/otras-pruebas-diagnosticas/tincion-
de-gram/

https://www.hisour.com/es/auxochrome-26500/
https://www.colibri.udelar.edu.uy/jspui/bitstream/20.500.12008/19662/1/TTS_CoresRodr
%C3%ADguezSantiago_ScarzellaAriel.pdf
ANEXOS

CUESTIONARIO
1. ¿Investigue que es un cromóforo y un auxocromo y por qué son importantes en la
observación del color?
Un auxocromo es un grupo funcional de átomos con uno o más pares de electrones
solitarios que, cuando se unen a un cromóforo, alteran tanto la longitud de onda como la
intensidad de absorción. Si estos grupos están en conjugación directa con el sistema pi del
cromóforo, pueden aumentar la longitud de onda a la que se absorbe la luz y, como
resultado, intensificar la absorción. Una característica de estos auxocromos es la presencia
de al menos un par de electrones solitarios que pueden verse como la extensión del sistema
conjugado por resonancia.
La presencia de un auxocromo en la molécula de cromógeno es esencial para hacer un tinte.
Un auxocromo se conoce como un compuesto que produce un desplazamiento batocrómico,
también conocido como desplazamiento rojo porque aumenta la longitud de onda de
absorción, por lo tanto, se acerca a la luz infrarroja. Las reglas de Woodward-Fieser
estiman el cambio en la longitud de onda de la absorción máxima para varios auxocromos
unidos a un sistema conjugado en una molécula orgánica.
Un auxocromo ayuda a un tinte a unirse al objeto que se va a colorear. La disociación
electrolítica del grupo auxocromo ayuda a la unión y es por esta razón que una sustancia
básica toma un colorante ácido.
El cromóforo es la parte de la molécula donde la diferencia de energía entre dos orbitales
moleculares diferentes cae dentro del rango del espectro visible y, por lo tanto, absorbe
algunos colores particulares de la luz visible. Por lo tanto, la molécula aparece coloreada.
El cromóforo es un conjunto de átomos que, al absorber radiaciones luminosas, dotan de
color a un compuesto orgánico.
Un cromóforo es cualquier molécula o elemento que tiene una carga electromagnética y
refleja ciertas longitudes de onda que caen en el espectro visible. El ojo humano detecta
estas longitudes de onda reflejadas y lo percibe como el “color” de la molécula o elemento.
Esto es lo que le da a la sal de mesa su color blanco y al oro, su ‘dorada’. Y, por lo tanto, en
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realidad cualquier sustancia podría llamarse técnicamente un cromóforo. En realidad, el

término se aplica generalmente a sustancias específicas que son conocidas por generar un
color puro particularmente vibrante y rico.

2. ¿Explique qué función cumple cada uno de los colorantes utilizados en la tinción de
Gram?
Cristal violeta: tiene afinidad a los peptidoglicanos presente en la pared bacteriana.
Lugol: Ayuda en la fijación del cristal violeta, evitando la salida de este, mediante un
complejo cristal-yodo que satura los espacios de peptidoglicano que están presentes en la
pared de la bacteria.
Cetona: Se encarga de deshidratar y cerrar los poros la pared de la bacteria, destruye la
pared externa (presente en las gram negativas). Cabe señalar que las bacterias Gram
positivas, al contener una mayor cantidad de pétidoglicano en comparación a las bacterias
Gram negativas, retiene con mayor fuerza el complejo (cristal violeta-yodo antes
mencionado)
Safranina: Se encarga de teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal
violeta.
3. ¿Explique por qué las bacterias gramnegativas al adicionarles KOH forman una
solución viscosa y las gram positivas no?
Las bacterias Gram negativas (-) se caracterizan por contener una capa de lipoproteínas más
lipopolisacáridos sobre la capa peptidoglucano y presentan una capa muy fina, al aplicar el
KOH al 3% produce el vaciado del interior de la célula hacia fuera, dando como resultado
la formación de un hilo solución mucosa. Al contrario, en las Gram positiva (+) no se
forma este hilo debido a que ellas presentan una pared celular más gruesa.
4. Consulte las posibles causas de que unas bacterias tomen el Gram y otras no.
¿Químicamente cuál es la causa de esta reacción?
La tinción es una prueba que se realiza en las bacterias para detectar, cualquier tipo de
infección presente en ciertas partes del cuerpo. Según la distribución del peptidoglicano de
la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias que no se
tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas. Están formadas por una pared
más fina formada por menos capas de peptidoglicano y una segunda membrana rica en
lípidos (que repele la tinción Gram), al microscopio aparecen incoloras.
La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo de
antibiótico, así como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de atravesar la
pared bacteriana, en función de si la bacteriana es gram positiva o negativa se seleccionará
el antibiótico más eficaz.
5. ¿En qué consiste un Test del hidróxido de potasio (KOH)?
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Consiste en colocar sobre una laminilla una gota de KOH al 3%y con el asa, hacer em ella
una suspensión de colonias de la bacteria problema, mezclando con movimientos giratorios
durante 1 a 3 minutos. Si al separa el asa la mezcla forma una hebra viscosa, se trata de una
bacteria gram negativa, si de lo contrario no se forma la hebra viscosa, entonces es una
bacteria gram positiva.

FOTOS
Cultivos

Muestra
1

Muestra 2

Muestra 3
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Muestra 4