UNIVERSIDAD TÉCNICA DEL NORTE

UNIVERSIDAD ACREDITADA RESOLUCIÓN No. 001-073-CEAACES-2013-13

FACULTAD INGENIERIA EN CIENCIAS AGROPECUARIAS Y AMBIENTALES
CARRERA DE INGENIERÍA FORESTAL
Nombre: Cynthia Buitrón
Asignatura: MICROBIOLOGÍA
Práctica N°: 2
Tema: Preparación de medios de cultivo

INTRODUCCIÓN
El medio de cultivo no es más que un sustrato el cual aporta los nutrientes indispensables
para el crecimiento de microorganismos. Teniendo en cuenta que las necesidades
nutricionales de los MO varían según la especie, es necesario poder contar con varios tipos
de medios de cultivo que satisfagan esas necesidades. Hay microorganismos muy poco
exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy
exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para
crecer.

Existen medios cuya composición permite el crecimiento de:

1. Un gran número de especies (agar nutritivo, caldo ordinario, agar de Sabouraud),
2. Determinados microorganismos (impidiendo el desarrollo de otros), son los
denominados medios selectivos.
3. Otros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas
fisiológicas o test bioquímicos (utilización de citratos, acidificación a partir de
azúcares, etc.).

OBJETIVOS

1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el

desarrollo de los microorganismos.

MATERIALES
• Recipientes (opciones, depende de lo que tengan)
o Frascos de cristal, con tapa metálica y que quepan en la olla de
presión
 • Olla
• Olla de presión
• Colador, cedazo, cernidor o gasa doble
• Espátula – Cuchara
• Soporte – rejilla - trapo
• Varilla de vidrio – Agitador – Cuchara de madera o plástico
• Papel de aluminio
• Agua destilada
• Pinza grande
• Bandeja
• Papel absorbente - Servilletas
• Papas
• Gelatina sin sabor
• Azúcar blanca

DESARROLLO
Esterilización de frascos / tubos de ensayo / placas Petri (Hacer esta
actividad un día antes de la preparación de medios).

• Frascos de vidrio

1. Antes de la esterilización asegurarse de que la tapa del frasco, no venga con un disco
de plástico o cartón en su interior, de ser así, retirarlo. Preocuparse de que el proceso
se haga con las manos limpias y evitando tocar el interior de los mismos.
2. Lavar muy bien los frascos con agua tibia y detergente, desprender las etiquetas de él.
3. Dentro de una olla alta (de acuerdo a los frascos que vayas a esterilizar) colocar una
rejilla metálica o un paño limpio doblado varias veces para evitar que al momento en
que el agua empiece a hervir los frascos empiecen a golpearse entre sí. Acomodar los
frascos sin tapa boca arriba sobre la rejilla o paño, ubicar las tapas también. Cubrir
con agua tibia o caliente, llevar al fuego y hervir por 20-30 minutos a partir de su
ebullición.

4. Sacar los frascos calientes sujetándolos idealmente con unas pinzas largas u otra
herramienta que nos ayude a no quemarnos. Acomodarlos sobre una bandeja que
tenga un papel absorbente, para este momento es necesario asegurarse que no haya
corrientes de aire en el lugar de trabajo, esto es para prevenir que se quiebren los
frascos de vidrio.
5. Dejar los frascos en la bandeja unas 12 horas para que solos se hagan “al vacío” sin
necesidad de volver a hervirlos.
Preparación del Medio de Cultivo.

Fórmula de Papa Dextrosa Agar (PDA) – medio litro

• 100 gramos de papa
• 10 gramos de azúcar blanca
• 10 gramos de Agar-Agar – Gelatina sin sabor (3 sobres)
• 500 ml de agua destilada
Procedimiento
• Pelar las papas y picarlas en cuadrados de aproximadamente 1cm2.
• Hervirlas en agua destilada durante 1 hora
• El líquido obtenido se pasa a través del colador o una gasa doble
• Añadir el azúcar
• Completar con agua destilada hasta los 500 ml
• Añadir la gelatina sin sabor
• Homogenizar con una cuchara de madera o plástico (si no se disuelve,
calentar nuevamente sin dejar hervir y removiendo constantemente)
• Verter en los frascos bien limpios
• Presentar las tapas sin cerrar completamente, poner papel de aluminio por
encima

Esterilizar:

• Poner un pedazo de tela en el fondo de la olla de presión (trapo cualquiera)

para impedir que los frascos toquen el fondo de la olla y se revienten con el
calor
• Añadir 2-3 centímetros de agua.

