UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA E INVESTIGACIÓN APLICADA

NÚMERO DE PRÁCTICA: 05
NOMBRE DE LA PRÁCTICA:
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

1. DATOS INFORMATIVOS:
CARRERA: AGRONOMÍA
ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA
CICLO/NIVEL: TERCER CICLO
ESTUDIANTES: ESPINOZA JEREMY, WALTHER PINCAY, CAGUANA
WELLINGTON

2. FUNDAMENTACIÓN
.
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que permite el crecimiento de
microorganismos en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas. Debido
a que estos medios son cruciales en el Laboratorio de Microbiología, es necesario
controlar su fabricación, preparación, conservación y uso para garantizar que los
resultados obtenidos sean precisos, confiables y reproducibles.}
La preparación de medios de cultivo es un proceso importante que implica ajustar o
corregir las formulaciones de los medios de cultivo para satisfacer las necesidades
específicas de los microorganismos que se están estudiando. Esta práctica se lleva a cabo
para mejorar la selectividad, la sensibilidad y la eficacia del medio y para garantizar
condiciones ideales para el crecimiento y la identificación de microorganismos.
Varios tipos de medios de cultivo, que pueden ser líquidos o sólidos, se utilizan en los
laboratorios de microbiología. Para hacer un medio sólido, generalmente se parte de un
medio líquido y se le agrega un agente solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel.

3. RESULTADOS DE APRENDIZAJE

 Reconocimiento de los diferentes medios de cultivo y sus usos.

 Conocimiento del proceso para preparar los medios de cultivo.
 Condiciones óptimas de preparación de medios de cultivo.

4. OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

 Establecer los pasos para preparar los medios de cultivo

5. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS

MATERIALES

 Vaso de precipitación
 Espátula
 Barilla de vidrio
 Parafilm
 Mechero de alcohol
 Pipetas graduadas de vidrio de 10 ml
 Cocineta
 Papel toalla
 Agua destilada

MEDIOS DE CULTIVO:
Agar: Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo.

 Agar tiosulfato citrato bilis sacarosa (TCBS):

Se lo utiliza para determinar vibrios.

 Agar Saboraud

Se lo utiliza para determinar hongos

 Agar papa Dextrosa.

Utilizado para determinar hongos

 Agar Cetrimide

Se utiliza para determinar pseudomonas

6. PROCEDIMIENTO
N° ACTIVIDADES OBSERVACIONES

1 Calcular el volumen necesario del Para hacerlo se usa una regla de 3.

caldo nutritivo (Saboraud).

2 Dilución del caldo nutritivo y agar. Se lo debe diluir de agua destilada

según el volumen que haya salido en la
regla de 3.

3 Preparación de la solución. Se debe hacer en la cocineta hasta que

el agar este bien disuelto sin grumos.
 4 Colocación de la solución en su caja Al colocar tiene que hacerse de una
Petri. manera rápida antes que la solución se
solidifique.

5 Solidificación. Su solidificación puede durar en un

tiempo de 5 a 10 minutos depende del
lugar donde se encuentre.

1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo asignado.

2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones correctas de cada uno
de los ingredientes. Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo.

PESAR

La cantidad de medio de cultivo que se pesa va en función de la cantidad de muestras

que se va a analizar, para el ejemplo se ha seleccionado 10 muestras que representan 10
cajas petric.

En éste caso seleccionamos al medio de cultivo TCBS para prepararlo, el mismo que
debe disolverse en un litro de agua

CÁLCULO DE PESO PARA 10 CAJAS PETRI

10 cajas por 15 ml de medio de cultivo que se requiere colocar en la caja Petri para la
siembra.

10 x 15 ml = 150 ml de medio de cultivo que se requiere para el número de muestras

CÁLCULO

89 g 1000 ml
x 150 ml: 13.35 gramos de medio de cultivo

3. Disolver la cantidad de medio de cultivo en agua destilada, ayudados por la barilla de

vidrio. Evitar sobre calentar puesto que deteriora la calidad del medio de cultivo o evitar
que se derrame ya que se pierde volumen de medio de cultivo.

4. Algunos medios de cultivo al prepararlo se ajusta automáticamente el Ph, mientras

que otros necesitan que uno lo ajuste.
Para ello se debe tomar una alícuota de 50 mL, medir el pH y de ser necesario ajustar al
pH indicado utilizando HCl 0,1N o NaOH 0,1N. Luego hacer el ajuste de pH al resto del
medio de cultivo utilizando la solución correspondiente, pero 1 N.

5. Distribuir el medio de cultivo en los tubos de ensayo entre 15 y 20 ml.

6. Identificar el lote de medio de cultivo preparado indicando su nombre, distribución y

fecha de preparación.

7. Luego se debe esterilizar de inmediato el medio de cultivo siguiendo las instrucciones

señaladas. Es preciso indicar que no todos los medios requieren ser esterilizados como en
éste caso el TCBS. La esterilización se la realiza en la autoclave a 120ºC a 30 lbs de
presión.

Si se presenta algún inconveniente que impida su inmediata esterilización, el medio de

cultivo se puede almacenar por un periodo máximo de 12 horas bajo refrigeración.

Luego se saca de la autoclave y está listo para ser utilizado.

Figura 1 Preparación de un medio de cultivo.

7. RESULTADOS ESPERADOS

 La determinación del peso en función de la clase del medio de cultivo y su uso.

 Los pH de los medios de cultivo por lo general se ajustan automáticamente
mientras que otros es necesario ajustarlo de manera manual.
 La consistencia de los medios de cultivo está en función de su composición.

8. BIBLIOGRAFÍA

Pelczar, M. J., Chan, E. C., & Krieg, N. R. (2019). Microbiology: concepts and
applications. McGraw-Hill Education.
Prescott, L. M., Harley, J. P., & Klein, D. A. (2017). Microbiology. McGraw-Hill
Education.
(s.f.). PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO. Obtenido de
https://www.ugr.es/~cjl/medios%20de%20cultivo.pdf

MacFaddin, J. F. (2000). Biochemical tests for identification of medical bacteria.

Lippincott Williams & Wilkins.
9. ANEXOS

Anexo 1. Se muestra la colocación de la solución en su respectiva caja Petri.

Anexo 3. Solución ya colocada, en proceso de solidificación.