Medicina Tema 10 Replicacion

Tema 10.
Replicación
Biología Molecular
Dra. Estrella Núñez Delicado
Grado en Medicina
1
Dra. Estrella Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869
Tema 10: Replicación, Biología Molecular
Universidad Católica San Antonio
Dra. Estrella Núñez Delicado 968
de Murcia - Tlf: (+34) - Tlf:27 88 968
(+34) 00 info@ucam.edu - www.ucam.edu
278869 - enunez@pdi.ucam.edu
DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGÍA
1956 Crick y Gamow proponen el “Dogma Central de la Biología”
Postulan que la “información

genética” fluye de manera
unidireccional del DNA al RNA y de
éste a las proteínas.
La secuencia de DNA especifica la

secuencia de aminoácidos de las
proteínas
“Flujo de la información genética”

2
Dra. Estrella Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869 - enunez@pdi.ucam.edu
1970 Temin y Baltimore descubren y aislan la Transciptasa Inversa,

enzima que sintetiza DNA a partir de RNA.
Modificación del “dogma central de la biología”
La transcriptasa inversa:
• Enzima esencial en los retrovirus (genoma
de RNA)
• Utilizando como molde el RNA sintetiza el
DNA complementario (cDNA)
• Su descubrimiento modificó el “dogma
central de la biología” propuesto por Crick y
Gamow
3
1977 Sharp y Roberts descubren los intrones,

secuencias internas no codificantes de los genes eucarióticos
4
REPLICACIÓN
Se produce de forma coordinada con la división celular.

Duplicación del material geneético previo a la división y de forma
coordinada
El inicio de la replicación obliga a la célula a emprender una división.
Separando de forma simultánea a la replicación.
El final de la replicación es la señal para la división celular.
El proceso de replicación se lleva a cabo sin que se separe de forma

completa la cadena progenitora: la doble hélice de desenrolla
gradualmente.
5
REPLICACIÓN
Las propiedades fundamentales de la replicación del DNA y los

mecanismos de las enzimas involucradas en este proceso, son
básicamente iguales en todos los organismos.
La replicación del DNA es semiconservativa 1 cadena a cada C hija
La replicación del DNA es bidireccional
La replicación del DNA es origen monofocal en

procariotas y multifocal en eucariotas
( en procariotas solo un punto de origen de replicación. Eucariotas muchos)
La replicación del DNA es semidiscontinua
una hebra se copia de forma contínua y la otra discontínua
6
Carácter semiconservativo
Sencillo conceptualmente
Complejo su mecanismo Proceso Semiconservativo:
Las dos hebras del ADN
progenitor sirven de molde para
la síntesis de sus respectivas
hebras complementarias.
Cada molécula hija de ADN está
formada por una hebra
progenitora y otra hija, recién
sintetizada.
El mecanismo se repite en
sucesivas generaciones de
células.
7
Experimento de Meselson y Stahl (1958)
8
-1958:
Este experimento es importante por que fue la 1ª vez en que se usó
la técnica de sedimentación en gradiente de cloruro de cesio y que se
usaron isótopos de N15 en el ADN (habitual N14).
bacterias cultivadas con N15 => ADN conformado por N15
las alimentamos con N14
1ª generación => pico en entre N15 y N14

ADN híbrido
las C hijas tienen entonces ADN conformado por N15 y N14
2ª generación => 2 picos en N15 y N15,5

ADN conformado por una doble cadena N15 y una híbrida N15/N14
3ª generación => C híbridas y otras solo N15

Experimento de Meselson y Stahl (1958)
Si la replicación del DNA fuese conservativa no aparecerían moléculas de

DNA de densidad intermedia
9
Replicación bidireccional
La replicación del DNA es bidireccional: La síntesis de DNA se realiza

en ambas direcciones desde el punto donde se inicia la replicación
Burbuja de replicación Horquilla de

replicación
La síntesis comienza en puntos
concretos de la molécula:
1. Monofocal: procariotas
2. Multifocal: eucariotas
(centenares o miles de
orígenes de replicación en
cada cromosoma)
10
Replicación bidireccional
11
Replicación bidireccional En la burbuja de replicación tenemos
dos direcciones de avance marcadas
por la ADN polimerasa. Una hebra
que se sintetice de forma continua y
otra discontinua, sucede de esta
forma en los dos extremos.
12
Requerimientos para la
síntesis de ADN
Para fabricar una cadena de adn complementaria necesitamos:
Sustratos: Se utilizan los 4 desoxinucleótidos-trifosfato (dATP, dGTP,
dCTP y dTTP. De cada uno se incorpora solamente dNMP. Se une monofosfato y se
libera pirofosfato
Cofactores: Ión metálico divalente asociado a los dNTP y a la
polimerasa (Mn2+ y Mg2+ in vitro y Mg2+ in vivo).
Molde: Los nucleótidos se incorporan según el orden marcado

