UNIVERSIDAD PRIVADA DE TACNA

FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

INFORME DE LABORATORIO

ASIGNATURA : “ Microbiología Ambiental ”

DOCENTE : Mtra. Claudia Clavijo Koc

INTEGRANTES : Frank Denilson Marca Soto

SECCIÓN : “A”

CICLO : Sexto Ciclo

SEMESTRE : 2024-I

TACNA – PERÚ

2024
 LABORATORIO MEDIOS DE CULTIVO

INTRODUCCION
Los medios de cultivo son esenciales en laboratorios de microbiología, ya que nos
dan los nutrientes exactos para que los microorganismos crezcan. Estos medios
contienen nutrientes en concentraciones óptimas para favorecer el desarrollo
microbiológico. se usan diversas clases de medios de cultivo, ya sea líquidos como
sólidos, para facilitarnos su evolución y análisis de microorganismos. La primordial
para la preparación, y utilización de estos medios son esenciales para garantizarnos
precisión y seguridad de los resultados obtenidos. Estos medios pueden clasificar
según su naturaleza de sus componentes, como medios complejos, que también
incluyen sustancias complejas como lo pueden ser animal o vegetal en el mismo
grupo con minerales y otros nutrientes. Por otro lado, se pueden distinguir medios
generales, de riqueza selectiva y diferenciales con un propósito en especial en el
cultivo y análisis de microorganismos. (Benjamín Jung ; Gilles J. Hoilat, 2022)
CALDO BRILLA
El agar verde brillante es un medio en microbiología que se utiliza para el
aislamiento y identificación de bacterias como Salmonella, Pseudomonas y
Staphylococcus aureus. incluye extracto de levadura, que proporcionan los
nutrientes necesarios para su crecimiento bacteriano, asegurandonos un medio
altamente rico en nutrientes que favorece una amplia cantidad de bacterias y
cadenas de péptidos. Y con el cloruro de sodio se tiene que añadir para mantener el
equilibrio, creando un entorno adecuado para el desarrollo bacteriano. (holiat,2023)
AGAR MACKONKEY
es un medio de cultivo selectivo y diferencial que solo da permiso al crecimiento de
bacterias gramnegativas. Se puede diferenciar aún más entre estas bacterias según
su capacidad de fermentar la lactosa. Las propiedades selectivas, diferenciales lo
hacen útil tanto para las investigaciones o como lo puede ser para aplicaciones
clínicas. La fermentación de la lactosa es capaz de producir ácidos orgánicos, que
reducen el pH del agar. El agar contiene un indicador de pH que se transforma de
color rosa. Por lo tanto, las bacterias gramnegativos con su fermentación las
lactosas darán a formar colonias de color rosa, mientras tanto las que no fermentan
formarán colonias blancas opacas. Además, algunas especies que forman cápsulas
aparecen de manera distinta en el agar MacConkey. En otras palabras, el agar solo
permite su crecimiento de bacterias gramnegativas, y estas se diferencian entre sí
por su capacidad que tiene con la lactosa, la velocidad de fermentar. Esto convierte
al agar en una herramienta muy útil para poder diferenciar y aislar especies
bacterianas a partir de muestras clínico lógicas. (Benjamín Jung ; Gilles J. Hoilat, 2022)
AGAR MONITOL SALADO
un medio de cultivo selectivo mayormente utilizado para el aislamiento primario de
estafilococos. Su composición está constituida por alcohol polihidroxílico más
conocido como manitol. Este sustrato nos permite identificar estafilococos positivos
de la especie Staphylococcus aureus, debido a su capacidad de su fermentación.
Esta característica se ha considerado un indicador de patogeno. Se pudieron realizar
modificaciones en la fórmula del agar manitol salado, dándonos como resultado un
producto casi parecido al medio de referencia, pero con características
fisicoquímicas y microbiológicas. No se pudieron hallar diferencias entre el producto
que se modificó y el medio de referencia utilizado. (Duran, zhurbenko, viera,2004)
AGAR PAPA DESTROXA
es un medio de cultivo nutritivo sólido no selectivo, lo que podemos deducir es que
permite el crecimiento de variedad de especies bacterianas, Sin embargo, su uso
está especialmente echo para el aislamiento y estudio de hongos filamentosos y
levaduras. El método rápido del Agar se puede emplear para contabilizar colonias
fúngicas en muestras como los siguientes productos. farmacéuticos y alimentos
lácteos. Además, se adecua para la siembra por ejemplo los raspados de piel en la
búsqueda de dermatofitos, que se desarrollan completamente en este medio y
muestran sus colores distintivos. (Marielsa gil,2023)
PEPTONA (DILUYENTE)
es un medio de enriquecimiento líquido no selectivo utilizado como diluyente de
muestras de comidas o otros materiales. Desde una vista química, este medio es
simple, por sus propiedades de peptona de carne, cloruro de sodio y agua, con un
alto valor nutritivo que facilita mucho a el enriquecimiento de la muestra. Además,
cuenta con la capacidad de reparar bacterias dañadas, teniendo mayor eficacia en la
obtención de bacterias del grupo Enterobacteriaceae. En el caso de la recuperación
de Salmonellas, lo recomendable seria el uso de una variante de agua peptonada
que actúa como un medio de enriquecimiento de su muestra. Esta variante tiene
componentes como fosfato y fosfato para potenciar su efectividad. (Marielsa Gil, 2023)

