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ENTEROBACTERIACEAE

173

4-2) , lo cual indica que el microorganismo es capaz de

formar ácido a partir de

la lactosa presente en el medi o. '

La diferenciación de Enterobacteriaceae, sin embar- go, se basa primariamente en la presenci a o ausencia de diferentes enzimas codificada s por el material genético del cromosoma bacteriano. Estas enzimas dirigen el me- tabolismo de las bacterias a lo largo de uno o más cami- nos que pueden ser detectados por medios especiales usados en las técnicas de cultivo in vitro. Los sustratos sobre los cuales pueden reaccionar estas enzimas están incorporados al medio de cultivo, junto con un indicador que puede detectarse por la utilización de sustrato o por

la presencia de productos metabólicos específicos. Me- diante la selección de series de medios que miden las di- ferentes características metabólicas de los microorganis- mos que se deben ensayar, puede determinars e un perfil

bioquímiao para hacer

una clasificación de especies .

CARACTERÍSTICAS DE RELEVAMIENTO

La identificación definitiva de lós miembros de Ent e- robacteria ce ae puede requerir una batería de pruebas bioquímicas . Pueden evitarse un tiempo considerable y una probable identificación errónea si se hacen unas po- cas observacione s preliminare s para asegurar que el mi-

croorganismo que se va a probar pertenece a este grupo.

Si e l microorganismo es

un gramnegátivo de otro grupo,

puede ser necesario usar un juego de características dife- rentes del que se usa comúnmente para la identificación de Enterobacteriaceae. Con unas pocas excepciones, to-

dos los miembros de Enterobacteriacea e demue s tran siguientes características:

la s

Fermentadores de glucosa (véase lámina color 4-lE

y F).

Citocromo oxidasa negativa (véase lámina color 4-1 G). • Reducción de nitrato a nitrito (véase lámina color 4-lH) .

UTILIZACIÓN DE LOS HIDRATOS DE CARBONO

Es común que los microbiólogos de laboratorio se re- fieran a los hidratos de carbono como azúcares. Esto es conve niente en un sentido operacional, aunque se entien - de que los alcoholes poliédricos , como el dulcitol y el manito!, o las sales catiónicas, como el acetato o el tar- trato, no son hidratos de carbono y por lo tanto no son verdaderos azúcares en el sentido químico . El término fermentación se usa también en forma algo laxa en referencia a la utilización de los hidratos de carbono por bacterias, con términos como fermentado- res de lactosa o no fermentadores de lactosa . Por defi- nición, la fermentación es un proceso metabólico de óxi- do-reducción que tiene lugar en un entorno anaerobio, en el que un sustrato orgánico sirve como aceptor final de hidrógeno (e lectrones) en lugar de oxígeno. En sistemas de prueba bacteriológicos, este proceso se detecta por observación del cambio de color de los indicadores de pH como consecuencia de la formación de productos áci - dos. La acidificación del medio de prueba puede ocurrir a través de la degradación de hidratos de carbono por otros caminos distintos de la fermentación, o puede ha- ber en algunos medios ingredientes distintos de los hidra-

tos de carbono que resulten en productos finales ácidos. Aunque la mayoría de las bacteria s que metab olizan los hidratos de carbono son anaerobias facultativas, l a utili- zación puede no ocurrir s iempre bajo estrictas condicio- nes anaero bias , como se observa en la producción de pro- ducto s ácidos por colonias bacterianas que crecen sobre la superficie del agar. Aunque todas las prueb as usadas para medir la habilidad de un microorganismo para de- gradar enzimáticamente un "azúcar" en producto s ácidos no son "fer mentativas ", estos términos serán usados por conveniencia en el resto del texto.

Principios básicos de fermentación. Los estudios de Pasteur de mediados del sig lo XIX sobre la acción de l as levadura s sobre el vino proveyeron la s bases de la com- prensión actual de la fermentación de los hidratos de car- bono. Pasteur observó que cierta s especies bacterianas contaminantes producían una caída del pH del vino (un sustrato de hidrato de carbono) debido a la producción de una variedad de ácidos. A partir de ese momento , y en forma rápida, se realizaron descripciones completas de lo s caminos fermentativos por los cuales se degrada un monosacárido como la glucosa. Por medio de una serie de clivajes y tran sformacio nes glucolíticas en zimáticas , la molécula de glucosa se separa en una serie de com- _pue.s!o de tres carbonos, el más importante de loscua les eselácido pirúvico. La secuencia química por la cual la glucosa se convierte en ácido pirúvico se conoce como vía de Embden-Meyerhof (EMP; fig. 4-1) . Muchas bac- terias , incluidas todas la s Enterobacteriaceae, fermentan

la glucosa a travé s de EMP para

formar ácido pirúvico.

Sin embargo, la manera en que el ácido pirúvic o se utili-

za varía entre

la s especies bacteriana s. Los destinos alter-

n ativ os del ácido pirúvico son el resultado de una varie - dad de caminos de fermentación que rinden producto s fi- n a le s bastante diferentes (véase fig. 4-1 ).

Las bacterias se diferencian por el hidrato de carbono que metabo1izan y por lo s ti¡JOS y cantidades de ácidos que pro ucen. Estas diferencias en la actividad enzimáti- ca sirven como una de las características bioquímica s más importantes por las cuales se reconocen la s especies

. Es esencial para lo s estudiantes de microbiología com- prender que en la formación glucolítica del ácido pirúvi- co, la adenosina trifostato (ATP) se genera a expensas de la reducción del dinucleótido de nicotinamida adenina (NAD) a NADH 2 . Por cada.molécula de glucosa que se fermenta para formar ácido pirúvico, se consumen cuatro iones hidrógeno a través de la reducción de dos NAD a dos NADH 2 Dado que el NAD total de la célula es muy limitado, Ja fermentación cesaría muy rápidamente si el

NADH 2 no fuera reoxidado en un

metabolismo posterior

a ácido pirúvico . La figura 4-2 muestra la ferment ación de tres molécula \ de glucosa por medio de dos vías alter- nativas. Por ejemplo , la fermentación de la glucosa por Escherichia coli ocurre por medio de la vía fermentación ácido mixta y resulta en la producción de gra nde s canti- dades de ácido acético, láctico y fórmico, con un~ mar- cada disminución del pH en el med io de prueba. Esta es detectada por la prueba positiva del rojo de metilo (véa- se fig. 4-2) . Por otro lado , e l grupo Klebsiella-Enterobac- ter-Hafnia-Serratia metaboliza el ácido pirúvico prima- riamente a través de la vía butilén-glucólica, producien- do acetilmetilcarbinoi•(acetoína) y una prueba de Voges- Proskauer positiva (VP) (véase fig . 4-2). Nótese que los principales productos finales de esta última vía son aleo-

  • 174 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

174 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO Glucosa 6-fosfato l Fr uctosa 6-fosfato l Fructosa 1,6 d ifosfato l Gliceraldehído

Glucosa 6-fosfato

l Fr uctosa 6-fosfato l Fructosa 1,6 d ifosfato l Gliceraldehído 3 -fosfato
l
Fr uctosa 6-fosfato
l
Fructosa 1,6 d ifosfato
l
Gliceraldehído 3 -fosfato

Fig. 4-1. Fermentación de la glucosa para formar piruva_- to (vía Embden-Meyerhof) y los destinos alternativos del ácido pirúvico.

