Medicina Tema 11 Transcripcion

Tema 11. Transcripción. Estructura de los promotores.
Etapas de la transcripción. Regulación del proceso.

Procesos de maduración postranscripcional del ARN.
Biología Molecular
Dra. Estrella Núñez Delicado
Grado en Medicina
Dra. Esrella
1
Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869
Tema 11 Transcripción, Biología Molecular
Universidad Católica San Antonio de Murcia - Tlf: (+34) 968 27
Dra. Estrella Núñez Delicado - Tlf: (+34) 96888 278869
00 info@ucam.edu - www.ucam.edu
- enunez@pdi.ucam.edu
Transcripción
El genoma es el
mismo en todas las
etapas de la célula
pero el transcriptoma
y el proteoma no.
2
Dra. Estrella Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869 - enunez@pdi.ucam.edu
Transcripción
q Da lugar a una copia de ARN, con secuencia complementaria y
antiparalela de la hebra de AND usada como molde.
q Es un proceso enzimático catalizado por la ARN polimerasa o
transciptasa.
q Procariotas:
1. El ARNm resultante es ya funcional.
2. El ARNm puede empezar a traducirse antes de acabar la
transcipción.
3. ARNr y ARNt sí sufren maduración.( modificación de nucleótidos).
q Eucariotas:
1. El ARN resultante de la transcripción se llama transcripto primario
y sufre una maduración en el núcleo antes de salir al citoplasma.
2. Existe separación espacial y temporal entre transcipción y
traducción.
3
Transcripción
Diferencias:
1.- En procariotas el transcripto
primario del mRNA es funcional, no
requiere maduración postranscripcional
y se usa directamente como molde para
la traducción.
4
Transcripción eucariotas
Expresión génica
qProcesos:
1.- Transcripción
2.- Maduración
postranscripcional
3.- Transporte nuclear
4.- Traducción
5.- Procesamiento
postraduccional
5
Transcripción eucariotas
6
Concepto de GEN
q Definición clásica: Unidad elemental de la herencia.
q Definición molecular: región del genoma que contiene la información
necesaria para codificar y expresar un producto génico, bien sea ARN
maduro o una proteína funcional. Tiene 2 tipos de secuencias:
Los productos génicos no son necesariamente proteínas sino tb arn ribosómico o transferente.
1. Estructural: define la secuencia del producto génico. Con

secuencias codificantes (exones) y no codificantes (intrones).
Tanto intrones como exones se transcriben para dar lugar al
transcipto primario, que sufrirá una maduración
postranscripcional en la que se pierden los intrones.
Esa región hace referencia a la cadena que no se lee que se llama cadena codificante.
2. Reguladora de la expresión: sin función codificante. Está

situada cadena arriba (hacia el extremo 5’). Contiene regiones
promotoras encargadas de interaccionar con los factores proteicos
para regular positiva o negativamente el inicio de la transcripción.
está en la cadena que no se lee, cadena codificante
7
Concepto de GEN
8
Concepto de GEN
9
Concepto de GEN
En procariotas un RNA puede codificar para más de una proteína
En eucariotas un ARNm traduce solo una proteína. 10

Características generales de la transcripción
q Carácter multifocal: comienza en numerosos puntos de la molécula de

ADN (un origen para cada gen).
q No simultáneo (asimétrico): no se produce en las dos hebras al
mismo tiempo. Se da de forma independiente en cada gen (no a la
vez en todo el genoma).
q El sentido único de la síntesis es 5’-3’. La hebra molde del AND se lee
en dirección 3’-5’
q La información para la síntesis de los distintos ARN está repartida en
las 2 hebras del ADN.
q Sólamente se transcribe una pequeña parte del genoma (exones e
intrones).
q Control de la expresión génica: Células diferentes transcriben distintas
regiones atendiendo a las señales de diferenciación celular o
adaptación al medio.
Según el tipo de célula, no sintetizará igual la del ojo que la del páncreas.
11
Transcripción
El trozo que se copia es el antisentido y el que no se copia es el consentido o codificante.
12
Transcripción
En fuxia la que se lee y en azul la que se fabrica.
13
14
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El lugar +1 es el primero que se transcribe, refiriéndose a la cadena con sentido.
16
17
Enzimología de la transcripción
q Sustratos: Se usan como sustratos ribonucleótidos trifosfato: ATP,

GTP, CTP y UTP.
q Cofactores: Es necesaria la presencia de un ión metálico divalente
como cofactor: Mg2+ in vivo y Mn2+ o Mg2+ in vitro.
q Molde: una de las hebras del ADN.
q Cebador: Es autoniniciadora, no necesita la presencia de un cebador.
q ARN polimerasa: cataliza la síntesis de ARN.
18
El extremo 3 provoca
Con ribosa un ataque nucleofílico
al -oh alfa
3’
3’ 3’
5’ 5’
19
Reacción enzimática:
Ataque nucleófilo del 3’OH
de la cadena en formación
al P (α) del NTP entrante.
Se forma un enlace
fosfodiéster y se libera
pirofosfato (PPi). La
hidrólisis del PPi para dar
pirofosfatasa 2Pi asegura la energía
para el proceso.
2 Pi
20
ARN polimerasa
INHIBIDOR
PRODUCTO
RNA pol LOCALIZACIÓN
En procariotas y órganos
subcelulares
(mitocondrias y rRNA
I -
cloroplastos de (18S; 5,8 y 28S)
NUCLEOLO
eucariotas) se utiliza una

sola RNApol para NUCLEOPLASMA
amanitina
II mRNA
sintetizar los tres tipos
snRNA ++
de RNA celular.
En eucariotas existen 3 amanitina
III tRNA
RNAs polimerasas NUCLEOPASMA
+
distintas (I; II rRNA 5S
(mayoritaria); III) tRNA, rRNA rifampicina

