Universidad Católica de Cuenca

Unidad de Salud y Bienestar

Carrera de Medicina

Catedra: Biología Molecular y Genética

Tema: Epigenética en Medicina.

Freddy Castillo Solano

BIOQUIMICO FARMACEUTICO
MAGISTER EN BIOTECNOLOGIA MOLECULAR
TEMA: EPIGENETICA EN MEDICINA TEXTO Nro 1: BIOLOGIA CELULAR Y TEXTO Nro 2. CONCEPTOS DE GENETICA
MOLECULAR DE GERALD KARP 8va Edición. DE KLUG 10ma Edición.

Capitulo 12: Control de la Expresión Capítulos Especiales sobre genética

Génica. moderna.
12.7 Epigenética: Hay mas que solo la herencia del Capitulo Especial 3: Epigenética.
DNA.
12.15 Activación Transcripcional: Coactivadores
EPIGENETICA EN que alteran la estructura de la cromatina.
12.17. Represión de la transcripción: Metilación
MEDICINA del DNA, Desacetilación de histonas, Impronta
genómica.
“EPIGENETICA EN MEDICINA”.
El carácter EPIGENETICO. Es un fenotipo estable
mitótica y meioticamente heredable, que resulta de
cambios de la expresión génica que tiene lugar sin
que se produzca alteración en la secuencia del DNA

EPIGENETICA es el estudio de las formas en que

estos cambios alteran los patrones de la
expresión génica específicos de cada célula y
cada tejido

MODIFICACIONES REVERSIBLES en el DNA y de

la estructura de la cromatina: interacción del
medio ambiente
!El conocimiento de las modificaciones epigenéticas son importantes para la
medicina, porque permiten comprender EL DESARROLLO, LOS PROCESOS DE
LAS ENFERMEDADES, REPRODUCCIÓN Y LA ADAPTACIÓN AL ENTORNO¡¡¡
 Alteraciones Epigenéticas del genoma.

A diferencia del genoma, que es idéntico en todos los tipos de células de un organismo, el epigenoma es especifico del
tipo de célula y es heredable.
Las modificaciones epigenéticas son reversibles “Abriendo la posibilidad de desarrollar fármacos para el tratamiento
de condiciones ligadas a disfunciones de los procesos epigeneticos”
Alteraciones Epigenéticas del genoma.

Existen 3 mecanismos epigenéticos

principales: Metilación del DNA,
modificación de histonas y regulación de
la expresión génica mediante RNAs
pequeños no codificantes.
Alteraciones Epigenéticas del genoma.
 METILACION DEL DNA
➢La metilación del DNA es la adición de grupos metilo en SITIOS
ESPECIFICOS DEL DNA, generalmente una CITOSINA.
➢ 1 de cada 100 nucleótidos porta un grupo metilo al carbono 5 de
una citosina.
➢Hasta casi 10% de citosina en organismos superiores está metilado.
➢Esto se presenta en grupos de CG llamados CpG. Estas se
encuentran en el extremo 5´ de muchos genes.
➢Las modificaciones EPIGENETICAS SON CAMBIOS HEREDABLES
que influyen en la expresión de ciertos genes sin alterar la
secuencia del DNA.
➢Los grupos metilo de las islas CpG ocupan el Surco Mayor del DNA
y bloquean la unión de los factores de trancripcion ncesarios para la
transcripcion
➢“LOS PATRONES DE METILACION DEL DNA SON
“LA METILACION PARTICIPA EN EL SILENCIAMIENTO DE LOS ELEMENTOS FUNCIONALMENTE IMPORTANTES, YA QUE UNA ALTERACION EN
LA METILACION DEL DNA PUEDE RESULTAR EN FALLAS Y
TRANSPONIBLES LINE (LINE1) Y SINE (ALU)” ENFERMEDAD”
METILACION DEL DNA
•Las células de Mamíferos contienen enzimas que se
mantienen y establecen la metilación del DNA. En la
nueva cadena de DNA después de la replicación.
•La METILACION es una manera de etiquetar regiones
de DNA
•ESTAS ENZIMAS SE LLAMAN “DNA
METILTRANFERASAS” (DNMTs) y “PROTEINAS DE
UNION A METILCITOSINA” (MeCPs) estas ultimas se
unen a las islas CpG.
•También se pueden distinguir dos tipos de
METILTRANSAFERASAS por sus funciones básicas:
MANTENIMIENTO DE LA METILACION (DNMT1) y
METILACION DE NOVO (DNMTE3a y DNMT3b)
METILACION DEL DNA : Mantenimiento
de la metilación de DNA
• Este tipo de metilación adiciona grupos
metilo a la nueva cadena de DNA
sintetizada des pues de la replicación y
división celular.
• Los sitios en el DNA parental sirven como molde
para la correcta metilación de las dos nuevas
cadenas después de la replicación
• Esto asegura que los patrones de metilación
previa son mantenidos correctamente en los
mismos sitios del DNA parental.
• La enzima Responsable de esto es la Dnmt1. Por
ejemplo Ratones deficientes en Dnmt3a mueren
dentro de pocas semanas.
METILACION DEL DNA : metilación del
DNA de novo.
•Los grupos metilo son
adicionados a nuevas
posiciones en ambas cadenas
•Participan la Dnmt3a y la
Dnmt3b.
RECONOCIMIENTO DEL DNA METILADO.
Ciertas ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
no cortan el DNA cuando reconocen
una secuencia metilada.
◦ Ejemplo: la enzima HpaII realiza un
clivaje en el DNA solo cuando reconoce
la secuencia 5´-CCGG-3´si no esta
metilada.
◦ MspI reconoce la misma secuencia 5´-
CCGG-3´independientemente de la
metilación y divide el ADN en este sitio
cada vez.
 Gen DNMT3B humano y mutaciones
• Las mutaciones en el gen DNMT3B codifica una metiltransfersas 3B de novo que
causa una enfermedad llamada SINDROME ICF (inmunodeficiencia ,
inestabilidad cromosómica centromerica, y anomalías faciales).
•Es de carácter autosómico recesivo
•Los centrómeros de los cromosomas 1, 9 y 16 donde el DNA satélite tipo 2 y 3
están localizados, son inestables.
•Su principal característica es una alteración del sistema inmunitario
•El gen humano DNMT3B consiste de 23 exones. Seis exones son sujetos a
SPLICING ALTERNATIVO.
•La proteína tiene 845 aminoácidos, con 5 MOTIVOS DNA METIL.TRANFERASAS.
Gen DNMT3B humano y mutaciones.
MODIFICACION DE HISTONAS.
MODIFICACION DE HISTONAS.
•Evento Clave en la remodelación del
núcleo de las histonas H3 y H4

