Pruebas Bioqumicas 1

CURSO DE MICROBIOLOGA DIAGNOSTICA

PRCTICA NMERO 4
Facultad de Medicina Humana
Escuela: Farmacia y Bioqumica
Docente: Jos Manuel Villanueva Carlos

PRUEBAS BIOQUMICAS
PARA LA
DETERMINACIN DE
BACTERIAS

REALIZADO POR:
Aguilar Villareal Geraldine
Alegre paredes Nadyd
Guzmn Prez Jhenny
Morillo Herrera Ketty
Torres vila Jess

Pruebas Bioqumicas 2

Las pruebas bioqumicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias.
Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es capaz de
fermentar azcares, la presencia de enzimas, la degradacin de compuestos, la
produccin de compuestos coloreados, etc.
Aun bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies diferentes
con base a pruebas bioqumicas. Por ejemplo, las bacterias entricas gram negativas,
forman un grupo muy grande y heterogneo cuyo hbitat natural es el tracto
gastrointestinal de humanos y otros animales. Esta familia, Enterobacteriaceae, incluye
a varios patgenos que causan sndromes diarreicos.
Existen flujogramas, para la identificacin bacteriana, mediante pruebas bioqumicas de
microorganismos. Por ejemplo, la presencia de un coco bacilo gram negativo,
facultativo, fermentador de glucosa, oxidasa negativo, nos indica la presencia de una
enterobacteria, para determinar su gnero podemos seguir el siguiente esquema.

Pruebas Bioqumicas 3
Las pruebas bioqumicas consisten en distintos test qumicos aplicados a medios
biolgicos, los cuales, conocida su reaccin, nos permiten identificar distintos
microorganismos presentes.
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una
via metablica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la
bacteria al crecer incorpora o no.
La mayor parte de las pruebas usadas para evaluar la actividad bioqumica o
metablica de bacterias (por medio de la cual puede hacerse una identificacin final de
especie), se lleva a cabo mediante el subcultivo del aislamiento primario en una serie
de medios diferenciales, cuyos resultados pueden interpretarse despus de uno o dos
das de incubacin.
Las pruebas bioqumicas disponibles para la identificacin de microorganismoson:
Citrato de simmons
Sulfuro Indol Movilidad (SIM)
Movilida, Indol, Ornitina (MIO)
Triple azcar Herro (TSI)
Agar Lisina Hierro (LIA)
Urea

1. Citrato de Simmons
Color : verde
Inhibidor : no tiene
Indicador : azul de bromotimol
Sustrato principal: citrato de sodio
Sustratos secundarios: fosfato dipotsico, cloruro de sodio, sulfato
de magnesio y fosfato monoamnico.
Se siembra por picadura profunda con aguja y luego por estras en
el pico.

Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como
nica fuente de carbono y compuestos amoniacales como nica fuente de nitrgeno
en su metabolismo, provocando una alcalinizacin del medio. Entre las enterobacterias
estas caractersticas se dan en los siguientes gneros: Enterobacter, Klebsiella, Serratia,

Pruebas Bioqumicas 4
Citrobacter y algunas especies de Salmonella. Sin embargo, Escherichia, Shigella,
Salmonella typhi y Salmonella paratyphi son incapaces de crecer con esos nutrientes.
Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio contiene citrato
de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrgeno
respectivamente y azul de bromotimol como indicador de pH. Slo las bacterias
capaces de metabolizar el citrato podrn multiplicarse en este medio y liberarn iones
amonio lo que, junto con la eliminacin del citrato (cido), generar una fuerte
basificacin del medio que ser aparente por un cambio de color del indicador de pH,
de verde a azul.