Org y mRNA de
MITOCONDRIAS Y
mitocondria CLOROPLASTOS +
y cloroplasto
21
ARN polimerasa procariotas
Las bacterias tienen una única RNA polimerasa

-Estructura: 5 Subunidades
β(156 kDa)
β’ (151 kDa)
α (dos subunidades idénticas) (37 kDa)
σ 70 (70 kDa)
-Nomenclatura de la RNA pol:
•(β ,β’y 2α): Núcleo de la enzima
•(σ, β ,β’y 2α): Holoenzima
-Funciones:
σ Interacciona con secuencias del promotor para determinar el sitio de inicio
de la transcripción
β y β’ : Subunidades catalíticas
α : Regula la frecuencia de iniciación
Cantidad y actividad celular: Aproximadamente 3.000 moléculas por célula, 1.500

transcribiendo, las otras 1.500 asociadas débilmente al DNA, moviéndose al azar hasta
encontrar una secuencia promotora a la que el facto sigma se pueda unir para empezar
la transcripción. 22
ARN polimerasa eucariotas
• Dos subunidades similares a α de E. coli:
• Dos subunidades grandes similares a β
y β’ de E. Coli (1 y 2). La 1 de la RNApolII
contiene en el extremo C-terminal un
dominio (CTD) esencial para la
transcripción, que sobresale de la
proteína. Consiste en repeticiones de 7 aa
(Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser). Está
próximo al pto de salida del ARN naciente.
Este dominio experimenta fosforilaciones
reversibles en los residuos 2 y 5 de Ser,
adquiriendo carga negativa, lo que lo
relaciona con la transición de la iniciación
a la elengación.
• 4 subunidades comunes entre I, II y III
pero sin homologías en E. coli.
• Subunidades adicionales distintas entre
I, II y III.
Cuando se fosforila la cola la unión es más suave y se puede elongar.

23
ARN polimerasas
24
Etapas de la transcripción
• Unidad de transcripción:
secuencia del ADN que se va a
transcribir más 2 secuencias
consenso que la flanquean:
promotor y terminador.
• Operón: unidad de transcripción
en procariotas.
• Etapas de la trasncripción:
Iniciación, elongación y
terminación
• Burbuja de transcripción:
separación de las hebras del DNA
cerca de la región promotora. Se
desplaza en la elongación.
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Iniciación de la transcripción en procariotas
•1.- Unión del las subunidades

de la RNA polimerasa al Es necesaria la unión de los factores de
promotor: Formación del transcripción (TF) que reconocerán a la
complejo cerrado. Reversible secuencia TATA
• 2.- Desapareamiento parcial de
la doble hélice (actividad
helicasa)(aprox 12 bases):
Complejo abierto. Irreversible
σ70 (factor de iniciación)
reconoce las secuencias
características del promotor y se
une a ellas
• 3.- Inicio de la síntesis de RNA:
Complejo ternario RNA-DNA-
RNAPol
•4.- Tras la transcripción de las
10 primeras bases se suelta la
subunidad sigma. Continúa el
núcleo de la enzima en la fase de
elongación.
El factor sigma sirve para ayudar a 26
reconocer a la ARN polimerasa al promotor. Dra. Estrella Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869 - enunez@pdi.ucam.edu
Estructura del promotor en procariotas
Estamos hablando de la hebra con sentido:

• En los promotores bacterianos hay cuatro secuencias conservadas:
El sitio de iniciación (+1) (purina)
Ahí es donde se va a abrir la
La secuencia -10 (caja TATA o caja Pribnow) doble cadena ya que es más
La secuencia -35 (reconocimiento) fácil al tener uniones dobles
La distancia entre las secuencias -10 y -35. la adenina y la timina.
1º paso es la unión débil de la ARN polimerasa al ADN desplazándose hasta encontrar el promotor
2º paso, detección de la región -35 y formar complejo promotor cerrado
3º paso, encuentra región -10, desenrrolla ADN (TATA box), separa 17 pb, forma complejo promotor 27
abierto Dra. Estrella Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869 - enunez@pdi.ucam.edu
4º paso se empieza a leer en el sitio +1 y cuando se han copiado 10 nucleótidos se separa el factor sigma
Estructura del promotor en procariotas
28
Transcripción en
procariotas
29
Iniciación de la transcripción en eucariotas
Transcripción por la RNA polimerasa II
Factores generales de la transcripción: FTII
Proteínas que se requieren para la transcripción de la
mayoría de los genes transcritos por la RNA polimerasa II
Complejo de iniciación: Factores generales + RNA polimerasa II

con su dominio CTD no fosforilado.
30
Iniciación de la transcripción en eucariotas
Factores generales de
transcripción = (TFII)
INICIACIÓN:
- Los TFII (D,A,B,F,E,H) junto
con la RNA pol se unen a la
región promotora para formar
el complejo de preiniciación
(complejo cerrado)
- Desnaturalización del
promotor, requiere ATP
(complejo abierto)
- Fosforilación del dominio
CTD y liberación de los
factores de inicio, entrada de
los factores de elongación
Pierde afinidad por los factores de inicio