en la hebra molde.
Necita un extremo 3’ libre sino la polimerasa no sabe unir nucleótidos.
Cebador: Requiere un fragmento monocatenario iniciador que
aporte un extremo 3’-OH libre. Fragmento de ARN emparejado
con la hebra molde de ADN de forma complementaria y
antiparalela. La replicación no es autoiniciadora, sino que solo
elonga moléculas preexistentes.
13
Mecanismo de reacción
La polimerasa solamente fabrica cadenas de adn en
direccion 5’-3’. Por lo tanto, lee cadenas molde en dirección
3’-5’ ( los enlaces fosfodiéster).
pirofosfatasa
2 Pi
ADN polimerasa
Mecanismo : el extremo 3’ libre de la cadena de ADN en formación mediante su grupo hidroxilo provoca
un ataque nucleofílico sobre el enlace éster del extremo 5’ del dNTP que tiene que unirse a la cadena
liberando un pirofosfato, que por la acción de la pirofosfatasa se convierte en 2 fosfatos inorgánicos.
La polimerasa solo fabrica cadenas de ADN en dirección 5’ “Lehninger
-> 3’. PorPrincipios
lo tantodelee
Bioquímica",
cadenas4ª molde
ed. en
Nelson, D.L. y Cox, M.M. Omega. 2006
dirección 3’ -> 5’.
Más importante y necesita un extremo 3’ libre la cadena libre de ADN en formación porque mediante su grupo 14
hidroxilo provoca un ataque nucleofilico sobre el enlace éster del extremo 5’ de dNTP Temaque tiene que
10: Replicación, unirse
Biología a la
Molecular
cadena, liberando un pirofosfato que por la acción de la pirofosfatasa se convertirá en dos fosforos inorgánicos.
3’ 3’ 3’
5’
5’ 5’
Mecanismo universal: Todas las ADN polimerasas y ARN

polimerasas sintetizan exclusivamente en dirección 5’-3’.
15
16
Mecanismo autocorrector
Actividad autocorrectora de la DNA polimerasa (corrección de pruebas “proofreading”)
Un error a la hora de copiar ADN se traspasa a la descendencia, y por eso, tiene actividad autocorrectora.
Los centros activos

polimerasa y exonucleasa
son diferentes.
Antes de añadir un nuevo
nucleótido la DNA pol verifica si
el último añadido es correcto
Para eso tiene dos centros activos: uno

centro activo polimerasa centro activo exonucleasa donde copia o polimeriza y otro que corrige.
Bases no
complementarias
Si no es correcto, elimina el
núcleótido desapareado,
hidroliza el enlace fosfoéster que
acaba de formar y libera el
nucleótido.
Actividad 3’ exonucleasa
( el ultimo nucleótido que se coloca es en el extremo 3’)
17
Aunque la reacción de síntesis es universal son distintas las ADN
polimerasas que existen y tienen distintas funciones. ADN
polimerasa I de procariotas fue la 1ª que se descubrió en 1958.
Pero en procariotas hay hasta 5.
La ADN polimerasa III de procariotas lleva a cabo la mayor parte
de la replicación, la II no está clara su función (papel reparador), y
la I es la que se encarga de eliminar los fragmentos de Okazaki, ya
que es la única polimerasa que tiene actividad 5’ exonucleasa, y la
presenta en otro centro activo diferente (3 centros activos).
ADN polimerasa I de E.coli
Está formada por una sola cadena polipeptídica.
Actividad polimersa 5’-3’.
Actividad 3’ exonucleasa (3’-5’) (otro centro activo): hidroliza nucleótidos del

extremo 3’.
Actividad 5’ exonucleasa (5’-3’) (otro centro activo).La única polimerasa de

procariotas que posee esta actividad. Hidroliza nucleótidos del extremo 5’ (eliminación
del cebador de la hebra retardada).
18
ADN polimerasa I de E.coli
Algunas DNA polimerasas tienen también actividad exonucleasa 5’ 3’
(DNA pol I de E. Coli) Permite eliminar los cebadores
(mella de hebra simple)
La DNA pol I elimina el cebador de los fragmentos de