Ácido propiónico t Ácido fórmico - H, + CO , Ácido succínico --- ---- Ace til
Ácido propiónico
t
Ácido fórmico -
H, + CO ,
Ácido succínico ---
----
Ace til -CoA
-
Ác
ido acét ico
t
Acetaldehído ~
Ácido butírico
Acetil-meti l-
carb inol
Ácido láctico
(acetoína)
Alcohol etílico
1
2,3
A lcoho l butílico
Buti leng licol
(butanodiol)

holes, y sólo se produce una pequeña cantidad de ácido;

por lo tanto, la prueba de rojo de metilo en general es ne-

gativa para este grupo

de microorganismos .

El gas resultante de la fermentación bacteriana es pri -

mariamente una mezcla de hidrógeno y dióxido de car-

bono formado por el clivaje

del ácido fórmico . Es una re-

gla aceptada que cualquier bacteria que forma gas en un

medio para probar hidratos de carbono primero debe for-

mar ácido, lo cual es evidente en el esquema de EMP de la figura 4-1. El gas se detecta mejor utilizando un medio líquido para fermentación de hidratos de carbono en el cual se han ubicado tubos invertidos de Durham (véase lámina color 4 - lF). En el tubo de Durham pueden ser de- tectadas trazas de gas que se colectan como burbujas. Al- gunas especies de Enterobacteriaceae carecen de la en- zima fórmico deshidrogenasa y no pueden formar ácido fórmico y como resultado de esto no pueden formar ni si- quiera trazas de C0 2 (p. ej., la mayoría de las especies de Shigella) . Por el contrario, los microorganismos que usan la vía butilén glucólica (es decir, VP positivos) producen

cantidades copiosas de C0 2 (véase fig. 4-2) . Por lo

tanto,

cuando se observan grandes cantidades de gas, se debe-

ría considerar el grupo Klebsiella-Enterobacter-Hafnia- Serratia como la identificación probable.

La formación de alcohol etílico por microorganismos tiene gran importancia comercial en la manufactura de bebidas alcohólicas y reactivos orgánicos; sin embargo, su utilidad es limitada para la identificación de bacterias en el laboratorio.

La ferrrientación < e

..

la lactosa es más compleja que la

de la glucosa. La lactosa es un disacárido compuesto por glucosa y galactosa, conectado a través de un puente de

oxígeno conocido como enlace galactosídico. Al hidro- lizarse, este enlace es dañado y libera glucosa y galacto- sa . Para que una bacteria metabolice lactosa, deben estar presentes dos enzimas: 1) ~-galactósido permeasa, que permite el transporte de ~-galactósido, como la lactosa , a travé s de la pared celular; y 2) ~-galactosidasa, la enzima requerida para hidrolizar el enlace ~-galactosídico una vez que el disacárido ha entrado en la célula. La reacción

174 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO Glucosa 6-fosfato l Fr uctosa 6-fosfato l Fructosa 1,6 d ifosfato l Gliceraldehído

ácida final resulta de l a degradación de la glucosa que se

muestra en la figura 4 - 3.

Dado que la fermentación de la lactosa procede en úl- tima instancia por medio de la degradación de la gluco- sa a través de EMP, se deduce que cualquier microorga- nismo incapaz de metabolizar la glucosa no puede for- mar ácido a partir de la lactosa . Esto explica por qué la g l ucosa se omite de las fórmulas de los medios de aisla - miento primario como agar MacConkey o agar EMB; si no se omitiera se perdería la habilidad para detectar la capacidad de fermentar . la lactosa. En este medio de prueba, el punto final de la fermentación de la lactosa es la detección de la producción de ácido. Un organismo no fermentador de la lactosa es aquel que carece de una o de las dos enzimas requeridas para el metabolismo de la lactosa y que carece de habilidad para atacar la glucosa. Se cree que los llamados fermentadores de lactosa tar- díos son organismos que exhiben actividad ~-galactosi­ dasa pero muestran baja actividad ~-galactósido per- measa. ~-galactosidasa y prueba ONPG. El o-Nitrofenil- ~-o-galactopiranósido (ONPG) es un compuesto estruc - turalmente similar a la lactosa, excepto en que la gluco- sa ha sido reemplazada por un grupo o-nitrofenilo. Esta

7

Ácido láctico

(3) Glucosa

ij

- 12 H

(6) Ácido pirúv ico

1

---

--

1

(1)

Fermentación butilenglicólica

(3)

]" 3 co ,

A<01~·:0,

(2)

\-

,

+4H

(2) Acido ====> Alcohol

acético

etílico

xcmioo

<(2)

Fermentación ácido mixta

(3)

(1)

+4H~

(2) Ácido láctico

~

+ 6H

Acetil metil carbinol (Acetoína)

H2

C02

(3) 2 ,3 -Butilenglicol

---------¡

....

--_

Diacetilo KOH + aire

1----- Naftol + "'ª""'"ª

Complejo ro]o (Prueba de Voges-Proskauer positiva)

Series de reacciones=====>

Rea cc iones de un solo paso-----

+•/ºª"'''°

(3) Ácido fórmico

Alcohol

etílico

H2

C02

pH < 4,4 convierte al indicador rojo de met i lo

Color rojo (prueba positiva de rojo de metilo)

Oxalacetato

\

+4H

Ácido

succínico

Fig. 4-2. Vías ácido mixta y butilenglicólica de fermentació11 de la g luc osa.

~

t;j

~

g:i

(}

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~

t'rj

, ....

- J

..

