FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE ENFERMERÍA

ASIGNATURA:

MICROBIOLOGÍA Y
PARASITOLOGÍA

DOCENTE:

VEGA PORTALATINO EDWIN JORGE

SECCIÓN:
C3T1

INTEGRANTES:
GUADALUPE BELEN AGURTO URBINA
KELYN MABEL CORONEL TORRES
JOAQUIN JESUS MUÑOZ HUANCAHUARI
ABISH ESTHER YACILA CUNYA
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PRÁCTICA
Nro. 01

Laboratorio de: Fecha :

Microbiología y Parasitología
Temática :
La Microbiología y Parasitología. Breve reseña histórica. Características generales de los
microorganismos. Métodos de estudio de los microorganismos. Bioseguridad
Sesión: 1 Resultado de aprendizaje:
Explica el crecimiento microbiano
considerando los procesos de
desinfección, esterilización y
antisepsia que se utiliza para el
control de microorganismos.
Estudiante: Tiempo desarrollo de la guía:
IV Ciclo de la Escuela Profesional de Enfermería 150 minutos

I. INTRODUCCIÓN
El laboratorio es el lugar ideal para llevar a cabo experiencias y demostraciones que
permitan comprender y complementar lo aprendido en los conocimientos teóricos
sin embargo es también un sitio que encierra una serie de riesgos y peligros tanto
para el personal, los alumnos y los docentes por lo tanto es necesario que todos
sepan la manera correcta de cómo desarrollar el trabajo a través de la comprensión y
aplicación correcta de las normas de bioseguridad así como del uso adecuado de los
materiales y equipos propios de un laboratorio.

Para poder observar los microorganismos es necesario contar con el microscopio, la

palabra microscopio viene del griego mikro, pequeño y skope, visión. Los
microscopios son instrumentos que nos permiten observar objetos pequeñísimos que
no se pueden ver a simple vista, ni con la ayuda de una lupa. Debido a las
dimensiones de las células, se generó la necesidad de inventar el microscopio como
una herramienta fundamental en la Biología. Los primeros reportes acerca del uso
de un microscopio fueron hechos por Robert Hooke en 1665, cuando observó cortes
de corcho y encontró lo que más tarde sus contemporáneos Schleiden y Schwann
describirían como células. Estos hallazgos dieron origen a la “Teoría Celular”.
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El microscopio óptico desempeña un papel importante en la investigación biológica,

sin embargo, con el creciente desarrollo tecnológico han surgido variaciones en el
diseño de microscopios, los cuales son más avanzados y ofrecen mayores
posibilidades en la observación detallada de estructuras celulares, tal es el caso del
microscopio electrónico que permite la visualización de partículas acelulares como
los virus. Gracias a las innovaciones en la fabricación de microscopios y el reciente
desarrollo de modelos con mayor aumento y poder de resolución, es que se ha
logrado una mejor comprensión de la organización celular

Entre los métodos de estudio de los microorganismos se encuentran las

coloraciones, la coloración y la observación microscópica de las bacterias revelan su
tamaño, morfología y tipos de agrupaciones, características que son de ayuda para la
identificación bacteriana. Las bacterias tienen alrededor de 1 μm de diámetro y 0.2 a
3-4 μm de largo y poseen tres formas básicas; los cocos, los bacilos y las espirilos.

Para poder estudiar a los microorganismos, es necesario aislarlos, para lo cual se

utilizan medios de cultivo, en la actualidad existen medios de cultivo que le
proporcionan a los microorganismos los nutrientes necesarios para que puedan
vivir y reproducirse. Por lo que un medio de cultivo debe contener nutrientes,
factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias
para el desarrollo de los microorganismos. Puesto que la diversidad metabólica de
los microorganismos es enorme.

II. CONOCIMIENTOS PREVIOS: Evaluación Inicial

¿Qué es un riesgo y que es un peligro?

¿Qué es la bioseguridad?
¿Cuáles son los principios de la bioseguridad?
¿Qué es un microorganismo?
¿Qué características tienen los microorganismos?
¿Cómo podemos observar un microorganismo?
¿Qué es un microscopio?
¿Qué es un medio de cultivo?

III. MATERIAL

 Videos e imágenes de atlas virtuales de microbiología y parasitología

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IV. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Actividad 1. Identificación de las partes del microscopio.
En la imagen, coloque el nombre de los componentes del microscopio.
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 Observar con objetivo de 100 X

Actividad 2. Coloraciones bacterianas

1. Coloración Simple
• En portaobjeto perfectamente limpio y desengrasado preparar un extendido
fino de la bacteria a estudiar y secar al ambiente o al calor moderado del
mechero
 Colocar el portaobjeto sobre las varillas de la cubeta de coloración y
cubrir con colorante azul de metileno por 1 minuto
• Lavar con agua.
 Secar al ambiente o al calor moderado del mechero
 Observar con objetivo de 100 X

1 PUNTO
Observación:
Morfología y agrupación de las bacterias

Muestra:
Colocar el frotis y agregar unas gotas del colorante hasta
cubrir la preparación, evitando que el colorante escurra.
Coloración:
Dicha coloración se deja actuar por 1min, lapso en el cual se
tiñen todas las células.

