TINCION DE HONGOS

ENDOESPORA
Tincion de gram

Pruebas bioquímicas

Gram positivas (capa gruesa de pectidoglicano, ácidos teicoicos Y Gram negativas (capa delgada de
pectidoglicano y una membrana de liposacaridos, compuesta por lípidos, color rosadito )se
diferencian en eso.

Tienen diferente morfología y agrupación

PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Las pruebas bioquímicas se basan en la determinación de la presencia o ausencia de diferentes
enzimas codificadas por el material genético del cromosoma bacteriano. Estas enzimas
involucradas en el metabolismo bacteriano, pueden ser evidenciadas en medios de cultivo
especiales que contienen los substratos sobre los cuales ellas actúan, junto con un sistema
indicador que va a poner de manifiesto la degradación del substrato o la presencia de un
metabolito específico

MATERIALES Y REACTIVOS

Cepas bacterianas: cepas de bacterias bacilares Gram negativas

Medios de cultivo: Agar TSI, agar LIA, agar UREA, agar CITRATO DE SIMMONS, caldo MR-VP, medio
SIM.

• Otros: reactivo de oxidasa, rojo de metilo, KOH 40%, alfa naftol 5%, Kovacs o Erlich.

FUNDAMENTO TSI

• Presenta tres azúcares: glucosa, lactosa y sacarosa. • Indicador de pH: ROJO DE FENOL el cual
vira al color amarillo (A) en presencia de acidez y al color rojo (K) en presencia de alcalinidad.
Fuente de azufre: TIOSULFATO DE SODIO

Indicador de acido sulfhídrico: SULFATO FERROSO

. Fermentación de la glucosa: K/A

· Fermentación de glucosa, lactosa y/o sacarosa: A/A

No fermentación de los carbohidratos: K/K

· Producción de gas: ruptura del medio o apariencia de burbujas

· Producción de H2S: ennegrecimiento del medio

FUNDAMENTO LIA

Determina la capacidad de un microorganismo para atacar el aminoácido LISINA

descarboxilándolo o

desaminándolo

• Indicador de pH: PÚRPURA DE BROMOCRESOL

• Fuente de azufre: TIOSULFATO DE SODIO • Indicador de acido sulfhídrico: CITRATO FERRICO DE

AMONIO

• Fermentación de la glucosa: (K/A)

• Descarboxilación de la lisina: (K/K).

•Desaminación de la lisina: (R/A) rajo/ amarillo.

•Producción de gas: ruptura del medio o apariencia deburbujas

• Producción de H2S: ennegrecimiento del medio

FUNDAM FUNDAMENTO CITRATO DE

SIMMONS

Determina la capacidad de un microorganismo de emplear el citrato como única fuente de

carbono en ausencia de fermentación de azúcares, este medio contiene también sales de amonio
inorgánicas ( produce moléculas de amoniaco, genera que el medio se vuelca alcalino, aquí cambia
de color verde a azul)
• Indicador de pH: AZUL DE BROMOTIMOL el cual en presencia de alcalinidad vira al color azul
indicando que la prueba es POSITIVA.

• Cuando no hay cambio de color ni crecimiento se dice que la prueba es NEGATIVA. Si no hay
cambio de color, pero sí hay crecimiento la prueba es DUDOSA.

FUNDAMENTO UREA

Determina la capacidad de un microorganismo de producir UREASA y desdoblar la urea, formando

2 moléculas de amoniaco generando alcalinidad en el medio.

Indicador de pH: rojo de fenol, el cual en alcalinidad vira a un color violeta indicando una prueba
POSITIVA. Si el color es amarillo indica una prueba NEGATIVA.

FUNDAMENTO SIM

• Determina la capacidad de un microorganismo de moverse producir INDOL y acido sulfhídrico.

• Prueba de Indol: el INDOL es uno de los productos del metabolismodel aminoácido TRIPTOFANO
(Triptofanasa).

• Fuente de azufre: TIOSULFATO DE SODIO • Indicador de acido sulfhídrico: HIERRO PEPTONADO

• Movilidad: se interpreta realizando un cuidadoso

examen macroscópico del medio para observar una zona de desarrollo difuso que parte de
inoculación.

FUNDAMENTO MR-VP
• Determinar cual es la vía metabólica que la bacteria utiliza para fermentar la glucosa.

VÍA ACIDA MIXTA (MR): con producción de metabolitos como ácido láctico, fórmico y succínico, los
cuales van a hacer descender el pH inicial, lo cual se visualiza al agregar el indicador de pH ROJO
DE METILO (10 gotas), el cual a pH ácido vira a un color rojo.

• VÍA BUTILEN GLICOLICA (VP): La bacteria puede fermentar la glucosa por esta vía con producción
de compuestos neutros como: acetil metil carbonil 2,3 butelin glicol y diacetil

TABLA

PROCEDIMIENTO PRACTICO