Okazaki y reemplaza el hueco por DNA
19
ADN polimerasas de procariotas
Para iniciar la elongación la primasa reconoce el cebador para que la polimerasa actúe
20
ADN polimerasas de eucariotas
• Distintas de las procariotas
• Se han descrito más de 5 distintas alfa, beta, gamma, delta, epsilon
• DNA -pol: reparación de daños y errores
• DNA -pol sintetiza el ADN mitocondrial y activ. 3’ exonucleasa
• Ninguna tiene actividqd 5’ exonucleasa. Eliminación cebadores 2 nucleasas
independientes
ninguna puede retirar los fragmentos de Okazaki Elongación de la hebra
Sintetiza ARN cebador Alta procesividad: abrazadera deslizante
Procesividad de las DNA Pol: Nº de nucleótidos adicionados antes de disociarse del molde
Es la responsable de la alta velocidad
21
En eucariotas hay 5 tipos: alfa, beta , ganma, delta y Dra. Estrella Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869 - enunez@pdi.ucam.edu
épsilon.
Delta y epsilon son las responsables de la mayor parte de la
elongación de las cadenas, cuando las enzimas
correspondientes eliminan los cebadores de la hebra
retardada RNasas, el hueco que queda es cubierto también
por delta y epsilon polimerasas.
La alfa polimerasa puede iniciar la elongación de la cadena.
Las delta y epsilon tienen alta procesividad, alta afinidad por

la cadena. Se unen a una proteína abrazadera deslizante.
En procariotas la primasa fabrica un cebador para que la polimerasa

pueda seguir uniendo nucleótidos, en eucariotas la primasa va a asociada
a la alfa-polimerasa (actividad primasa intrínseca).
Delta y épsilon tienen alta procesividad porque pasan más tiempo unidas
a la cadena lo que implica una mayor velocidad de síntesis, mientras que
la alfa solo se requiere en el inicio.
La abrazadera deslizante la necesita la delta polimerasa que es una
proteína que cogen a la enzima la enganchan y la deslizan a lo largo de la
hebra.
Procesividad ADN polimerasas
¿Por qué es tan alta la procesividad de algunas DNA Polimerasas?
Porque la DNA pol interacciona con una proteína, la abrazadera deslizante,

que la mantiene unida al DNA
abrazadera deslizante abrazadera deslizante
E. Coli eucariotas
Abrazadera deslizante β
β cargada en el DNA PCNA
22
Abrazadera deslizante
Abrazadera deslizante
(β): une la DNA pol al
DNA
Cargador de la
abrazadera (complejo γ)
de bacterias
Gastando ATP se coloca el complejo alrededor del la hebra de ADN

Gastando atp el cargador de la abrazadera deslizante la ayuda a 23
colocarse en su sitio y después una vez colocada estaDra.
se Estrella
va. Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869 - enunez@pdi.ucam.edu
Etapas en la replicación
El ADN se replica una vez por ciclo celular, durante la fase S.
Tres fases: iniciación, elongación y terminación.
Replicón: Unidad funcional de la replicación. Es la región del ADN que se replica

a partir de cada origen.
Cada replicón tiene un origen de replicación y dos horquillas.
Procariotas: todo el cromosoma es un solo replicón.

Eucariotas: numerosos replicones que se replican de forma simultánea.
Delante de la horquilla de replicación se produce:

Descondensación de los cromosomas En replicación los procesos de iniciación y
Disociación de los cromosomas terminación son fáciles ya que se necesita
copiar todo, pero en la transcripción solo hay
Separación de las histonas que copiar un trozo por eso sus señales de
iniciación y finalización deben ser mucho
Detrás de la horquilla deben: más específicos.
Reutilizarse las histonas para la reasociación de los nucleosomas
Volverse a condensar la cromatina.
Se necesitan más histonas de las que ya tenía ya que se forman dos cadenas y
24
anteriormente había una sola. Tema 10: Replicación, Biología Molecular
Iniciación de la replicación
En puntos definidos de la molécula de ADN: secuencias características.
Procariotas: origen de replicación único llamado oriC.
Eucariotas: numerosos orígenes de replicación.
Punto de inicio depende de 2 regiones en el ADN:
Replicador: zona que determina la apertura inicial de la doble hélice.
Contiene:
Zonas de doble hélice que se abren con facilidad (ricas en
pares AT). Porque sólo tiene dos puentes de H.
La unión de estas
proteínas Zonas que interaccionan específicamente con proteínas
reconocedoras se da iniciadoras, cuya unión provoca una flexión del ADN que
en el surco mayor, para genera una tensión superhelicoidal que unido a los pares AT
que sea posible la provoca la separación de las hebras.
posterior unión de
helicasas, ADN
En eucariotas hay proteínas iniciadoras que reconocen
polimerasas… secuencias palindrómicas que forman estructuras
cruciformes que facilitan la apertura de la hélice.
Origen: punto donde comienza la síntesis sobre el molde abierto.
Una vez abierta la hebra helicasa y polimerasa pueden asociarse y comenzar la síntesis
25
Elongación de la cadena
Encabezando la horquilla de replicación debe ir desenrollándose la
doble hélice (delante de la polimerasa).
Conforme se van sintetizando las nuevas hebras se debe ir recuperando
el enrollamiento mediante proteínas especializadas.
Replisoma: complejo multiproteico formado por proteínas
especializadas en desenrollar el ADN, las ADN polimerasas y el resto de
proteínas implicadas en la replicación, que viaja asociado a la horquilla.
Helicasas, ADN polimerasas y prot implicadas en la replicación.
Componentes proteicos del replisoma:

Helicasas.
Proteínas de unión al ADN de cadena única (SSB).
Topoisomerassa.
Primasa.
ADN polimerasa.
ADN ligasa.
26
Proteínas que actúan en la horquilla de replicación
Función E. Coli Eucariotas
Síntesis del cebador DnaG Primasa + DNA pol α
DNA helicasa DnaB Complejo Mcm (proteínas de

mantenimiento de cromosomas)
Large T-antigen en SV40
Proteínas de unión a hebra simple SSB RPA (proteína de replicación)
Polimerización Pol III Pol δ (ε)
Abrazadera deslizante Dímero β PCNA
Cargador de la abrazadera Complejo γ RFC (Replication Factor C)
Ligador flexible Proteína τ Proteína τ
Eliminación del cebador de RNA Pol I RNase H, FEN1 (Pol δ rellena el hueco)
Unión de los fragmentos de Okazaki DNA ligasa DNA ligasa
Topoisomerasas Topo I, Girasa Topo I y II
27
Holoenzima Pol III Tema 10: Replicación, Biología Molecular
Helicasas
se une a la hebra retardada 5’ -> 3’
Se unen al ADN una vez abierto en el
origen.
Actúan propagando la separación de las
dos hebras.
Requieren la hidrólisis simultánea de ATP.
Son hexámeros en forma de anillo que
rodean una de las hebras de ADN. (la que va en dirección 5’-3’)
El avance de las horquillas de replicación
está liderado por una helicasa y le siguen
el resto de componentes del replisoma.
La otra cadena es
la continua que va
de 3’ a 5’ ya que
en este sentido
puede actuar la
ADN polimerasa.
28
Proteínas ligantes de ADN
monocatenario (SSB)
Una vez separadas las hebras por la helicasa, las proteínas SSB (single
strans binding proteins) impiden el reemparejamiento de las hebras.
Proteínas SSB en procariotas.
Proteína de replicación A (RPA) en eucariotas.
29
Topoisomenrasas
Eliminan los superenrrollamientos que

Topoisomerasas tipo I aparecen delante de la orquilla.
Hidrolizan un enlace fosfodiéster en una hebra,

hacen pasar la otra hebra a través del corte y
vuelven a unir los extremos de la primera.
El número de enlace de la molécula de DNA

disminuye en una unidad.
Relajan el DNA
La enzima se une covalentemente a uno de los

extremos del corte, mediante un residuo de Tyr
de la enzima.
30
Topoisomenrasas
Topoisomerasas tipo I
La topoisomerasa para mantener
cortada la cadena se une por
una tirosina al enlace de cadena
5’ que acaba de cortar, para que
la otra hebra gire.
31
Topoisomenrasas
Topoisomerasas de tipo II
(DNA girasa en E. Coli)
Hidrolizan dos enlaces fosfodiéster de la doble hebra, hacen pasar la otra

doble hebra a través del corte resellando éste de nuevo.
Se hidroliza una molécula de ATP por cada corte de la cadena
El número de enlace de la molécula de DNA aumenta o disminuye en