Ul

  • 176 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

Lactosa

U nn p-galactosídica

  • -- p-ga lactós ido permeasa

Fig. 4-3. Fermentación bacteri ana de la lacto sa : la lactosa ,

un disacárido

compuesto d e mol éc ula s de glucosa y ga lacto -

sa

unidas por

un enlace P-galacto síd ico , difunde a través de

la pared bacter iana bajo la acción de la ~-galactósido per- measa. Si la bacter ia produce ~-galactosidasa, la lac to sa es hidroli zada para producir glucosa y ga lacto sa. La g luco sa es lu ego metabolizada como se ilustra e n la figura 4-1.

Glucosa

+

Ga lactosa

Glucosa

Pared celu lar bact eriana

1

Ácidos mixtos (véase fig. 4- 1)

 

manipulación bastante ingeniosa de una molécula forma

las bases para Ja prueba ONPG, la cual_ se reseña en ~l

diagrama 57 . Esta prueba detecta la

enzima ~-galactos1-

dasa mucho más rápidamente de lo que lo hace la prue - ba de fermentación de la lactosa previamente descrita. Es útil para la identificación de Jos fermentadores tar - díos de la lactosa deficientes en ~-galactósido permeasa. El ONPG permeabiliza la pared bacteriana más rápida- mente que la lacto sa y, bajo la acción de la ~-galactos1- dasa se hidroliza a galactosa y o -nitrofenol (véase dia-

gra~a 57). El o-nitrofenol es un crom?for~ 9ue no tiene color cuando está unido al o-galactop1ranos1do, pero es amarillo es su forma libre (no unida) (véase lámina co- lor 4 -4A). Las tabletas de prueba ONPG, que pueden ser fácil - mente reconstituidas por el agregado de una pequeña cantidad de agua, están disponibles comercialmente y son convenientes para utilizar en el laboratorio. Los mi - croorganismos con fuerte actividad de ~-galactosidas_a

ueden producir una prueba positiva en unos pocos mi- nutos después de la inoculación del medio. La prueba ONPG es más útil para Ja detección de actividad de ~-ga­

lactosidasa en

fermentadores tardío s de lactosa, como al-

1'\ gunas cepas de E. coli en las cuales la diferenciación d~ especies de Shigella (excepto ciertas cepas de S. somm_~i) puede ser difícil por otro método. La pr~eba es ~amb1en útil para distinguir ciertas cepas de especies de Cttrobac- ter y Salmonella arizanae (ONPG-positivo) de ~a mayo-

ría

de las especies de Salmonella (ONPG-negat1vas) . La

prueba ONPG no es un sustituto de la dete · ción

..

d.e-

l a fermentacion e1a 1actosa porque sólo se mide la en-

zima ~-galactosidasa.

ACTIVIDAD CITOCROMO OXIDASA

Cualquier microorganismo que desarrolle actividad ci- tocromo oxidasa siguiendo los procedimientos y las con- diciones de prueba reseñadas en el capítulo 16 se excluye

de Enterobacteriaceae. La

reacción de color que se desa -

rrolla debe ser interpretada dentro de los 1O a 20 segundos porque muchos microorganismos , incluidos miem~ros se - leccionados de Enterobacteriaceae, pueden producu reac - ciones falsas-negativa s demorada s . Si hubiera alguna difi - cultad en interpretar Ja reacción de la citocromo oxidasa, deben probarse tanto los microorganismos controles oxi - dasa-positivos como los oxidasa-negativos. Los goteros comerciales de citocroin~ oxi?asa se usan con gran frecuencia debido a s u convemencia. Las reac- ciones de color son claramente visibles en 10 segundos. Si se usan en el laboratorio asas metálicas de inoculación enruladas o rectas para transferir bacterias al reactivo de oxidasa, las que son de acero inoxidable o de Nicrom pueden producir reacciones falsas positivas, debido a ~a pre se ncia de trazas de óxido de hierro en la superficie flameada del metal. Este problema puede solucionarse usando para inocular asas de plástico o de platino o pali- tos aplicadores de madera o hisopos pa~a llev~ a ca_bo ~a

prueba de oxidasa. El reactivo tetrametil-1:7-femle~diaJ?l­

na se usa más frecuentemente que el denvado d1met1lo , porque el reactivo es más estable , más sensible y menos tóxico (véanse cap. 16 y lámina color 4 - lG) .

REDUCCIÓN DE NITRATOS

Todas las Enterobacteriaceae con excepción de cier- to s biotipos de Pantoea (Enterobacter) agglomerans y

ENTEROBACTERIACEAE

177

ciertas especies de Serratia y Yersinia, reducen los nitra - tos a nitritos. Debido a que el período de incubación que se requiere para llevar a cabo la prueba de reducción de nitratos es variable (3 a 24 horas, según el sistema usa- do) , no se usa comúnmente para hacer un relevamiento previo de aislamientos bacterianos desconocidos. Más bien , la prueba se emplea en la mayoría de los laborato - rios para confirmar la clasificación correcta de un mi - croorganismo desconocido o como ayuda en la determi-

4- lF ilustra las reacciones de fermentación ácida en cal- do púrpura. Todas las Enterobacteriaceae crecen bien en este tipo de medio, y la fórmula base usada es una cues- tión de preferencia personal. Además de producir el cam- bio de color al modificar el pH en medios de cultivo pa- ra fermentación , la producción de ácidos mixta, notable- mente ácido butírico , genera a menudo un olor penetran - te y desagradable en el medio de cultivo. Cuando se de- tecta tal olor, inmediatamente se debe sospechar la pre -

nación e

identificación de especies

de bacterias. Los de -

sencia de una de las Enterobacteriaceae (además las bac -

talles de la prueba de reducción de nitratos se presentan

terias anaerobias generan productos metabólicos caracte -

en el diagrama 53. Cualquier medie basal que soporte el crecimiento de

rísticos con olores distintivos).

microorganismos

y

contenga O, 1 o/o de concentración

de

nitrato de potasio

(KN0 3 ) es adecuado para llevar a cabo

USO DE AGAR HIERRO DE KLIEGLERY AGAR HIERRO

la prueba. El caldo nitrato o agar nitrato inclinado son las

TRIPLE AZÚCAR

formas de presentación del medio usado más común- mente en laboratorios clínicos. Dado que la enzima nitra- to reductasa tiene actividad máxima en condiciones anaerobias , ZoBell ha recomendado el uso de agar semi - sólido. 129 El medio semisólido también estimula el creci- miento de muchas especies de bacterias y provee el en- torno anaerobio que se necesita para la activación de la enzima. El agregado de limaduras de cinc a todas las reacciones negativas , como se muestra en el diagrama 53, debería ser un procedimiento de rutina. La mayoría de los microorganismos capaces de reducir nitratos , lo harán en 24 horas ; algunos pueden producir cantidades detectables dentro de 2 horas. Una prueba rápida de ni- trato fue descrita por Schreckenberger y Blazevic. 283 Tan - to la a-naftilamina como el ácido sulfanílico son relati - vamente inestables, de modo que su reactividad debería ser determinada a intervalos frecuentes mediante la prue- ba de los microorganismos controles positivos y negati- vos. El compuesto de diazonio que se forma de la reac-

ción del nitrato reducido y los

reactivos también es rela -

tivamente inestable, y el color tiende a decaer ; de acuer- do con esto , las lecturas deberían hacerse inmediatamen - te después de que se agregan los reactivos (véase lámina

color 4-lH).

MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS PARA LA DETECCIÓN DE FERMENTACIÓN DE HIDRATOS DE CARBONO

Una variedad de diferentes medios líquidos o con agar pueden ser usados para medir la habilidad de un microor- ganismo para utilizar fermentativamente los hidratos de carbono. El principio de la fermentación de hidratos de carbono se basa en los estudios de Pasteur sobre bacte- rias y hongos, escritos hace más de 100 años , los cuales afirman que la acción de muchas especies de microorga- nismos sobre un hidrato de carbono sustrato resulta en la acidificación del medio. La fórmula de un medio típico base para la fermentación contiene tripticasa (BBL), 10 g; cloruro de sodio, 5 g; rojo fenol, 0,018 g y agua destilada csp 1 L. El hidrato de carbono que se va a probar como la glu - cosa, se filtra, esteriliza y se agrega asépticamente al me - dio basal hasta una concentración final de 0 ,5 % a 1% . La tripticasa es un hidrolizado de caseína que sirve como fuente de carbono y nitrógeno; el cloruro de sodio es un estabilizador osmótico; y el rojo fenol es un indicador de pH del medio que vira d~bajo de 6 ,8 . La lámina color

En la práctica, los microorganismos capaces de fer - mentar l~l1,1cosa en general se detectan mediante la ob- / servación de las reacciones que ellos producen cuando se cultivan en agar hierro de Kliegler (KIA) o agar hierro I triple azúcar (TSI) (fig . 4-4; véase lámina color 4- lE) . Si un microorganismo no puede fermentar la glucosa, en- tonces se observa la superficie inclinada alcalina y en profundidad también alcalina (sin cambio) en el tubo (véase fig. 4-4A), lo cual indica la falta de producción de ácido y la falla del microorganismo prueba para fermen- tar cualquiera de los azúcares presentes. Esta sola acción / es suficiente gara excluir un microorganismo de Entero- v bacteriaceae. La fórmula de KIA se enumera en el re- cuadro 4-1 (la fórmula de TSI es idéntica excepto en que se agregan 10 g de sacarosa). Varias observaciones son importantes para estudiar las fórmulas de KIA y TSI. La incorporación de cuatro deri- vados de proteínas -extracto de carne, extracto de leva- dura, peptona y proteosa peptona- hace que KIA y TSI sean nutricionalmente m uy ricos. La falta de / perffiite el crecimiento de todas las especies bacterianas -V excepto las más exigentes (excluidos los anaerobios obli- gados). Por esta razón, el agar KIA y TSI pueden ser úsa- cvLm dos sólo cuando se están probando especies bacterianas p///l seleccionadas de una colonia úniéa recuperada de placas -- de agar primario o selectivo. La glucosa y la lactosa (y sacarosa en TSI) están distribuidas por todo el tubo tan - v to en el pico de flauta ·como en profundidad. Sin embar -

inhibidor~

go, la factosa está presente en

una concentración 10 ve -

ces mayor que la glucosa (de modo similar, la relación , sacarosa a glucosa es de 10: 1 en el medio TSI). Esta re- iY/ .;) !ación 1O:1 es importante para entender los principios }'"'

·

bioguímicos que se comentan más

adelante . El sulfato de

/

hierro es un detector de sulfuro de hidrógeno menos sen- v

sible que otras sales fémcas o ferrosas; por lo tanto pue- de haber discrepancias en las lecturas de sulfuro de hi- drógeno entre KIA y TSI y otros medios de prueba (véa - se lámina color 4-4B). El indicador rojo fenol es amari- llo a pH menor que 6,8. Dado que el pH~del med10 no

inoculado se equilibra a pH con

buffer 7 ,4, la producción

de cantidades relativamente pequenas de ácido provocan

un cambio visible de color.

PRINCIPIOS BIOQUÍMICOS

Los principios bioquímicos en los que se basan ' las reacciones observadas en agar KIA y TSI se ilustran en

  • 178 DIAGNÓSTI C O MICROBIOLÓGICO

A

 

No fermentador

 

..

q,.,

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/

 
 

No

"''!),

fer m

en t ación}

   

02

P H = 7 4

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.

;olícx

º.s

S uperf ic ie inc linada a lca li- na / profundidad alcalina

No fe r mentado r de lactosa

Superf icie inc linada ácida / profu ndidad ácida Reacción inicia l

B

S u perficie inc li nada a lca lina / p rofund idad ácida

Fermentador de lac t osa

(sacarosa)

Superficie inc l inada ácida / p rofund idad ácida

Fig. 4-4. Tre s tipos de reacci o ne s pro - ducid a s por bacterias qu e crecen en agar hierro de Klieg ler. A. Bac ilos no ferment ativo s que no son ca paces de

producir ác id os a partir de la fermenta- !

ción de

la g luco sa o la lacto

sa ; no hay

cambi o

e n e l medio (repr es enta do en

bla n co) . B. Ac idificaci ó n

inicial de la

profundidad y la superfi c ie inclinada de l me dio re a sombreada ) por bacte-

ria s qu s uperfi

e fermentan la gl ucosa , pe ro la c ie in c linada del med io recupera

el pH a lca lino a cau sa de las amina s al- calinas fo rm ad as por d es carbo x ilación oxidativa d e péptido s (d e rivados de proteína s del medio) cerc a de la super- ficie. C . Acidificación completa perma- nente de la p ro fundidad y la superficie in c linad a d e l tubo por las ba c te ri a s fer- ment adora s de lacto sa.

e

l a figura 4-4 . Nótese que el a gar fundido se deja solidifi-

/r car formando una superfic ie inclinada. Est a configura-

\/

ción o~ ina dos cám ai;as de reacción dentro del mismo

tubo . a porción de la superficie inclinada es aerobia ya

que e s tá expue sta en toda su superficie a l oxígeno atmos-

férico . La porción inferior, llamada la co a o profundi-

dad, e stá protegida del aire y es relativamente anaerobia .