• Metilación agrega grupos metilo CH3

• Acetilación agrega grupos acetilo –CO-CH3 CODIGO DE HISTONAS
• Fosforilación agrega grupos Fosfato
Acetilación y Desacetilación de Histonas
Acetilación y Desacetilación de Histonas + Metilación del DNA
Acetilación y Desacetilación de Histonas
• La acetilación es mediada por enzimas llamadas ACETIL
TRANFERASAS DE HISTONAS (HATs) , se vinculan con la transcripción
•Las enzimas encargadas de desacetmilar se llaman DESACETILASAS
DE HISTONAS (HDAC) se relacionan con la represión de la
transcripción de genes.
•Algunos tipos de cáncer están relacionados con la sobreexpresión de
HDACs.
•Para estos tipos de cáncer se han desarrollado medicamentos como
el VORINOSTAT
Acetilación y Desacetilación de Histonas

• El VORINOSTAT inihibe la
actividad enzimática de
las histona desacetilasas:
• HDAC1,
• HDAC2
• HDAC3
• HDAC6.
Accesibilidad de la Cromatina
REMODELACION DE CROMATINA.
 EPIGENETICA EN EL CANCER.
La relación entre el cáncer y la epigenética fue observada por primera vez en 1980 por Feinberg y
Volgenstein, cuando observaron que las células del cáncer de colon tenían niveles muchos mas bajos de
metilación que las células normales obtenidas del mismo tejido
“La hipo metilación global es una propiedad de todos los canceres examinados hasta la fecha”
“Actualmente el cáncer se contempla como una enfermedad que implica tanto cambios epigenéticos como
genéticos que conducen a alteraciones en la expresión génica”
La HIPOMETILACION ACTIVA A LOS ONCOGENES, CONDUCE A LA ACTIVACION DE ELEMENTOS
TRANSPONIBLES LINE Y SINE, incrementando la INESTABILIDAD GENOMICA
LA HIPERMETILACION TAMBIEN OCURRE EN MUCHOS TIPOS DE CANCER INACTIVACION DEL BRCA1 EN EL
CANCER DE MAMA, INACTIVACION DEL GEN MLH1 en CANCER DE COLON
EPIGENETICA EN EL CANCER.
 EPIGENETICA EN EL CANCER.
Otros Genes Hipermetilados
Diferenciación Resistencia a
Reparación del DNA Apoptosis
celular fármacos

Perfiles Anormales de modificación de histonas

Mutaciones en los genes de Acetiltransferasas de
Mutaciones en los genes de Histonas desacetilasas
histonas

Síndrome Rubenstein-Taybi heredan una mutación de línea germinal que produce una HAT
disfuncional tienen una probabilidad de cáncer 300 veces mayor
 EPIGENETICA EN EL CANCER: DECITABINA

DECITABINA

La decitabina es un análogo de la Citidina y se incorpora al DNA

Tratamiento de síndrome mielodisplásico y leucemia
durante la replicación, las enzimas de metilacion de DNA se unen
irreversiblemente a la DECITABINA impidiendo la metilacion del DNA mieloide aguda
 Universidad Católica de Cuenca
Unidad de Salud y Bienestar
Carrera de Medicina
Catedra: Biología Molecular y Genética
Tema: Mecanismos de reparación del DNA

Freddy Castillo Solano

BIOQUIMICO FARMACEUTICO
MAGISTER EN BIOTECNOLOGIA MOLECULAR
TEMA: Telómeros y TEXTO Nro 1: TEXTO Nro 2. Texto Nro 3. Biología Articulo Cientifico:
Telomerasa BIOLOGIA CELULAR Y CONCEPTOS DE Celular y Molecular de Mechanism of Diseases:
MOLECULAR DE GENETICA DE KLUG Lodish 7ma Edición Telomere Diseases
GERALD KARP 8va 10ma Edición.
Edición.
Capitulo 12. Control Capitulo 11. Replicación Capitulo 8: Genes, Calado, R. T., &
de la expresión y Recombinación del genómica y cromosomas. Young, N. S. (2009).
génica. DNA 8.6 Elementos Telomere
12.5 Estructura del 11.7 Los Extremos de los Morfológicos y
Estructura y Cromosoma Mitótico: cromosomas lineales funcionales del
diseases. New
England Journal of
función del Telómeros y
telomerasa
son problemáticos
durante la replicación
cromosoma eucariota: La
adición de secuencias Medicine, 361(24),
Telómero y teloméricas por 2353-2365.
https://www.nejm.org/
telomerasa evita el
la acortamiento de los doi/full/10.1056/NEJMr
cromosomas a0903373
telomerasa
 TELOMEROS
• A diferencia de los cromosomas circulares
cerrados de las bacterias y de algunos
bacteriófagos, los cromosomas de las células
eucariotas son lineales.
• En los extremos de los cromosomas se
encuentran unas estructuras de DNA repetitivo
(TTAGGG) llamado TELOMERO, el cual tiene
ciertas características:
• Están unidos a PROTEINAS (Shelterina)
• Preservan la integridad y la estabilidad de los
cromosomas
• Al final de los cromosomas el DNA tiene características
como si se tratase de ROTURAS DE DOBLE CADENA
• Evita la FUSION de los EXTREMOS DE LOS
CROMOSOMAS.
• La enzima encargada de extender los telómeros se llama
TELOMERASA
 ESTRUCTURA DEL TELOMERO