y gana por los factores de elongación. 31
Factores de transcripción en eucariotas
TFIID: se une al DNA por
reconocimiento de la TATA box por
medio de la TBP
TFIIB y TFIIA :Se incorporan una vez
asociado el TFIID y su función es
determinar la distancia y orientación en la
cual la RNA pol-II se posicionará en el
“core” del promotor.
TFIIF: se une a la RNA pol-II y
desestabiliza interacciones no especificas
con el DNA
TFIIE: estabiliza la burbuja de
replicación, que es necesario para la
posterior incorporación de TFIIH, y regula
su actividad.
TFIIH: tiene actividad helicasa y quinasa.
Fosforila el CTD de la RNApol II,
permitiendo la elongación.
32
Estructura de los promotores eucariotas
El promotor central o basal de la RNA polII tiene secuencias

consenso reconocidas por los factores de iniciación:
- Inr, que contiene el punto de inicio
- Caja TATA
Hay regiones corriente arriba: caja CAAT, cajas GC y el octamero. Sirven
para aumentar la eficacia de la transcripción, constituyen el promotor
proximal. ( antes del promotor central)
Puede haber regiones distantes que sirven para unir los activadores y/o
los represores: promotor distal
33
Transición de iniciación a elongación
• En eucariotas viene marcada por la fosforilación del dominio CTD de la

ARN polimerasa.
• La forma fosforilada es la que participa en la fase de elongación.
• La fosforilación la lleva a cabo el factor de transcripción TFIIH y el
factor de elongación P-TEFb.
• Con la fosforilación la ARN polimerasa se desprende de la mayoría de
los TF (liberación del promotor) y comienza a desplazarse a lo largo
del ADN.
34
Elongación de la transcripción
La elongación se inicia al fosforilarse el dominio CTD. Requiere de la presencia

de factores de elongación (TFIIS, estimula el ritmo de la elongación)
35
• La ARN polimerasa continúa alargando la cadena de ARN desplazándose junto

con la burbuja de transcripción (leyendo en dirección 3’-5’).
• Complejo de elongación: ADN abierto, ARN polimerasa y ARN naciente.
• Delante de la polimerasa se separan las hebras de ADN y el superenrollamiento
producido es compensado por la toppoisomerasa.
• La polimerasa alarga el ARN naciente añadiendo nucleótidos en su extremo 3’.
• El último tramo permanece dentro de la burbuja formando transitoriamente un
híbrido ADN:ARN.
• Detrás de la polimerasa el ARN en formación se va separando de la hebra molde
de ADN, saliendo de la burbuja y quedando como ARN monocatenario.
• El ADN vuelve a emparejarse y vuelve a enrollarse el ADN con la ayuda de las
topoisomerasas.
36
• La ARN polimerasa posee una procesividad muy elevada: sintetiza una cadena
de ARN completa sin separarse del ADN molde.
• Tasa de error: 1 cada 10.000 (1000 veces superior a la replicación).
• La ARN polimerasa posee capacidad de corrección de pruebas.
• En la elongación participan hasta 16 proteínas llamadas factores de elongación.
Varios de ellos se unen a la cola CTD de la ARN polimerasa cuando está
fosforilada.
• Acción de los factores de elongación:
1. Estimulación de la actividad enzimática de la polimerasa ( ELL, CSB y SIII).
2. Mantenimiento del estado fosforilado del CTD (TFIIH (iniciación), P-TEFb),
si está desfosforilado se inhibe la elongación.
3. Regulación de la procesividad de la ARN polimerasa (TFIIS, DSIF).
No es tan grave como en la replicación ya que solo codifica una

proteína mal, la próxima se sintetizará de forma adecuada.
37
• La eficacia de la elongación depende de un equilibrio entre dos acciones:
estimulación y freno.
• DSIF es la proteína principal en la regulación de la procesividad de ARNpoli.
• Es un heterodímero formado por hSPT4 y hSPT5.
• Cuando se une a la proteína NELF (negative elongation factor) frena la
elongación.
• Cuando DSIF es fosforilado en hSPT5, se separa de NELF y activa la elongación.
• La principal quinasa responsable de la fosforilación de hSPT5 es P-TEFb (la
misma que fosforila el dominio CTD de la ARNpoli.
38
• La presencia de los factores de elongación facilita el reclutamiento de proteínas

necesarias para el proceso de splicing (maduración potranscripcional).
39
Terminación de la transcripción
• Es necesaria la presencia de señales específicas para que se produzca.
• Esta etapa está relacionada con las señales que marcan la poliadenilación del
extremo 3’ del ARNm.
• Como resultado se separan los componentes del complejo de transcripción, y en
el caso de la ARN polimerasa II la desfosforilación de la cola CTD, para poder
ensamblarse a un nuevo complejo de iniciación y comenzar otro ciclo.
• El extremo 3’ del ARN funcional no es el punto donde la polimerasa deja de
elongar ya que durante la maduración postranscripcional se corta la molécula
recién transcrita.
Siempre se copia un fragmento más que después se

eliminará en el proceso de maduración ( son nucleótidos)
40
Terminación de la transcripción en procariotas
• Puede darse de 2 maneras:

1. Independiente del factor proteico ρ (rho): terminación intrínseca.
2. Dependiente del factor ρ. proteína hexamérica
1. Independiente del factor proteico ρ (rho):