E s importante, cu ando se prepara el medio, que la pen-

diente y la profundidad tengan la misma longitud, apro -

1

ximadamente 3 c m cada una , de modo que el efecto de

e s tas dos camaras se preserve .

Lo s tubos KIA y TSI se inoculan con un as a larga ex-

tendida y derech a. La colonia prueba, bien aislada, que

fue recuperada de una placa de agar se toca con el extre -

m 9

del asa de inoculación , la cual l uego es clavada en lo

RECUADRO 4-1.

AGAR HIERRO DE KLIGLER

Extracto de carne, 3 g Extracto de levadura,

3g

Peptona , 15 g Proteosa peptona, 5 g Lactosa, 10 g Glucosa , 1 g

Sulfato ferroso, 0 ,2 Cloruro de sodio , 5

g

g

Tiosulfato de sodio, 0 ,3 g Agar, 12

g

Rojo fenol , 1 Bt924 g

Agua desti.l.ada c .s :p. 1 L pH final 7,4

profundo del tubo , ex tendiénd ose ~~ta 3 a 5 m11Lflel fon -

do d e l tubo. Cuando el asa de in o cul a ci ó n se ret ira de la

profundidad del tubo , la superficie inclinada e s estriada

con un movimiento de ida y vuelta . Los tubos inoculados

s e ubican en un a incubadora a 35 °C durante 18 a 24 ho -

ra s . Las foto grafía s color que s e muestran en la s láminas

color 4 - lE y 5-lA revelan la s re a cciones que e s tán des-

crita s en el recuadro 4-2 .

Por lo tanto , como se muestra eq la figura 4 -4A y en la

lá mina 5 - lA , sin fermentación de hidratos de c arbono , ¡/

no se forman áci do s y la pro d ucción de aminas en el pla-

no inclinado junto con lo s buffer s a lcalinos produce un

co ~o de todo el

medio Las bacterias que producen

e s te tipo de r eacción se conocen como no fermentadoras

(véase cap. 5) .

Si el tubo KIA se inocula con un microorg a nismo fer - to'

mentador de

luco s a

ue no

uede utilizar la lactosa, só-

 

lo s e puede obtener una cantid a d relativamente pequeña

de ácido a partir de

una concentrac · ón de )u c;o sa en-e l

medio de 0 , 1 % . Inicialmente, durante J_llli __Qrimeras

8 a

l"Í,¡

12 horas de incubad ón, aun e s a cantidad de ácido puede

O"

- ser s uficiente para converti r el color al amarillo tanto en

l a parte profund a como en la s uperficie inclinada. En las

po c a s horas

siguientes , sin embargo , el suplemento de

g lucosa se a g ot a en forma completa y la bacteria comien-

z a la degradación oxidativa de aminoácidos dentro de la

s uperficie inclinad a del tubo , donde hay oxígeno . Esto

re s ulta en la liberación de amin as que rápidamente con -

trarrestan la s pequ e ñ as cantidade s de ácido presentes en

ENTEROBACTERIACEAE

179 ¡/'

la superficie inclinada; y entre las 18 y las 24 horas , la superficie inclinada completa revierte a un pH alcalino y

el color vuelve a ser rojo . En la porción profunda (anae -

robia)

del tubo, la degradación de aminoácidos es insufi -

ciente para contrarrestar el ácido formado y el medio per-

manece amarillo . Por lo tanto , una reacción

a lc a lina en la

superficie inclinada y ácida en profundidad en e l KIA (o TSI) es un importante indicador inicial de un microorga- nismo prueba no fermentador de la l actosa (véanse fig . 4 -4B y lámina color 4-lE).

Si el tubo KIA es inoculado con un microorganismo

  • I fermentador de lactosa, entonces, aun cuando la glucosa sea usada completamente después de las primeras 8 a 12 horas , la fermentación continúa ya que el microorga- nismo es capaz de usar la lactosa (presente en una con- centración 10 veces superior que la de la glucosa). En consecuencia , cuando se examina el tubo luego de 18 a 24 horas, la producción de ácido a partir de la ferment a- ción de la lactosa está ocurriendo aún, y tanto la superfi - cie inclinada como la profundidad aparecen amarillas , lo que es consecuencia de una reacción ácida en la superfi- cie inclinada y ácida en la profundidad (véanse fig. 4-4C y lámina color 4- lE) . Muchos microbiólogos prefieren TSI a KIA porque el agregado de sacarosa a la fórmula ayuda a investigar es- pecies de Salmonella y Shigella, ya que ninguna de é st as (excepto cepas raras) metaboliza ni la lactosa ni la saca- rosa. Por lo

tanto, cualquier re acción de TSI indica que la

lactosa o la sacarosa , o ambas , han sido fermentadas , ex- cluidas Salmonella y Shigella. También debe recordarse

que Yersinia enterocolitica . fermenta l a sacaro s a, pero no

la lactosa; por lo tanto , en TSI l a reacción será ácida-áci-

d a (similar a las coliforrn e s corno E. coli), pero

en KIA,

ferrnen-

l a re acción se alcalin~-ácida (similar a los no

ta dori>s el-e lados a) . En consecuencia , cuando se investi-

g an muestra s de materia fecal para Salmonella , Shigella

y Yersinia , algunos podrían argumentar que ferible a TSI.

KIA es pre -

.J Para

la detección

de sulfuro

de hidrógeno,

que es inco -

loro, el medio debe incluir un indicador. El tiosulfato de sodio es la fuente de átomos de azufre en la mayoría de los medios usados para la producción de sulfuro de hi-

drógeno . Las sales de hierro (sulfato ferroso y férrico,

ci-

trato de amonio) se incorporan al medio de cultivo y reaccionan con sulfuro de hidrógeno para producir un precipitado negro insoluble (sulfuro de hierro). Se re- quiere un medio ácido para que un microorganismo pro - duzca sulfuro de hidrógeno y, por lo tanto , debe proveer -

se una fuente de iones hi drógeno. Dado que la profundi-

dad de los tubos KIA y TSI se vuelve ácida con la fer- mentación de la glucosa (los iones hidrógeno aumentan) , a menudo el ennegrecimiento se ve por primera vez allí , particularmente con bacterias no fermentadoras de lacto-

sa (véase lámina color 4- lE) . Por lo

tanto , el negro pro -

fundo debería ser leído corno ácido si el color amarillo usual se oscurece con un precipitado negro. Los medios KIA y TSI son menos sensibles en la detección de sulfu- ro de hidrógeno que los medios que contienen hierro , co- mo el medio sulfuro indo! movilidad (SMI) (véase lámi- na color 4 -4B) . Si un microorganismo puede excluirse de Enterobac- teriaceae antes de que se establezca una extensa batería de pruebas bioquímicas se ahorra considerable tiempo y trabajo . Se recomienda que la superficie inclinada de KIA o TSI se utilice en todos los aislamientos que se sos- pecha que son Enterobacteriaceae al mismo tiempo que se utilicen los medios de prueba diferenciales . Aun cuan- do se trate de un microorganismo fermentador y se sos- peche que es Enterobacteria ceae, se debe llevar a cabo una prueba de citocromo oxidasa para excluir los mi- croo rgani s mos pe rtenecientes a otros géneros de bacte- ri a s fermentadoras, como especies de Aeromonas, Plesiomonas , Vibrio y Pasteurella , que son oxidasa posi- tivos .

