MICROBIO

Laboratorio
LOGÍA N°.4
Técnicas de Siembra
Microbiana

DOCENTE:
- CABELLO CHAVEZ Pablo Edwin
INTEGRANTES:
- LIÑAN MARTINEZ, Jordan Lewis.
- PINEDA MEDINA, Diana Susan.
- QUISPE TREJO, Cesia Abigail.
- TUYA CASTILLO, Steven Héctor.
- RUPAY CARO, Wilmer Wilfredo.
FACULTAD
- Ciencias del Ambiente
 1. INTRODUCCIÓN.

En la naturaleza los microorganismos se encuentran en comunidades más o menos

complejas. Por ello, una técnica esencial en Microbiología es la de obtención de
cultivos puros, a partir de los cuales son posibles estudios sobre las propiedades del
microorganismo.

Un cultivo puro es aquel que contiene una sola clase de microorganismo, para
obtenerlo es necesario recurrir a las llamadas técnicas de aislamiento, existen varias;
las técnicas más utilizadas emplean un medio de cultivo sólido, en el que los
microorganismos generan colonia separadas.

El precursor de algunas técnicas de siembra fue Robert Koch y sus colaboradores. Las
técnicas de siembra se basan en la inoculación de los microorganismos en un medio
adecuado, que luego de un período de incubación bajo condiciones óptimas se
conseguirá su reproducción y desarrollo. La idea es permitir aislar una sola especie
microbiana para su estudio.

El crecimiento de los microorganismos depende básicamente de la disponibilidad de

agua: las bacterias requieren 20% de agua, los hongos 12%; para sintetizar sustancias
celulares se requiere de nutrientes que provean macro elementos en grandes
cantidades y micro elementos, también es necesario compuestos que provean energía
como la luz para los autótrofos y los carbohidratos para los heterótrofos. Otros
microorganismos además de los nutrientes adecuados, necesitan factores de
crecimiento como aminoácidos, vitaminas, purinas y otras sustancias que estimulan
favorablemente su crecimiento.

Siembra Microbiana: es la operación que consiste en colocar a los

microorganismos en un ambiente (medio de cultivo) adecuado para que se
desarrollen y multipliquen.

Crecimiento Microbiano: es el aumento irreversible de materia viva; el

incremento inicial es de las moléculas químicas y luego la división celular.

Colonia: es un conjunto de microorganismos sobre un medio de cultivo sólido

visible macroscópicamente, producto del crecimiento a partir de una sola célula.

Cepa: es un cultivo puro de microorganismos, morfológico, genético y

fisiológicamente iguales, procedentes de un aislamiento.
 2. MATERIALES Y MÉTODOS.
2.1. MATERIALES.
Materiales

 Equipo: incubadora, baño maría, autoclave.

 Material bilógico: Agar nutritivo, muestra problema, tubos con
medio semi sólido, tubo con agar semisólido inclinado, caldo
nutritivo.
 Herramientas: Asa bacteriológica, Placas Petri, marcador de
vidrio

Métodos

Se basa en el estudio mediante distintas técnicas de la identificación

del microorganismo causante de las distintas infecciones que ocurren
en nuestro organismo, así como de la determinación de la sensibilidad
que pueden presentar a los distintos antibióticos.