dos unidades.
32
Primasa
Une los primeros nucleótidos de la nueva cadena en formación (ARN).
Es una ARN polimerasa dirigida por la hebra de ADN.
En procariotas es una proteína independiente que forma parte del
primosoma (complejo proteico asociado a la horquilla formado por
primasa y helicasa).
En eucariotas la actividad primasa reside en una de las subunidades de
la ADN polimerasa (distinta de la que posee el centro activo de la
actividad polimerasa). Esta proteína se llama ADN pol /prim.
procariotas
eucariotas
33
Asimetría en la replicación de las hebras
Las hebras son antiparalelas y la ADN polimerasa
actúa de forma continua en dirección 5’-3’.
Hebra que se expone en la dirección 3’-5’: Su complementaria se sintetiza

de forma continua en dirección 5’-3’ en la dirección del desplazamiento de
la horquilla y se denomina hebra adelantada.
Hebra que se expone en dirección 5’-3’: Su complementaria se sintetiza de

forma discontinua en dirección opuesta al avance de la horquilla,
desfasada respecto a la otra hebra y se denomina hebra retardada.
Síntesis de la hebra retardada de forma discontinua mediante los

fragmentos de Okazaki. Cada uno de ellos tiene un ARN cebador
sintetizado por la primasa que se desplaza con la horquilla de replicación.
Síntesis semidiscontinua: hebra adelantada continua y hebra retardada

discontinua.
34
Horquilla de replicación Las hebras hijas se sintetizan en

dirección 5’ 3’
Movimiento de la
horquilla de replicación
Hebra adelantada (conductora)

Hebra retrasada (frag.de Okazaki)
Hebras parentales
La replicación del DNA es semidiscontinua
35
La hebra adelantada se sintetiza de forma continua y requiere 1 sólo RNA cebador
cebador
La hebra retrasada lo hace de manera discontinua. Los segmentos de DNA de la hebra

retrasada se conocen con el nombre de fragmentos de Okazaki
El RNA cebador es finalmente reemplazado por DNA
36
¿Cómo se coordina la replicación de las hebras conductora y retrasada?
Movimiento de la
Hebra adelantada (conductora)

Hebra retrasada (frag.de Okazaki)
Hebras parentales
Se consigue mediante la dimerización de la DNA pol III en la

37
Maduración de los fragmentos de Okazaki
En la hebra retrasada, el RNA

cebador es reemplazado por Fragmento 1 Fragmento 2
DNA. mella
Dos fragmentos de Okazaki Cebador
tienen que juntarse
DNA
En procariotas, la DNA polimerasa I
polimerasa I realiza esta función:
• Elimina el cebador
actividad exonucleasa 5’ 3’
Mononucleótidos mella
• Rellena el hueco
actividad polimerasa 5’ 3’
DNA ligasa
La mella se sella por acción de
la DNA ligasa: forma enlace
fosfoéster entre el extremo 3’
libre de un fragmento y el 5’ del
siguiente
38
Maduración de los fragmentos de Okazaki
En eucariotas:
• RNase H o FEN1 eliminan el cebador
• Pol rellena el hueco
39
Reacción ADN ligasa
Une el hidroxilo del

carbono 3 de uno de los
fragmentos provoca un
ataque nucleofílico al
fosfato del siguiente
fragmento de Okazaki de
la cadena 5’ libre y los
une por un enlace
40
fosfoester. Tema 10: Replicación, Biología Molecular
Coordinación de la replicación de las hebras
adelantada y retrasada en la horquilla de
replicación: modelo del “trombón” (E.Coli)
REPLISOMA
DNA polimerasa de
la cadena
adelantada
3’
5’
BUCLE
SSB unidas
al DNA
Siempre un trozo de hebra libre donde

se pueden ir colocando las proteínas
para ir en sentido contrario.
41
42
43
La abrazadera se
carga sobre la
cadena atrasada que
tiene un cebador
nuevo
44
45
REPLISOMA
46
REPLISOMA
47
REPLISOMA
Topoisomerasa
Doble hélice de ADN
Helicasa
Primosoma
Proteína de unión a la
ARN cebador
hebra sencilla SSB
Molde de la
Molde de la cadena cadena retardada
conductora
ADN polimerasa I
ADN nuevo de la
hebra conductora Fragmento de ADN ligasa
Okazaki
ADN polimerasa
ADN nuevo de la
hebra retardada
48
Terminación de la replicación
Comprende varios aspectos:
Finalización de la elongación de la cadena por la ADN

polimerasa: cuando una horquilla alcanza a la siguiente
(proceso desconocido en términos moleculares).
Cúal es el número de replicones implicados de forma

simultánea en la replicación del cromosoma: no se conoce.
Replicación de los telómeros: no se puede llevar a cabo

mediante elongación por la ADN polimerasa.
49
Telómeros y telomerasa
PREMIOS NOBEL DE FISIOLOGÍA O MEDICINA 2009
Elizabeth H. Blackburn Carol W. Greider Jack W. Szostak