Elizabeth Carol Jack

Blackburn Greider Szostak
Bioquímica Bioquímica Biólogo
Molecular

Ganadores del Premio Nobel Diciembre 2009

en Fisiología y Medicina por descubrir la
estructura y mantenimiento de los telómeros
TELOMEROS y TELOMERASA
 TELOMEROS

• Los telómeros evitan el acortamiento prematuro de los cromosomas

• La telomerasa se encuentra prácticamente inactiva en las células somáticas
• En cambio en las células germinales y embrionarias esta se encuentra activa
• Otro grupo de células también expresa telomerasa estas son las células del CANCER
• Los telómeros determinan el Nro de Veces que una célula puede dividirse, lo cual es
aproximadamente 80 divisiones celulares
• Si los telómeros se ven afectados o la enzima que los extiende, entonces puede desarrollarse
un envejecimiento prematuro y cáncer SINDROME DE WERNER
• Los telómeros evitan que los extremos de los Cromosomas se fusiones
CONSECUENCIAS DEL DESGASTE ANORMAL DEL TELOMERO EN LAS CELULAS

El desgaste de los telómeros esta

relacionado con algunas enfermedades:
• Síndrome de Werner
• Fibrosis Pulmonar
• Disqueratosis Congénita
• Anemia Aplásica
CONSECUENCIAS DEL DESGASTE ANORMAL DEL TELOMERO EN LAS CELULAS.

• Disqueratosis
Congénita: Distrofia
ungueal, leucoplaquia.

Anemia Aplástica: El acortamiento

de los telómeros en las células de la
medula ósea confiere progresión a
mielodisplasia, leucemia mieloide
aguda.

Fibrosis Pulmonar: Tos, Disnea, 15%

de los pacientes presenta desgaste
prematuro de los telómeros
TELOMEROS: Síndrome de Werner (SW) o
Progeria Adulta.
• “El SÍNDROME DE WERNER es un síndrome poco
frecuente hereditario que se caracteriza por un
ENVEJECIMIENTO PREMATURO” con aparición en la
tercera década de la vida, se presentan algunas
características.
• Cataratas,
• Neoplasias mesenquimales y aterosclerosis
• Inestabilidad genómica
• La muerte se producirse por Cáncer o infartos de miocardio
• Autosómico Recesivo
• 1-9/1000000
• La causa es una mutación (Inserciones, deleciones)en el gen WRN,
localizado en el cromosoma 8p11-12, este gen codifica para una RecQ
Helicasa.
• El gen mutado esta presente en el 90% de los casos de SW
• El diagnostico se lo realiza por las características que presenta mas el
diagnostico molecular que incluye SECUENCIACION DEL EXON y de los
PRODUCTOS DE LA RT-PCR y Análisis WESTERN BLOT
 Universidad Católica de Cuenca.
Facultad de Bienestar y Salud
Carrera de Medicina.
Catedra de Biología Molecular y Genética:
“REPLICACION Y RECOMBINACION DEL DNA”

D O C ENTE: B Q. F F R E DDY C A STI LLO SO LA NO M G S.

TEMA: REPLICACION DEL DNA TEXTO Nro 1: BIOLOGIA CELULAR Y TEXTO Nro 2. CONCEPTOS DE GENETICA
MOLECULAR DE GERALD KARP 8va Edición. DE KLUG 10ma Edición.

Capitulo 13: Replicación y Reparación del DNA Capitulo 11: Replicación y

13.1. Replicación del DNA
13.2 Replicación del DNA en Bacterias
Recombinación del DNA
13.3. Maquinaria que opera en la horquilla de
replicación
REPLICACION Y Estructura y función de las DNA polimerasas
13.6 Replicación del DNA en Células Eucariotas
RECOMBINACION DEL
DNA
“La imagen común del DNA como molécula autorreplicable
se describe mejor como una carta que se autoduplica. La
carta necesita una fotocopiadora; el DNA necesita una
Célula”

“Richard Lewontin”
 INTRODUCCION.
•Los organismos se duplican por medio de la reproducción sexual o asexual,
las células por división celular y el material genético por REPLICACION DEL
DNA.
•La estructura que propusieron Watson y Crick en 1953 para el DNA incluía
un mecanismo que sugería su “autoduplicacion”.
•Watson y Crick supusieron que la replicación ocurría por separación gradual
de las cadenas de la doble hélice, similar a una cremallera.
•“CUANDO LAS CADENAS DE DNA SE SEPARAN, CADA UNA PUEDE ACTUAR
COMO UNA PLANTILLA PARA DIRIGIR LA SÍNTESIS DE LA CADENA
COMPLEMENTARIA Y RESTAURAR EL ESTADO DE DOBLE CADENA”.
•En algunos virus las moléculas de RNA de cadena sencilla funcionan como
plantillas para la síntesis de RNA y DNA Complementario. Sin embargo la
vasta preponderancia de RNA y DNA
•EL DNA tiene que duplicarse fielmente y con extremada precisión, sin
embargo no esta exento de errores (EVOLUCION)
 EL DNA se reproduce de
manera semiconservativa.

• Se dice que es de tipo semiconservadora puesto

que cada dúplex descendiente contiene una
cadena de la estructura parental.
• Dicho de otra manera una cadena de DNA recién
sintetizada tiene una cadena “VIEJA” y una
cadena “NUEVA”
• También se postulaba otros modelos de
replicación: “CONSERVATIVO Y DISPERSIVO”
REPLICACION SEMICONSERVADORA: El Experimento de Meselson y Stahl.

