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L
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PERU

FACULTAD DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

“Año del bicentenario del Perú: 200 años de independencia”

ANALISIS PARA DETERMINAR E.Coli Y

COLIFORMES TOTALES
MEDIOS DE CULTIVO SOLIDO (AGAR EN PLACA)

CATEDRA: Microbiologia de alimentos

CATEDRATICO:
INTEGRANTES: ALFONZO PAUCAR, Carmen
PAUCAR SEGURA, Yahaira
PALACIOS LAZARO, Erika Rocio
RODRIGUEZ ÑAVINCOPA, Xiomara
 Huancayo – Perú
2021

AGAR VERDE BRILLANTE

El agar verde brillante es un medio de cultivo sólido, con alto grado de selectividad. Se
utiliza exclusivamente para el aislamiento de cepas del género Salmonella, sin
embargo, existen algunas excepciones, como la especie typhi y paratyphi que no
crecen en este medio.
La búsqueda del género Salmonella es frecuente en muestras de heces, agua o
alimentos. En este sentido, este medio puede ser de gran utilidad. Este agar fue creado
en 1925 por Kristensen, Lester y Jurgens, más tarde fue modificado por Kauffmann.
Está compuesto por pluripeptonas provenientes de digerido péptico de tejido animal y
digerido pancreático de caseína, además contiene extracto de levaduras, cloruro de
sodio, lactosa, sacarosa, rojo fenol, verde brillante y agar-agar.
Se caracteriza por ser un medio bastante inhóspito para la mayoría de las bacterias,
favoreciendo el crecimiento de Salmonella, sin embargo, algunos coliformes son
capaces de subsistir en el mismo, desarrollándose débilmente.
Es importante destacar que en este medio no crece el género Shigella y tampoco
Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Por tanto, si se desea aislar a estos
microorganismos se deben usar otros medios, como el agar XLD, entre otros. (Gilar M.,
2019)
COMPOSICION
Provisto
 Medio de Cultivo Deshidratado.
Composición: (en gramos por litro)
INSTRUCCIÓN
Medio Deshidratado:
Suspender 58,1 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver
por calentamiento agitando con frecuencia. Hervir durante un minuto hasta su
completa disolución. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 45-
50 ºC, mezclar bien y dispensar en placas. Si es necesario, deje secar durante
aproximadamente 2 horas con las cubiertas parcialmente retiradas.
ALMACENAMIENTO
Deshidratado: El medio de cultivo provisto es estable hasta la fecha indicada en su
envase, mantenido en su envase original y conservado en ambiente seco, entre 10-
30°C.
PROCEDIMIENTO
 Sembrado Estriar la superficie del medio.
 Incubación Colocar en estufa de cultivo a 35-37 ºC durante 18-24 hs, en
aerobiosis.
CONTROL DE CALIDAD

Colonias típicas
Las colonias típicas del género Salmonella son pequeñas, incoloras, rosadas o fucsias,
transparentes u opacas, sobre el medio coloreado de rosado a rojo.
RESULTADOS
Microorganismos fermentadores de lactosa y/o sacarosa: colonias amarillas verdosas,
rodeadas por halo amarillo.
Microorganismos no fermentadores de lactosa y/o sacarosa: colonias blanco rosadas o
trasparentes, rodeadas por halo rojizo.
CONCLUSION
Agar Verde Brillante (BGA) se utiliza para el aislamiento selectivo de Salmonella spp,
distinto a S. typhi, en alimentos y muestras clínicas, a través de la fermentación de la
lactosa/sacarosa.

AGAR MAC CONKEY

MARCO TEORICO
El agar MacConkey es un medio de cultivo sólido que permite el aislamiento exclusivo
de bacilos Gram negativos pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, incluyendo
las especies oportunistas y las enteropatógenas. Por esta razón es un medio selectivo y
además permite distinguir entre bacilos fermentadores y no fermentadores de la
lactosa, lo que lo hace un medio diferencial. Es uno de los medios de cultivo más
utilizado en un laboratorio de microbiología. También se puede usar para aislar a otros
bacilos entéricos que habitan en el tracto gastrointestinal, pero que no pertenecen a
Enterobacteriaceae, como Aeromonas sp, Plesiomonas sp, entre otros. Finalmente,
puede aislar otros bacilos Gram negativos no fermentadores de glucosa que se
encuentran en ambiente, agua o suelos, pero que en ocasiones pueden ser patógenos
oportunistas como Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcalígenes sp,
Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, entre otros. (Gilar M.,
2019).
Medio de cultivo selectivo, adecuado para el aislamiento de microorganismos Gram
negativos tolerantes a la bilis, a partir de muestras de origen clínico (deposiciones,
orina), aguas y aguas residuales, y alimentos, como también muestras de origen
farmacéutico e industrial. Su formulación permite la diferenciación de enterobacterias
fermentadoras y no fermentadoras de lactosa, El contenido de sales biliares y cristal
violeta inhibe el desarrollo de bacterias Gram positivas, sin impedir la recuperación de
Gram negativos. Los aislados de bacterias coliformes presentan una coloración rosa-
rojo típica, que puede incluir halos de precipitación de sales biliares como resultado de
la acidificación por la fermentación de la lactosa en la zona que rodea las colonias. Las
colonias de bacterias no fermentadoras de lactosa permanecen incoloras y no
producen halos de precipitación, aún en cercanía de colonias de coliformes. (VALTEK,
2016)
CONTENIDO Y COMPOSICION
6 FRASCOS x 50ml