Fundamento:El citrato de sodio es una sal del cido ctrico, un compuesto orgnico
simple que constituye uno de los metabolitos del ciclo de los cidos tricarboxilicos.
Generalmente los microorganismos que emplean el citrato como nica fuente de
carbono, utilizan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno. El metabolismo del
citrato realizado, por algunas bacterias se realiza por el ciclo de krebs y requiere el
desdoblamiento del citrato por la enzima citritasa (citrato-oxalacetato-liasa o citrato
desmolasa) en presencia de magnesio o manganeso y de transportadores como citrato
permeasas.
La citritasa acta sobre el citrato produciendo cido oxalacetico y acetato; productos
que son convertidos enzimaticamente a piruvato y dixido de carbono. Durante esta
reaccin el medio comienza a alcalinizarse por el CO2 que se genera, el cual se combina
con el agua y el sodio para formar Carbonato un producto alcalino, este carbonato da
la alcalinidad que produce el cambio de color del indicador de pH del medio de verde
a azul Prusia oscuro (indicador: azul de bromotimol, amarillo a pH< de 6.0 y azul a pH
> de 7.6). El medio incluye citrato como nica fuente de carbono y fosfato de amonio
como nica fuente de nitrgeno.

Reacciones del citrato

Citrato oxalacetato + acetato
Piruvato

+ CO2

Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del medio. Si el pH
aumenta (alcalino), se produce ms acetato y formato con una disminucin de la
produccin del lactato y CO2, por encima de pH 7 no hay produccin de lactato y los
productos son:
Citrato

CO2 + cido formico + 2 cido actico

Con el pH acido el acetilmetilcarbinol (acetoina) y el lactato son los principales

productos de utilizacin del citrato. Independientemente de los productos terminales
producidos, el primer paso de la fermentacin del citrato da como resultado la
produccin de piruvato. La degradacin del piruvato depende entonces del pH del
medio

Pruebas Bioqumicas 5
Tcnica:Inocular el tubo con agar citrato de Simmons realizando siembra por estra
tomando una colonia del microorganismo en estudio. Incubar a 37 grados C por 24
horas.

Interpretacin:El desarrollo de un color azul intenso

en 24-48 horas indica una prueba positiva y revela que
el microorganismo en estudio ha sido capaz de utilizar
el citrato en el medio con la formacin de productos
alcalinos. La prueba tambin es positiva en ausencia de
color azul si existe crecimiento del microorganismo a lo
largo de la estra de inoculacin.

2. Triple Azcar (TSI)

Color : rojo ladrillo
Inhibidores: no tiene
Indicador : rojo de fenol
Sustratos principales: lactosa, sacarosa y glucosa (la proporcin
en el medio de lactosa y sacarosa es de 10: 1 con la glucosa)
Sustratos secundarios: tiosulfato sdico, peptona, citrato frrico
amoniacal y extractos.
Se siembra por picadura profunda con aguja y luego se siembra
por estras en el pico.

El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de

produccin de cido y gas a partir de la glucosa, sacarosa y lactosa en un nico medio.
Tambin permite la identificacin de la produccin de SH2.
Esta es una prueba especfica para la identificacin a nivel de gnero en la familia
Enterobacteriaceae. Con objetivo de diferenciar entre:
Bacterias fermentadoras de la glucosa
Bacterias fermentadoras de la lactosa.
Bacterias fermentadoras de sacarosa.
Bacterias aerogenicas.
Bacterias productoras de SH2 a partir de sustancias orgnicas que contengan
azufre.

Fundamento:El agar se prepara en forma de pico de flauta. Esto determina que

existan dos cmaras de reaccin dentro del mismo tubo. La porcin inclinada (pico)
expuesta en toda su superficie al oxgeno es aerobia y la porcin inferior (fondo) est
protegida del aire y es relativamente anaerobia.
Al crecer un microorganismo en el TSI, el pico tiende a virar al pH alcalino (color rojo
por el rojo fenol) por la produccin de aminas, debido a la utilizacin aerobia de las
peptonas. En el fondo del tubo -donde no hay oxgeno- la degradacin de peptonas es
menor y no se generan aminas, de manera que se pueden detectar la produccin de