Por el descubrimiento de cómo los cromosomas son
protegidos por los telómeros y la enzima
telomerasa.
ANÁLISIS: Premio Nobel de Medicina
Un cronómetro molecular en la célula
Jordi Surrallés, Catedrático de Genética de la UAB 06/10/2009
http://masalladelabioinformatica.wordpress.com/tag/telomerasa/ 50
Telómeros y telomerasa
Telómeros: regiones
terminales de los
cromosomas eucariotas,
formados por ADN
repetitivo no codificante.
Formados por unidades de 6

a 8 pb repetidas en tandem
centenares o miles de veces
en el extremo 3’ que
sobresale respecto del 5’.
Este final puede
autocohesionarse.
La telomerasa es una
ribonucleoproteína que, al
tener RNA en su estructura,
no necesita una plantilla de
DNA exógena y puede
replicar los extremos
monocatenarios de los
cromosomas 51
Replicación de los telómeros
Representación esquemática de la replicación de un cromosoma eucariótico
replicón 1 replicón 2 replicón 3 replicón 4

orígenes de
replicación centrómero
telómero telómero
3’ 5’
5’ 3’
3’ 5’
Retardada Conductora R C R C R C
avance de las horquillas
Conductora Retardada C R C R C R
5’ 3’
aquí se encontrarán las 2 horquillas

procedentes de distintos orígenes
3’ 5’
5’ 3’
3’ 5’
5’ 3’
52
El problema de la replicación de los cromosomas lineales: las
cadenas nuevas quedan más cortas en 5’ que su molde.
3’ 5’
5’ 3’
3’ 5’
5’ 3’
Todos los cebadores intermedios son eliminados por las nucleasas (FEN1 y RNasa H1) y
sustituidos mediante la elongación del fragmento de Okazaki adyacente. Los cebadores
de los extremos 5’ de las hebras nuevas también pueden ser eliminados, pero no
sustituidos; por ello, las hebras nuevas quedan más cortas en 5’ que su molde:
3’
|||||||||||||||||||
5’
3’ 5’
5’ 3’
3’ 5’
5’ 3’
La secuencia de bases de los telómeros no codifican nada.

53
• Este acortamiento de las regiones teloméricas en sucesivas divisiones
celulares puede llevar a comprometer la perpetuación del mensaje genético.
• Este problema se resuelve gracias a la actuación de las telomerasas, que
alragan los telómeros, compensando así el acortamiento anterior.
La longitud de los telómeros de un cromosoma está implicada en la senescencia
celular y el cáncer
La telomerasa es activa en los primeros estadíos embrionarios, en células germinales
y en células madre
Las células somáticas de mamífero carecen de actividad
telomerasa y, por tanto, sufren acortamiento cromosómico
cada vez que se dividen, después de cierta cantidad de
divisiones celulares la célula entra en un estado de
senescencia
Base del envejecimiento de los

organismos multicelulares
El acortamiento de los telómeros se reconoce como un reloj biológico que 54
mide el proceso del envejecimiento, de hecho pacientes con envejecimiento
prematuro presentan una pérdida acelerada de los telómeros.
Telómeros y envejecimiento
Células Células Síndromes de

germinales somáticas envejecimiento
Longitud de los telómeros
prematuro
Salud
Enfermedad
Edad
55
Telomerasa y cáncer
La telomerasa está presente en casi todas las células que proliferan, especialmente
en las tumorales (proliferación indefinida de los tumores).
Inhibición de la actividad telomerasa como principio de terapia antitumoral.
Telomerasa: diana terapéutica.
En fases tardías del progreso tumoral aumenta la actividad telomerasa, con el fin de favorecer
el crecimiento del tumosr e impedir la muerte celular.
56
Telomerasa y cáncer
57
Telomerasa
La telomerasa es una enzima tipo ADN polimerasa que utiliza como molde
ARN: es una transcriptasa inversa con características especiales.
Es una ribonucleoproteína formada por 2 componentes:
1. Componente ribonucleico (ARN de la telomerasa, TR o TER):
Tamaño variable (146 – 1544 nt).
Secuencia característica para cada especie (9 – 28 nt)
complementaria a la secuencia telomérica respectiva.
Ejemplo: Telomerasa humana, su hTR tiene 450 nt con una
secuencia rica en C (5’-CCCUAA-3’), complementaria y
antiparalela a la hebra rica en G de la repetición telomérica (5’-
TTAGGG-3’).
2. Componente proteico (contiene la actividad enzimática de la
telomerasa, TRT o TERT): Para sintetizar el ADN telomérico no utiliza
un ARN cebador sintetizado a tal fin, sino que elonga el extremo 3’
precedente utilizando como molde la parte TR de la propia
telomerasa.
58
Telomerasa
59
Telomerasa
Primera fase (A): La telomerasa alarga el saliente 3’
telómero humano 3’
RNA
DNA —AATCCCAATCCC (5’) hTR 5’ telomerasa
—TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG (3’) C humana
UAC A AUCCCAAUC U U AC
repeticiones teloméricas
proteína
saliente 3’ (12-16 nt)
hTRT
3’ A1) colocación de la telomerasa