▪Puntos importantes a tomar en consideración:

▪Se consideraron 3 modelos de como los organismos

podrían replicar su DNA: SEMICONSERVATIVO,
CONSERVATIVO Y DISPERSIVO.

▪MODELO SEMICONSERVATIVO: en el que la cadena de

DNA sirve como molde para hacer una nueva cadena
complementaria, parecía el mas probable tomando en
cuenta la estructura del DNA.

▪Meselson y Stahl probaron los modelos al marcar el

DNA de las bacterias con isotopos de nitrógeno a lo
largo de varias generaciones.

▪A partir de patrones de DNA marcado que vieron.

Meselson y Stahl confirmaron que el DNA se replica de
forma Semiconservativa
 REPLICACION
SEMICONSERVADORA
REPLICACION SEMICONSERVADORA
REPLICACION SEMICONSERVATIVA EN MAMIFEROS REPLICACION SEMICONSERVATIVA EN VEGETALES

REPLICACION SEMICONSERVADORA EN CELULAS EUCARIOTAS DE MAMIFERO Y CELULAS VEGETALES.

 REPLICACION DEL DNA EN BACTERIAS: Orígenes
Horquillas y Unidades de replicación
Los primeros avances de la investigación en bacterias fueron
impulsados por técnicas Genéticas y Bioquímicas como las
siguientes:
◦Disponibilidad de Mutantes que no pueden sintetizar
una u otra proteína requerida para el proceso de
replicación (MUTANTES SENSIBLES A LA
TEMPERATURA (TS).
◦Desarrollo de sistemas in vitro en los cuales la
replicación se puede estudiar mediante componentes
celulares purificados.
 REPLICACION DEL DNA EN BACTERIAS: Orígenes
Horquillas y Unidades de replicación
◦ La replicación comienza en un sitio especifico en el cromosoma
bacteriano conocido como el ORIGEN.
◦ En E. coli es una secuencia llamada oriC (SITIO DE UNION PARA
VARIAS PROTEINAS)
◦ Poseen una secuencia terminadora llamada Ter.
◦ La replicación es Bidireccional
◦ Horquillas de Replicación: Sitio donde la doble hélice parental se
separa y los nucleótidos se incorporan en las cadenas
complementarias recién sintetizadas.
◦ Las Horquillas de Replicación se mueven en direcciones opuestas.
◦ El replicón es unidad de replicación de DNA. En E.coli solo tiene
un único replicón.
REPLICACION DEL DNA EN BACTERIAS: Orígenes Horquillas y Unidades de replicación
Horquillas de replicación y replicación bidireccional.
Propiedades de las DNA polimerasas: DNA Polimerasa I

▪En 1950 Arthur Kornberg de la Universidad de

Washington comenzó los estudios de estas enzimas.
▪Trabajo con extractos bacterianos, DNAs marcados con
radiactividad en un polímero acido insoluble de DNA.
▪La enzima se denomino DNA polimerasa I..
▪Las DNA polimerasas son enzimas encargadas de
sintetizar nuevas cadenas de DNA durante la replicación
o reparación de la molécula de DNA.
▪Todas las DNA polimerasas necesitan dos requerimientos
básicos: “UNA CADENA DE DNA PLANTILLA PARA COPIAR
Y UNA CADENA INICIADORA EN LA CUAL PUEDEN
AGREGARSE LOS NUCLEOTIDOS”
 Propiedades de las DNA
polimerasas: “DNA Polimerasa I”

1. SUSTRATOS: Desoxiribonucleosidos
trifosfato (dTTP, dATP. dCTP y dGTP).
2. COFACTORES: Iones metálicos Divalentes
Mg+2

3. MOLDE O PLANTILLA: Determina el orden

correcto de incorporación de los
nucleótidos (Complementariedad de
Bases).

4. CEBADOR: necesario para aportar un

grupo 3´OH libre. Oligonucleótido RNA
que debe estar emparejado con la hebra
progenitora
Propiedades de las DNA polimerasas
Luego de los estudios de Kornberg se presentaron algunas preguntas:

•Si las cadenas se polimerizan en dirección 5´ a 3´ la otra lo hará en

dirección 3´a 5´?
•Acaso había otra enzima encargada de la construcción de la
cadena en la dirección 3´ a 5´?
•La enzima trabajaba en condiciones diferentes en la célula que bajo
condiciones in vitro?
Propiedades de las DNA polimerasas

▪En este caso la DNA “POLIMERASA TIPO III” es la

que participa en la replicación del DNA bacteriano.
▪Las cadenas de DNA NO SE PUEDEN SINTETIZAR
3´a 5´.
▪Sin embargo las DNA polimerasas se mueven en
dirección en dirección 3´ a 5´ a lo largo de la
plantilla y ambas construyen una cadena que crece
en desde su extremo fosfato 5´ fosfato terminal.
Actividades de Exonucleasa de las DNA
polimerasas.
▪ Kornberg encontró que las DNA polimerasas tienen actividad EXONUCLEASA, es decir son capaces de
degradas polímeros de DNA, al eliminar nucleótidos del extremo de la molécula. Es una actividad real
de la molécula.
▪Todas las polimerasas bacterianas poseen actividad de exonucleasas, 5´a 3´ y 3´a 5´ según sea la
dirección en el cual se degrada la cadena.
▪La DNA polimerasa I tiene actividades Exonucleasa 3´a 5´ y 5´a 3´ además de su actividad de
polimerización. La DNA POLIMERASA I posee tres enzimas en una.
▪Casi todas las NUCLEASAS son especificas para DNA o RNA, pero la exonucleasa 5´a 3´ de la DNA
polimerasa I puede degradar los dos tipos de ácidos nucleicos DNA y RNA.
▪La DNA Polimerasa II IV y V, se cree que participan en la reparación del DNA que ha sido dañado por
agentes externos.
▪“Los Fragmentos de Okasaki son removidos por la actividad exonucleasa 5´a 3´ de la DNA polimerasa
I. a medida que se remueven los nucleótidos del INICIADOR DE RNA, su actividad de polimerasa
rellena de manera simultanea el espacio resultante con DESOXIRRIBONUCLEOTIDOS”
Actividades de Exonucleasa de las DNA polimerasas.
 DURANTE LA REPLICACION DEL DNA SE TIENEN
QUE RESOLVER MUCHAS CUESTIONES COMPLEJAS