Se encuentra una secuencia palindrómicarica en C-G que precede a una secuencia rica de 6-7
residuos de U en la cadena de ARN.
Esta secuencia palindrómica se pliega para formar una horquilla que es fundamental para la
terminación.
El mantenimiento de la estructura en horquilla después de la terminación estabiliza al ARNm
procariótico, protegiéndolo de la actividad 3’ exonucleotídica.
41
Terminación de la transcripción procariotas
2. Dependiente del factor proteico ρ (rho):

El factor ρ es una proteína hexamérica con actividad
ATPasa intrínseca dependiente de ARN.
Las secuencias de los sitios de terminación
dependiente de ρ contienen residuos de C
distribuidos regularmente en el transcripto.
El ARN naciente se enrosca en el factor ρ y la hidrólisis
del ATP proporciona la energía necesaria para que
el transcripto se disocie del molde.
Reconoce regiones
del adn ricas en
citosina pero no se
sabe bien porque se
une en ese momento.
42
Terminación de la transcripción en eucariotas
• En la terminación intervienen dos mecanismos:

ligada a la
1. Detención o pausa de la ARN polimerasa. desfosforilación de la
cola CTD.
2. Desestabilizaión del híbrido ARN:ADN.
• La influencia de estos dos mecanismos es distinta para
cada una de las 3 ARN polimerasas eucarióticas.
• Las 3 tienen en común la ausencia de secuencias
palindrómicas en el ARN que participen en la terminación
de la transcripción.
Secuencias palindrómicas en procariotas.
43
Terminación de la transcripción en eucariotas
44
Transcripción del genoma mitocondrial
ARN polimerasa ORG.
• 37 genes
• Lo transcribe una sola polimerasa.
• Para la iniciación es necesaria la
presencia de un factor de
transcripción (mtTFA).
• Se transcribe a partir de 3 lugares de
iniciación, produciéndose 3
transcriptos primarios diferentes:
–2 hebra pesada (H1 y H2).
–1 hebra ligera (L1).
• Los 3 promotores están en el bucle D.
• Los 3 transcriptos primarios sufren
una maduración para dar lugar a
varios ARNr, ARNt y ARNm maduros.
45
Inhibidores de la transcripción
-Actinomicina D: inhibe
indirectamente la elongación de
las cadenas de RNApol de
bacterias y de eucariotas. Se
intercala en el DNA entre los
pares G=C sucesivos,
deformando el DNA, impidiendo
el paso de la polimerasa. Inhibe
también la replicación.
- Rifampicina: inhibe el inicio de
la transcripción en procariotas
por bloqueo de la subunidad β.CATALÍTICA
No tiene efecto sobre las
polimerasas nucleares
eucarióticas (sí la mitocondrial).
antibiótico 46
Inhibidores de la transcripción
-α-amanitina: inhibidor
específico de la elongación de la
transcripción en eucariotas pero
no en procariotas.
Es el mecanismo de defensa de
la seta Amanita phalloides para
evitar su ingestión.
-Ácido nalidíxico: inhibidor
indirecto que actúa
impidiendo la acción de la
girasa (topoisomerasa
procariotas)
47
Regulación de la expresión génica
§ Todas las células de nuestro cuerpo tienen el mismo genoma (20.000 – 25.000 genes)
pero lo expresan de diferente manera.
§ Una célula humana solo expresa 10-20% de sus genes.
§ La expresión de los genes puede regularse en distintos puntos del proceso, y sobre
ella influyen factores como: necesidades metabólicas, estado fisiológico de la célula,
agentes externos, etc.
§ Punto de vista patológico: la alteración de cualquiera de los pasos implicados en el
proceso puede causar enfermedades.
• La diferenciación celular es el
resultado de la expresión diferencial
de genes bajo el control de
reguladores maestros (RM).
• La clave por la que se generan
distintos tipos celulares reside en que
distintas células contienen diferentes
proteínas reguladoras específicas.
48
Control pretranscripcional
• La transcripción no puede tener lugar en estados de condensación superiores a la
fibra de 10 nm (cadena de nucleosomas).
• El acceso a la información genética del ADN para llevar a cabo la transcripción es
una combinación de 3 mecanismos:
1. Posición precisa de nucleosomas: promotores en regiones
internucleosómicas.
2. Retirada de los nucleosomas: liberación de las histonas o desplazamiento de
la posición de los nucleosomas para dejar accesible el ADN (gasto ATP).
3. Avance de la polimerasa en presencia de los nucleosomas: se desensamblan
parcial y reversiblemente al paso de la polimerasa.
• En los procesos 2 y 3: modificación covalente de las histonas (epigenética).
poniéndoles un metil pierden afinidad
• Control de la transcripción con 2 componentes: por el ADN, quitándoselo la ganan.
1. Regulación genética: modificaciones que afectan a la secuencia de bases
(control de la transcripción).
2. Regulación epigenética: modificaciones que no afectan a la seucencia del
ADN y son heredables. metilaciones, que modifican la expresión ( se metilan
histonas, nucleótidos o actúa el factor promotor)
49
heredables porque son provocadas por proteínas (metilasa) que ya Temaestán codificadas
11 Transcripción, por
Biología Molecular
el ADN, que se trasmite a las descendencia
Epigenética
• Estudio del conjunto de cambios en el patrón de expresión génica que