MATERIALES
-Medios de cultivo
-Balanza
-Probeta
-Matraz
-Agua destilada
-Hornilla
-tubo de ensayo
-Algodón
-Papel craf
-pabilo
METODOLOGIA

CALDO BRILLA

1. pesamos el caldo brilla 40g in 1000ml 2.

agregamos el agua destilada en una

probeta
3. mezclar el caldo con el agua destilada en la probeta 4.

revolvemos en la hornilla hasta que se disuelva todo

5. medir 10ml en la probeta y vaciar en un tubo de ensayo

6. tapamos las muestras con algodón y papel graf

7. llevar a la autoclave durante 15min a 121 grados

8. dándonos el siguiente resultado

AGAR MCKONKEY
1. se calcula los gramos que se utilizaran para el experimento para empezar a
trabajar.
 2. se pasa a la balanza para así poder calcular los gramos que son 12,89g para el
mckonkey.

3 . pasamos a diluir el mckonkey en 250ml de agua en una probeta

4. En el cuarto paso ya medido el agua pasamos a echar en un matraz el

mckonkey con el agua a 200ml
5. Como quinto paso llevamos la prueba a la hornilla por media hora hasta que se
evapore toda partícula y se vuelva líquido.

6. En sexto lugar las muestras la sellamos con algodón y el papel craft para que no
entre ninguna partícula y malogre nuestra muestra para llevar a autoclavar

AGAR MONITOL SALADO

1. pesamos 27g de monitol salado
2. agregamos 250ml de agua destilada a una probeta

3. agregamos al matraz los 27g y los 250ml de agua destilada

4. despues se pasa a la hornilla a calentar el agar para eliminar toda partícula y

quede solo liquido
5. finalmente se tapa con algodón y con papel craft para autoclavar

AGAR PAPA DESTROXA

1. se pesa la papa destroxa 1.74

2. se mide los 300 ml de agua destilada

3. agregamos el agua con la papa destroxa pesada al matraz

4. llevamos al horno hasta que se disuelva la papa destroxa y se evapore toda
partícula y sea un líquido único

5. por último se sella con algodón

PREPARACION PEPTONA (DILUYENTE)

1. como en los procedimientos anteriores pesamos la peptona 0,2g
 2. en segundo paso agregamos la peptona y el agua destilada al matraz

3. en tercer paso llevamos a la hornilla para calentar y eliminar toda sustancia 1

min aproximadamente
4. por cuarto paso las muestras realizadas que obtuvimos las colocamos en el
matraz y en unos pequeños tubos y sellarlo con algodón y papel para llevarlo a
congelar.