1. Desespiralizarían del DNA:

◦ OriC
◦ 9meros y 13meros
◦ DnaA, DnaB y DnaC (HELICASAS)
◦ Proteínas de unión a cadena sencilla (SSB)
◦ DNA girasa (Topoisomerasa TIPO II)
2. Iniciación de la Síntesis de DNA utilizando un cebador
de RNA
◦ Primasa
◦ Cebador: Segmento de RNA de aprox. 10-12
nucleótidos
3. Síntesis continua y discontinua del DNA.
◦ Ligasas
◦ Fragmentos de Okasaki
Propiedades de las DNA polimerasas
 REPLICACION SEMIDISCONTINUA

▪ La cadena que se sintetiza de modo continuo se conoce

como CADENA ADELANTADA, debido a que lo hace
conforme avanza la horquilla de replicación.
▪ La cadena que se sintetiza de forma DISCONTINUA, se
llama CADENA RETRASADA, debido a que cada
fragmento debe esperar a que las cadenas progenitor
se separen y expongan un fragmento.
▪ Dado que una cadena de DNA se sintetiza de modo
continuo y la otra de manera discontinua, la
REPLICACIÓN ES SEMIDISCONTINUA.
REPLICACION SEMIDISCONTINUA
 REPLICACION SEMIDESCONTINUA.
•Reiji Okasaki de la Universidad de Nagoya-Japón, Realizo
experimentos de marcaje, que una cadena se sintetiza primero como
un fragmento.
•FRAGMENTO DE OKASAKI: “Son pequeños Fragmentos de DNA que
se forman durante la síntesis de la cadena retrasada en la replicación
del DNA y que son rápidamente unidos por la DNA ligasa”.
•La enzima que une los Fragmentos de Okasaki en una cadena
continua se conoce como DNA LIGASA.
•PRIMASA: es una RNA polimerasa que sintetiza una secuencia corta
de RNA, no de DNA.
“La cadena adelantada, cuya síntesis comienza en el origen de
replicación también la inicia una PRIMASA”.
 La Maquinaria que Opera en la Horquilla de Replicación.

El desenrollamiento del Dúplex y la Separación de las Cadenas requiere la ayuda de dos tipos de proteínas que se unen al DNA:
• HELICASA: enzima que abre la molécula de DNA, rompiendo los puentes de hidrogeno que unen las bases nitrogenadas.
• La principal HELICASA de E.Coli es producto del Gen dnaB, es la Maquina principal de desenrollamiento durante la replicación. Tienen una estructura similar a un anillo
y usa ATP
• PROTEÍNAS DE UNIÓN A CADENA SENCILLA O MONO CATENARIO (SSB): Cumplen una función muy importante, se unen de manera selectiva al DNA monocatenario
manteniéndolo en un estado extendido y evitando que se vuelva a enrollar o se dañe.
• La DNA polimerasa I, elimina los iniciadores de RNA.
La Maquinaria que Opera en la Horquilla de Replicación:
Proteínas de unión a cadena sencilla.
La Maquinaria que Opera en la
Horquilla de Replicación
La Maquinaria que Opera en la Horquilla de Replicación.
 ESTRUCTURA Y FUNCIONES DE LA DNA POLIMERASA.

▪La enzima que sintetiza las cadenas de DNA durante la replicación en E. coli es la DNA POLIMERASA III, que es parte de una maquinaria de
Replicación llamada HOLOENZIMA DNA POLIMERASA III.
▪La Holoenzima presenta un componente no catalítico llamado PINZA β (ABRAZADERA): Mantiene la polimerasa relacionada con la plantilla de
DNA. Tiene forma de Dona
▪Las DNA polimerasas poseen dos propiedades contrastantes 1. Tienen que permanecer vinculadas con la plantilla sobre largos tramos para
sintetizar una cadena complementaria continua y 2. no se pueden fijar con tanta fuerza que les impida desplazarse de un nucleótido al siguiente.
REPLICACION EN
CELULAS
EURCARIOTAS
INICIO DE LA REPLICACION EN CELULAS
EUCARIOTAS.
▪Las células eucariotas replican su genoma en pequeñas porciones, denominadas
REPLICONES.
▪En las células humanas la replicación comienza en alrededor de 10000 a 100000
diferentes orígenes de replicación en ambas direcciones.
▪Las secuencias que promueven la replicación se conocen como SECUENCIAS DE
REPLICACIÓN AUTÓNOMA (ARS).
▪Existe una SECUENCIA CONSERVADA DE 11 PARES DE BASES, que funciona como un
sitio de unión especifica para un COMPLEJO DE RECONOCIMIENTO DE INICIO (ORC) (En
la Fase temprana G1 de la mitosis ).
▪Si la ARS muta de modo que sea incapaz de unirse al ORC, no es posible el inicio de
replicación.
▪En eucariotas la síntesis de DNA aparece durante la fase S del ciclo celular
INICIO DE LA REPLICACION EN CELULAS EUCARIOTAS.
INICIO DE LA REPLICACION EN CELULAS
EUCARIOTAS.
INICIO DE LA REPLICACION EN CELULAS
EUCARIOTAS.
▪Las Células que se reproducen en ciclos celulares mas cortos, como
los de los embriones jóvenes de los anfibios, utilizan mayor cantidad
de sitios como orígenes de replicación que las celulas con ciclos
celulares mas largos.
▪Se considera que la elección real de sitios se rige por factores
epigenéticos reales, como las
▪ POSICIONES DE LOS NUCLEOSOMAS,
▪ LOS TIPOS DEMODIFICACIONES DE HISTONAS,
▪ EL ESTADO DE METILACION DEL DNA,
▪ EL GRADO DE SUPERENRROLLAMIENTO Y NIVEL DE TRANSCRIPCION.
 LA REPLICACION SE RESTRINGE A UNA POR CICLO.