ELECCIÓN DE MEDIOS DE AISLAMIENTO RIMARIO

Deben usarse medios de cultivo selectivos para recu- perar las e species de bacterias importante s de las mues- tras que pueden alojar una mezcla de microorganismos .

Para hacer rac!onal las selecciones. los microbiólogos

deben conocer la com posición de cada fórmul a y tlJ2ro- pósito y la ' coñcentración rela ti va <le cada químico o

yfAl

. r.

compuesto que se incluye . Por ejempló~ no es suficiente con saber que se incluyen sales biliares en las fórmulas de varios medios selectivos para inhibir el crecimiento de grampositivos y de algunas de las especies bacterianas

gramnegativas más exigentes . Por

ejemplo , el agar SS/ ~:U

contiene alrededor de cinco veces la concentración de sa-\fl les biliar~ cC onkey y es más inhibitorio pa - ra E. coli y más selectivo para la recuperación de espe -

cies de Salmonella d e cultivos de materia fecal.

1/ 180

DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

Se dispone de tres tipos generales de medio para la re- cu peración de Enterobacteriaceae de muestras clínica s que potencialmente alojan bacterias mixtas: 1) medio no selectjyo para aislamiento primario (~ _;_

2) agar selectivo y diferencial (p. ej. , agar MacConkey y

Q Hektoen entérico); y 3) caldos de enriquecimiento. En $' los cuadros 4-1y4 -2 se comparan los diferentes medios

~ '\\ comúnmente usados en la práctica clínica. Las fórmulas

  • - son complejas e incluyen ingredientes que no sólo inhi - ben

el crecimiento de ciertas especies bacterianas (selec -

f vo ), sino que también detectan varias características io uímicas ue on im ortantes para
f vo ), sino que también detectan varias características
io uímicas
ue
on
im ortantes para hacer una identifi -
cación preliminar de los microorganismos presentes en la
~
ferencial).

QUÍMICOS Y COMPUESTOS USADOS EN MEDIOS SELECTIVOS

1/ 180 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO Se dispone de tres tipos generales de medio para la re- cu
1/ 180 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO Se dispone de tres tipos generales de medio para la re- cu

El recuadro 4-3 enumera los tipos generales de quími- cos y los compuestos usados en medios selectivos e inclu- ye breves comentarios acerca de la función de cada uno.

MEDIOS DE AISLAMIENTO SELECTIVOS

En 1905, MacConkeyl 94 describió por primera vez un

1/ 180 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO Se dispone de tres tipos generales de medio para la re- cu

medio

1/ 180 DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO Se dispone de tres tipos generales de medio para la re- cu

selectivo diferencial Cagar rojo neutro-sa les bi-

liares) que él usó para aislar bacilos entéricos gramne-

gativos de muestras que contenían mezclas de especies bacterianas. Incorporó lactosa y el indicador rojo neu-

CUADRO 4-1.

MEDIOS SELECTIVOS DIFERENCIALES PARA LA RECUPERACIÓN DE ENTEROBACTERIACEAE

~ = = ~ '<' 8 w ~~ ~ 8 w " ~»>< = ' w
~
=
=
~
'<'
8
w
~~
~
8
w
"
~»><
=
'
w
~
Se~
~
>'
Medio
Formulación
Propósito e ingredientes
diferenciales
Reacciones e interpretación
Agar MacConkey
(véase lámina 4-2A y B)
Peptona
Poli peptona
Lactosa
Sales biliares
Cloruro de sodio
Agar
,. Rojo neutro
Cristal violeta
Agua destilada c .s.p.
pH final = 7 , 1
17
g
3g
El agar MacConkey es un medio
de plaqueo diferencial para la se-
Los fermentadores fuertes de la
lactosa típicos , como especies de
10
g
1,5 g
5g
13,5 g
0 ,03
g
0,001 g
l L
lección y recuperación de Ente-
robacteriac e ae y bacilos gram-
negativos entéricos relacionados.
Las sales biliares y el cristal viole-
ta inhiben el crecimiento pe bac-
terias grampositivas y de algunas
gramnegativas exigentes .
La lactosa es el único hidrato de
carbono.
Las bacterias fermentadoras de
lactosa producen colonias que
tienen distintos tonos de rojo ,
debido a la conversión del colo-
rante indicador rojo neutro (rojo
con pH por debajo de 6,8) por la
producción de ácidos mixtos.
Las colonias de bacterias no fer-
mentadoras de la lactosa apare-
cen sin color y transparentes.
Escherichia, Klebsiella y Ente-
robacter producen colonias rojas
rodeadas de una zona de bilis
precipitada.
Los fermentadores lentos o débi -
les de la lactosa , como
Citrobacter, Providencia,
Serratia y Hafnia , pueden apare-
cer sin color después de 24 h o
rosa pálido en 24-48 h.
Las especies de Proteus, Edwad-
siella , Salmonella y Shigella ,
con raras excepciones, producen
colonias con poco color o trans -
parentes .
Las colonias representativas de es-
tas varias reacciones se muestran
en la lámina color 4-2.
Agar eosina azul de me -
tileno (EMB)
Peptona
10
g
Lactosa
5g
(véase lámina color 4-2C Sacarosa*
5g
hasta F)
Dipotásico , P0 4
Agar
Eosina
Azul de metileno
Agua destilada c.s.p .
pH final = 7 ,2
2g
13,5 g
0,4 g
0,065 g
El agar EMB es un medio de pla-
queo diferencial que puede ser
usado en lugar del agar MacCon-
key en el aislamiento y detección
de Enterobacteriaceae o deba-
cilos coliformes de muestras con
bacterias mixtas.
lL
'
'
Los colorantes anilínicos (eosina y
azul de metileno) inhiben a las
bacterias grampositivas y a las
gramnegativas exigentes. Se
combinan para formar µn preci-
pitado a pH ácido y, de ese mo-
do , sirven también como indica-
dores de la producción de ácido.
EMB Levine, con sólo lactosa, da
reacciones más en paralelo con
las del agar MacConkey ; la fór-
mula modificada también detecta
fermentadores de la sacarosa.
Las colonias de los fermentado-
res de la,ctosa fuertes típicos,
notab l emente Escherichia coli,
son negro verdoso con brillo
metálico .
Los fermentadores débiles , inclui-
dos Klebsiella, Enterobacter, Se-
rratia y Hafnia, producen colo -
nias púrpura en 24-48 h.
Los no fermentadores de lactosa,
que incluyen Proteus , Salmone -
lla y Shigella, producen colonias
transparentes.
Yersinia enterocolitica, un fermen-
tador de sacarosa no fermenta -
dor de lactosa , produce colonias
transparentes en EMB Levine y
colonias púrpura a negro en la
fórmula modificada.
Véase lámina color 4-2.