AGAR EOSINA AZUL DE METILENO

Este medio es selectivo y diferencial, diseñado para el crecimiento de Entero
bacterias. Su función es distinguir entre bacterias Gram negativas que fermentan
rápidamente la lactosa y las que ya no, además de poder identificar Micrococcus
spp. Para lograr lo mencionado, se utiliza la eosina y el azul de metileno, los cuales
sirven para el crecimiento de muchas bacterias Gram positivas. Las bacterias que
fermentan llegan a producir colonias de color azulado con un brillo metal, mientras
que las que no generan colonias incoloradas. Este método tiene la facilidad de
diferenciar entre organismos con capacidad o ya sea sin capacidad para utilizar la
sacarosa, lo que nos facilita la clasificación de distintas clases de bacterias según su
capacidad de fermentación como lo es por otro lado la coloración de las colonias
que nos quedan como resultado. (de Instrucción, 2020)
METODOLOGIA
Preparación del medio deshidratado: Mezcla 36,5 gramos de polvo en 1 L de agua
destilada y dejar que repose durante 10 minutos a temperatura ambiente. Luego,
llevada para la mezcla a ebullición por unos minutos, agitar de vez en cuando.
Esterilizar durante 15 minutos a 121ºCelcios y luego dispensar la solución en placas
estérilizadas.
Preparación del medio que ya preparamos: Colocamos los frascos que vamos a
ocupar llenamos un recipiente con agua suficiente para poder cubrirlos, calentamos
hasta que lleguen a su punto de ebullición y se disuelvan completamente. Agitamos
enérgicamente para diluir mejor la mezcla, luego abre los frascos y retiramos el
precinto de aluminio y distribuimos el medio en placas esterelizadas. (de Instrucción,
2020)

AGAR SALMONELLA-SHIGUELLA
es un medio que puede tener características moderadamente selectivas y
diferenciales. Su propósito es aislar bacterias entero patógenas que pertenecen a
los géneros Salmonella y Shigella, como pueden ser de muestras provenientes del
ambiente o de muestras clínicas.
El agar SS es una composición muy compleja, que incluye extracto de carne,
peptona, verde brillante y agua destilada. Debido a su buena selectividad, adecuado
para siembra de muestras que puedan contener una variedad de flora.

En los laboratorios el medio es altamente usado para poder detectar la presencia de

Salmonella y Shigella este medio podemos ocuparlo en muestras de heces, aguas
residuales, agua potable y alimentos. (Marielsa, 2023)
METODOLOGIA
pesamos 63 gramos del medio deshidratado y disolverlos en 1L de agua destilada.
Calentar la solución y vamos a agitarla. La mezcla puede alcanzar la ebullición
durante unos cuantos minutos.

Es importante que destaquemos que este medio no puede auto clavarse. Después
de su disolución, se vierte rápidamente sobre placas esterilizadas.

Es esencial permitir que las placas enfríen a temperatura ambiente antes de poder
sembrar nuestras muestras. podemos proceder a sembrar directamente la muestra
original, colocándolo en una sección del agar y luego utilizando el método de
estriado por agotamiento a partir del área. (Marielsa, 2023)
AGAR CHOCOLATE
es un medio de cultivo sólido, rico, que no es selectivo ni diferencial. Se usa
principalmente para el aislamiento de microorganismos que tengan demandas
nutricionales específicas, aunque esta puede soportar el crecimiento de variedades
de bacterias.
El agar chocolate debe su nombre característico por su color marrón que es algo
similar al chocolate. Su preparación es algo similar al agar sangre, con la diferencia
de que la sangre se calienta para poder romper los glóbulos.
la preparación del medio es delicada, como lo es el agar sangre ya mencionado
anteriormente. Por lo cual, muchos laboratorios adquieren este medio ya echo a
través de comercio que nos garantizan su calidad del producto. (gil, 2022)
METODOLOGIA
primeramente, pesamos la cantidad que nos pide este medio y así poder transferirla
a un matraz que contiene agua.
En segundo lugar, se calienta y se agita con movimientos circulares hasta que el
medio se disuelva por completo, así permitiéndonos que hierva durante 1 minuto.
El tercer paso sería colocar el matraz en la autoclave para así esterilizar el medio a
una temperatura de 121 calcios durante veinte minutos.
Por ultimo la esterilización en la autoclave, permite que el medio repose hasta que su
temperatura pueda bajar a un rango aproximado de 56 y 70 °C. En este punto, se
echa la sangre y se pasa a mezclar cuidadosamente hasta que el medio obtenga
ese color marrón característico. (gil, 2022)
CALDO SELENITO
medio de cultivo líquido selectivo. Su principal propósito es enriquecer muestras que
se tiene la duda de que contengan bacterias entero patógenas del género
Salmonella. La composición química nos favorece a la recuperación de
microorganismos, al tiempo que a crecimiento de otros. Ejerce algo toxico sobre la
mayor parte de las bacterias del grupo Enterobacteriaceae. Permite el crecimiento
de variedad de cepas de Shigella y no interfiere con el crecimiento de
Pseudomonas. Se usa el caldo selenito en investigaciones epidemiológicas que
llevan consigo enfermedades así como su estudio en pacientes asintomáticos.
(Alfonso, 2020)
METODOLOGIA
dispone de los ingredientes necesarios, para poder medir:
 4 g selenito de sodio anhidro.
 10 g fosfato de sodio anhidro.
 5 g peptonas.
 4 g lactosa.
Ya pesado disolvemos en 1 litro de agua destilada. Se puede aplicar un breve
calentamiento para asegurar que los compuestos se disuelvan por completo.