• Colocar los frascos con el medio tapados (no completamente, sino los
frascos acumulan presión y estallan)
• Cerrar la olla, calentar a fuego fuerte hasta que la pesa comience a
moverse y liberar vapor.
• Bajar el fuego (suave), dejar por 15-20 minutos.
• Apagar y esperar a que la olla baje la presión y esté totalmente enfriada (No
se debe abrir antes pues la diferencia de presión o temperatura hará que
entre aire “no estéril” a los frascos, creando un peligro de contaminación)
• Dejar enfriar y con guantes desinfectados con alcohol se terminan de cerrar
los frascos para evitar la entrada de aire no estéril
 • Almacenar en la refrigeradora.

OTRA FÓRMULA QUE SE PUEDE EMPLEAR

1. Un sobre de gelatina sin

sabor
2. Un cubito de caldo de res
3. Disuelve el cubo de caldo y el
sobre de gelatina en 1/2 litro
de agua. Déjalo hervir durante
el tiempo que diga el fabricante, normalmente sobre 10 minutos
4. Colocar la mezcla en cada envase y ponles la tapa.
5. Esterilizar
Resultados:

1. ¿Cuál es la importancia que tienen los medios de cultivo para el

crecimiento de microorganismos?
Los medios de cultivo son importantes ya que permiten el crecimiento y desarrollo de
diferentes estructuras, tienen como principio básico, lograr las condiciones de crecimiento
ideales para microorganismos. Los tarros de vidrio son adecuados para transformar
(Ortega, Espinosa, Espinosa, & Rodríguez, 2000)
2. Del medio de cultivo preparado (PDA), realice una búsqueda e indique
para que tipo de microorganismos se puede emplear.
Medio de cultivo Agar de Dextrosa y Papa es de la marca DIBICO, y es conocido como PDA
por sus siglas en ingles, tiene la infusión de papa como fuente de almidones y la dextrosa
son la base para el crecimiento de hongos y levaduras. El bajo pH (3.5) evita el crecimiento
de las bacterias.
3. Realice una búsqueda y enumere al menos 5 medios de cultivo para
microorganismos (diferentes al que preparó), de cada uno indique la
formulación, así como para que tipo de microorganismo se emplea.
• Mac Conkey Agar: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram
negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos a partir de
muestras clínicas, aguas y alimentos. Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
• Thayer Martin: El Agar Thayer Martin preparado con medio base GC, y
adicionado de suplementos nutricionales, hemoglobina e inhibidores,
permite obtener un buen desarrollo de Neisserias patógenas tales como N.
gonorrhoeae y N. meningitidis.
• Caldo lactosado: El caldo lactosado es un medio de cultivo líquido, no
selectivo, utilizado principalmente como medio de pre-enriquecimiento en el
aislamiento de cepas de Salmonella provenientes del análisis microbiológico
realizado a alimentos procesados, productos lácteos o agua.
• El medio Löwenstein Jensen que se caracteriza por tener un color verde
opaco y pálido, es especialmente práctico para el aislamiento, cultivo y
diferenciación de micobacterias, pero no solo de las del complejo
tuberculoso sino también de otras como: Mycobacterium
avium, Mycobacterium gordonae y Mycobacterium bovis.
• Agar con Eosina y Azul de Metileno: El Agar con Eosina y Azul de Metileno
es una combinación del medio de Levine y el de Holt-Harris y Teague,
contiene una mezcla de peptonas según Levine y presenta dos
carbohidratos lactosa y sacarosa.
Este medio de cultivo permite una diferenciación muy clara entre las colonias
de organismos fermentadores de lactosa y aquellos que no la fermentan; el
contenido de eosina y azul de metileno inhiben en cierto grado organismos
Gram positivos.

• Conclusiones:
o Los medios de cultivo son uno de los métodos más usados para el análisis
de microorganismos con varios fines, como el de multiplicación,
identificación, antibiograma, entre otros, y puede ofrecer información
valiosa sobre los mismos si se realiza de manera adecuada e higiénica
para evitar la contaminación del medio y la alteración de los resultados.
o Los medios de cultivo son esenciales para determinar el crecimiento
bacteriano en los diferentes medios de cultivo ya que las bacterias se
reproducen por fisión binaria (bacterias similares a la madre)
o por brotación (formación de una protuberancia inicial) que se agranda y
toma el tamaño de una célula y posteriormente se separa por eso es
esencial en la microbiología la observación y crecimiento bacterianos para
su posterior análisis en caso de enfermedades patógenas causantes de
muertes en animales.
 o La preparación adecuada de un medio de cultivo nos permite disponer de
los nutrientes y condiciones necesarias para favorecer el crecimiento de los
microorganismos en el laboratorio.

• Bibliografía:
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CULTIVO PARA EL CRECIMIENTO Y ESPORULACIÓN DE SAROCLADIUM ORYZAE (SAWADA)
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