Aumento:
100 aumentos

2. Coloración de Gram.
 En portaobjeto perfectamente limpio y desengrasado preparar un extendido
fino de la bacteria a estudiar y secar al ambiente o al calor moderado del
mechero
 Colocar el portaobjeto sobre las varillas de la cubeta de coloración y
cubrir con colorante cristal violeta por 1 minuto
 Lavar cuidadosamente con abundante agua.
 Cubrir con lugol durante 3 minutos.
 Lavar con agua.
 Decolorar durante 20 segundos exactamente con solución de alcohol-acetona.
 Lavar con agua.
 Cubrir con el contracolorante de safranina durante 30 segundos.
 Lavar con agua.
 Secar al ambiente o al calor moderado del mechero
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1 PUNTO
Observación:
Gram -: Las bacterias se tiñen de rosa o rojo por la Safranina;
Gram +: las bacterias se tiñen de violeta.
Muestra:
Se coloca 1gt de agua sobre una lámina portaobjetos y
sobre ella colocar una muestra tomada de un cultivo sólido.
Coloración:
Añadir cristal violeta por 1min para que tiña todas las
bacterias Gram – y Gram +, enjuagar.

luego añadir Lugol por 30s, enjuagar y aplicar alcohol de 96º

por 15s, por último, añadir Safranina por 1 o 2 min, lavar y
dejar secar.
Aumento: 100 aumentos

3. Coloración de Ziehl Neelsen

 En portaobjeto perfectamente limpio y desengrasado preparar un extendido
fino de una muestra de esputo y secar al ambiente.
 Cubrir con colorante fucsina carbólica
 Calentar con mechero hasta desprendimiento de vapores, repetir este paso 3
a 4 veces.
 Lavar con agua
 Decolorar con alcohol ácido,
 Lavar con agua
 Contracolorear con azul de metileno de 30 a 60 segundos.
 Observar con objetivo de 100 X

1 PUNTO
Observación:
Identificación de bacterias Bacilos Ácido alcohol resistentes

Muestra:
Esputo como ejemplo para hacer la coloración

Coloración: se deja secar y se pasa 3 veces por el mechero

para que las bacterias se adhieran a la lámina, se aplica
Fuczina cubriendo la lámina, se enjuaga con agua, se
aplica alcohol ácido por 1min, luego se lava y finalmente
se le aplica Azul de metileno por 3min, se lava y se deja
secar.

Aumento: 100 aumentos

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 Observar con objetivo de 100 X

Actividad 3. Preparación de los Medios de Cultivo

Pesar la cantidad de gramos indicados en el frasco del medio de cultivo, añadir lo
pesado a un matraz o un balón de fondo plano. Agregar agua destilada y disolver,
luego calentar en una cocina o un baño maría hirviente. Colocar el tapón de algodón
y cubrir con un pedazo de papel kraft, anotar el nombre del medio y amarrar con
hilo pabilo. Esterilizar en autoclave.

Actividad 4. Siembra de microorganismos.

 Siembra de bacterias por dispersión (agotamiento, estrías)

A partir de una muestra de consistencia líquida o blanda se siembra por

estrías, tal como se observa en la siguiente figura, en la superficie del medio
de cultivo contenido en una placa de Petri

 Siembra en tubos con agar inclinado

 A partir de una colonia aislada en placa, se siembra por estría, tal como se
observa en la siguiente figura, en el pico de flauta del medio de cultivo
contenido en un tubo de ensayo
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 Siembra de hongos por puntura

A partir de un cultivo puro de un hongo, se siembra por puntura, tal como se
observa en la siguiente figura, en la superficie del medio de cultivo
contenido en la placa de Petri.

V. CONCLUSIONES (1 PUNTO)

Las coloraciones son el proceso el cual en cuerpo toma color bajo la acción de otro
cuerpo o sustancias llamadas colorante se reconocieron 2 tipos: simple y conpuesta o
diferencial gram y la ziehl neelesen.
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 Observar con objetivo de 100 X

VI. EVALUACIÓN
1. Fundamento de la coloración Gram (2 PUNTOS)

Esta es una técnica que muestra 4 pasos primordiales: tinción fijación con el
mordiente, decoloración, contradicción, por tanto, esta técnica además de colorear a
las bacterias, también permite diferenciarlas. Para la realización de una tinción de gran
se utilizan 2 colorantes. Uno de carácter primaria como es de cristal violeta y otro de
contraste, como la safranina