Pruebas Bioqumicas 6
pequeas cantidades de cido (color amarillo por el rojo fenol). Si se inoculan
microorganismo no fermentadores no se formarn cidos, pero por la produccin de
aminas en el pico, todo el medio quedar rojo.
La glucosa en el TSI est en una proporcin 10 veces menor que la lactosa y la
sacarosa. Si el TSI es inoculado con una bacteria fermentadora de glucosa pero no de
lactosa ni de sacarosa, la cantidad de cido producida por fermentacin ser baja
(porque la cantidad de glucosa inicial es baja). En las primeras horas (10 a 16 hrs.) de
incubacin se producir viraje del indicador al amarillo en todo el tubo (pico y fondo),
pero al continuar la incubacin, el pico del tubo retornar al rojo por la produccin de
aminas debida a la degradacin aerobia de las peptonas antes descrita.
Si el microorganismo fermenta la lactosa y/o la sacarosa, como las concentraciones de
estos azcares son 10 veces mayores a la glucosa, se producir gran cantidad de cido
(que no puede ser neutralizado por la produccin de aminas en la superficie), por lo
tanto todo el tubo (pico y fondo) virar al color amarillo (cido).
La produccin de H2S a partir de tiosulfato se pone en evidencia por precipitacin del
sulfuro ferroso (negro). Como esta reaccin se da preferencialmente en medio cido,
un ennegrecimiento del fondo del tubo (que puede cubrir todo el fondo del tubo y
enmascarar el color amarillo) se lee como fermentacin de algunos de los azcares del
medio. Adems puede observarse la produccin de gas (H2 y CO2), ya sea como
burbujas en el fondo del tubo, por ruptura del agar o desplazamiento del mismo hacia
la superficie.

Tcnica:Inocular el medio realizando siembra mixta del microorganismo en estudio,

incubar a 37 grados C por 24 horas.

Interpretacin:
A: Reaccin acida. Color amarillo
A/A: Fermentacin 3 azucares
K: Reaccin alcalina. Color roja naranja K/A:Fermentacin de la glucosa
Burbujas: Produccin de gas
K/K: No hay fermentacin de los 3
Precipitado negro: Formacin H2S

3. Agar Hierro Lisina (LIA)

Color : lila
Inhibidores : no tiene
Indicador : prpura de bromocresol
Sustratos principales: lisina y glucosa
Sustratos secundarios: peptona, tiosulfato de sodio, extracto de
levaduras.
Se siembra por picadura profunda con aguja y luego por estras
en el pico.

Esta prueba permite diferenciar el microorganismo. Que producen

Pruebas Bioqumicas 7
descarboxilacin o desaminacin de la lisina. Se puede detectar adems la produccin
de H2S. Es muy utilizado en las tcnicas de bsqueda de Salmonella, principalmente
para descartar otras bacterias que dan colonias de aspecto similar en los medios
diferenciales utilizados durante el aislamiento selectivo.
La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para
detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y
amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de cido
sulfhdrico. El prpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color
amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.
Las descarboxilasas son un grupo de enzimas sustrato-especificas, capaces de actuar
sobre la porcin carboxilo (COOH) de los aminocidos, con formas de aminas de
reacciona alcalina. Esta reaccin conocida como descarboxilacin, produce dixido de
carbono con producto secundario. Cada una de las descarboxilasas es especfica para
un aminocido.
Lisina, ornitina y arginina son los tres aminocidos ensayados habitualmente en la
identificacin de las enterobacterias y producen las siguientes aminas especficas.
La cadaverina (o 1,5-diaminopentano o pentametilenodiamina pentano-1,5-diamina; o
C5H14N2) es una amina biognica que se obtiene por la descomposicin del
aminocidolisina. Se encuentra principalmente en la materia orgnica muerta, y es
responsable en parte del fuerte olor a descompuesto.
La formacin de la cadaverina se esquematiza de la siguiente manera:
(NH2) - (CH2)4-CH (COOH)-NH2 (Lisina)

NH2-(CH2)5-NH2 (Cadaverina)

La Putrescina es un compuesto qumico orgnico NH2(CH2)4NH2 (1,4-diaminobutano o

butanodiamina) que se crea al pudrirse la carne, dndole adems su olor caracterstico.
Est relacionada con la cadaverina; ambos se forman por la descomposicin de los
aminocidos en organismos vivos y muertos.
La putrescina es producida en pequeas cantidades por las clulas vivas gracias a la
accin de la ornitina-descarboxilasa.
Las poliaminas, de las que la putrescina es uno de los ejemplos ms simples, parecen
ser factores de crecimiento necesarios para la divisin celular.
Otros compuestos qumicos que se caracterizan por su mal olor son el metanotiol y el
cido butrico.