CALDO UREA
medio de cultivo líquido que lo utilizan para detectar enzima ureasa en algunos
microorganismos.
Puede descomponer compuestos orgánicos no todos los microorganismos tienen
esta función de producir esta enzima. Por lo cual su detección en un laboratorio
facilita la observación de ciertas bacterias permite ayudarnos a diferenciar entre
variedades de especies dentro el género. La urea es muy eficaz para obtener el
género Proteus de otras clases de géneros por ejemplo la Enterobacteriaceae,
debido a su rápida reacción que presenta. (Alfonso, 2020)
METODOLOGIA
primeramente, a pesar la cantidad recomendada por la fábrica que hizo el medio
Luego, se disuelve en agua destilada y se esteriliza a 121 °C por 15 minutos.
Después de un corto reposo ya frio nuestro medio, se agregan 100 ml de la solución
de urea al
20 por ciento, esterilizamos por filtración. Por último, el medio se pasa a tubos
estériles. (Alfonso, 2020)

INDICADORES DE PH
INDICADOR COLOR EN RANGO DE COLOR TIPO DE
DE PH MEDIO ACIDO VIRAJE MEDIO AGAR
BASICO
Púrpura de LIA Lysine
Bromocresol AMARILLO 5,2 – 6,7 PURPURA Iron
Agar

Azul de Agar CLED

Bromotimo AMARILLO 6,0 – 7,5 AZUL lactosa,
citosina,
deficiente en
electrolitos

Azul de Timol AMARILLO 8,0 – 9,7 AZUL Agar TCBS

Rojo neutro ROJO 6,7 – 8,0 AMARILLO VRBA violeta
Rojo bilis Agar

Rojo de fenol AMARILLO 6,5 – 8,0 ROJO Agar XLD

Xylose Lysine
Deoxycholate
Agar

CONCLUCIONES
Los medios de cultivo son esenciales en microbiología para el desarrollo de
diferentes microorganismos, como bacterias. Algunas conclusiones importantes
sobre los medios:
1. Nos ayudan en el aislamiento también en su cultivo de microorganismos, lo
cual es importante para su estudio.
2. Los microorganismos pueden tener requisitos específicos de nutrientes, pH,
temperatura y atmósfera para que pueda crecer, por lo que se deben trabajar
medios de cultivo adecuados para un mejor aislamiento.
3. Existe lo del conteo de placas donde solo se cultiva una pequeña parte de la
muestra microbiana presente debido a que muchos microorganismos no se
pueden cultivar sobre los medios convencionales.
 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Jung, B., & Hoilat, G. J. (2022). MacConkey Medium. StatPearls Publishing.

Agar verde brillante Composición, principio, preparación, resultados, usos. (2022, enero
23). Microbiology Note – Online Biology Notes.
https://microbiologynote.com/es/composici%C3%B3n-de-agar-verde-brillante/

Gil, M. (2023, junio 2). Agar papa dextrosa. Lifeder. https://www.lifeder.com/agar-papa-

dextrosa/

Durán Vila, A., Zhurbenko, R., & Viera Oramas, D. R. (2004). Propuesta de una
modificación en la formulación del medio agar manitol salado utilizado en el aislamiento
de estafilococos de importancia clínica. Revista cubana de medicina tropical, 56(3), 172–
177. http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=s0375-07602004000300004&script=sci_arttext

Gil, M. (2023, junio 2). Agua peptonada. Lifeder. https://www.lifeder.com/agua- peptonada/

Alfonso, G. (2020). Caldo selenito. Mexico: Alfa.

de Instrucción, M. L.–E. (2020). Levine Agar – E.M.B. argentina: Alfa.

gil. (2022). Agar chocolate. Ecuador: Alfa.

Marielsa, G. (2023). Agar Salmonella-Shigella. Venezuela: Alfa.