no implican alteración de la secuencia de bases del ADN y que son
heredables.
• Bajo este concepto se incluyen:
– Metilaciones del ADN en residuos de citidina: DNA metilasas
metilan secuencias dinucleotídicas CG. Pueden ser eliminadas por
la desmetilasa. Los genes que no se expresan están metilados
(ZDNA). Se adornan las bases que ya están puestas.
– Modificaciones covalentes reversibles de histonas: se suelen
modificar las colas amino-terminales de las histonas H3 y H4, que
sobresalen de la estructura central del nucleosoma. Histona
aceltiltransferasas (genes activos histonas acetiladas) e histona
desacetilasas. Histona metiltransferasas e histona desmetilasa.
Fosforilación de residuos de serina (marcas que reconocen otras
proteínas).
– Remodelación de los nucleosomas.
50
Regulación en procariotas: modelo del operón Son los que se transcriben
siempre porque dan proteínas
• Dos tipos de genes (los dos están regulados): imprescindibles para la vida
1. Genes constitutivos: Se expresan siempre. Las enzimas que codifican
son necesarias para la actividad de la célula.
2. Genes adaptativos: Se expresan solo en determinadas circunstancias
(modelo operón):
• Sistemas inducibles: El sustrato de la enzima provoca su síntesis. El
compuesto se denomina inductor.
• Sistemas represibles: El producto final de la reacción que cataliza la
enzima impide la expresión de la misma. El compuesto se llama
correpresor.
Control positivo: El producto del gen regulador activa la expresión de los
genes. Actúa como activador. a través de una proteína activa la
transcripción de lo que viene detrás.
Control negativo: El producto del gen regulador inhibe la expresión de los
genes. Actúa como represor.
OPERÓN: grupo de genes estructurales cuya expresión está regulada por los
mismos elementos de control (promotor y operador) y genes reguladores
51
Regulación en procariotas: modelo del operón
Principales elementos que constituyen un operón:
Los genes estructurales: Genes cuya expresión está regulada. Los operones
bacterianos suelen contener varios genes estructurales pero hay algunos que tienen un
solo gen estructural. Los operones eucarióticos suelen contener un sólo gen estructural.
El promotor (P): Elemento de control. Es una región del ADN con una secuencia
reconocida por la ARN polimerasa para comenzar la transcripción. Se encuentra
inmediatamente antes de los genes estructurales. Se le designa por la letra P.
El operador (O): Elemento de control. Región del ADN con una secuencia reconocida
por la proteína reguladora. Se sitúa entre la región promotora y los genes estructurales.
Abreviadamente se le designa por la letra O.
El gen regulador (i): secuencia de ADN que codifica para la proteína reguladora que
reconoce la secuencia de la región del operador. Se sitúa cerca de los genes estructurales
del operón pero no inmediatamente al lado. Se le denomina gen i.
Proteína reguladora: proteína codificada por el gen regulador. Puede estar activa o
inactiva. Se une a la región del operador.
Inductor: compuesto cuya presencia induce la expresión de los genes.
53
Operador: reconoce la proteína reguladora. Tema 11 Transcripción, Biología Molecular
el gen regulador puede estar separado
54
55
El gen regulador codifica una proteina reguladora. En una regulacion negativa la proteina reguladora es un represor
y se une al operador impiediendo que la polimerasa lea los genes estructurales. Si hay inductor se une a la proteína
represora y deja de reconocer al operador teniendo la polimerasa la capacidad de leer los genes estructurales.
REGULACIÓN NEGATIVA
En ausencia del inductor los genes están reprimidos
Proteína represora codificada por gen regulador, se une al operador, sin inductor, y
reprime genes impidiendo que la polimerasa lea la secuencia de genes estructurales
El inductor cambia la conformación del represor, y ya no se puede unir al operador,

pudiendo la polimerasa leer los genes estructurales. 56
En ausencia del inductor los genes están reprimidos
57
En presencia del inductor los genes se transcriben
58
Con inductor la proteína represora se sintetiza igual pero la Tema 11 Transcripción, Biología Molecular
Dra. Estrella Núñez Delicado
lactosa el inductor se une y permite la unión de la polimerasa - Tlf: (+34) 968 278869 - enunez@pdi.ucam.edu
• Presencia de
glucosa y lactosa:
transcripción basal
• Presencia de
glucosa y ausencia
de lactosa: no hay
transcripción.
• Ausencia de glucosa
y presencia de
lactosa: transcripción
activada
59
REGULACIÓN POSITIVA
Baja [glucosa],
alta [AMPc]
En ausencia de lactosa, no hay Si Cap está unida al AMPc, se une al AND, provoca una
producción de enzima Lac (Lac torsión que favorece la lectura de la ARN polimerasa
inhibidor está unido al operador).
Cuando la lactosa es la fuente

preferida de carbono (por
ejemplo, en ausencia de glucosa)
AMPc-CAP se unen al promotor
(en una secuencia palindrómica) y
la producción de la enzima Lac se
maximiza.
En el control positivo existe una proteína que estimula la transcripción de los genes 60
estructurales. Hay una proteína que cuando se une al ADN hace que Tema se puedan leer
11 Transcripción, losMolecular
Biología genes
estructurales.
Hay un sitio de unión en el adn al que se puede unir la proteina cap cúando esté unido al AMPc.
Cuándo el AMP-CAP se une al ADN hace que la polimerasa lea mejor los genes estructurales.
La proteína cap solo se va unir al ADN para favorecer la expresión de los genes estructurales si
está unida a AMPc ( y esto ocurre cuando los niveles de glucosa son bajos).
En el control positivo existe una proteína que estimula la transcripción de los genes
estructurales. Hay una enzima que cuándo se une al ADN hace que se puedan leer los genes
estructurales.
La expresión de los genes estructurales del operón de la lactosa está regulada por dos tipos de
control: por control negativo ( con una prot represora) y por control positivo por la proteína cap
unida al AMPc. Por lo tanto la expresión de los genes estructurales será resultado del equilibrio
entre los dos tipos de control.
Cap solo se une al ADN para favorecer la expresión de genes estructurales si está unida a AMPc, esto ocurre cuando los niveles de
glucosa son bajos.
61
La expresión de los genes estructurales del operón de la lactosa está
Dra.regulada por Delicado
Estrella Núñez dos tipos
- Tlf:de control:
(+34) negativo
968 278869 (prot represora)
- enunez@pdi.ucam.edu y
positivo (Cap), por lo tanto su expresión será resultado del equilibrio entre los dos tipos de control
• Lactosa (inductor) se une