Pruebas Bioqumicas 8
Laarginina se sintetiza de citrulina por accin secuencial de las enzimas citoslicas
argininosuccinato sintetasa (ASS) y de la argininosuccinato liasa (ASL). Esto es
energticamente costoso, ya que la sntesis de cada molcula de argininosuccinato
requiere la hidrlisis de adenosin trifosfato (ATP) a adenosin monofosfato (AMP); i.e.,
dos ATP equivalentes.
La citrulina es un compuesto que interviniente en el ciclo de la urea. Se forma por
transferencia del grupo carbamoilo proveniente del anhdrido del cido fosfrico al
grupo d-amino de la ornitina. El enzima ornitina transcarbamoilasa es tambin
mitocondrial. La citrulina difunde desde la mitocondria al citosol, donde contina el
resto del ciclo de la urea.
El NO se produce mediante la accin de la enzima llamada xido ntrico sintasa (NOS,
siglas que provienen del ingls nitric oxide synthase), la cual contiene diferentes
molculas accesorias que trabajan en conjunto para formar el NO a partir del
aminocido arginina y O2. Durante esta reaccin la arginina se convierte en una
molcula de citrulina al liberar NO y consumir O2 (el cual dar lugar a una molcula de
agua)
La citrulina puede proveerse de mltiples fuentes:

De la arginina va xido ntrico sintetasa (NOS);

De la ornitina va catabolismo de la prolilla o de la glutamina / glutamato;
De la dimetilarginina asimtrica (ADMA) va DDAH.

La actividad de la enzima NOS se regula mediante la disponibilidad de diversas

materias primas (o substratos), como son la arginina, el O2 y otras molculas que son
necesarias para la sntesis del NO.
En la conversin de arginina a citrulina interviene una dihidrolosa ms bien que una
descarboxilasa, ya que en primer trmino un grupo NH2 es eliminado de la arginina. La
citrulina es transformada en ornitina, que luego sufre descarboxilacin para formar
putrescina. Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que
alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La
decarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesaria que la
glucosa sea previamente fermentada.

Pruebas Bioqumicas 9
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son
fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al
amarillo, pero a las 24 hrs. de incubacin se observa el pico de color violeta debido al
consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. La produccin de sulfuro de hidrgeno,
se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de
hierro. Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella,
desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de
hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del medio.

Tcnica:Inocular realizando siembra mixta con doble picadura a partir de una colonia
del cultivo del microorganismo en estudio e incubar 24 horas a 37 grados C.

Interpretacin:
A: Reaccin acida. Color amarillo
K: Reaccin alcalina. Color violeta
R: Reaccin alcalina: color rojo
K/K: Descarboxilacion lisina
K/A: Fermentacin glucosa. Descarboxilacion lisina
R/A: Desaminacion lisina. Fermentacin glucosa

4. Sulfuro-Indol-Motilidad (SIM)
Color : amarillo
Inhibidores : no tiene
Indicador : no tiene
Sustrato principal : peptona
Sustrato secundario : tiosulfato sdico, hierro y amonio
Este medio se utiliza para comprobar la motilidad, la formacin
de H2S y la produccin de indol por parte de la bacteria.
Se siembra por picadura

Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de

sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es til para diferenciar miembros de la familia
Enterobacteriaceae.

Fundamento:El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y

particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para
formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El
indol producido se combina con el aldehdo del reactivo de Kovacs o de Erlich, para
originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este
medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que
aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un
precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se
mantenga a un pH mayor a 7.2.

Pruebas Bioqumicas 10
Reacciones:
Produccin de indol

Triptofanasa

Triptofano ( C11H12N2O2 )indol ( C8H7N )

Produccin de H2S

+ H+H2S

Cisteinaon hidrogenoAcido sulfhidrico

Tcnica:Inocular al medio realizando siembra por picadura hasta la mitad del medio a
partir del cultivo del microorganismo en estudio. Incubar 24 horas a 37 grados C. al
finalizar este periodo aadir 5 gotas del reactivo de Kovacs por la pared del tubo.

Interpretacin:El desarrollo de un color rojo-fucsia en la interfase del reactivo y de

los medio segundos despus aadir el reactivo de Kovacs indica la presencia de indol y
por lo tanto una prueba positiva.

