GUIA N°3 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

Miembros:

Ariza Bohórquez Saray

Arizal Padilla Ana Maria

Rubio Conde Maria Mercedes

Sierra Vergara Saara Sofia

Grupo: CEPA

Salón 02-B

Fecha de realizacion de la practica: 21/09/2023

Fecha de entrega:21/09/2023

Universidad de Córdoba

Facultad de Ingenierias

Ingenieria de Alimentos

Sede Berastegui

2023
1. Diagrama de flujo
1. Diagrama de flujo preparacion de medio de cultivo solido

Figura 2. Diagrama de flujo preparacion de medio de cultivo liquido

Figura 3. Diagrama de flujo preparacion medio de cultivo inclinado / prueba bioquimica

RESULTADOS

Solido

Figura 4. Resultado medio solido XLD Xilosa Lisina Desoxicolato

Liquido

Figura 5. Resultado medio liquido MR-VP Metilo Voges Proskauer

INCLINADO/PRUEBA BIOQUIMICA

Figura 6. Resultado Medio Inclinado/Prueba Bioquimica

Lysine Iron Agar

ANALISIS DE LOS RESULTADOS

Medio de cultivo solido (XLD)

Al haber realizado la preparación del medio de cultivo XLD agar (agar xilosa lisina desoxicolato), se
obtuvieron 5 cajas petri con 20ml; cada caja petri presentó un color rosa brillante o rojo y una
consistencia gelatinosa.

Este es un medio de cultivo selectivo diferencial para microorganismos gran negativos, constituido por
extractos de levaduras, agar, desoxicolato de sodio, una variedad de carbohidratos capaces de sufrir una
fermentación (lisina, Sacarosa, gilosa y lactosa), rojo de fenol, citrato férrico y tiosulfato de sodio.

El proceso de diferenciación de este medio inicia a partir de sus componentes, principalmente, los
extractos levadura actúan como fuente de nutrientes y vitaminas para los microorganismos y el agar
como agente que permite su solidificación.

El desoxicolato de sodio sirve como agente selectivo, pues inhibe el crecimiento de los microorganismos
gran positivo, permitiendo únicamente el crecimiento de grandes negativos. Seguidamente actúan los
carbohidratos (a excepción de la lisina) pasando por un proceso de fermentación el cual permite que se
lleve a cabo una reacción de acidificación gracias a la cual, el rojo de fenol sirve como indicador de pH
ácido o alcalino. Al ocurrir un proceso de acidificación el medio mantendrá un pH alcalino por lo que
habrá una transición de color rojo a amarillo; y gracias a la descarboxilación de la lisina y la formación de
una amina el medio cambiará nuevamente a un pH alcalino con color rojo, lo cual dará paso a la
formación del sulfuro de hierro. [1]

Medio de cultivo liquido (MR-VP)

En la preparación de medios de cultivos líquidos se utilizó caldo MR-VP; por el cual se obtuvieron 3 tubos
de ensayos pequeños completamente líquidos y de color amarillento o naranja pálido.

Este es un medio que indica el proceso de metabólico y productos finales de la Glucosa vía ácido mixtas
(ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico) compuesto por Pluripeptona, Glucosa y Fosfato Dipotásico.
Al adicionar y actuar el rojo de metilo como indicador para el reconocimiento de las distintas rutas
metabólicas de los microorganismos, se puede verificar la presencia de productos ácidos. Además, la
presencia de la coloración rojiza en el medio luego de agregar hidróxido de potasio muestra la oxidación
del acetil carbonilo quien pasa a ser diacetilo para reaccionar con la peptona del medio con Glucosa. [2]

Inclinado/ prueba bioquimica (LIA)

Para la preparación de los medios de cultivos inclinados se utilizó Lisina Hierro Agar (LIA) mediante el
cual se obtuvieron 2 tubos grandes por 10ml cada uno, ya que durante el proceso de calentamiento y
dilución hubo pérdida de material, y por indicación de la auxiliar de laboratorio fue distribuido en 2
tubos grandes por 10ml. Cada tubo presentó un color café.

Este es un medio de cultivo compuesto por Peptona de gelatina, extractos de levaduras, Glucosa, Lisina,
Agar, Tiosulfato de sodio, púrpura de bromocresol y citratos de hierro y amonio.

La principal fuente de nutrientes para los microorganismos es los extractos de levaduras y la peptona; la
Glucosa será fermentada y acidificará el medio, alterando su pH, lo cual se demuestra con un cambio de
color amarillo (medio ácido) o color púrpura (medio alcalino) gracias a la presencia del Púrpura
Bromocresol.

La presencia de macroorganismos fermentadores de azúcar en estos medios mostrará tonalidades

distintas respecto al tubo, para el fondo habrá un color amarillo y en su superficie uno violeta debido al
consumo de las peptonas que estaban presentes en el medio. [3]

CONCLUSION

Gracias a este laboratorio obtuvimos medios de cultivo [XLD, MR-VP, LIA]. Lo cual se pudo lograr llevando
a cabo procedimientos de forma precisa y ordenada como se mostraba en la guía, obteniendo así los
medios esperados. Cabe resaltar que debido a un descuido en la incubadora el medio inclinado (LIA)
tomó una forma que no era la correcta.

Podemos concluir que los medios de cultivos poseen nutrientes y finalidades distintas, las adecuadas
para la distinción de microorganismos, por lo cual se prepararon diversos de estos, ya que un medio
líquido es usado para facilitar el desarrollo bacteriano de células estresadas, los medios solidos por su
parte cumplen un papel importante en la obtención de bacterias aisladas; puesto que se forman colonias
en la superficie de este, también es fundamental en el estudio de la morfología de estas colonias, a
diferencia de los medios líquidos y por último, los medios semisólidos son usados para el estudio de la
motilidad bacteriana.

BIBLIOGRAFIA

[1] De, P. P. D., & Vitro, 10 Unidades Para Uso. (n.d.). Agar XLD (Xilosa-Lisina-Desoxicolato).
Insumolab.Cl. Retrieved May 5, 2023, from
https://www.insumolab.cl/descargas/educacion/placas_90mm/ficha_tecnica/02.pdf

[2] Lisina Hierro Agar. (n.d.). Britanialab.com. Retrieved May 5, 2023, from
https://www.britanialab.com/productos/producto/21/20/_/172/285/lisina_hierro_agar

[3] Britanialab. (5 de marzo de 2016). britanialab. Obtenido de

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6054e85d48c47.pdf

ANEXOS:

LABORATORIO DE CULTIVOS
GRUPO DE SÓLIDO: LÍQUIDO: INCLINADO/PRUEBA
LABORATORIO 2B 20 ml/caja (5 cajas 5ml/TP (3TP) BIOQUÍMICA:
grandes) 8ml/TG (3TG)
GRUPO: CEPA XLD (NA) MR-VP LIA
Prep: 55 g/L Prep: 17g/L Prep: 32 g/L

CONVENCIONES

· TP: Tubo pequeño

· TG: Tubo grande
· Prep: Preparar
· NA: NO AUTOCLAVAR
· XLD: Xilosa Lisina Desoxicolato
· MRVP: Caldo rojo metilo Voges
Proskauer
· LIA: Lysine Iron Agar

PRE-CÁLCULOS

· Sólido XLD (NA) (5 cajas grandes)

(55g/l 𝒙 100 ml)/1000 ml=5,5 g/l

· Líquido MR-VP (3TP)

(17g/l 𝒙 15 ml)/1000 ml= 0,25 g/l

· Inclinado/Prueba Bioquímica (3TG)

( 32g/l 𝒙 24 ml)/1000 ml= 0,76 g/l