a la proteína represora y
se activan los genes
inducibles que codifican
para su catabolismo.
• Glucosa reprime el
operón lac. Su presencia
hace disminuir los niveles
de AMPc, y al no unirse a
CAP( proteína catabólica
activadora) no se activa
la transcripción. CAP-
AMPc (complejo que
facilita la interacción del
promotor a la RNA
polimerasa y la
trascripción).
62
Sin glucosa ni lactosa, el represor está unido, el AMPc está alto, pero cuando se encuentra
el represor se para la lectura.
Con glucosa y sin lactosa, AMPc bajo, no se une Cap, se une el represor, y no hay lectura.
Si no hay glucosa ni lactosa el represor está unido y la polimerasa no puede leer los genes
estructurales, pero al no haber glucosa el AMPc está alto y la proteína cap se une
favoreciendo a la polimerasa, pero no se produce la transcripción porque se encuentra con
el represor.
La proteína Cap es un dímero, y unida al AMPc se une al ADN provocando una torsión de
90º en el mismo que favorece la unión de la polimerasa y por tanto la transcripción de los
genes estructurales. Se une en una secuencia palindrómica.
63
Regulación de la expresión en eucariotas
Diferencias con procariotas:
• Los nucleosomas afectan el acceso de los genes a la

maquinaria de la transcripción.
• El número de sitios reguladores y el número de proteínas
es muy elevado lo que supone una integración de
señales.
• El estado basal de transcripción es restrictivo. La RNA
polimerasa es inactiva en ausencia de factores de
transcripción, en cambio en procariotas hay transcripción
basal en ausencia de activadores y represores.
64
• Nivel pretranscripcional y
transcripcional.
• La decisión de qué genes se
expresan se realiza en la
transcripción.
• El inicio de la transcripción
es la etapa mas regulada.
65
• En eucariotas el número de unidades de transcripción es mucho mayor.

• Cada una de ellas está controlada por varios promotores.
• Promotor: Región del ADN que regula el inicio de la transcripción de un
gen. Región reguladora del gen también llamada “factor cis” por esto es ADN
encontrarse en la misma molécula de ADN que regula.
• En la regulación también están implicadas las proteínas que reconocen
al promotor, llamadas factores de inicio de la transcripción (TF).
• Los TF se denominan “factores trans” pues sus regiones están alejadas
de los genes que regulan. Su capacidad de unión al promotor que
reconocen es debido a que poseen motivos estructurales como: dedos
de zinc, cremalleras de leucina, etc. Se unene al ADN por el surco mayor
El factor cis o promotor es un trozo de Adn ( no es proteico). Los factores trans
son los que son de naturaleza proteica.
Tenemos en eucariotas 3 tipos de secuencias promotoras: las basales, las proximales

y las distales.
66
En eucariotas hay 3 tipos de secuencias promotoras: basales, proximales, y distales.
Secuencias reguladoras en eucariotas
• Secuencias promotoras basales: Definen el punto de inicio de la transcripción y

son imprescindibles para que esta comience. Situadas en posición adyacente al
origen de replicación (Caja TATA o Caja de Hogness, -30 a -23). Ellas solas no
son suficientes para provocar el inicio de la transcripción.
Esto también es ADN
La polimerasa va a reconocer secuencias promotoras basales que están cerca del sitio
+1 pero que por si solas no son capaces de inducir el inicio de la transcripción. 67
• Secuencias promotoras proximales: Se sitúa cercana al promotor basal.

Determinan la frecuencia con que se produce el inicio de la transcripción. Sobre
ellas se unen diferentes TF que favorecen la interacción de la ARNpol-II con el
ADN en el punto de inicio y su actividad enzimática. Sus secuencias son más
variadas que las basales pero las 2 más características son: caja CAAT (-60 y -
80) y caja GC que aparece con varias copias y a ambos lados de la caja CAAT.
68
• Secuencias promotoras distales: En los genes inducibles la regulación es más

compleja y en ella intervienen regiones situadas a gran distancia del punto de
inicio. Flexibilidad de la cadena de ADN para acercarse estas regiones.
Están lejos del punto de inicio, están solo en los genes inducibles. El resto
69
( las basales y proximales ) en genes constitutivos. Tema 11 Transcripción, Biología Molecular
-1000 -200 -50 +1 +50
Promotor Promotor Promotor gen

Distal o de proximal Basal
respuesta
Potenciadores
o
Silenciadores
1.-Ensamblaje de la RNApol
sus mediadores
Cada uno de estos Potenciadores:
elementos permite la Aumentan
interacción del ADN 2.-Atracción/repulsión,
Unión, Modificación
con proteínas que
(activación/desactivación) y
modifican o regulan la
actividad del Silnciadores: Posicionamiento en el
maquinaria Disminuyen promotor
transcripcional
70
Pero esto son proteínas