5’
C A2) primera elongación
—AATCCCAATCCC UA CAAUCCCAAUC U U AC
—TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG
dNTPs
apareamiento de bases entre DNA
telomérico y RNA de la telomerasa El componente proteico de la telomerasa
cataliza la elongación del saliente 3’
3’ empleando como molde la hebra de RNA
5’
de la propia telomerasa
C
—AATCCCAATCCC UA CAAUCCCAAUC U U AC A3) translocación
—TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAG
La telomerasa se desliza sobre el
nuevos nucleótidos incorporados saliente 3’ previamente elongado,
por la telomerasa conservando la complementariedad
60
Telomerasa
5
C
—AATCCCAATCCC UA CAAUCCCAAUC U U AC A3) translocación
—TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAG
La telomerasa se desliza sobre el
nuevos nucleótidos incorporados saliente 3’ previamente elongado,
por la telomerasa conservando la complementariedad
3’ gracias a la repetición de secuencias
5’
C
—TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAG A4) segunda elongación
dNTPs De nuevo, la
telomerasa elonga el saliente 3’, por
3’ el mismo mecanismo de la etapa A2
5’
C
—TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAG A5,6...)
sucesivas translocaciones
nuevos nucleótidos incorporados y elongaciones
por la telomerasa
—AATCCCAATCCC
—TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAG
61
Telomerasa
Segunda fase (B): La DNA polimerasa rellena la otra hebra

(La acción de la telomerasa ha finalizado) B1) síntesis de un cebador por DNApol /prim
—AATCCCAATCCC (3’) CCAAUCCCAAUC (5’)

—TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAG (3’)
B3) sellado de la B2) elongación por DNApol /prim

mella por la ligasa
—AATCCCAATCCCAATCCCAATCCCAATCCCAATCCCAATCCCAATCCCAAUCCCAAUC (5’)
La eliminación del cebador por las ribonucleasas (FEN1+RNasa H1) genera
de nuevo un saliente 3’, pero en un telómero más largo que el de partida
—AATCCCAATCCCAATCCCAATCCCAATCCCAATCCCAATCCCAATC (5’)
62
REPLICACIÓN eucariotas
63
Replicación del ADN mitocondrial
Hebra L: Unica región no codificante del DNA mitocondrial: región de control. Contiene el
hebra ligera Lazo D origen de replicación de la hebra H.
(mayor
contenido en El genoma mitocondrial está
bases formado por varias copias
pirimidínicas). de un único cromosoma
situado en la matriz
mitocondrial.
Es bicatenario
Circular
16.596 pb No posee intrones

El mtDNA humano tiene 37
genes que codifican para:
• 2 rRNA
• 22 tRNA y
• 13 proteínas
ND: subunidades del complejo NADH-CoQ reductasa
Hebra H: hebra pesada (mayor 64

contenido en bases púricas). Dra. Estrella Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869 - enunez@pdi.ucam.edu
Propiedades:
sintetiza hebra pesada
• Hay dos orígenes de

replicación: donde se empiezan
a sintetizar.
•OH : de la hebra pesada
•OL: de la hebra ligera
• Replicación unidireccional y
continua. Cada hebra se sintetiza
a partir de orígenes distintos y en
sentidos opuestos. No
fragmentos de Okazaki.
• No simultánea (bifocal): primero
sintetiza la hebra ligera hebra H y luego hebra L.
• DNA pol γ
• Independiente del ciclo celular:
no solo en la fase S
Primero se sintetiza la hebra 65
pesada y luego la ligera Dra. Estrella Núñez Delicado - Tlf: (+34) 968 278869 - enunez@pdi.ucam.edu
origen de replicación “replicación de la hebra pesada”
DNA mitocondrial
de la hebra pesada bucle D
H (hebra pesada) H
en la región D-loop, o OH 5’ 3’
L bucle D, se forma una H’
(hebra ligera) triple hebra que recibe el L H’
nombre de DNA 7S, por
replicación de un trozo
de hebra pesada (H’)
empleando como molde
la hebra ligera
la elongación de la nueva hebra