1. En el origen de replicación se une ORC (también denominado

“PISTA DE ATERRIZAJE MOLECULAR”).
2. Se unen los FACTORES PERMISIVOS al ORC, para ensamblar un
complejo proteínico-DNA Llamado COMPLEJO DE PRE-
REPLICACION (Mcm2-Mcm7, helicasa replicadora eucariota).
3. Justo antes de iniciar la fase S del Ciclo celular, la actividad de
las proteínas Kinasas clave conduce a la activación de la
Helicasa.
LA REPLICACION SE RESTRINGE A UNA
POR CICLO.

4. Una vez que la replicación de la fase S,

las proteínas del Mcm se mueven con la
horquilla de replicación y son esenciales
para completar la replicación de un
replicón.
Las Mcm de mamíferos no pueden volver
a relacionarse con un origen de
replicación ya utilizado.
LA REPLICACION SE RESTRINGE A UNA POR CICLO.
 La Horquilla de replicación eucariota.
▪ Los fragmentos de Okasaki de cadena retrasada son mas pequeños, cercanos a 150 nucleótidos de longitud.
▪Las cadenas de DNA se sintetizan de manera coordinada por un solo complejo de replicación o REPLISOMA.
▪Existen 5 DNA polimerasas TIPICAS ALFA, BETA, GAMMA, DELTA, ÉPSILON. De ellas las tres (Pol α, δ y ε son
imprescindibles en la replicacion del DNA nuclear las celulas eucariotas.)
▪La polimerasa GAMMA REPLICA EL DNA MITOCONDRIAL y la BETA FUNCIONA EN LA REPARACION DEL DNA.
▪La polimerasa ALFA ESTA MUY RELACIONADA CON LA PRIMASA y juntas inician la síntesis de cada fragmento de
Okasaki.
▪La PRIMASA SINTETIZA UN CEBADOR DE RNA
▪La POLIMERASA DELTA sintetiza la cadena retrasada y la POLIMERASA EPSILON sintetiza la cadena adelantada.
▪En eucariotas la pinza deslizante se conoce como PCNA (CINTURON DE HERRAMIENTAS MOLECULARES)
La Horquilla de replicación eucariota.
 RECOMBINACION DEL DNA: la
recombinación del DNA esta dirigido por
enzimas.

•El entrecruzamiento entre Homólogos se debe a

roturas y unión de cadenas de DNA, dando lugar
al intercambio de información genética.
•El intercambio genético en posiciones
equivalentes a lo largo de dos cromosomas con
alta homología sustancial en su secuencia de DNA
se denomina RECOMBINACION GENERALIZADA U
HOMOLOGA.
•Modelo de recombinación mas aceptado Robin
Holliday y Harold White House 1964.
 Universidad Católica de Cuenca
Unidad de Salud y Bienestar
Carrera de Medicina
Catedra: Biología Molecular y Genética
Tema: Mecanismos de reparación del DNA.

Freddy Castillo Solano

BIOQUIMICO FARMACEUTICO
MAGISTER EN BIOTECNOLOGIA MOLECULAR
 TEXTO Nro 1: BIOLOGIA
TEMA: Reparación del DNA
CELULAR Y MOLECULAR DE
GERALD KARP 8va Edición.
Capitulo 13: Replicación y
reparación del DNA.
13.8. Reparación del DNA.
Reparación por escisión de
nucleótidos, Reparación por escisión
de bases, Reparación de roturas de
doble cadena, Reparación de
Mecanismos de emparejamientos erróneos
(Missmatch).
Reparación del
DNA
TEXTO Nro 2. CONCEPTOS DE Texto Nro 3. Biología Celular
GENETICA DE KLUG 10ma y Molecular de Lodish 7ma
Edición. Edición
Capitulo 15. Mutaciones y Capitulo 5. Mecanismos
Genéticos y Moleculares
Reparación del DNA
15.5 Los organismos Básicos.
Utilizan sistemas de 5.6 Reparación y
recombinación del DNA:
reparación del DNA para
Reparaciones por escisión de
contrarrestar las
mutaciones.
emparejamientos erróneos y
pequeñas inserciones y
eliminaciones
 REPARACION DELDNA
▪El DNA es una de las moléculas mas susceptibles al daño ambiental, y es esencial
que la información genética permanezca de manera primordial “SIN CAMBIO
CONFORME ESTA PASA DE CÉLULA A LA SIGUIENTE Y DE UN INDIVIDUO A
OTRO”.
▪ Cuando una molecula de DNA se afecta por:
▪ RADIACIÓN IONIZANTE el esqueleto de la molécula de DNA sufre
con frecuencia ROTURAS,
▪ REACTIVOS QUÍMICOS, las BASES DE UNA MOLECULA DE DNA
pueden alterarse de manera estructural (Superoxid, radicales
Hidroxilo )
▪ RADIACIÓN UV, las PIRIMIDINAS adyacentes en las cadenas de DNA
tienden a interactuar entre si para formar complejos covalentes y
crear un DIMERO
▪ ABSORCION DE ENERGIA TERMICA: producida por el metabolismo es
suficiente para para eliminar bases de ADENINA y GUANINA.
REPARACION DEL DNAy MUTACIONES
REPARACION DELDNA

Dímeros de pirimidinas
 REPARACION DELDNA
!LA MAGNITUD DE ESTAS ALTERACIONES ESPONTANEAS, O LESIONES, PUEDE RECONOCERSE SI SE
CONSIDERA QUE CADA CELULA DE UN MAMIFERO DE SANGRE CALIENTE PIERDE ALREDEDOR DE
10000 BASES POR DIA!