INSTRUCCIÓN
Colocar los frascos cerrados en baño maría y llevar lentamente hasta ebullición para
fundir el medio de cultivo solido contenido en los mismos.
Una vez que se ha fundido el medio de cultivo, retirar cuidadosamente los frascos del
baño maría y dejar enfriar.
Cuando alcanza la temperatura 45-50 °C, abrir distribuir asépticamente placas de Petri
estéril.
CARACTERISTICAS
Medio de cultivo color rojizo purpura
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo listo para usar en frascos 10-35°C
Cuando se distribuye en placas Petri, debe conservarse a 2-8°C
PROCEDIMIENTO
 SIEMBRA
En superficie: inocular directamente la muestra por estría
En profundidad: inocular una alícuota de la muestra directa o de su dilución.
Verter un volumen del medio de cultivo fundido y enfriado a 40-45°C.
Homogenizar mediante movimientos de vaivén y rotación. Dejar solidificar.
 INCUBACION
En aerobiosis, a 35-37°C durante 18-48 horas.

CONTROL DE CALIDAD

RESULTADOS
Microorganismos fermentadores de lactosa y/o sacarosa: colonias amarillas verdosas,
rodeadas por halo amarillo.
Microorganismos no fermentadores de lactosa y/o sacarosa: colonias blanco rosadas o
trasparentes, rodeadas por halo rojizo.

CONCLUSION
 Los coliformes crecen con colonias rojas rodeadas por un halo de precipitación
de las sales biliares, por acidificación. Las otras enterobacterias crecen con
colonias incoloras. Proteus no invade la placa. E. coli forma colonias rojo
 violáceas con halo. Enterobacter aerogenes crece menor que E. coli y sin halo.
Salmonella crece incolora.

AGAR EMB
MARCO TEORICO
Es un medio de cultivo sólido selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento de
bacilos Gram negativos, principalmente de la familia Enterobacteriaceae, y otros
bacilos Gram negativos no exigentes. También se le conoce con las siglas EAM, que
significa eosina-azul de metileno.
Este medio fue creado por Holt-Harris y Teague en 1916. Contiene peptona, lactosa,
sacarosa, fosfato dipotásico, agar, eosina, azul de metileno y agua. Es muy similar al
agar MacConkey, sobre todo si se usa el agar EMB modificado por Levine, que no
contiene sacarosa.
Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano. La
diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos
que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno;
éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram
positivas. El agar es el agente solidificante. Muchas cepas de Escherichia coli y
Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la
lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no
lo hacen son incoloras.
COMPOSICION
CONTENIDO Y COMPOSICIÓN Código B0210105: envase x 100 g. Código B0210106: envase x
500 g.

INSTRUCCIÓN
Suspender 36 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 minutos. Calentar
con agitación frecuente y llevar a ebullición hasta su disolución total. Esterilizar en
autoclave 121°C durante 15 minutos. Distribuir en placas de Petri estériles.
CARACTERISTICAS
Medio de cultivo deshidratado: color púrpura, homogéneo, libre deslizamiento. Medio
de cultivo preparado: color púrpura vinoso
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados BD EMB Agar, Modified (placas Stacker de 90 mm).
Controladas microbiológicamente.
Materiales no suministrados Medios de cultivo auxiliares, reactivos y equipo de
laboratorio que se requiera.
 Una vez recibida la muestra en el laboratorio, extenderla tan pronto como sea posible.
La placa de extendido se emplea sobre todo para aislar cultivos puros en muestras que
contengan flora microbiana mixta. Si por el contrario el material se cultiva
directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección pequeña cercana
al borde, extendiendo luego a partir de esta área inoculada. Asimismo es preciso
extender un medio no selectivo, p. ej. agar Columbia, con sangre de carnero al 5% para
suministrar una indicación de otros microorganismos presentes en la muestra. Incubar
las placas, protegidas de la luz, a una temperatura de 35 ± 2 °C durante un período de
18 a 24 h.

CONTROL DE CALIDAD
Incubar las placas en condiciones aerobias a una temperatura de 35 ± 2 °C durante un
período de 18 a 24 horas

RESULTADO

CONCLUSION

Por medio de esta practica se logró aprender, que tecnicas se utilizan para poder hacer
un medio de cultivo, sea cual sea el que se utilice.

BIBLIOGRAFIA
 Gilar M., 2019. Agar MacConkey: fundamento, preparación y usos. Recuperado
de: https://www.lifeder.com/agar-macconkey/
 VALTEK, 2016. MacConkey Agar: Características. Recuperado de:
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5b5b1f09563
65.pdf
 Gilar M., 2019. Agar verde brillante: fundamento, preparación y usos.
Recuperado de: https://www.lifeder.com/agar-verde-brillante/
 European Pharmacopoeia. 6th Ed. 2007. American Public Health Association.
Standard Methods for the Examination of Water and Waster water, 11th
Edition APHA, New York, 1960. American Public Health Association.
Recommended Methods for the Microbiological Examination of Foods, APHA,
Inc. New York, 1958.
 MacFaddin. 1985. Media for isolation-cultivation-identificationmaintenance of
medical bacteria, volume 1. Williams & Wilkins, Baltimore, Md.
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6054e713a29
0e.pdf
 Levine, M. 1918. Differentiation of B. coli and B. aerogenes on a simplified
eosin-methylene blue agar. J. Infect. Dis. 23:43-47.