* Fórmula de Holt-Harri s Tea g ue modificada. Ag ar EMB Le v ine no c onti e ne sac aro sa .

ENTEROBACTER!ACEAE

181

V

tro en el medio para proveer un medio visual para de- tectar la utilización de lactosa por el organismo prueba. En ese momento, a todos los bacilos gramnegativos no formadores de esporas se los denominaba aún bacilos

entéricos; sin embargo , los

microbiólogos habían reco-

nocido que ciertas . especies eran más patógenas para los humanos que otras. El patrón de utilización de hidratos

de carbono de varias especies de bacterias ya era cono-

cido a fines del siglo, y la fermentación de la lactosa, en particular, fue reconocida como un importante marca- dor para diferenciar ciertos patógenos entéricos. En 1916 , Holt-Harris y Teague 151 describieron un medio

con eosina y azul

de metileno como indicad para

diferenciar entre las colonias fermentádoras y no fer-

Medio

Formulación

Propósito e ingredientes diferenciales

Reacciones e interpretación

Agar Salmonella-Shige - lla (SS)

Extracto de carne Peptona

Lactosa Sales biliares Citrato de sodio Tiosulfato de sodio Citrato férrico

Agar

Rojo neutro Verde brillante

5g

5g

10 g

8,5 g

8 ,5

g

8,5 g

1 g

12 ,5

g

  • 0 ,025 g

  • 0 ,033 g

Agua destilada c .s. p.

pH final,

7 ,4

lL

El agar SS es un medio altamente selectivo formulado para inhibir el crecimiento de la mayoría de lo s microorganismos coliformes y permitir el desarrollo de espe- cies de Salmonella y Shigella de muestras ambientales y clínicas. Las altas concentraciones de sales

biliare s y citrato de sodio inhi-

ben a todas las bacteria s gram- positi vas y mucho s microorga- ni s mo s gramnegativos, incluido s

lo s coliformes. La lactosa es el único hidrato de carbono y el rojo neutro es el in- dicador para la detección de

ácido. El tiosulfato de sodio es la fuente

Cualquier colonia fermentadora de lactosa que aparezca se colorea de rojo por rojo neutro. Ciertas frecuente s de Salmo-

cepa s poco nella arizanae son fermentado- ras de lactosa y pueden parecer- se a Escherichia coli. El crecimiento de especies de Sal-

monella no es inhibido , y las co-

lonias aparecen sin color con centro negro, debido a la pro- ducción de sulfuro de hidrógeno. Las especies de Shigella mues- tran inhibición variada y colo- nias sin color y sin ennegreci- miento. Las cepas móviles de Proteus que aparecen en el agar SS no se dis-

de sulfuro. Cualquier bacteria persan. que produce gas sulfuro de hi- drógeno se detecta por un preci- pitado negro formado con citrato

férrico (relativamente in sensi -

ble). La alta selectividad del agar SS perm ite el uso de un inóculo car- gado.

Agar Hektoen entérico (HE) (véase lámina color 4-3E y F)

}

Peptona Extracto de levadura Sales biliares Lactosa Sacarosa Salicina Cloruro de sodio Tiosulfato de sodio

12 g

3 g

9 g

12 g

12

g

2 g

5 g

5 g

Citrato férrico de amonio 1,5 g

Fucsina

ácida

Azul de timol Agar Agua destilada c .s .p. pH final , 7 ,6

0 , 1 0,04 g

g

14

g

1 L

El agar HE es una formulación re- ciente diseñada como un medio de plagueo indirecto para mu¡;¿- tras fecales para incrementar el rendimiento de especies de Sal - monella y Shigella a pattir de flora normal nuiñerosa. Lá alta concentración de sales bi- liare s inhibe el crecimiento de todas las bacterias grampositivas y retarda el de muchas cepas co- liformes . Pueden producirse ácidos a partir de hidratos de carbono , y la fuc - sina ác ida , al reaccionar con el azul de timol, produce un color amarillo cuando baja el pH . El tio s ulfato de sodio es una fuen- te de sulfuro , y el gas sulfuro de hidrógeno se detecta mediante citrato férrico de amonio (relati- vamente sensible).

Los fermentadores rápidos de lac- tosa (como E. coli) son inhibi- dos moderadamente y producen colonias naranja brillante a rosa- do salmón. Las colonias de Salmonella son azul-verdosas , típicamente con

centros negros de gas sulfuro de hidrógeno. Shigella aparece más verde que Salmonella, y las colonias pali-

decen hacia

la periferia .

Las cepas de Proteus son inhibi- das en cierta forma; la s colonias que desarrollan son pequeñas y tran sparentes, y de aspecto más brillante o acuoso que el de la s especies de Salmonella o Shige- lla. Véase lámina color 4-3.

(Continúa)

 

v

182

CUADRO 4-2.

GASTROINTESTINAL

Medio

'

Agar xilosa li sina desoxicolato (XLD) (véase lámin a color 4-3A a D)

DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

MEDIOS ALTAMENTE SELECTIVOS PARA LA RECUPERACIÓN DE ENTEROBACTER/ACEAE A PARTIR DE MUESTRAS

(C

NTINUACIÓN )"

e

,e

,

••

'

Formulación

 

Propósito e ingredientes diferenciales

Reacciones e interpreta c ión

Xilosa

 

3

,5 g

El agar XLD es menos inhibidor

Los microorganismo ss como

Lisina

 

5g

del crecimiento de bacilo s coli-

E co li y especies de Klebsiella-

Lactosa

 

7

,5 g

formes que el agar HE y fu e di-

Enterobacter pueden usar más de

Sacarosa

7,5 g

 

señado

para detectar s higellae en

un hidrato de carbono y producir

Cloruro de sodio

 

5g

heces después de enriquecimien-

colon i as

amarillo brillante . La s

Extracto de Levadura

3g

to en caldo para gramnegativos.

colonias

en mucha s especies de

Rojo feno l

0 , 08

g

 

Las sales biliares en concentración

Proteus so n también amarillas.