“LAFALLAPARAREPARARESTASLESIONESPRODUCEANOMALÍAS
PERMANENTES, O MUTACIONES EN ELDNA”.
➢ Si la mutación tiene lugar en una CELULA DESTINADA A SER UN GAMETO, la
alteración genética puede pasar de una generación a otra.
➢Las mutaciones en CELULAS SOMATICAS pueden interferir con la transcripción y
la replicación, lo que causa la transformación maligna de una célula o acelera el
proceso por medio del cual un organismo envejece
 REPARACION DELDNA.

Reparación del
DNA

Reparación por
Escisión de Reparación de Reparación de la
escisión de bases
nucleótidos y Apareamiento rotura de Doble
(BER). DNA
reparación erróneo cadena
Glucosilasa

Unión de
Vía acoplada a Vía genómica Recombinación
Extremos no
transcripción global Homólogos Genética
 REPARACION DEL DNA: ESCISION DE
NUCLEOTIDOS YREPARACION.
•Opera por un mecanismo de corte y pegado que elimina diversas
lesiones voluminosas, incluidos los dímeros de pirimidina y los
nucleótidos en los cuales distintos grupos químicos se unen
• Vía Acoplada a la Transcripción: En la cual las cadenas de DNA plantilla de
los genes que se transcriben de forma activa se reparan de manera
preferencial. Esta vía garantiza que los genes que la célula transcribe de
manera activa reciban prioridad mas alta en la lista de reparación.
• Vía Genómica Global: corrige las cadenas del DNA en el resto del genoma.
REPARACION DEL DNA: ESCISION DE NUCLEOTIDOS Y
REPARACION.
REPARACION DEL DNA: REPARACION POR
ESCISION DE BASES.
▪Este sistema de reparación elimina los nucleótidos alterados generados
por los reactivos químicos presentes en la DIETA y EL METABOLISMO.
▪En este mecanismo participa la enzima DNA GLUCOSILASA, que reconoce
la alteración y remueve la base por medio del corte del enlace glucosídico
que une la base al azúcar desoxirribosa.
▪También participa una enzima llamada ENDONUCLEASA AP (Corta el
Esqueleto de DNA) y UNA DNA POLIMERASA (la actividad de
fosfodiesterasa de la polimerasa B elimina el remanete AZUCAR
FOSFATO).
▪DNA LIGASA tipo III
REPARACION DEL DNA: REPARACION POR
ESCISION DE BASES.
REPARACION DEL DNA: REPARACION DE
PARES DE BASES MAL APAREADAS.
• Este sistema repara emparejamientos erróneos entre G-T
• Este mecanismo de reparación actúa después del proceso
de replicación del DNA.
• Genes importantes en este proceso MLH1 y MSH2
• Las células con al menos una copia funcional de cada uno
de estos genes mantiene reparación del DNA normal.
• Las mutaciones que inactivan estos genes son formas
comunes de cáncer de colon no poliposo heredado

Las mutaciones en MLH1 y MSH2 también

están asociados a:
• Leucemias
• Linfomas
• Tumores de Ovario
• Próstata y endometrio
 REPARACION DEL DNA: REPARACION DE
LA ROTURA DE DOBLECADENA.
▪Los “RAYOS X, LOS RAYOS GAMMA Y LAS PARTÍCULAS LIBERADAS POR LOS ÁTOMOS
RADIACTIVOS” se describen como. RADIACION IONIZANTE PORQUE GENERAN IONES QUE
ATRAVIESAN LA MATERIA
▪La radiación ionizante a menudo provoca ROTURAS DE DOBLE CADENA (DSB), también
son producidas por medicamentos utilizados en QUIMIOTERAPIA (BLEOMICINA) y
radicales libres generados por el metabolismo normal de la célula.
▪Existen dos mecanismos de reparación de la rotura de doble cadena: UNION DE
EXTREMOS NO HOMOLOGOS y RECOMBINACION GENETICA.
▪“LOS DEFECTOS EN AMBAS VÍAS DE REPARACIÓN SE HAN VINCULADO CON EL
INCREMENTO DE LA SUSCEPTIBILIDAD AL CANCER”
REPARACION DEL DNA: REPARACION DE LA ROTURA DE DOBLE
CADENA: EXTREMOS NOHOMOLOGOS.

• Es el mecanismo predominante de reparación del

DNA, para roturas de doble cadena.
• Durante el proceso se pierden varios pares de
bases.
• Pueden producirse DELECIONES, la reparación del
DNA induce mutaciones.
• En ocasiones pueden ocurrir TRANSLOCACIONES
generando genes quiméricos
• Sistema de reparación propenso a errores
• Se activa durante la fase G1 del ciclo celular
REPARACION DEL DNA: REPARACION DE LA ROTURA DE DOBLE CADENA:
RECOMBINACION DE EXTREMOS HOMOLOGOS.

• Las mujeres que heredan un ALELO MUTANTE de

BRCA1:
• Tienen un 60% de probabilidad de desarrollar
cáncer de mama a los 50 años apro.
• 15-40% de desarrollar un cáncer de ovario
• La proteína BRCA1, esta involucrada en la
reparación del DNA inducido por radiación.
REPARACION DEL DNA: REPARACION DE LA
ROTURA DE DOBLE CADENA: RECOMBINACION DE
EXTREMOS HOMOLOGOS.