Factores de transcripción
basales: proteínas que actúan
sobre todos los genes
(constitutivos e inducibles).
Reconocen los elementos
basales del promotor.
Factores de transcripción proximales: proteínas que reconocen elementos del

promotor proximal, aumentando la eficacia de formación del complejo de iniciación
y la actividad de la polimerasa (sobre genes constitutivos e inducibles).
Factores de transcripción inducibles: Proteínas que reconocen elementos distales
del promotor. Actúan sobre genes inducibles. Regulan tanto de forma positiva como
negativa. Ejemplo: receptores nucleares de hormonas esteroideas o tiroideas.
Hay señales hidrofóbicas que pueden llegar directamente al núcleo e 71
interaccionan con las secuencias basales,
Dra. proximales e inducibles.
Estrella Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869 - enunez@pdi.ucam.edu
La unión de esta proteína se debe a la torsión del ADN.
Algunas proteínas no
interaccionan
directamente con la
polimerasa, sino que
ejercen de
intermediarios con
otros TF.
Polimerasa
72
73
Maduración postranscripcional
• Las diferencias entre procariotas y eucariotas se centran en la

maduración del ARNm.
• ARNr y ARNt sufren una maduración similar en ambos tipos de
organismos. En procariotas tienen bases nitrogenadas modificadas.
• El ARNm de procariotas es el único ARN que no necesita maduración. El
transcripto primario que se produce ya es funcional. Todos los genes
tienen un exón único.
• El conjunto de transcriptos primarios del ARNm se les denomina hnRNA
(ARN heterogéneo nuclear).
• En eucariotas las regiones que se eliminan de los transcriptos primarios
son los intrones.
• Los intrones son característicos de los genes de eucaritoas que
codifican proteínas (ARNm), pero también están presentes en algunos
genes de ARNr y ARNt. Las histonas son un ejemplo de genes que no
poseen intrones.
74
Maduración postranscripcional
Los transcriptos primarios tienen la misma secuencia de la hebra

codificante. Existen tres transcritos primarios en eucariotas (m, r y t).
Antes de su utilización deben madurar: procesamiento postranscripcional.
-Ocurre en el núcleo. Los RNAs una vez maduros a través de los poros de
la membrana nuclear pasan al citosol.
- Las reacciones generales consisten en :
1.- Modificación de bases.
2.- Adición de nucleótidos en los extremos.
3.- Escisión de nucleótidos en los extremos.
4.- División de la molécula en varios fragmentos
5.- Eliminación de intrones.
- La maduración proporciona al RNA una mayor estabilidad frente a la
degradación por nucleasas.
75
Procesamiento del ARNm eucariota
1.- Al RNA recién sintetizado se le añade una “caperuza” (CAP) (extremo 5’).
2.- Al RNA recién sintetizado se le han de eliminar intrones y empalmar los

exones: “splicing” o ajuste. El proceso de “splicing” se realiza mediante dos
reacciones de trans-esterificación sucesivas, catalizadas por una maquinaria
molecular presente en el esplicesoma (proteínas y RNA responsable del corte
y empalme). Algunos RNAs no se procesan siempre de la misma manera:
“splicing alternativo”.
3.- La transcripción del mRNA termina con la adición de una cola de Poli A
(hasta 250 A) en el extremo 3’.
La maquinaria molecular implicada en el procesamiento del mRNA se asocia

a la cola de CTD y el proceso transcurre a la vez que la elongación.
76
77
MODIFICACIÓN DEL EXTREMO 5’: comienza cuando se han sintetizado entre 20-40 nt
78
MODIFICACIÓN DEL EXTREMO 5’: CAP
desfosforilación - Tres reacciones enzimáticas (RNA

trifosfatasa; Guanilil transferasa y;
Metiltransferasa).
La maquinaria molecular implicada
se recluta en la cola de CTD
guanilación
fosforilada.
- Tras la formación de CAP la

defosforilación de la Ser 5 en el
dominio CTD conduce a la
disociación de estas enzimas y se
pasa a la fase de elongación.
79
CAP0 ESTRUCTURA DE CAP
Se añade Guanina al extremo 5’ mediante un
enlace fosfodiester 5’-5’.
La metilación para formar CAP ocurre en la

posición 7 de la guanina (CAP 0).
Otros organismos metilan además posiciones

2’ de la ribosas del segundo y tercer
nucleótido (CAP 1 y CAP 2)
FUNCIÓN DEL CAP

CAP1
• Ayuda a distinguir mRNAs de otros RNAs
• Sirve como punto de unión del ARNm a los
ribosomas para iniciar la síntesis proteica.
CAP2 • Evita la degradación del extremo 5’ por las
exonucleasas
80
Modificación del extremo 3’: cola de poliA
ØVinculada a la terminación
ØDirigido por una secuencia señal en el
RNA
Ø La secuencia señal une un complejo de
proteínas que facilitan la escisión del RNA
y la poliadenilación (el ARNm es más
corto que su transcripto primario).
ØParticipa una poli (A) polimerasa (solo
acepta ATP como sustrato), añade A hasta
un número variable que puede alcanzar
250 A.
ØParticipa en el transporte del ARNm al
citoplasma.
ØPurificación ARNm
81
Modificación del extremo 3’: cola de poliA
Se elimina
82
• Eliminación de intrones y unión de exones.
Viene determinada por 3 secuencias
“Splicing” o empalme cortas altamente conservadas:
q 2 que definen los extremos del intrón.
q 1 en el interior del intrón.
El corte de intrones y empalme de