Salmonella producen colonias

Agar Deoxicolato de sodio Tiosulfato de sodio Citrato férrico de amonio

13,5 g 2,5 g 6,8 g 0,8 g

relativamente baja hacen que el medio sea meno s selectivo que los otros dos incluido s en este cuadro.

La ma yoría de las especies de

rojas, con centros negros de gas sulfuro de hidrógeno.

Ag ua destil ada c.s.p

1 L

Tres hidrato s de carbono están

Shigella,

Providencia y mucha s

pH final, 7,4

 

disponibles para la producción de ácido, y el rojo fenol es un

 

especies de Proteus no usa n nin- guno de Jo s hidratos de carbono

 

indicador de pR Los microorga ni smos li s ina positi- vos, como especies de Salmone- lla, producen colonias inicial- mente amarillas debido a la utili- zac ión de xilosa y colonias rojas retardadas por la desc ar boxil a - ción de Ja li sina . El sistema de detección de sulfuro de hidrógeno es s imilar al del agar HE

y producen colonias transparen- tes . Colonias de Citrobacter son ama- rillas con centros negros; mu - chas especies de Proteus so n amaiillas o transparente s co n centros negro s; la s de Salmone- llae son rojas con centro negro . Véase l á mina color 4-3.

mentadoras de lactosa . Se incluyó

sacarosa en el medio

para detectar aquellos miembros del grupo coliforme

que fermentan la sacarosa más rápidamente que

la lac -

tosa . Los agares MacConkey y EMB son so l amente mode- _radamente inhjbjtorjqs y fueron diseñados en principio

para evitar el crecimiento de bacterias grampositivas a partir de cultivos mixtos . Muchas especies de microorga - nismos gramnegativos exigentes son inhibidas del mismo modo; sin embargo , todas las Enterobacteriaceae crecen bien. En el cuadro 4-1 se comparan las fórmulas , ingre - dientes inhibitorios y características claves diferenciales para los agares MacConkey y EMB. La decisión de usar agar MacConkey o EMB es ante todo una cuestión de preferencia personal, dado que las especies bacterianas que utilizan lactosa pueden ser dife - renciadas por ambos . El agar MacConkey contiene rojo neutro como indicador de pH y, como resultado , las co - lonias que metabolizan lactosa aparecen rosadas a partir de la producción de ácidos mixtos (véase lámina color

4 -2A

y B). Las bacterias que son fuertes productoras de

ácido, como E. coli, forman colonia s rojo oscuro. Las bacterias prod uctoras de bajas cantidades de ácido for - man colonias rosado pálido o colonias que son claras en la periferia y tie nen centros rosados. Sobre agar EMB, las bacterias que son fuertes productoras de ácido forman colonias con bri ll o metálico (véase lámina color 4 -2C y D). La apariencia brillante es causada por la pre - cip itación del colorante sobre las co lonias, y es altamen- te indicativa de E. coli, au nque otros fuertes productores de ácido, corno , Yersinia enterocolitica, pueden tener apariencia similar.

MEDIOS DE AISLAMIENTO ALTAMENTE SELECTIVOS USADOS PR I NCIPALMENTE PARA MUESTRAS GASTROINTESTINALES

Los medios se hacen alt ame nte selectivos mediante el agregado de una variedad de inhibidores a sus fórmula s, generalmente en concentraciones s altas que en agar MacConkey o EMB. E stos medios son usados primaria-

mente para inhibir el crecimiento de E. coli y otros coli- formes , pero permiten el crecimiento de especies de Sal- monella y Shigella a partir de muestras de materia fecal. Aquí se comentan varios medio~ selectivos formulados para su utilización en laboratorios clínicos. Los más co -

múnmente usados son el agar Salmonella -Shigella

(SS),

el agar xilosa-lisina-desoxicolato (XLD) y el agar Hek- toen entérico (HE). Éstos se describen en el cuadro 4-2 . La decisión respecto de cuál de estos medios usar pa- ra la recuperación de patógenos entéricos de muestras fe- cales depende de la preferencia personal y de las especies que van a ser seleccionadas. En general, estos medios se emplean en el laboratorio clínico para la recuperación de especies de Salmonella y Shi ge lla de muestras de mate - ria fecal diarreica, o en laboratorios de salud pública pa- ra inve st igar una po sible contaminación fecal de suminis- tros de agua y comida. Virtualmente todas las especies

crecen bien en pre se ncia de sales biliari;!s , lo cual explica por qué la vesícula biliar a menudo sirve como reservo-

rio en los seres humano s

portadores . Se agregan

sales bi -

l i ares al medio selectivo debido a que otras especies de bacilos entéricos, incluidas algunas de las cepas de Shi- gella más exigentes , crecen poco o no crecen . El agar SS

y el HE contienen concentraciones relativamente altas de

 

ENTEROBACTERIACEAE

185

RECUADRO 4-4. SELECCIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

las pruebas ampliamente usadas en los laboratorios clíni-

PARA MUESTRAS FECALES O HISOPADOS RECTALES

c9s para medir las caracter:ísticas metabólica s

por las

l. Inocular la muestra directamente en placas de agar MacConkey o EMB para aislamiento primario de todas las especies de bacilos entéricos gramnegativos.

  • 2. Inocular directamente o en placas de agar XLD o HE para la investigación ~electiva de especies de Salmone- lla o Shigella .

  • 3. Enriquecer una pequeña porción de la muestra median- te inoculación cargada de caldos selenito o GN. Si se usa selenito, subcultivar a agar HE dentro de las 8 a

    • 12 horas ; si se usa GN, subcultivar dentro de

las 4 ho-

ras. Nota: e n el laboratorio del autor este paso no es lle-

vado a cabo de rutina a menos que se investiguen pa- cientes asintomáticos para detectar la presencia de un estado portador.

  • 4. Incubar todas las placas de cultivo a 35ºC durante 24 a 48 horas. Seleccionar colonias sospechosas para la identificación bioquímica definitiva o para pruebas se - rológicas.

Para mue stras