Este proceso se desarrolla en la fase S tardía o en la fase temprana de G2 del ciclo celular
Este mecanismo de REPARACIÓN DEL DNA ES MUY PRECISO
RESUMEN MECANISMOS DE REPARACION DEL DNA YSU
IMPLICACION CLINICA
 Universidad Católica de Cuenca
Unidad de Salud y Bienestar
Carrera de Medicina
Catedra: Biología Molecular y Genética
Tema: Importancia Biomédica-Xeroderma Pigmentoso

Freddy Castillo Solano

BIOQUIMICO FARMACEUTICO
MAGISTER EN BIOTECNOLOGIA MOLECULAR
TEMA: TEXTO Nro 1: TEXTO Nro 2. CONCEPTOS Texto Nro 3. Biología Articulo Científico:
Xeroderma Pigmentoso BIOLOGIA CELULAR Y DE GENETICA DE KLUG Celular y Molecular de Shining A ligth on
MOLECULAR DE 10ma Edición. Lodish 7ma Edición Xeroderma
GERALD KARP 8va Pigmetosum
Edición.
Capitulo 13. Capitulo 15. Mutaciones y Capitulo 5. DiGiovanna, J. J., &
Replicación y Reparación del DNA Mecanismos Genéticos Kraemer, K. H. (2012).
Reparación del DNA. 15.5 Los organismos y Moleculares Básicos. Shining a light on
13.10. Perspectiva Utilizan sistemas de 5.6 Reparación y xeroderma
Humana: reparación del DNA para recombinación del pigmentosum. Journa
Consecuencias de los contrarrestar las DNA: Reparación por l of investigative
Importancia
defectos en la mutaciones: Reparación por escisión de nucleótidos dermatology, 132(3),
Biomédica: reparación del DNA. Escisión de nucleótidos y corrige aductos 785-796.
Xeroderma enfermedades humanas químicos y distorsiones https://doi.org/10.10
Pigmentoso. (Xeroderma Pigmentoso) de la cadena de DNA 38/jid.2011.426
(Xeroderma
Pigmentoso)
 Xeroderma Pigmentoso
“El Xeroderma Pigmentoso ocurre en todas las ETNIAS y es un trastorno autosómico recesivo de
la reparación del DNA, lo cual predispone a graves efectos epidérmicos, en las personas que lo
padecen y que están expuestas a radiación UV.”
Estas personas han perdido la capacidad de realizar NER (Reparación por escisión de
nucleótidos, por sus siglas en ingles).
Las personas con XP, pueden desarrollar reacciones en la piel que van desde pecas, ulceraciones
de la piel hasta el desarrollo de cáncer de piel.
Esta enfermedad es muy grave e incluso mortal.
 Xeroderma Pigmentoso

El Xeroderma Pigmentoso esta causado por mutaciones que

afectan la sub-via de reparación GLOBAL DEL GENOMA
Importante!!: La capacidad reducida o ausente para la
REPARACION GLOBAL DEL GENOMA, representa una perdida
de las FUNCIONES DE VIGILANCIA necesarias para el
mantenimiento de la integridad del GENOMA y producen la
acumulación de MUTACIONES ONCOGENICAS.
En la actualidad se conocen que son 7 genes mutados los que
están involucrados con el Xeroderma Pigmentoso (XPA al
XPG).
Xeroderma Pigmentoso: Genes involucrados en el XP
Xeroderma Pigmentoso: Genes
involucrados en el XP:
Xeroderma Pigmentoso: Características
•Los pacientes con Xeroderma Pigmentoso desarrollan síntomas a la edad de 1-2 años
•El 5% inician después de los 14 años.
•Facilidad para quemaduras solares.
•Fotosensibilidad aguda.
•Pecas y fotofobia.
•Envejecimiento prematuro.
•60 al 90% presentan anomalías oculares.
•Sordera
•Retraso mental
•Tienen una esperanza de vida corta aprox. 30años
Xeroderma Pigmentoso: Características
A) Paciente con ampollas, luego de ser expuesto por un
corto tiempo a la luz solar

B)paciente de 2 años de Edad con desarrollo maculas

hiperpigmentadas en la piel.

C) paciente presenta cáncer a nivel de la base de la

nariz y mejilla izquierda

D) paciente de 35 años de edad con maculas en su piel

y presenta neurodegeneración y sordera

E) Nubosidad corneal, perdida de pestañas, pterigio.

F) Demarcación aguda, cambios poiquilodermatosos en

la piel expuesta

G) Perdida del borde de los labios, y telangiectasias en

la lengua

H) Carcinoma de células escamosas desarrollada en la

lengua.

I-J) Tricotiodistrofia
Medidas terapéuticas
▪Evitar la exposición al sol
▪Usar ropa protectora
▪Vigilar cuidadosamente la aparición de neoplasmas cutáneos
▪No hay tratamiento curativo
▪Detección temprana
▪Suplementos de Vitamina D

▪La radiación UV posee un potencial energético elevado y un

intenso poder mutágeno. Actúa sobre la iniciación y el
desarrollo del cáncer. Altera los oncogenes y es
inmunosupresora. Por lo tal en la XP el defecto de reparación
del ADN lesionado por la radiación UV es responsable de la
aparición de un número elevado de células mutadas
 Riesgo de Herencia

Debido a que es una enfermedad autosómica

recesiva, la probabilidad es de un 25% (1/4).
El diagnóstico prenatal es posible mediante
PRUEBAS FUNCIONALES DE REPARACION DEL
DNA y SENSIBILIDAD A LA RADIACION
ULTRAVIOLETA en cultivo de AMNIOCITOS o de
VELLOSIDADES CORIONICAS