3. RESULTADOS.
Tópico de uso del microscopio.
a. Coloque el microscopio en la mesa con el brazo hacia usted.
b. Utilizando el microscopio (figura 13), localice y rotule en el diagrama las
siguientes partes: la base, el brazo, los lentes oculares, el botón micrométrico, el 6
botón macrométrico, la montura tipo revólver con los lentes objetivos, la platina con
el carro mecánico, el diafragma, el condensador y el iluminador (bombilla).
c. Dele vueltas a la montura tipo revolver hasta que el objetivo de menor aumento
(4X) esté en posición de observar. Escuchará un sonido (“click”) que le indicará
que el objetivo está en posición correcta. El aumento total de cualquier espécimen
visto bajo el microscopio se obtiene multiplicando la magnificación del objetivo
usado por la magnificación del lente ocular. Por lo tanto, con el ocular 10X y con el
objetivo 10X, la imagen del objeto es aumentado cien veces.
d. Seleccione una de las diversas laminillas de montaje fijo que le provea su profesor
y colóquela correctamente en el carro mecánico. Asegúrese de que el
cubreobjetos quede hacia arriba.
e. Al mirar por el ocular mantenga siempre ambos ojos abiertos. Ajuste la distancia
entre los oculares y sus ojos siguiendo las instrucciones de su profesor. Mire por el
ocular mientras mueve el ajuste macrométrico. El ajuste macrométrico solo se
utilizará con el objetivo de 4X en posición de observar, nunca con objetivos de 10X,
40X o 100X. Continúe haciendo esto hasta que el objeto quede en foco.

4. DISCUSIONES.
Caracterización de crecimiento sobre agar nutritivo
Siembra en cajas de Petri por la Técnica de agotamiento, aislamiento o de estría
cruzada.
Es un buen método para el aislamiento de colonias (obtención de colonias aisladas);
mediante esta técnica buscamos obtener colonias separadas a partir de un inóculo.
Para su realización: (I) se toma la placa Petri en la palma de la mano y ligeramente
inclinada; con la mano contraria, se manipula el asa de argolla previamente
esterilizada y con ella se recoge el material de cultivo, para colocarlo en un área
periférica de la placa haciendo movimientos circulares para homogeneizar el inóculo.
(II) El asa debe ser nuevamente flameada y enfriada en un lateral del agar (procurando
no dañarlo); a continuación, se realiza una estría partiendo de la primera y arrastrando
los microorganismos presentes en ella hacia el extremo contrario de la superficie del
agar. (III) Repita el paso II, por tres veces (algunos autores reportan solo dos),
recordando flamear y enfriar el asa cada vez que culmine una estría y solo tocar con el
asa la estría inmediatamente anterior, con el objetivo de ir reduciendo la carga
microbiana arrastrada por la argolla. Finalmente se esteriliza el asa antes de
descartarla.
a. Tamaño: Mediano (diámetro aproximado a 1mm
b. Forma: Irregular
c. Borde: De borde regular (continuo),
d. Elevación: Elevada (convexa baja)
e. Superficie: Rugosa.
Caracterización del crecimiento sobre Agar Nutritivo inclinado.
Los cultivos en este medio se inoculan en una sola línea recta (sobre la superficie del
bisel), y se evalúan de la siguiente manera.
1. Abundancia de crecimiento. Moderada
2. Pigmentación. Blanquecino
3. Las características ópticas. Pueden evaluarse con base en la cantidad de luz
transmitida a través del crecimiento; estas características son descritas como: opaca
(ninguna transmisión de luz)
4. Forma. Arborescente
Caracterización del crecimiento en Caldo Nutritivo.
Son evaluados según la distribución y apariencia del crecimiento.
Turbidez fina uniforme: Crecimiento fino y totalmente disperso.

La morfología de las colonias es un parámetro importante en el proceso de

identificación bacteriana, siendo estas características, comunes entre cada género
bacteriano. Sin embargo, la morfología puede alterarse por el tiempo de incubación,
composición del medio de cultivo (excesiva desecación o humedad), etc.

5. CONCLUSIONES.

 Cada técnica de siembra microbiológica tiene su propio propósito y aplicación

específicos y es importante conocer y utilizar la técnica adecuada para cada
tipo de muestra y análisis microbiológico. Tales como el aislamiento
microbiológico; identificación, cuantificación de microorganismos; y
detección de patógenos.