exones está mediado por el
espliceosoma (proteínas y ARN).
El espliceosoma es necesario para
el reconocimiento de los puntos de
escisión como para la catálisis.
Reacción de transesterificación:
dos reacciones sucesivas para romper
el enlace fosfodiéster (extremo 5’ y 3’
del intrón) y formar otro nuevo.
83
Ejemplo de “splicing”: gen de ovoalbúmina
84
Maduración del pre-rRNA eucariota
85
Maduración del pre-tRNA eucariota
86
Maduración del pre-tRNA eucariota
Bases modificadas en el tRNA
87
Transporte del RNA al citoplasma
Se realiza una vez que el ARN

está maduro.
Requiere de la presencia de
proteínas (SR), presentes en el
espliceosoma ricas en serina y
arginina, que acompañan en su
paso por los poros nucleares
Es un transporte activo, la
energía se obtiene de la hidrólisis
de GTP.
Espliceosoma es la estructura que se genera para llevar
a cabo el splicing.
88
Estabilidad del ARN en el citosol
La vida media del RNA depende del grado de estructura 2ª y 3ª:
tRNA>rRNA>mRNA
ARNm
• El CAP y la cola de Poli A protegen a los
mRNAs eucarioticos de su degradación
• Vía dependiente de desadenilación: La
degradación comienza con la eliminación
de la cola de poli A: exonucleasas
• Tras la eliminación de la cola de poli A se
produce la eliminación del CAP
• Degradación 5’ 3’ por una exonucleasa
(XRN1). Degradación 3’ 5’ una vez
eliminada la cola de poli A
• No todos los mRNAs se degradan a la
misma velocidad
• Secuencias que aceleran la degradación:
AUUUUA en la región 3’-UTR
89

Medicina Tema 11 Transcripcion

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Tema 11. Transcripción. Estructura de los promotores.

Etapas de la transcripción. Regulación del proceso.

Dra. Estrella Núñez Delicado

1. Estructural: define la secuencia del producto génico. Con

2. Reguladora de la expresión: sin función codificante. Está

En eucariotas un ARNm traduce solo una proteína. 10

q Carácter multifocal: comienza en numerosos puntos de la molécula de

El lugar +1 es el primero que se transcribe, refiriéndose a la cadena con sentido.

q Sustratos: Se usan como sustratos ribonucleótidos trifosfato: ATP,

eucariotas) se utiliza una

(mayoritaria); III) tRNA, rRNA rifampicina

Las bacterias tienen una única RNA polimerasa

Cantidad y actividad celular: Aproximadamente 3.000 moléculas por célula, 1.500

Cuando se fosforila la cola la unión es más suave y se puede elongar.

•1.- Unión del las subunidades

Estamos hablando de la hebra con sentido:

Complejo de iniciación: Factores generales + RNA polimerasa II

Pierde afinidad por los factores de inicio

El promotor central o basal de la RNA polII tiene secuencias

• En eucariotas viene marcada por la fosforilación del dominio CTD de la

La elongación se inicia al fosforilarse el dominio CTD. Requiere de la presencia

• La ARN polimerasa continúa alargando la cadena de ARN desplazándose junto

No es tan grave como en la replicación ya que solo codifica una

• La presencia de los factores de elongación facilita el reclutamiento de proteínas

Siempre se copia un fragmento más que después se

• Puede darse de 2 maneras:

1. Independiente del factor proteico ρ (rho):

2. Dependiente del factor proteico ρ (rho):

• En la terminación intervienen dos mecanismos:

• Estudio del conjunto de cambios en el patrón de expresión génica que

Principales elementos que constituyen un operón:

el gen regulador puede estar separado

El inductor cambia la conformación del represor, y ya no se puede unir al operador,

Cuando la lactosa es la fuente

• Lactosa (inductor) se une

Diferencias con procariotas:

• Los nucleosomas afectan el acceso de los genes a la

• En eucariotas el número de unidades de transcripción es mucho mayor.

Tenemos en eucariotas 3 tipos de secuencias promotoras: las basales, las proximales

• Secuencias promotoras basales: Definen el punto de inicio de la transcripción y

• Secuencias promotoras proximales: Se sitúa cercana al promotor basal.

• Secuencias promotoras distales: En los genes inducibles la regulación es más

-1000 -200 -50 +1 +50

Promotor Promotor Promotor gen

Pero esto son proteínas

Factores de transcripción proximales: proteínas que reconocen elementos del

La unión de esta proteína se debe a la torsión del ADN.

• Las diferencias entre procariotas y eucariotas se centran en la

Los transcriptos primarios tienen la misma secuencia de la hebra

2.- Al RNA recién sintetizado se le han de eliminar intrones y empalmar los

La maquinaria molecular implicada en el procesamiento del mRNA se asocia

desfosforilación - Tres reacciones enzimáticas (RNA

- Tras la formación de CAP la

La metilación para formar CAP ocurre en la

Otros organismos metilan además posiciones

FUNCIÓN DEL CAP

Modificación del extremo 3’: cola de poliA

El corte de intrones y empalme de

Ejemplo de “splicing”: gen de ovoalbúmina

Bases modificadas en el tRNA

Se realiza una vez que el ARN

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