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Citrato

Fundamento
El citrato de sodio es una sal del acido ctrico, un compuesto orgnico simple que
constituye uno de los metabolitos del ciclo de los cidos tricarboxilicos.
Generalmente los microorganismos que emplean el citrato como nica fuente de
carbono, utilizan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno. El metabolismo
del citrato realizado, por algunas bacterias se realiza por el ciclo de krebs y
requiere el desdoblamiento del citrato por la enzima citritasa (citrato-oxalacetato-
liasa o citrato desmolasa) en presencia de magnesio o manganeso y de
transportadores como citrato permeasas.
La citritasa acta sobre el citrato produciendo acido oxalacetico y acetato;
productos que son convertidos enzimaticamente a piruvato y dixido de carbono.
Durante esta reaccin el medio comienza a alcalinizarse por el CO2 que se
genera, el cual se combina con el agua y el sodio para formar Carbonato un
producto alcalino, este carbonato da la alcalinidad que produce el cambio de color
del indicador de pH del medio de verde a azul Prusia oscuro (indicador: azul de
bromotimol, amarillo a pH< de 6.0 y azul a pH > de 7.6). El medio incluye citrato
como nica fuente de carbono y fosfato de amonio como nica fuente de
nitrgeno.
Interpretacin
El desarrollo de un color azul intenso en 24-48 horas indica
una prueba positiva y revela que el microorganismo en
estudio ha sido capaz de utilizar el citrato en el medio con la
formacin de productos alcalinos. La prueba tambin es
positiva en ausencia de color azul si existe crecimiento del
microorganismo a lo largo de la estra de inoculacin.
Malonato fundamento
El malonato de sodio, es una sal orgnica que es utilizada
por las bacterias como nica fuente de carbono con formaron
de productos alcalinos que se evidencia por un viraje de
verde a azul del indicador del medio, azul de Bromotimol. Si
un microorganismo es capaz de utilizar el malonato de sodio
como nica fuente de carbono, al mismo tiempo que utilizar
el sulfato de amonio como fuente de nitrgeno, se produce
un aumento de la alcalinidad que se debe a la formacin de
Hidrxido de sodio (NaOH).
Fundament rm
Determinar la capacidad de un microorganismo para
producir y mantener estables los productos terminales
cidos de la fermentacin de la glucosa y vencer la
capacidad amortiguadora del sistema. La prueba Rojo de
metilo es cuantitativa para la produccin de acido y requiere
que los microorganismos produzcan cidos fuertes a partir de
la glucosa, de forma que el medio del pH descienda a menos
de 4.4. Esta distincin puede hacerse a travs del indicador
Rojo de metilo que presenta color amarillo por encima de un
pH de 5.1 y solo presenta color rojo cuando el pH desciende
a 4.4.
El desarrollo de un color rojo estable en la superficie del
medio indica que la produccin de acido es suficiente como
para bajar el pH a 4.4 y es una prueba positiva. Cuando
ocurre la formacin de un color amarillo la prueba es
negativa.
Vp
Determinar la capacidad de algunas bacterias para generar un
producto final neutro (acetoina y 2,3 Butanodiol) a partir de
la fermentacin d ela glucosa. Los productos neutros
formados en la presencia de oxigeno atmosfrico, alcalisis
(Hidrxido de Potasio al 40%) y peptonas, se oxidan en
diacetilo, reactante para el color producido en la reaccin. El
Alfa naftol acta como catalizador para revelar un complejo
color rojo.
Una prueba positiva esta indicada por el desarrollo de un
color rojo a los 15 minutos de aadido los reactivos
reveladores por la presencia de acetoina. Una prueba
negativa da un color cobrizo.

FISIOLOGIA Y GENETICA MICROBIANA
ACREDITADA

PRACTICA No. 1 UTILIZACION DE CARBOHIDRATOS Y ACIDOS ORGANICOS




GRUPO: 402 TURNO: MATUTINO

Chilpancingo De losBravo, Guerrero a 10 de Septiembre del 2012.



Objetivo
El alumno pondr de manifiesto la actividad enzimtica de los microrganismos sobre los
carbohidratos y los cidos orgnicosutilizando diversos medios de cultivo.


R E S U L T A D O S

N E G A T I V O |
Sin produccin de halo. |
Prueba en Agar Almidn


Fermentacin de carbohidratos en tubos Durham (encaldo).

Carbohidrato | Glucosa | Lactosa | Maltosa | Sacarosa |
E. coli | A/G | A/G | A/G | --- |

Fermentacin de carbohidratos (medio gelificado)
Agar Kligler |
Fermentador deGlucosa A/A |






Positivo |
Prueba del rojo de metilo (RM)









Prueba de Vogues Proskauer (VP)
Vogues Proskauer (VP) |
POSITIVO |



UTILIZACION DEACIDOS ORGANICOS: CITRATO Y MALONATO
N E G A T I V O |
Prueba de Citrato de Simons


N E G A T I V O |
Prueba del Malonato



D I S C U S I O N
DIGESTION DE POLISACRIDOS(HIDROLISIS DEL ALMIDON). El almidn es un
polisacrido que sirve como nutriente para muchos microrganismos pero no todos la
pueden utilizar ya que slo algunos son productores de amilasa enzima quehace la
degradacin de esta macromolcula. E. coli no pudo formar un halo por ser Gram
negativo y estos microrganismos son susceptibles a este tipo de solucin por lo tanto no
hidroliz.
FERMENTACIONDE CARBOHIDRATOS EN TUBOS DURHAM (EN CALDO). El
resultado es positivo en cuanto a la fermentacin porque hay presencia de gas en el tubo
y un cambio de pH (cambio de color) esto nos demuestra que E.coli tiene la capacidad
para fermentar los carbohidratos, esta capacidad de fermentar una sustancia es de gran
utilidad para la identificacin de otros microrganismos. Cuando el resultado es negativo