pesada (H’) desplaza a la
H progenitora de su apareamiento
con la L progenitora
“replicación de la hebra ligera”
LH’
tras recorrer unos 2/3 del

cromosoma, el origen OL
L queda accesible y puede
comenzar la síntesis de
una nueva hebra ligera L
H’ usando la pesada H’
progenitora como molde
OL
3’ OL
5’
HL’ origen de replicación H
L’ H de la hebra ligera
66
Replicación del ADN nuclear,
mitocondrial y procariótico
67

Medicina Tema 10 Replicacion

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Medicina Tema 10 Replicacion

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Tema 10.

Dra. Estrella Núñez Delicado

Postulan que la “información

La secuencia de DNA especifica la

“Flujo de la información genética”

1970 Temin y Baltimore descubren y aislan la Transciptasa Inversa,

1977 Sharp y Roberts descubren los intrones,

Se produce de forma coordinada con la división celular.

El final de la replicación es la señal para la división celular.

El proceso de replicación se lleva a cabo sin que se separe de forma

Las propiedades fundamentales de la replicación del DNA y los

La replicación del DNA es semiconservativa 1 cadena a cada C hija

La replicación del DNA es bidireccional

La replicación del DNA es origen monofocal en

bacterias cultivadas con N15 => ADN conformado por N15

las alimentamos con N14

1ª generación => pico en entre N15 y N14

las C hijas tienen entonces ADN conformado por N15 y N14

2ª generación => 2 picos en N15 y N15,5

3ª generación => C híbridas y otras solo N15

Si la replicación del DNA fuese conservativa no aparecerían moléculas de

La replicación del DNA es bidireccional: La síntesis de DNA se realiza

Burbuja de replicación Horquilla de

Molde: Los nucleótidos se incorporan según el orden marcado

Mecanismo universal: Todas las ADN polimerasas y ARN

Los centros activos

Para eso tiene dos centros activos: uno

Actividad polimersa 5’-3’.

Actividad 3’ exonucleasa (3’-5’) (otro centro activo): hidroliza nucleótidos del

Actividad 5’ exonucleasa (5’-3’) (otro centro activo).La única polimerasa de

(mella de hebra simple)

La DNA pol I elimina el cebador de los fragmentos de

Sintetiza ARN cebador Alta procesividad: abrazadera deslizante

La alfa polimerasa puede iniciar la elongación de la cadena.

Las delta y epsilon tienen alta procesividad, alta afinidad por

En procariotas la primasa fabrica un cebador para que la polimerasa

Porque la DNA pol interacciona con una proteína, la abrazadera deslizante,

Gastando ATP se coloca el complejo alrededor del la hebra de ADN

Replicón: Unidad funcional de la replicación. Es la región del ADN que se replica

Cada replicón tiene un origen de replicación y dos horquillas.

Procariotas: todo el cromosoma es un solo replicón.

Delante de la horquilla de replicación se produce:

Componentes proteicos del replisoma:

Función E. Coli Eucariotas

Síntesis del cebador DnaG Primasa + DNA pol α

DNA helicasa DnaB Complejo Mcm (proteínas de

Polimerización Pol III Pol δ (ε)

Abrazadera deslizante Dímero β PCNA

Cargador de la abrazadera Complejo γ RFC (Replication Factor C)

Ligador flexible Proteína τ Proteína τ

Unión de los fragmentos de Okazaki DNA ligasa DNA ligasa

Topoisomerasas Topo I, Girasa Topo I y II

Eliminan los superenrrollamientos que

Hidrolizan un enlace fosfodiéster en una hebra,

El número de enlace de la molécula de DNA

La enzima se une covalentemente a uno de los

Hidrolizan dos enlaces fosfodiéster de la doble hebra, hacen pasar la otra

Se hidroliza una molécula de ATP por cada corte de la cadena

El número de enlace de la molécula de DNA aumenta o disminuye en

Hebra que se expone en la dirección 3’-5’: Su complementaria se sintetiza

Hebra que se expone en dirección 5’-3’: Su complementaria se sintetiza de

Síntesis de la hebra retardada de forma discontinua mediante los

Síntesis semidiscontinua: hebra adelantada continua y hebra retardada