La identificacin definitiva de una especie requiere de pruebas bioqumicas.

Permiten conocer
microorganismos.

las

actividades

metablicas

enzimticas

Identificar los productos finales de los procesos metablicos.

de

los

Pruebas Bioqumicas 11

MATERIALES:
Asa bacteriolgica
Mechero de alcohol
Gradilla
Citrato de Simmons
TSI
LIA
SIM
Estafilococo
Proteus
Ecoli
Klebsiella
Estufa

PROCEDIMIENTOS:
1) SIM.1. En un mechero calentar el asa bacteriolgica a rojo vivo, luego dejar enfriar
hasta 2 segundos.
2. Luego sacar la muestrade la siembre deProteus y penetrar directamente
hasta el fondode la SIM de forma vertical y sacarlo con cuidado precurando
de no hacerlo en forma zig-zag.

3. Repetir los mismo pasos con la muestra de la siembre de Estafilococo. Y luego

llevar la muestras a la estufa.

Pruebas Bioqumicas 12
2) TSI, Citrato Simmons y LIA.1. En un mechero calentar el asa bacteriolgica a rojo vivo, luego dejar enfriar
hasta 2 segundos.
2. Luego sacar la muestra de la siembre de Klebsiella y penetrar directamente
hasta el fondode la TSI y sacar en forma de zig-zag por las esquinas del tubo
de ensayo. Repetir los mismos pasos usando la muestra de la siembra de
Proteus.

3. Seguir los mismos pasos para el Citrato Simmons, donde se usara la muestra
de siembra deKlebsiella y Ecoli; por ultimo para LIA, donde se usara la
muestra de siembra de Estafilococo y Proteus.

MUESTRAS

1. TSI (Triple Sugar Iron):

Pruebas Bioqumicas 13

COLOR: rojo de ladrillo

INDICADOR: rojo de fenol
SUSTRATOS PRINCIPALES: glucosa, lactosa y sacarosa

a) KLEPSIELLA.-

Pico alcalino/ fondo acido (pico rojo / fondo amarillo)

Fermentacin de glucosa
Fermentacin en condiciones aerbica (pico de flauta)
Formo estras
b) PROTEUS.-

Pico alcalino / fondo alcalino (pico rojo / fondo rojo)

No existe fermentacin de azucares
Presencia de burbujas indica que el microorganismo produce gas.
No tiene vibracin de pH
Pico de flauta

Pruebas Bioqumicas 14
2. SIM (ZULFURO INDOL MOTILIDAD):
COLOR: Amarillo
INDICADOR: No tiene
SUSTRATO PRINCIPAL: Peptona
SUSTRATO SECUNDARIO: Tiosulfato sodico, Hierro y amanio

a) PROTEUS

Produccin de cido sulfhdrico por accin enzimtica de los

aminocidos que contienen azufre produciendo una reaccin
visible de color negro en la superficie
Produccin de indol

b) ESTAFILOCOCOS

H2S Negativo
Presencia de burbujas

Pruebas Bioqumicas 15
3. LIA (AGAR LISINA DE HIERRO):

COLOR: Lila
INDICADOR: Purpura De Bromocresol
SUSTRATOS PRINCIPALES: Lisina Glucosa

a) ESTAFILOCOCOS

Descarboxilacion de la lisina
Prueba positiva: pico violeta / fondo violeta
Formo pico de flauta

b) PROTEUS

Descarboxilacion de la lisina
Prueba negativa: pico violeta / fondo amarillo
Formo pico de flauta

Pruebas Bioqumicas 16
4. CITRATO DE SIMMONS:

COLOR: verde
INDICADOR: azul de bromocresol
SUSTRATO PRINCIPAL: citrato de sodio

a) KREPSIELLA

Prueba negativa: el medio permanece de color

verde debido a que no hay desarrollo
bacteriano y no hay cambio de color.
Asimilo nitrgeno y carbono

Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI:

1. Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a
amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora
de glucosa, el medio permanecer de color rojo.
2. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su
superficie volvindolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie
del medio continuar de color rojo.
3. Si produce cido sulfhdrico (debido a la reduccin de las sales de hierro), se
presentar un ennegrecimiento del tubo. La produccin de sulfhdrico y el
consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentacin de la
glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria
es fermentadora de glucosa.
4. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es
productora de gas.
Correspondientemente las reacciones sobre agar SIM:

Pruebas Bioqumicas 17
Motilidad negativa Presencia de turbidez difusa en el medio.
Correspondientemente las reacciones sobre agar CITRATO DE SIMMONS:
La prueba positiva est representada por la produccin de color azul oscuro en el
trmino de 24 a 48 horas, que indica que el microorganismo en prueba ha sido capaz
de utilizar el citrato contenido en el medio, con formacin de productos alcalinos.
El indicador es el azul de bromotimol, que es amarillo por debajo de pH 6 y azul por
encima de pH 7,6.
La prueba tambin puede considerarse positiva sin que haya color azul, si hay
desarrollo visible en la estra de siembra. Esto es vlido porque para que el desarrollo
sea visible, el microorganismo debi haber ingresado en la fase logartmica de
crecimiento, lo que solo es posible si ha asimilado carbono y nitrgeno.
Correspondientemente las reacciones sobre agar LIA son:
Un cambio del color original del medio (morado) hacia amarillo en el fondo indica una
reaccin cida por la fermentacin de una pequea cantidad de glucosa en el medio. Si
el microorganismo produce lisina descarboxilasa, la accin de esta enzima sobre la
lisina dar lugar a la cadaverina, la cual provocar un cambio de pH hacia la alcalinidad
dando un color morado que sobrepasa la acidez debida a la glucosa. As pues, un
fondo amarillo indica que no se produce lisina descarboxilasa y un color morado que si
es producida.

TSI(Triple Sugar Iron): En este medio se busca determinar la capacidad de la bacteria

para degradar los azcares y la formacin de gas y de H2S. La fermentacin aerbica se
produce en el pico de tubo y la anaerbica en el fondo del tubo. La degradacin de la
lactosa ocurre en la parte superior, la de la sacarosa en la parte intermedia y la de la
glucosa en la parte profunda, producindose un viraje del rojo al amarillo. El tiosulfato
es reducido a H2S quien reacciona con el citrato frrico amoniacal para dar formacin
al sulfuro de fierro que es de color negro. La presencia de gas se debe al CO2 producto
de la fermentacin.
Tener en cuento los siguientes pasos resultados:
1. Pico alcalino/ fondo acido (pico rojo fondo amarillo) :el microorganismo
solamente fermenta glucosa.
2. Pico acido/ fondo acido (pico amarillo/ fondo amarillo): el microorganismo
fermenta glucosa y lactosa.
3. Pico alcalino / fondo alcalino (pico rojo / fondo rojo) el microorganismo no es
fermentador de azucares.

Pruebas Bioqumicas 18
4. La presencia de burbujas o ruptura del medio indica que el microorganismo
produce gas.
5. El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo indica que el
microorganismo produce cido sulfrico.

LIA(Lisina Iron Agar): En este medio se permite evidenciar la descarboxilacin del

aminocido lisina en la diamina cadaverina, como tambin la desaminacin de la lisina
en un alfa cetocido. Estas 2 reacciones se ponen de manifiesto por el viraje del
indicador prpura de bromocresol. La formacin de H2S se pone de manifiesto por la
presencia del tiosulfato sdico, que dar formacin al sulfato frrico. Tambin puede
verificarse la formacin de gas a partir de la degradacin de la glucosa.
Caractersticas de la formacin de Lisina Iron Agar:
1. Descarboxilacion de la lisina:
Prueba positiva: pico violeta / fondo violeta.
Prueba negativa: pico violeta / fondo amarillo
2. Desaminacion de la lisina:
Pico rojiso/ fondo amarillo.
3. Produccin de cido sulfrico:
Prueba positiva. Ennegrecimiento del medio, especialmente en el lmite del pico
y fondo.
Citrato de Simmons:Este medio nos permite comprobar la capacidad de la bacteria de
utilizar el citrato como fuente exclusiva de carbono. La degradacin del citrato conlleva
a la alcalinizacin del medio y el viraje del indicador azul de bromotimol de verde a
azul prusia.
SIM(Sulfuro-Indol-Motilidad): La motilidad se pone de manifiesto por la turbidez
difusa del medio de cultivo alrededor del canal de la picadura. La no motilidad se
caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de la lnea de
inoculacin. La produccin de H2S se reconoce por el ennegrecimiento de la zona de
crecimiento o del medio debido a la presencia del tiosulfato sdico. Para la
demostracin del indol se usa el rvo de Kovacs, que manifiesta la degradacin del
triptfano por la enzima triptofanasa en indol, que se combina con el aldehdo
presente en el rvo de Kovacs, para producir un color rojo.
Cepas movibles:Producen turbidez del medio, que se extiende ms all de la lnea de
siembra.
Cepas inmovibles:El crecimiento se observa en la lnea de la siembra.