2. Fundamento de la coloración Ziehl Neelsen (2 PUNTOS)

La tinción de Ziehl-Neelsen es la técnica comúnmente usada en el diagnóstico rutinario de

tuberculosis. Siendo una técnica rápida, fácil y de bajo costo, lo que eventualmente permite que
se pueda realizar en casi cualquier laboratorio clínico. Esta tinción permite específicamente
diferenciar a las bacterias en dos grupos: aquellos que son capaces de resistir la decoloración
con alcohol-ácido y aquellos que no lo son. La sensibilidad de esta tinción para identificar
bacilos ácido-alcohol resistentes es del 74% y la especificidad del 98%, teniendo un límite de
detección de 5,000- 10,000 bacilos/mL de muestra. Reforzando lo anterior esta teoría demuestra
de cierto modo la capacidad de ciertas bacterias ante la resistencia de coloración por ácidos y
alcoholes, lo cual se relaciona con su alto contenido en lípidos de la pared celular y presencia de
ácidos micólicos que aumentan el carácter hidrófobo, pudiendo identificar de esta manera una
de las bacterias que presentan una de las características como la Mycobacterium tuberculosis
conocida por ser la principal causante de la tuberculosis.
3. En relación a los tipos de medios de cultivo, defina y mencione 2 ejemplos
de cada uno
1.

a. Medios sólidos:
 son aquellos en la cual se puede obtener bacterias aisladas por la formación de
colinas sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de morfologías de
las colonias.
Ejemplos
 Agar cerebro corazón
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 Agar común
b. Medios líquidos:
 Son aquellos que favorecen o permiten la multiplicación de bacterias cuando la
muestra obtenida es muy pobre
Ejemplos
 Caldo tetrationato
 Caldo o agua peptonada
c. Medios simples:
 Son aquellos que poseen requisitos nutricionales para permitir el desarrollo
bacteriano general.

Ejemplos:
 Caldo nutritivo
 Agar nutritivo

d. Medios enriquecidos:
 Son aquellos que permite el aporte de factores de crecimiento o sustancias que
neutralizan agentes inhibidores del crecimiento de bacterias exigentes
nutricionalmente.
Ejemplos
 Agar sangre
 Agar desoxicolato-lactosa

Ej. Caldo tetrationato utilizado para el enriquecimiento de las especies

del género Salmonella provenientes de muestras de heces, orina, agua o
alimentos.
e. Medios selectivos:
 Son básicamente iguales a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios
sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos.
 Ej. Agar desoxicolato citrato utilizado para el aislamiento de patógenos
entéricos.

f. Medios diferenciales:
 No contienen sustancias inhibidoras, es decir, permiten el crecimiento de
muchos tipos de microorganismos.
 Ej.: Agar base rojo fenol utilizado para detectar fermentación de carbohidratos.
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4. En relación a la preparación de medios de cultivo:
 Observar con objetivo de 100 X
a. ¿Por qué es necesario esterilizar los medios de cultivo? (2 PUNTOS)

Para el estudio de estos microorganismos esencial contar con material y

medios de cultivo estériles. Como se sabe, en la microbiología el mantener
estéril se puede definir como un
“proceso en el cual se van a descartar los microorganismos de un objeto,
medio o superficie” y al aplicarse eso se va a garantizar la carencia de
microorganismos en el material y medios de cultivo al ser ya empleados.
Ahora, existen diferentes métodos de esterilización: calor (seco o húmedo),
filtración (sustancias termolábiles y aire) radiaciones y aplicación de gas de
óxido de etileno (jeringas y cajas de plástico).

b. ¿Todos los medios de cultivo deben ser esterilizados? Si su respuesta es

no, fundamente y mencione 2 ejemplos de medios que no es necesario
esterilizarlos (2 PUNTOS)

Si, ya que así es indispensable trabajar con materiales estériles con el objetivo
de que los resultados que se obtengan correspondan al microorganismo que
está presente en la muestra que se está estudiando y no sean contaminantes ya
que así saldrían falsas pruebas.

5. De las técnicas de siembra estudiadas, ¿Cuál se utiliza para el

aislamiento de microorganismos a partir de muestras clínicas? (1
PUNTO)

Las técnicas de siembra de Petri, tiene como objetivo la atención de colonias de

aislamiento. El aislamiento, consiste en la separación de un determinado
microorganismo de las poblaciones existentes de la naturaleza. Para lograrlo es
necesario utilizar estrías muy juntas avanzando suavemente por las superficies de
lagar sin retroceder. En las estrías finales se van a obtener colonias perfectamente
separadas unas de otras. Otra técnica de siembra que se realiza por extensión del
cultivo bacteriano sobre la placa de Petri con ayuda de la espátula de digralsky, si la
espátula es de vidrio o metal es esteriliza con alcohol y se pasa por el mechero 2 o 3
veces.

VII. BIBLIOGRAFÍA (4 PUNTOS)

Código de LIBROS/REVISTAS/ARTÍCULOS/TESIS/PÁGINAS
biblioteca WEB.TEXTO
616.01 / M95c Murray P, Rosenthal K, Pfaller M. Microbiología Médica. 6ta. ed.
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Madrid:
Elsevier España; 2009.
579.1788 / Madigan M, Martinko J, Parker J. Biología de los Microorganismos de
M14A Brock.
12ava ed. Madrid: Pearson; 2009.
616.01 / K74A Koneman E et al. Diagnóstico Microbiológico Texto y Atlas. 6ta ed.
Argentina:
Médica Panamericana S.A; 2008.
Ramírez J, Reyes A. Manual de Prácticas de Biología. México: Pearson
570.724 R21 Educación S.A. de CV; 2003
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