 La obtención de colonias aisladas a partir de poblaciones mixtas es una técnica

importante para el aislamiento y estudio de microorganismos individuales.
Este proceso permite obtener información más detallada sobre las
características y comportamiento de los microorganismos, lo que puede ser
útil para su identificación y aplicación en diversos campos como la medicina,
la agricultura y la industria.
 La elección de una técnica de siembra microbiológica adecuada es
fundamental para obtener resultados precisos y confiables en cualquier tipo de
análisis microbiológico. La siembra inadecuada puede conducir a errores en la
interpretación de los resultados, lo que puede tener consecuencias graves en
términos de la salud pública, la seguridad alimentaria, el control de calidad y
otros campos.
Esquematización
a) Siembra en placa: consiste en diluir la muestra y colocarla en una placa
con medio de cultivo sólido. Se pueden utilizar diferentes técnicas para
extender la muestra sobre la superficie del medio de cultivo, como la
técnica de vertido, la técnica de estría o la técnica de punta de pipeta. Esta
técnica es útil para obtener colonias aisladas y puras de microorganismos.

b) Dilución en serie: consiste en diluir la muestra en serie en diferentes tubos

de ensayo con medio de cultivo líquido. Esta técnica permite obtener una
dilución adecuada de la muestra y proporciona una estimación aproximada
del número de microorganismos presentes en la muestra.

c) Siembra por gota: consiste en colocar una pequeña gota de muestra en un

medio de cultivo sólido. Esta técnica es útil para microorganismos que
forman colonias pequeñas o difíciles de aislar.

d) Siembra por inmersión: consiste en sumergir el objeto o la muestra en un

medio de cultivo líquido para permitir que los microorganismos crezcan en
la superficie del objeto. Esta técnica es útil para muestras con
microorganismos adheridos a la superficie. (Caldo nutritivo)
 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.

 Fecyt. (s/f). #Fotciencia19. Fotciencia. Recuperado el 13 de marzo de 2023, de

https://www.fotciencia.es/publico/galeria/formampliacionimg.aspx?
fotografia=12124
 Equipo. (s/f). Cultivo Puro. Blogspot.com. Recuperado el 13 de marzo de
2023, de http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/10/cultivo-
puro.html
 Sureshchandra, B., & Kumar, N. (2011). Detection of presence or absence of
Mycobacterium tuberculosis in infected and uninfected pulp using a
microbiological culture method - Case series. Endodontology, 23(1), 8.
https://doi.org/10.4103/0970-7212.352021

7. ANEXOS.

7.1. CUESTIONARIO.
1. Definir Cultivo Microbiano.

Un cultivo microbiano se refiere al proceso de cultivar y multiplicar

microorganismos, como bacterias, hongos y virus, en un medio de cultivo en
condiciones controladas de temperatura, pH, nutrición y oxígeno. El objetivo
de este proceso es obtener una población de microorganismos homogénea y
pura para su uso en investigaciones y aplicaciones en diversos campos, como
la biotecnología, la medicina, la agricultura y la industria alimentaria. Los
cultivos microbianos pueden ser utilizados para la identificación de especies
 de microorganismos, la producción de enzimas y metabolitos, y para estudiar
la fisiología y el comportamiento de los microorganismos en diferentes
condiciones. Los cultivos microbianos pueden ser cultivados en condiciones
aerobias o anaerobias y pueden ser líquidos o sólidos dependiendo de la
técnica de cultivo utilizada.

2. Definir Cultivo Puro.

Un cultivo puro se refiere a una población de microorganismos que se ha

aislado y separado de otras especies o poblaciones de microorganismos
presentes en una muestra. En un cultivo puro, todos los microorganismos son
idénticos y pertenecen a la misma especie. Esto es importante para estudios y
aplicaciones microbiológicas, ya que permite la caracterización precisa de las
propiedades, características y comportamiento de los microorganismos
individuales. Para obtener un cultivo puro, es necesario utilizar técnicas de
siembra microbiológica, como la siembra en placa, la dilución en serie o la
técnica de estría, para aislar colonias individuales de microorganismos y
cultivarlas en medios de cultivo adecuados.