Pruebas Bioqumicas 19

En la prctica realizada de TSI en conclusin llegamos hubo una reaccin del

microorganismo (klepsiella) que de rojo ladrillo se volvi amarillo nos indica que
hubo fermentacin de glucosa y se form pico de flauta, mientras que con el
microorganismo (proteus) solo quedo color rojo y al fondo color amarillo que nos
indica que no hubo fermentacin de azucares, una presento burbujas cual indica que
hubo presencia de gas.
En la prueba realizada SIM concluimos que hubo una reaccin del microorganismo
(proteus) que formo un anillo de color negro en la superficie de la muestra lo cual
indica que hubo una produccin de cido sulfrico por una accin enzimtica, mientas
la reaccin del microorganismo (estafilococos) no uno una reaccin se cido sulfrico
por lo tanto nos dio una prueba negativa.
En la prctica realizada de LIA de color violeta en el primer tubo de ensayo con el
microorganismo (estafilococos) hubo una descarboxilacin de la lisina y una formacin
de pico de flauta mientas que en el segunto tubo de ensayo con el microorganismo
(proteus) nos sali una prueba negativa y tambin formo pico de flauta
En la prctica realizada con CITRATO DE SIMMONS de color verde donde trabajamos
con el microorganismo (klepsiella) donde nos sali una prueba negativa: el medio
permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio
de color, por lo tanto el microorganismo no tiene fuente de nitrgeno y ni compuestos
amoniacales, por lo que no provocaron una alcalinizacin del medio.

Pruebas Bioqumicas 20
(1) (2013). Atlas de pruebas bioquimicas para identificar bacterias ... Retrieved

December

1,

2014,

fromhttp://www.academia.edu/4858992/Atlas_de_pruebas_bioquimicas_para_id
entificar_bacterias.
(2) (2013). Medios Bioqumicos - SlideShare. Retrieved December 1, 2014,

fromhttp://es.slideshare.net/Prymer/medios-bioqumicos.
(3) (2011).

BIOQUIMICAS - enterobacterias. Retrieved December 1, 2014,

fromhttp://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm.
(4) (2011). Pruebas bioqumicas de identificacin de enterobacterias. Retrieved

December 1, 2014, fromhttp://microinmuno.files.wordpress.com/2011/05/11pruebas-bioquc3admicas-de-identificacic3b3n-de-enterobacterias.pdf.

(5) (2014). Pruebas bioqumicas - SlideShare. Retrieved December 1, 2014,

fromhttp://es.slideshare.net/SusanaGG/pruebas-bioqumicas.
(6) (2014). PRUEBAS BIOQUIMICAS 4 SEMESTRE - Scribd. Retrieved December 1,

2014,

fromhttps://es.scribd.com/doc/58915844/PRUEBAS-BIOQUIMICAS-4-

SEMESTRE.
(7) (2014).

58915844-PRUEBAS-BIOQUIMICAS-4-SEMESTRE.doc.

December

1,

2014,

Retrieved

fromhttps://es.scribd.com/doc/243485925/58915844-

PRUEBAS-BIOQUIMICAS-4-SEMESTRE-doc.
(8) (2013). Laboratorio no. 5 pruebas bioqumicas - SlideShare. Retrieved

December 1, 2014, fromhttp://es.slideshare.net/nataliaizurieta/laboratorio-no5-pruebas-bioqumicas-8146300.

(9) (2012).

Pruebas Bioqumicas - DePa. Retrieved November 29, 2014,

fromhttp://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U3c_PruebasBioquimicas_174
61.PDF.